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ACTUALIZACIONES EN PRUEBAS SEROLOGICAS Y MOLECULARES EN BANCO

DE SANGRE

FUNDACIÓN HEMOCENTRO BUENOS AIRES

Jorge Rey Jefe Div. ETT Hospital de Clínicas

Universidad de Buenos Aires

DE SANGRE

IMPLEMENTACIÓN DENAT EN ARGENTINA

CARACTERÍSTICAS DE LA DONACIÓN EN ARGENTINA

Nº DE DONACIONES ANUALES COMUNICADAS AL ANLIS

400.000

Nº DE DONACIONES ESTIMADO POR CONSUMO DE BOLSAS DE

1.000.000 - 1.500.000CONSUMO DE BOLSAS DE EXTRACCIÓN

POR CIENTO DE DONACIONES REPETITIVAS

< del 25%

PRUEBAS PARA LA SELECCIÓN DE DONANTES EN ARGENTINA

MARCADOR

HBsAg

anti HBc

anti HCV

anti HIV1/2anti HIV1/2

Combo HIV/Ag p24

anti HTLV

anti TC HAI

anti TC EIE

Anti-Cardiolipina/anti TP

anti Bruc.

PREVALENCIA EN DONANTES DE SANGRE

MARCADOR A (%) B (%) C (%)

Anti HIV 0,19 0,23

P24 0,06 ----

Combo HIV 0,51

A: ANLIS, Centro Nacional de Redes de Laboratorio, 2007: www.anlis.gov.ar/CNRL/Principal.htm

B: Proyecto Programa Nacional de Control de Hepatitis Virales. Epidemiología Informe N°8, 2008: www.hepatitisviral.com.ar/pdf/informeepi8.pdf

C: Hospital de Clínicas. Universidad de Buenos Aires. Comunicación personal

Combo HIV 0,51

Anti HCV 0,75 0,71 0.28

HBsAg 0,88 0,23 0.10

Anti HBc 3,17 2,31 1.43

CASOS DE HIV ADQUIRIDOS POR TRANSFUSIÓN EN ARGENTINA

2000 2001 2002 2003 2004 2005 Total

Transfusión 15 22 15 18 30 7 107

TOTAL* 1449 3137 2642 3311 3870 2066 16475

Fuente: Dirección de Sida y ETS. Ministerio de Salud de la Nación Argentina: Boletín epidemiológico diciembre de 2005; www.msal.gov.ar/sida/vigilancia.asp

% 1,04 0,70 0,57 0,54 0,78 0,34 0,65

*Número total de casos de HIV en Argentina

CASOS TRANSFUSIONALES DE HIV

0,501,001,50

% T

ota

l ca

so

s

co

mu

nic

ad

os

PORCENTUALES

0,000,50

2000 2001 2002 2003 2004 2005

AÑO

% T

ota

l ca

so

s

co

mu

nic

ad

os

En Argentina la industria realiza PCR desde 1995. Desde el año 2004 se

comenzó a realizar NAT en Bancos de Sangre. En la actualidad hay 12 Centros que realizan NAT por distintos métodos.

NAT - INTRODUCCION

que realizan NAT por distintos métodos. En nuestro país no existe obligatoriedad

para la realización de NAT y por lo tanto se crean desigualdades en el suministro de

sangre segura.

CÁLCULO DEL RIESGO RESIDUAL

(casos x 106)(casos x 106)

RRT = T i

365 d/año

Vs(casos x 106)

10/06/09

(casos por 105pac.)(casos por 105pac.)

Donde: Ti =tasa de incidencia=Incidencia

Dadores/año(casos por 105pac.)

WPRWP

Rendimiento = RR x

Cálculo del rendimiento

10/06/09

WPRR= RIESGO RELATIVO

WPR:REDUCCIÓN DEL PERÍODO DE VENTANA

/WP:PERÍODO DE VENTANA

Incidencia = 3/105pa Incidencia = 30/105pa

Sensibilidad Analitica50% LOD

(copias/mL)

Numero de muestras en el pool

Periodo de ventana

infecciosoRR en 106

Donaciones

Rendimiento en 106

DonacionesRR en 106

Donaciones

Rendimiento en 106

Donaciones

HBsAg (no NAT)

individual 38,3 3,15 0 31,5 0

EJEMPLO

NAT)

