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UNNERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA, FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA, ESCUELA DE BIOLOGÍA, LABORATORIO DE ENTOMOLOGIA Y PARASITOLOG~.
"Evaluación de la eficacia de Telenomus fariai rabinovichi De Santis et Vida1 como enemigo natural a nivel de huevos de Triatorna dimidiata,
principal vector del mal de Chagas en Guatemala".
Investigadora Principal : M. Sc. María Carlota Monroy Escobar Investigadora Asociada : Lic. María Eunice Enríquez Cottón
Auxiliar de Investigación : Br. Carlos Manuel Maldonado Apilera
INDICE
1. Resumen 2. Introducción 3. Antecedentes
A. Enfermedad de Chagas B. Control Biológico C. Parasitoides Como Agentes de Control Biológico D. Parasitoides de los Vectores del Mal de Chagas E. Parasitoides de Triatominos en Guatemala
4. Objetivos 5. Hipótesis 6. Metodología
A. Objeto de Estudio B. Población C. Colecta del Hospedero y su Enemigo Natural D. Crianza de Ratones y Conejos E. Mantenimiento y Cultivo de T. dimidiata F. Mantenimiento del Cultivo de T. fariai G. Experimentos
a. Porcentaje de Parasitismo Natural b. Duración del Tiempo de Vida c. Duración del Ciclo de Vida d. Capacidad de Parasitismo de una Hembra e. Preferencia de Parasitismo por la edad de los huevos f. Efecto de la Edad de los Huevos g. Capacidad de Búsqueda del Hospedero h. Efecto de la Carencia del Hospedero i. Evaluación de Fototropismo de Telenomus
D j. Fuente de Atracción de Telenomus fariai H. Técnicas de Análisis de Datos
7. Resultados A. Porcentaje de Parasitismo Natural B. Duración del Tiempo de Vida C. Duración del Ciclo de Vida D. Capacidad de Parasitismo de una Hembra
E. Preferencia de Parasitismo por la edad de los huevos F. Efecto de la Edad de los Huevos G. Capacidad de Búsqueda del Hospedero H. Efecto de la Carencia del Hospedero 1. Evaluación de Fototropismo de Telenomus J. Fuente de Atracción de Telenomus fariai
8. Discusión de Resultados A. Porcentaje de Parasitismo Natural B. Duración del Tiempo de Vida C. Duración del Ciclo de Vida
D. Capacidad de Parasitismo de una Hembra E. Preferencia de Parasitismo por la edad de los huevos F. Efecto de la Edad de los Huevos G. Capacidad de Búsqueda del Hospedero H. Efecto de la Carencia del Hospedero 1. Evaluación de Fototropismo de TeIenomus J. Fuente de Atracción de Telenomus fariai k. Utilización de T. fariai como Control Biológico
9. Conclusiones 10. Recomendaciones 11. Bibliografía 12. Ejecución Financiera de los Recursos Solicitados a FONACYT
1. RESUMEN
El objetivo de esta investigación fué contar con el conocimiento necesario sobre la
biología de Telenomus fariai ravinobichi, parasitoide de huevos de Triatoma dimidiata, para
conocer su eficácia en la utilización en el control de Triatoma dimidata, principal vector del mal
de Chagas en Guatemala y sugerir un plan de control integrado (añadiendo un control biológico
con parasitoides a las medida actualmente utilizada, que es la fumigación con piretroides).
Para determinar si 1 fariai rabrnovichz es eficáz en el control de Triatoma dimidiata se
estudiarón diez aspectos básicos de su biología a nivel de laboratorio: capacidad de parasitismo
(postura de huevos) de una hembra, capacidad de parasitismo con relación a la edad de los
huevos de su hospedero, preferencia por la edad de los huevos de su hospedero, tiempo de vida
de una hembra parasitoide. duración del ciclo de vida dinámica poblacional en condiciones
naturales, fuente de atracción por parte del hospedero, fototropismo, capacidad de búsqueda y
efecto de la competencia por el hospedero .
Las conclusiones del trabajo son las siguientes :
Se obtuvo que el parasitoide estudiado cuenta con una alta tasa de crecimiento
poblacional, su capacidad reproductiva es alta, el tiempo de cada una de las generaciones es
muy corto en relación a la de su hospedero, capaz de parasitar un amplio rango de edad de
los huevos y además tiene una alta especificidad con su hospedero. Lo que según Pschorn-
Walcher (1977) son características de un buen enemigo natural.
Para implementar un plan integral de control de triatorninos utilizando Telenomus se
debe esperar 6 meses después de la fumigación para liberarlos debido al efecto residual del
insecticida que podría matar a los parasitoides.
Según nuestros cálculos en una vivienda rural de bajareque o adobe existen
aproximadamente unos 300 vectores de los cuales un 15% son adultos hembras, calculando
la capacidad de parasitismo de Telenomus podemos inferir que deben soltarse 36 huevos de
Triatoma dimidiata que contienen aproximadamente 263 hembras de Telenomus. Creemos
que es factible alternar una fumigación y una liberación de parasitoides dejando por lo menos
6 meses de intervalo entre uno y otro evento, esto por supuesto debe ser objeto de estudio
en un experimento controlado a nivel de campo.
