Muestreo, identificación y cuantificación

de microorganismos

Recomendaciones de Muestreo

A muestra que va a ser objeto del análisis:

Debe ser homogénea.

Se debe tomar Aproximadamente 15 submuestras por hectárea en forma de zigzag.

Al final realizar la mezcla y obtener una muestra compuesta de aproximadamente 500 gramos

Limpiar la superficie del suelo, cavar un hoyo de 20 cm de profundidad con las paredes inclinadas, sacar una sección de 5 cm de grosor.

Luego con la ayuda de una paleta retirar los bordes laterales y tomar la parte que incluye entre los 5 a 20 cm y colocar la muestra en un recipiente de plástico limpio.

Y colocarlo en una funda plástica limpia e identificarla con una tarjeta.

• información del remitente, • fecha de muestreo• cultivo, • edad del cultivo• manejo• localidad• si es posible indicar las coordenadas geográficas,

condiciones climáticas, aplicación de materia orgánica o productos biológicos, aplicación de agroquímicos (fertilizantes y pesticidas), etc.

¿Cómo se hace?

La composición del medio de crecimiento usado para contar poblaciones microbianas es importante, ya que afectara mi resultado final.

Selectivo

No selectivo

Elección de medios de cultivo

A las bacterias que obtienen su fuente de carbono a partir de compuestos orgánicos .

Medio de cultivo que se utiliza para su identificación agar nutritivo caldo nutritivo.

Fuentes de carbono y proteínas (peptona).

bacterias heterótrofas en menos de 3 días a 30 °C.

Técnica de cuenta por dilución en placa.

Bacterias totales por dilución en placa

Hongos totales por dilución en placa

Su desarrollo es muy lento. pH acido.

Medios con gran cantidad de azúcar fácilmente degradable.

Usar mezclas de agar papa-harina de maíz. Agar papa dextroxa adicionada con rosa de bengala

para permitir el conteo de hongos así como la adición de antibiótico.

Incubar a 30 °C 5 días.

Las bacterias hidrocarbonoclastas son aquellas capaces de crecer en presencia de hidrocarburos como única fuente de carbono y energía.

Método de aislamiento y cuenta de las bacterias técnica por dilución en placa

Medio mineral basal que contenga petróleo crudo o un hidrocarburo específico.

Se agrega rosa de Bengala y se ajusta pH 4

Bacterias hidrocabonoclastas por dilución en placa

En ausencia de un aceptador de electrones externo pueden catabólizar los compuestos orgánicos mediante fermentación.

Crecimiento se hace en medio de cultivo anaerobio utilizando glucosa como única fuente de carbono y aceptor de electrones.

Cuantificación se realiza con el numero mas probable. Utilizando como indicador el azul de bromotimol, indicador de acidez.

Bacterias fermentativas

DEFINICIÓN: REDUCTORAS DE AZUFRE

Son las bacterias que tienen la facultad de reducir sulfato, sulfito o tiosulfato de manera no asimilatoria, utilizandolos como aceptores de electrones, produciendo como desecho metabólico ácido sulfhídrico.

GÉNEROS : BRS.

• Actualmente se han reconocido 18 géneros, subdivididos en dos grandes grupos según si oxidan o no el acetato como fuente de carbono y energía

1. GÉNEROS Desulfovibrio, Desulfomonas, Desulfomaculum,

Desulfobulbus.

• Utilizan fundamentalmente lactato, piruvato y etanol como fuente de energía y de carbono, reduciendo el sulfato a sulfuro de hidrógeno.

2. GÉNEROS Desulfobacter, Desulfococcus,Desulfosarcina y

Desulfonema.

• Están particularmente especializados en la oxidación de acetato, reduciendo el sulfato a sulfuro.

Bacterias sulfato reductoras

Técnica del numero mas probable. Indicador positivo de la sulfato reducción se

muestra un precipitado negro de sulfuro de fierro, resultado de la reacción de sulfuro de hidrogeno producido por la reducción biológica de sulfatos

Incubar 30 °C durante 30 dias

Crecen en utilizando sulfato u oxidantes de sulfuro como aceptor de electrones y acetato, lactosa y glucosa como donadores de electrones.

El crecimiento especifico de las bacterias utilizando acetato como fuente de carbono y fierro como aceptor de electrones

Cuantificación por el NMP.

Se utiliza como indicador positivo el cambio de color en el medio de cultivo de amarillo a transparente presencia de citrato de hierro. Transparente indica reducción de Fe3+ a Fe2.

Incubar 30 °C durante 30 días.

Bacterias anaerobias reductoras de Fierro

El método es aplicable para el cultivo y la cuantificación de bacterias nitrato reductoras en para la técnica NMP

Se basa en el crecimiento especifico en un medio de cultipo anaerobio por la reducción de nitratos, empleando acetato como fuente de carbono.El número de bacterias se hace por la técnica del NMP analizando la aparición de nitritos por la adición de los reactivos Griess Llosvay y polvo de zinc

Griess Llosvay se basa en la adición de acido sulfanico y una solución acida de alfa naftalina las cuales deben reaccionar con los nitritos forman un complejo color rojo de diazonio p-sulfobenceno-azo-alfa naftilamina

Bacterias nitro reductoras

Se encuentran en la familia Euryarchaeota coccus, Methanobacterium.

Aerobios estrictos producen metano por fermentación de acetato o utilizando CO2 como aceptor de

electrones.

Crecimiento se hace en un medio de cultivo base anaerobio empleando acetato como fuente de

carbono. La cuantificación utilizando el NMP Como indicador la producción de metano.

30 °C durante 60 días

Bacterias anaerobias metanogénicas