20 individual 22,0 1,81,4

(1:710.000)18

14 (1:71.000)

32016-

donaciones

32,2 2,650,5

(1:2.000.000)26,5

5 (1:200.000)

Adaptacion de

Busch MP et al. Transfusion (2005), 45(2), 254-264

Kleinman S & Busch MP J Clin Vir (2006), 36(1) S23-S29

SUPONGAMOS:

Incidencia=prevalencia=0.1%=100x10E-5

Período de Ventana=21 dí

RR= 100x10E-5x21/365=57.5x10E-6RR= 100x10E-5x21/365=57.5x10E-6

1 caso / 17.391

Si Incidencia=0.2% 1 caso / 8695

ANTECEDENTES HISTÓRICOS Y LEGALES DE CASOS DE TRANSMISIÓN

AÑO 1995:� 2 PACIENTES HIV POST TRANSFUSIONAL (detectados

por SC y clínica)� TRANSMISION POR CGR. NO SE TRANSFUNDIERON

CP NI PFC� RESULTADOS DE DONANTES REPETIDOS EN PFC: p24

y anti HIV 3a Gen NEG (por ensayos de diferentes fabricantes)

� ESTUDIOS BM EN PFC: RNA HIV REACTIVOS (10.000 Y 8.000 cop/ml)

� JUICIOS. AMBOS FALLARON A FAVOR POR POSIBILIDADES METODOLOGICAS EXISTENTES

CAUSA N°16.015/96 A. H. C. JUZG. N°2 SECR. N°3

“…su reglamentación no impongan un determinado mecanismo de prueba –aunque sí, como señalé, obligan a detectar la sangre infectada para evitar la transmisión del virus-; lo importante es que había pruebas más eficientes a los fines perseguidos, conocidas por la comunidad científica. Además, como ya sentenció este fuero, no es óbice para imputar responsabilidad que la conducta médica se es óbice para imputar responsabilidad que la conducta médica se ajuste a las prescripciones legales o reglamentarias, pues el saber y la prudencia médicas no surgen de los reglamentos administrativos. Imprudencia no necesariamente es sinónimo de infracción Reglamentaria (conf. Sala III, 2/06/2005, “Chaves c/ Navarro y otros s/responsabilidad médica”)…”

NAT para HIV y HCV en Hemocentros Argentinos

Institución MarcaDS/ pool

Sens HCV UI/ml

Sens HIV

Cp/mlInicio N

Casos NAT+/Serol-

FUHESA NucliSens48 NE NE 2004 ? 0

HemocentroBuenos Aires

NucliSens 48/96 NE NE 2004 48.944 0

CDCBios NucliSens96/48 NE NE 2004 80.000 0

CIBIC Ampliscreen 6 21 50 2005 9.726 0

Congreso AAHI:2008

NAT para HIV y HCV en Hemocentros Argentinos

Institución MarcaDS/ pool

Sens HCV UI/ml

Sens HIV

Cp/mlInicio N

Casos NAT+/Serol-

Hospital Italiano PCR

“in house”1 NE NE 2005 5.500 1Italiano

Rosario“in house”

1 NE NE 2005 5.500 1

Fundación BS Cba

Ampliscreen 6 NE NE 2006 6.388 0

Hospital Garrahan

Ampliscreen 5 23 86 2007 4.469 0

Congreso AAHI:2008

EXPERIENCIA DEL HOSPITAL DE CLINICAS – UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES

IMPLEMENTACIÓN EN EL ÁMBITO DE LA UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES (UBA)

Se realiza mediante un protocolo de investigación aprobado por el Comité de

Ética del Hospital de Clínicas y el Consejo Ética del Hospital de Clínicas y el Consejo Superior de la UBA y presentado ante la

Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos Tecnología

Médica (ANMAT)

PROTOCOLO DE INVESTIGACIÓN

REACTIVO COMERCIAL: PROCLEIX ULTRIOENSAYO MULTIPLEX (HIV,HCV,HBV)

Características:

ENSAYO MULTIPLEX (HIV,HCV,HBV)AMPLIFICACIÓN ISOTÉRMICA: TMATESTEO INDIVIDUALEN PARALELO CON LA SEROLOGÍA

RESULTADOS OBTENIDOS

Total de muestras:� 5868 donantes

Donantes BM reactiva:� 6 HCV reactivos � 6 HCV reactivos � 6 HIV reactivos � 3 HBV reactivos� 1 No estudiado (muestra insuficiente)