Consideramos que se tendrán mejores resultados si la liberación del parasitoide se
realiza un año después de la fumigación, en los meses de Marzo o Abril ya que para ese
entonces las poblaciones de Triatoma ya se habrán recuperado de la fumigación y comienzan
a reproducirse, este puede ser un buen momento para la liberación de Telenom~rs fariai.
Triatoma dimidiata es un vector de ciclo vital muy largo (1.5 años), el mantener las
poblaciones muy bajas utilizando el parasitoide puede ser una alternativa que produciría
menos daño al ambiente que la fumigación. Por otro lado Triatoma existe en condiciones
silvestres (cuevas) y en el peridomicilio (cúmulos de leña y gallineros) en donde la
fumigación con piretroides no sería efectiva, en cambio sí lo podría ser la liberación del
parasitoide.
El estudio con esta especie de parasitoide no debe llagar hasta aquí ya que hay
muchas incertidumbres acerca de su biología, comportamiento y ecología. Por lo que se
debe seguir investigando en el laboratorio cuestiones como efecto de los insecticidas,
optirnización de la reproducción masiva, además a nivel de campo se debe investigar las
liberaciones masivas de Telenomus, dinámica poblacional después de una liberación previa,
evaluaciones periódicas del la permanencia de los parasitoides en el campo, traslapar los
conocimientos sobre la biología y ecología de Triatoma dimidiata con los conocimientos de
la biología y ecología de su parasitoide, integración del control biológico con el control
químico y otras formas de control biológico como lo son los depredadores, aceptación de
este tipo de control por las comunidades afectadas por la enfermedad de Chagas, etc.
2. INTRODUCCI~N
El mal de Chagas es una enfermedad causada por el patógeno flagelado T v n o s o m a cruzi y
transmitida en Guatemala por los insectos vectores (orden Hemíptera, familia Reduviidae)
ñhodnius prolixus, Triatoma nitida y Triatoma dimidiata; siendo este idtimo el de mayor
distribución e importancia en Guatemala. Esta enfermedad es de mucha importancia ya que
afecta a las poblaciones humanas de escasos recursos, no tiene cura y es mortal, no presenta
síntomas hasta después de muchos años de haber sido adquirida y es de amplia distribución en
nuestro país (se encuentra distribuída en los 22 departamentos).
Los métodos utilizados actualmente para el control de las poblaciones de los vectores de
D la enfermedad de Chagas son principalmente: 1) Mejoramiento de vivienda eliminando de ésta
manera los refugios que les brindan las grietas que se fonnan en las casas de bajareque (mezcla
de barro y paja) donde es muy común encontrar a Triatoma dimidiata. 2) Educación a los
pobladores sobre la biología y comportamiento de los insectos vectores del Mal de Chagas para
que ellos mismos contribuyan a su eliminación y eviten la transmisión de dicha enfermedad.
3)Furnigación de las casas con insecticidas piietroides, que son efectivos pero por su corto
efecto residual hay reinfestación por parte de los insectos vectores que viven en el bosque,
además de ser dañino para el hombre y el ambiente.
Existen especies de arañas, chinches, avispas, hongos y bacterias que contribuyen en la
disminución y equilibrio de las poblaciones de Triatoma dimidiata, a los cuales se les llama
D enemigos naturales o controladores biológicos aborígenes. En Guatemala aún no se ha estudiado
nada sobre estos enemigos naturales y su uso en el control biológico de las poblaciones de
chinches vectores del Mal de Chagas.
Telenomus fmai rabinovichi es una avispa microhymenoptera de la familia Scelionidae.
Esta avispa es un parasitoide endógeno de huevos de dos especies de triatominos (chinches
hematófagas) que son conocidos como vectores de la enfermedad de chagas en Guatemala
(Triatoma dimidiata y Triatoma nitida).
En el presente trabajo se evaluó la eficacia a nivel de laboratorio de í? fariai rabinovichi
como enemigo natural de Triatoma dimidiata, con el objetivo de contar con el conocimiento
necesario sobre esta especie para implementar un plan de control integrado de los vectores,
mediante la integración de un control biológico con parasitoides a las medidas actualmente
utilizadas.
Para determinar si T. füriai rabinovichi es eficáz en el control de Triatoma drmidiata se
estudiarón diez aspectos básicos de su biología a nivel de laboratorio: capacidad de parasitismo
(postura de huevos) de una hembra, capacidad de parasitismo con relación a la edad de los
huevos de su hospedero, preferencia por la edad de los huevos de su hospedero, tiempo de vida
de una hembra parasitoide, duración del ciclo de vida, dinámica poblacionai en condiciones
naturales, fuente de atracción por parte del hospedero, fototropismo, capacidad de búsqueda y
efecto de la competencia por el hospedero. Estos experimentos junto con otros más son
D necesarios para conocer la biología de este parasitoide y crear las condiciones necesarias para
su reproducción masiva en el laboratorio y posteriormente su liberación y evaluación como
enemigo natural a nivel de campo.
3. ANTECEDENTES
A. Enfermedad de Chagas
La enfermedad de Chagas es una parasitosis que puede lesionar seriamente el
corazón, aparato digestivo y sistema nervioso ; estaba primitivamente restricta a los
mamíferos silvestres desde la Patagonia hasta el sur de los Estados Unidos. (Schofield,
1994)
Los reservorios silvestres conviven con las chinches silvestres y mantienen el
parásito responsable de la enfermedad, Trypanosoma cruzi. Cuando el hombre invade los
bosques ocurre un desequilibrio y las chinches son desalojadas de su ecotopo, invadiendo las
D viviendas rústicas del hombre y es así como la enfermedad llega al hombre y animales
domésticos. Hoy en día la OMS indica que de 16 a 18 millones de personas están infectadas,
con otros 90 millones en riesgo, lo que representa una prevalencia media del 4% de la
población total de Latinoamérica (Schofield, 1994).
Los principales vectores del mal de Chagas en Guatemala son: Triatoma dimidiata ,
Rhodniusprolixus y Triatoma nitida. Se considera que el vector más importante y de mayor
distribución es Triatoma dimidiata. (Ochóa et. al ,1996)
B. Control Biológico
El control biológico puede definirse como la utilización de enemigos naturales para el
D control de insectos plaga. El control biológico natural es en el que el hombre no maneja
activamente a los enemigos naturales y el control biológico aplicado o clásico es donde el
hombre sí manipula a los enemigos naturales. Las ventajas de este control biológico son la
seguridad, permanencia y economía.( Stehr F. 1990)
Una desventaja menor es que lleva mucho tiempo implantarlo debido a las
investigaciones que se requieren para ponerlo en marcha. Por el contrario los plaguicidas son
de pronta acción , pero también lleva mucho tiempo patentarlos.
El dificil manejo de las plagas debido a la resistencia de las mismas, la contaminación
ambiental, efectos letales en el hombre, la contaminación de alimentos con residuos (en el
caso de plagas agrícolas) y el uso excesivo de plaguicidas, han contribuido al impulso de
nuevas alternativas de control de plagas de importancia económica. En los últimos cinco
años en Guatemala se han creado instituciones privadas y comerciales que han impulsado
fuertemente el control biológico de plagas de importancia económica. (Hernández, 1992)
A principios del siglo XX, se introdujeron los primeros insectos benéficos en
Guatemala, se hizo una variedad de descubrimientos acerca de agentes naturales de control
que mantenían un equilibrio con su presa ( la mayoría de estudios hechos en el campo de la
agricultura), hasta en 1973 que se dio la primera liberación masiva de un agente de control
(1 0,000 Trichogrumu sp. y 5,000 larvas infectadas con virus). (Hernández, 1992)
C. Parasitoides Como Agentes de Control Biológico
Un parasitoide es una clase especial de depredador que a menudo tiene el mismo
tamaño que su hospedero, sus etapas inrnaduras se desarrollan dentro de éste -matandolo-
para posteriormente desarrollarse en adultos de vida libre.
Los parasitoides encuentran su mayor representación en el orden Hymenoptera en tres
grandes superfamilias : Ichneumonoidea , Chalcidoidea y Proctotrupoidea. También hay del
orden Díptera representados en varias familias pero Tachinidae es la de mayor importancia.
Los adultos generalmente se alimentan de néctar o pólen, pero tambien pueden
comportarse como depredadores, alimentandose de fluídos del cuerpo del huesped.
(Schotman & Lacayo, 1989)
Las larvas de parasitoides pueden alimentarse del interior (endoparasitoides) o del
D exterior (ectoparasitoides). Pueden atacar cualquier forma de vida , pero la gran mayoría
parasita huevos o larvas, algunas pupas y muy pocos adultos. Una especie solitaria de
parasitoide es la que vive sola dentro de un individuo huesped y la gregaria es la que
varios individuos de la misma especie completan su desarrollo dentro de un individuo
huesped. Algunos parasitoides pueden presentar poliembrionía, de un solo huevo se forman
muchos individuos idénticos, como ocurre en la familia Encyrtidae, Braconidae,
Platygasteridae y
Dryiniidae. (Stehr F. 1990) La gran mayoría de los endoparasitoides son monoembriónicos
(cada huevo desarrolla un sólo individuo). (Poinar y Thomas, 1984)
Los parasitoides tienen relaciones tróficas como : a) hiperparasitismo donde los
hiperparasitoides atacan a otros parasitoides a los que se les llama secundarios si atacan a
los primarios y terciarios cuando atacan a los secundarios b) Superparasitismo y c)
multiparasitismo son fenómenos similares , ya que la oviposición se da en los hospederos
que ya han sido parasitados. Algunas hembras son capaces de reconocer si el huevo ya ha
sido parasitado y no lo parasitan en caso de que haya hospederos abundantes, lo cual es
característica de un buen parasitoide, ya que los primeros huevos son los que se desarrollan.
El superparasitismo se presenta cuando existen más individuos de la misma especie, pero de
distintas hembras, en un solo hospedero que puede completar su desarrollo en una forma
normal, este se considera nocivo ya que se desperdicia la capacidad reproductiva (ya que la m 2da. o 3ra. hembra que oviposita tiene muy poca descendencia), si no es que se pierde, pero
puede ser el indicador de altos índices de parasitismo. Pero también podría ser benéfico ya
que reduce la siguiente generación reduciendo la presión sobre el hospedero. Otra ventaja
del superparasitismo es que se evita la encapsulación (tipo de defensa por parte del
hospedero, evitando el parasitismo) porque el hospedero no es capaz de matar a todos los
individuos dentro del huevo. (Stehr F. 1990)
El multiparasitismo se presenta cuando más de una especie de parasitoide comparte
el mismo hospedero, generalmente resulta con la muerte de la especie menos agresiva.