MARCADORNúmero de muestras

HBsAg 2

anti HBc<101 23

anti HBc>101 54

DONANTES EIE + / NAT -

anti HCV<32 7

anti HCV>32 1

HIV COMBO 13

COMBO + aHIV+ WB- 1

aHIV+ WB- 7

1. CO/S

2. S/CO

AÑO DADOR SEROLOGIA REACTIVA DISCRIMINATORIO

2007 3369 Anti HCV /anti HBcUltrio reactivo,

discriminatorio no realizado

2007 3559 Anti HCVUltrio reactivo,


2007 3647 HBsAg/anti HBcUltrio reactivo,

DONANTES EIE + / NAT +

2007 3647 HBsAg/anti HBcdiscriminatorio no realizado

2007 3891 HBsAg/anti HBcUltrio reactivo,


2007 4118 Anti HIV/Combo HIVUltrio reactivo,


2007 4247 Anti HIV/Combo HIVUltrio reactivo,


2007 4789 Anti HIV/Combo HIV/anti HBcUltrio reactivo,


2007 5537 Anti HCVUltrio reactivo,


AÑO DADOR SEROLOGIA REACTIVA DISCRIMINATORIO

2007 5638 Anti HIV/Combo HIV/anti HBc HIV

2007 5830 HBsAg HBV

2007 6264 Anti HCV HCV

DONANTES EIE + / NAT +

2008 1575 Anti HIV/Combo HIV HIV


2008 3578 HBsAg / anti HBc HBV


Anti-HIV 3rd generation Axsym : No ReactivoAnti-HIV/p24Ag Combo test Murex: No Reactivo

Procleix Ultrio : Reactivo RP 17.0Procleix Ultrio Discriminatorio: Reactivo para RNA de HIV,

No Reactivo para HCV/HBV

DETECCIÓN DEL PRIMER PERÍODO DE VENTANA

Donación de sangre: 03/06/08Resultados:

Anti-HCV Murex: No ReactivoHBsAg Murex: No Reactivo

anti-HBc AxSym Abbott: No Reactivoanti HTLV I/II: No Reactivo

HAI Chagas Polychaco: No ReactivoEIE Chagas Wiener: No Reactivo

Sifilis USR Wiener: No ReactivoBrucelosis (Aglutinación en placa) Wiener: No Reactivo

Recitación: 23/06/08

Anti-HIV 3rd generation Axsym : Reactivo RP 10Anti-HIV/p24Ag Combo test Murex: Reactivo RP7,0

Western Blott: Indeterminado (reactivo débil para gp 160)Procleix Ultrio : Reactivo RP 17.0

Procleix Ultrio Discriminatorio: Reactivo para RNA de HIV, No Reactivo para HCV/HBV

Resultados:

DETECCIÓN DEL PRIMER PERÍODO DE VENTANA

No Reactivo para HCV/HBV

Anti-HCV Murex: No ReactivoHBsAg Murex: No Reactivo

anti-HBc AxSym Abbott: No Reactivoanti HTLV I/II: No Reactivo

HAI Chagas Polychaco: No ReactivoEIE Chagas Wiener: No Reactivo

Sifilis USR Wiener: No ReactivoBrucelosis (Aglutinación en placa) Wiener: No Reactivo

Genotipificación:Summary Data:

EIE- / NAT +

1 Resultado obtenido usando Bayer Versant. Usando NASBA Real Time: 105 cp/ml. Usando Cobas Ampliprep/Cobas Taqman: 99 cp/ml

FECHA MUESTRA RNA HIV

03/06/08 3517 91 cp/ml1

Summary Data:Sequence includes PR: codons 1-99Sequence includes RT: codons 1-400There are no insertions or deletionsSubtype and % similarity to closest reference isolate:

PR: B (93,9%)RT: B (95,2%)

“Detection of HIV-1 infection in blood donorsduring the immunological window period usingthe nucleic acid-amplification technology”