(Wratten S.D. 1987)
Los nutrientes del hospedero son ingeridos por el parasitoide a través del
m integumento de las larvas en desarrollo, algunas veces las células de la membrana embrional
se rompen y flotan libremente y sirve de alimento a las larvas. Muchas larvas respiran a
través del integumento ya que el sistema traqueal no es funcional , algunos han desarrollado
un elaborado mecanismo de obtención de aire a través del sistema respiratorio del
hospedero. En general , hay cinco estadios larvarios en los himenópteros parasitoides, que
varían desde tres a nueve y el número de larvas por tipo de hospedero varía según la especie
de parasitoide (desde 15 a 200 larvas). La temperatura influye en el tiempo de
desarrollo de los parasitoides dentro del hospedero: a 26 grados centígrados se desarrollan
en 24-27 días, si se disminuye la temperatura tardarán mucho más tiempo en desarrollarse, y
si se aumenta la temperatura tardarán menos tiempo. (Poinar & Thomas, 1894)
Tal como Pschorn-Walcher (1977) lo ha resumido, el enemigo natural que puede
tener éxito es aquel que tiene: 1) una gran capacidad de búsqueda, 2) una taza de
reproducción elevada, 3) una alta especificidad para el hospedero, 3) buena sincronización
con el hospedero y 5) una buena adaptabilidad para una amplia gama de condiciones
ecoclimáticas, por lo tanto un enemigo natural con estos atributos no permitirá que el
hospedero o la presa oscilen por arriba del nivel de daño económico. Desde el punto de vista
del control de plagas un enemigo así es ideal, ya que no se requiere manejo alguno después
de establecido, desafortunadamente no se han encontrado suficientes enemigos naturales
para muchas plagas por lo que se debe confiar en la integración de una o más técnicas de
manejo (control integrado de plagas). (Stehr,F. 1990) B
D. Parasitoides de los Vectores del Mal de Chagas
Muchas especies de parasitoides son actualmente estudiados por su potencial como
agentes de control biológico, dichas pueden parasitar larvas, pupas, huevos y hasta adultos.
Sin embargo los que parasitan huevos son muy raros, no por eso son poco abundantes. Tres
familias de parasitoides oófagos del orden Hymenóptera son las más comunes: Encyrtidae,
Eupelmidae y Scelionidae. De los pertenecientes a la familia Scelionidae hay más de 200
especies de Telenomus que en su mayoría son parasitoides de plagas agrícolas. (Altieri, et al.
1989)
Las chinches hematófagas no se escapan a ser parasitadas, es por eso que entre los
D diversos enemigos naturales de los triatominos se encuentran los microhimenópteros
parasitoides de los huevos de éstos, que han sido bastante estudiados. Por ejemplo desde el
descubrimiento de Telenomus fariai Costa Lima en huevos de Pansírongylus megrstus en
Brasil ,ha recibido la atención de muchos investigadores. Algunos trabajos se refieren a su
biología y ciclo de vida y otros al grado de parasitismo, tanto en la naturaleza como en
condiciones experimentales. Este microhimenóptero también fué utilizado para estudios de la
determinación de sexo. Así mismo Bosque y Ravinobich,1979 demuestran el
comportamiento de marcaje de Telenomus fariai , el cual permite a las hembras de esta
especie identificar aquellos huevos que han sido parasitados previamente por otros
individuos, evitando de esta manera el superparasitismo. (Rabinovich, 1 9 8 5)
Montesinos y Rabinovich, 1979 demuestran que existen diferencias entre poblaciones
proveiiielites de zonas tropicales de Centroarnérica donde hay Telt7itoriitis füi-iai ~.üEir~ovicJ~i,
q;e se ha encontrado en huevos de Triatoma pallidipertis, T. pI~yllomma, T. tibiomaculata
y T. dimidiata menos en T. infestans y en zonas de latitudes inferiores de Brasil y
Argentina donde hay Telenomus =fariai .fariai que, en condiciones de laboratorio, parasíta
huevos de T: maculata, T: Brasilensis, Zvittrceps, T. rubrovarla y Panstrongylus chinai, P.
megistus y P. herreri. (Xabinovich, 197 1)
Otra especie de Telenumus parasitoide de huevos de triatorninos es Telenomus
f:npl#o De Santis and Laiácona qtle t i i k reportado por Pified~ et a1 ,1978 Venen-lela
parasitando huevos de Psammolestes arthuri, fue reportado que puede parasitar, bajo B condiciones de laboratorio, huevos de R. prolixus por Feliciangeli et al., 1978. (Feliciangeli,
1978)
tTt; tsrcer parasitoide del gbnero TeÉenomus reportado es TeEenomus costalimai
Ortiz and Alvarm F e p x z s i t ~ nztcra!mnte hiievos de Rhahiers prolixus. Rabinovich et
al, en 2980 evaliiá la efec.tividc.4 de _T. iavtnlimni y On~ncyrtu~v tr7nid~devsj:v (LID
parasitoide de la familia Encyrtidae que también parasita huevos de R. pro1ixu.r) en
condiciones de campo. (Feíiciangeli, 1985)
E. Parasitoides de Triatominos en Guatemala
Monroy y Barrios (1984) descubrieron a un microhymenoptero parasitando de forma
B natural huevos de Rhodnius prolixus y lo nombraron Telenomus prolixus. Posteriormente
en 1997 con ia ayuda del Doctor Mni ro Kanayama, entomóiogo del Japón, se colectó una
especie di! parasitoide de hevos de R. pmlijiüs y ijoi íiiediu de la Doctora Marta Loiácofio
d-l Dep-irtamentn Cien?ífic,n de Entnmn!ngía del M t m ~ de la Plata, Brienos &res
Argentina, se pudo constatar que la especie encontrada en huevos de R. prolixus es
Ooencyrtus venatorius De Santis et Vidal. Se comprobó que, en condiciones de
laboratorio, parasita huevos de Xdimzdzata , pero en condiciones naturales no lo hace, esto
se zqiliea porque Rhodizius p?-~lixus y T. dimidiata casi nunca comparten el mismo
ecctopc y i.atcra!r??ecte el pzrasitoide no se encontraría frente a huevos de T. dimidiata.
Según ei Doctor Kanayarna O. venatorius podría actuar como parasitoide extranjero
en lugares donde se enweiitra s31u T. dirtzidiata.
En el laboratorio de Entomología de la escuela de Biología de la Universidad de San
Carlos de Guatemala, durante el primer semestre de 1998 se encontró un parasitoide
afectando los huevos de Triatoma dimidiata , el vector de la enfermedad de Chagas más
distribuido en toda Guatemala. Por medio de la Doctora Marta Loiacono se pudo constatar
que la especie encontrada en huevos de T. dimidiata es Teienomus fariai rabinovichi De
Santis et Vidal, el parasitoide estudiado en el actual pmj-ctc de iwextig~cibn.
4. OBJE'riVOS
A. Objetivo general
a. Evaluar !a eficac.ia de Telennmzís fariai como c~ntro! hiológic~ de! princip~l \rector del
mal de Chagas en Guatemala.
B. Objetivos específicos
a. Describir la &iíhica püblacioiial de la avispa a 10 largo de üií aiiü eií cuiídicioiies
nat_ilril!eo.
b. Estimar el tiempo de vida media de las hembras adultas de Telenomusforai sometidas a . .
distintos tratanientus alimzntiziüs.
c. Estimar el ciclo de vida medio a tres distintas temperatura.
d. Establecer cual es la capacidad reprodtietiva de tina hembra parasitoide ante 6:f 1 mates
cantidades de huevos de Triatoma di3idiata.
e. De1enliin;r.r si existe una preferencia de la h_enitira pnrasitoide pQr huevos de Tríato.m
dimidiata de cierta edad .
f. Determinar el efecto de la edad de 10s huevos de Triatoma dtmidiata sobre la capacidad
reproductiva de Tclenomus fariai.
g. Determinar la capacidad de biísqueda de una hembra de Telen~mzrs farini.
B h Describir cual es el efecto de la competencia entre hembras parasitoides por huevos de su
hospedero Triatoma dimidiata.
i. Observar si ias avispas parasitoides presentan fototropismo positivo.
j, Establecer cual es la füeilte de aii-a~ciün de T e l e n o s f ü i páia detecta a w líospedru
Iríiatom dimidiat~.
S. RIPOTESIS:
Tzknomus f m i ~ i es un buen controlador bioljgico de las poblaciones de fijatoma
dimidiata, debida a su alta capacidad repr^ductiva, a su alta capacidad de búsqueda y a su
parasitismo de un amplio rango de huevos de su hospedero.
A. Objeto de Estuciio
TcEcnomus ft:r";t:; r"t:EinoMcZi ea ünü üviapü mic:~himenópterü de 1% familia
m Sceiionidae, endaparásito de huevos de triatominos (chinches hematofagasj que son
conocidos como vcctorcs dz la ci"Ebrmedad de Chagas en Guatemala , entre silos Triat,r;tr;
dimi&& y Triadorna niti&.
B. Lugar de Colecta
Los paraitoides estt!djados fi~iron obtenidos de algunas casas de las aldea de El
Cuje, Potrerillos y Las Joyas, de Pueblo Nuevo Viñas, Santa Rosa, Guatemala.
C. C o ! ~ t s de! hospedero y su enemigs natural
Se realizaron _giras mensuales a las aldeas de El Cuje, Potrerios y Las Joyas, heblo
B Nuevo Viñas, Santa Rosa, Guatemala. Se buscaron casas de bajareque (casas construidas de
una mezcla de barro y material vegetd) donde se sueie albergar i: dimidiata. Posteriormente se
p i ~ e d i ó a. la mlecta de huevos, ~ikeas y adultos dc esta espezie, p m el rl;ilithIiierrio del
ccltivo de la chinche y de sc pa-aitcide. Yr? e! !&9rat9ri9 se separaron los huevos q ~ e evt&m
parsitados de lo que rm lo est~ban para iniciar tanto d ~i'ltivn de IIhidmcr &mi&& corno el
cultivo de su parasitoide Telenomus fariai.