P. S. P. Scuracchio,* M. C. C. Poli,* M. M. M. Lemos,* A. G. Oliveira Filho,* N. A. Salles,†D. A. F. Chamone,†‡ M. Magri,§ N. J. F. Cavalcante§ & R. Collela* *Cavalcante§ & R. Collela* *

Banco de Sangue de Saõ Paulo,†Fundacxaõ Pro´-sangue/Hemocentro de Saõ Paulo, ‡Department of Hematology and Hemotherapy, Universidade de Saõ Paulo, and §Reference and Training Center–AIDS, Saõ Paulo, Brazil

Received 1 November 2006; accepted for publication 2 February 2007

Transfusion Medicine, 2007, 17, 200–204

� El número de NAT + / EIA negativo fue mayor que el estimado:– 1,1 casos / 100.000 CI 95% ( 7,1-14,5) estimado– 4,18 casos / 100.000 (encontrado)

� Aumento del riesgo puede ser explicado por “dadores buscadores de pruebas”, puede ser la “dadores buscadores de pruebas”, puede ser la explicación para este aumento del riesgo calculado.

� Ambos casos ocurrieron antes de los sintomas de fase aguda del HIV.

Salles N., FSP, Congreso argentino de hemoterapia. 2007

Infección oculta por Virus Hepatitis B (HBV) en hemodonantes: detección y caracterización genómica parcial.

Trinks, J1; Gambino, G2; Toledano, A2; Bobillo, MC3; Fernández Toscano, M2; Cuestas, ML1; Minassian, ML1; Rivero, CW1; Corach, D3; Mathet, VL1, Rey, J2; Oubiña, JR1.

•Población:• 110 muestras de donantes de sangre, HBsAg NR, anti-HBc R•71 hombres, 39 mujeres•71 hombres, 39 mujeres•Mediana de edad: 46 años•Período: Mayo del 2006. Marzo del 2008

Ensayos utilizados:•Procleix Ultrio en muestra individual, ensayo discriminatorio•Amplificación de la región S por PCR anidada (Zheng y col W Jgastroenterol 2004.)

•Amplificación del genoma completo ((Sugauchi y col J of Gen Virol 2001)

•Amplificación de la región pre C (Birkenmeyer y col J Virol Met |994)

•Secuenciación nucleotídica Big Dye termination Chemistry, Applied Biosystem•Cuantificación DNA HBV , Roche Amplicor Monitor

Resultados:

• Procleix Ultrio: 3 muestras reactivas (2,7%)Ensayo discriminatorio: 2 muestras HBV DNA reactivas (1,82% IC 95%; 0,0%-4,31%).

• Cuantificación viral: Inferior a 50 copias/ml• Otras amplificaciones génicas: bandas del tamaño • Otras amplificaciones génicas: bandas del tamaño

esperado para las regiones genómicas del HBV comprendidas entre las posiciones 1736 a 2471.

• Secuenciación: El análisis filogenético de la secuencia nucleotídica de la región Pre-core/corede una de las muestras reveló que ésta pertenece al genotipo E, oriundo de Africa y excepcional en nuestra población.

CONCLUSIONES:

1. Se documentó la presencia de infección oculta por HBV entre hemodonantes con anticuerpos anti-HBc (1,8% de la población estudiada).

2. La sensibilidad de la metodología empleada para detectar genomas virales es superior a la del enzimoinmunoensayo para pesquisar el HBsAg en la detección de portadores del HBV detección de portadores del HBV

3. El genotipo E exhibe la mayor divergencia aminoacídicaentre los genotipos del HBV a nivel del determinante “a” del HBsAg, -lo cual puede afectar su detección mediante equipos comerciales que utilizan anticuerpos monoclonales-

4. La circulación y eventual propagación del genotipo E requeriría replanteos en los planes de inmunización

Al 2010 existen por lo menos 10 centros que procesan muestras de donantes por biología molecular para sus muestras y

muestras de derivación. Estos centros se encuentran ubicados en Neuquén,

Córdoba, Rosario y Gran Buenos Aires. Córdoba, Rosario y Gran Buenos Aires. No existe política oficial acerca de la

obligatoriedad de la implementación. En aproximadamente 100.000 muestras,

utilizando single test o minipool, se han comunicado 6 períodos de ventana: 3 para HIV, 3 para HBV, y 1 para HCV.

Muchas gracias!!!!!

[email protected]

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