D. Crianza de ratones y conejos
Se mantuvo una crianza de siete ratones y dos conejos para la alimentación de
7: dimidiata en estado de ninfa y adulto. Los ratones fueron mantenidos dentro de cajas de
plástico transparente cubiertos con una tapadera de malla. Como sustrato se utilizó aserrín, se
alimentaron con concentrado y agua . Los conejos se mantuvieron en jaulas especiales y al
igual que a los ratones, se les alimentó con concentrado y agua. Tanto a los conejos como los
ratones se les cambió comida y sustrato dos veces por semana. (Ochoa A et al., 1996)
E. Mantenimiento del cultivo de T. dimidiata
Estas chinches fueron mantenidas en una cámara ambiental a 26.5 "C y 50-60 % de
m humedad. Se alimentaron semanalmente, ofieciéndoles ratones de laboratorio inmovilizados
con una malla metálica, en total oscuridad, donde ellas succionan la sangre del ratón.
Para alimentar a los 3ro., 4to., Sto. estadios y adultos se utilizó un conejo debido a la
gran cantidad de sangre que succionan. Las chinches permanecieron dentro de envases de
plástico, debidamente etiquetados, tapados con una malla muy h a . Dentro de los fiascos se
colocan papeles doblados en forma de acordeón, para que de esa manera las chinches se
escondan de la luz y tengan el menor contacto unas con otras. (Ochoa A et al., 1996)
F. Mantenimiento del cultivo de T. Fariai rabinovichi
Al emerger las avispas de los huevos de Triatoma parasitados en el campo se les ofreció
D huevos fiescos, de 1-5 días de haber sido ovipuestos, para su reproducción. Estos cultivos se
mantuvieron dentro de tubos de vidrio de 6 cm. de alto por 1 cm. de diámetro con tapón de
corcho, en una cámara ambiental a 26 "C y 50-60% de humedad. Estos parasitoides no necesitan
agua ni comida para realizar sus actividades normales de reproducción. (Rabinovich J. et al,
1970)
G. Experimentos
Se realizarón varios experimentos tanto en el campo como en el laboratorio para
evaluar la efectividad de Telenomus fariai como agente de control biologico de T.
dimidiata.
a. Porcentaje de parasitismo natural
Se realizó 1 gira a Villa Canales (aldea de El Jocotillo), Guatemala, Guatemala y 3
giras a Pueblo Nuevo Viñas (aldeas El Cuje, Potrerillos, La Joya, Ixpaco y Caserio San
Miguel), Santa Rosa, Guatemala. En casas de Bajareque (mezcla de barro y paja) se D buscaron huevos de Triatoma dimidiata que estubieran parasitados por Telenomus
fariai. Se tomaron como huevos parasitados los siguientes: si los huevos tenían coloración
marrón o negra y si los huevos estaban vacios pero con un solo orificio diminuto en el
lado apuesto a opérculo (donde el parasitoide ya salió) . Se tomaron como huevos no
parasitados: si tenían una coloración blanca o naranja y transparente con el orificio del
operculo abierto (donde ya salío la chinche). Posteriormente se escogieron 20 casas donde
hubo indicios de parasitoides para trabajar en la dinámica poblacional de Telenomus fariai
(al final se trabajó solamente con 14 casas).
A cada una de estas casasa se llevarón 20 huevos de Triatoma procedentes del
laboratorio, divididos en 4 grupos de 5 huevos cada uno dentro de tubos eppendorf con la
D tapadera perforada con orificios tan pequeños que solo podía entrar el parasitoide y si en
dado caso nacian las chinches no podrían salir. (Ver Anexo 1-A) Se colocaron estos tubos
entre las grietas de la pared de las casas visitadas.
Se hicieron un total de 12 giras en un año, de Abril a Enero, para colocar y
recoger los huevos (un total de 8 muestreos). Estos hue1.l~~ se exminaror, en el
laboratorio y se dividieron en grupos de: parasitados, no parasitados e incertidumbre (estos
últimos se revisaron otra vez 15 ó 20 días después).
b. Duracion del tiempo de vida
Para este experimento se utilizaron 3 tratamientos :
1. Sin Comida (control) : Se colocó una hembra parasitoide en un vial de vidrio de 6
cms. de alto por 1 cm. de diámetro con tapón de corcho. Se realizaron 26 replicas de este
tratamiento.
2. Con Huevos : Se colocó una hembra parasitoide en un vial de vidrio de 6 cms. de alto
por 1 cm. de diámetro con tapón de corcho. Además se le colocaron 3 huevos de
Triatoma dimidiata de 1-2 días de haber sido ovipuestos. No se les colocó comida. Se
realizaron 23 réplicas de este tratamiento.
m 3. Con Comida : Se colocó una hembra parasitoide en un vial de vidrio de 6 cms. de
alto por 1 cm. de diámetro con tapón de corcho. Además se le colocó un rectangulo de
papel filtro empapado con agua azucarada al 5%, el cual se cambió diariamente para evitar
el crecimiento de hongos. Se realizaron 30 replicas de este tratamiento.
Cada uno de los tratamientos se efectuaron dentro de una cámara ambiental a 26.5
"C y 50-60 % de humedad. Se observó diariamente cada una de las réplicas y se apuntó el
tiempo que viviá cada una de las hembras. (Ver Anexo 1 -B)
c. Duración del ciclo de vida
Se realizaron los siguientes tratamientos :
D 1. 345 huevos de Triatoma dimidiata parasitados por Telenomus fariai se colocaron en una
incubadora a 24 "C.
2. 55 huevos de Triatoma dimidiata parasitados por T. fariai se colocaron en una
incubadora a 26 "C.
3. 82 huevos de Triatoma dimidiata parasitados por T. fariai se colocaron en una
incubadora a 28 "C.
Los huevos se revisaron cada dos días para observar su desarrollo. Se observó el
tiempo total de desarrollo desde el momento en que son parasitados hasta el día de la
eclosión de los huevos. Se calculó el porcentaje de machos y hembras de T. fariai que
nacieron de los huevos parasitados.
d.capacidad de parasitismo de una hembra
Para evaluar la capacidad reproductiva de T. fariai se efectuaron los siguientes
tratamientos :
1. A una hembra parasitoide se le colocaron 3 huevos de Triatoma dimidiata. Se realizaron
23 repeticiones de este tratamiento.
2. A una hembra parasitoide se le colocaron 5 huevos de Triatoma dimidiata . Se
realizaron 23 réplicas de este tratamiento.
3. A una hembra parasitoide se le colocaron 7 huevos de Triatoma dimidiata. Se
realizaron 24 réplicas de este tratamiento. ' 4 A una hembra parasitoide se le colocaron 10 huevos de Triatoma dimidiata. Se
realizaron 22 réplicas de este tratamiento.
5. A una hembra parasitoide se le colocaron 15 huevos de Triatoma dimidiata. Se
realizaron 25 réplicas de este tratamiento.
Las hembras fueron colocadas en viales de vidrio de 6 cm de alto por 1 cm de
diámetro. Los huevos tenían de 1-2 días de haber sido ovipuestos. Se observó cuantos
huevos fueron parasitados (huevos negros o marrón), cuantos huevos no fueron parasitados
(huevos anaranjados o blancos). Se anotó la fecha en que eclosionaron los huevos que
fueron parasitados y se calculó el porcentaje de machos y hembras del total de la
progennie. (Ver Anexo 1 -D)
e. Preferencia de parasitismo por la edad de los huevos del hospedero
Se preparó una caja redonda de 25 cms de díametro por 7 cms de alto, a la cual se
le incrustaron cinco viales de vidrio de 1 cm de diámetro por 6 cms de alto. Dentro de
cada uno de los viales se colocarón cinco huevos de cinco edades distintas de Triatoma
dimidiata. Las edades fueron las siguientes : 1-5 días, 6-10 días, 1 1-1 5 días, 16-20 días y
21-25 días de haber sido ovipuestos. En el centro de la caja se colocó una hembra de
Tedenomus.fmiai. 25 días después se observó cuantos huevos fueron parasitados (color
marrón o negro) y cuantos no fueron parasitados (color naranja a blanco). De los huevos
que fueron parasitados se observó el porcentaje de hembras y machos y tiempo de
desarrollo. Se realizaron 21 replicas del experimento. (Ver Anexo 1-E)
f. Efecto de la edad de los huevos del hospedero sobre la progenie
Para este experimento se realizaron los siguientes tratamientos :
1. A una hembra parasitoide se le colocaron 10 huevos de Triatoma dimidiata de 1-5 días
de haber sido ovipuestos. Se realizaron 37 réplicas de este tratamiento.
2. A una hembra parasitoide se le colocaron 10 huevos de Triutomu dimidiata de 6- 10 días
de haber sido ovipuestos. Se realizaron 23 replicas de este tratamiento.
D 3. A una hembra parasitoide se le colocaron 10 huevos de Triatoma dimidiata de 1 1 - 1 5 días
de haber sido ovipuestos. Se realizaron 26 réplicas de este tratamiento.
4. A una hembra parasitoide se le colocaron 10 huevos de Triatoma dimidiata de 16-20
días. Se realizaron 33 réplicas de este tratamiento.
Las hembras fueron colocadas en viales de vidrio de 6 cm de alto por 1 cm de
diámetro. Se observó cuantos huevos fueron parasitados (huevos negros o marrón), cuantos
huevos no fueron parasitados (huevos anaranjados o blancos). Se anotó la fecha en que
eclosionaron los huevos que fueron parasitados y el porcentaje de machos y hembras. (Ver
Anexo 1-F)
g. Capacidad de búsqueda del hospedero
Se utilizaron 7 cajas herméticas de las siguientes dimensiones : 0.0014m3, 0.016
m3: 0.038 m3: 0.053 m3, 0.28 m3, 1.32 m3 y 24.6 m3. A las cuales se les colocó 4
tapaderitas de 1 cm de alto por 1 cm de diámetro con 3 huevos de T. dimidiata cada una.
Dentro de cada una de las cajas se liberaron 10 parasitoides. Estas se mantuvieron a
temperatura ambiente 4 días, luego se sacaron los huevos de las cajas y se colocaron en
una cámara ambiental a 26.5 "C y 50-60% de humedad. Posteriormente se contaron
cuantos huevos fueron parasitados según los diferentes tratamientos. (Ver Anexo 1-G)
h. Efecto de la carencia del hospedero en la progenie
Se realizaron los siguientes tratamientos :
1. A un huevo de Triatoma dimidiata se le colocó una hembra parasitoide. Se realizaron 38
réplicas de este tratamiento.
2. A un huevo de Triatoma dimidiata se le colocaron 3 hembras parasitoides. Se realizaron
28 réplicas de este tratamiento.
3. A un huevo de Triatoma dimidiata se le colocaron 5 hembras parasitoides. Se realizaron
25 réplicas de este tratamiento.
4. A un huevo de Triatoma dimidiata se le colocaron 7 hembras parasitoides. Se realizaron B 28 réplicas de este tratamiento.
5. A un huevo de Triatoma dimidiata se le colocaron 9 hembras parasitoides. Se realizaron
24 réplicas de este tratamiento.
Los huevos utilizados fueron de 1-2 días de haber sido ovipuestos. Las hembras y
los huevos fueron colocados cada cual en viales de vidrio de 1 cm de diámetro por 6 cms
de altura. Cuando eclosionaron los huevos parasitados se calculó el porcentaje de machos
y hembras. (Ver Anexo 1-H)
i. Evaluacion del fototropismo de Telenomus
A manera de prueba preliminar, se introdujeron 100 parasitoides en un vial de 1
B cm de diámetro por 6 cms de altura con tapón de corcho, se cubrió un extremo del vial con
un papel obscuro, se esperó 3 min. y se observó la reacción de Telenomus. Se repitió
la prueba de esta misma manera pero tapando el otro extremo del vial.
Como en las 20 réplicas realizadas de la forma anterior se observó un fototropismo
positívo de Telenomzrs, se decidió hacer otra prueba pero de forma cuantitativa. La prueba
es la siguiente :
Se colocó un promedio de 30 parasitoides en un recipiente plástico transparente de
12 cms de diámetro y 10 cms de altura, el cual fue cubierto en una de sus mitades, por
lado fuera, con papel negro y se le colocó el mismo tipo de papel a modo de tabique (con
ocho perforaciones dispuestas de forma simétrica), separando el interior del recipiente en
dos mitades, una clara y una oscura. Se tomó el número de parasitoides del lado claro en
diferentes tiempos ( 0 min, 10 min, 20 min, 30 min, 40 min, 50 min, 60 min, 70 min, 80 min
y 90 min ). Se contó el total de parasitoides cuando estos murieron. Se realizaron 20
réplicas de este experimento. (Ver Anexo 1-1)
j. Fuente de Atracción de Telenomus fariai
A una caja de 25 cms de de diámetro y 7 cms de alto se le incrustó a los lados 5
viales (de 6 cm de largo por 1 cm de diámetro), los cuales contenían lo siguiente: 1)
heces de Triatoma dimidiata 2) huevos de Triatoma dimidiata, 3) Un macho de
Triatoma dimidiata 4) Una hembra de Triatoma dimidiata y 5) Un control, que era una
hembra parasitoide solamente sin comida y sin huevos.
Se tomó como parámetro el peso promedio de una chinche adulta, luego se tomaron
pesos equivalentes de huevos y heces.
Se introdujeron 15 parasitoides dentro de el dispositivo preparado, se esperó el
tiempo necesario para que un primer parasitoide se introdujera en alguna de las cinco
alternativas. Se realizaron 20 réplicas de este experimento. (Ver Anexo 1-J)
H. Técnicas de Análisis de Datos
Se utilizó estadística no paramétrica para al análisis de los datos de todos los
experimentos. En los resultados se indica cada uno de los análisis utilizados. Se usaron tres
8 diferentes análisis :
1) Bondad de Ajuste de Ji-Cuadrado para comprobar si habia diferencia significativa en la
relación de dos variables en los diferentes tratamientos utilizados.
2) Análisis de Kruskall-Wallis para comprobar si habia diferencia significativa de una
variable en los diferentes tratamientos utilizados.
3) Rangos de Correlación de Spearman para comprabar si dos variables estaba
correlacionadas.
7. RESULTADOS
A. Porcentaje de parasitismo natural
Tabla No. 1
Número de huevos de Triatoma dimidiata parasitados en cada una de las casas muestreadas en los diferentes meses a lo largo de un año
Tabla No. 2
Casa 14 TOTAL
Número y porcentaje de casas donde se encontró parasitoide en cada uno de los meses muestreados a lo largo de un año.
O O
" MESES DEL ANO
Enero Mayo Junio Julio
Agosto Septiern bre
Octubre Noviembre
O O
No. Casas con Parasitismo
2 2
No. 011 4 011 4 311 4 1/14 1/14 011 4 111 4 011 4
O 7
% O O
21.4 7.1 7.1
O 7.1
O
O 7
2 19
O O
O 5
O O
Meses del Afio
Gráfica No.1 En esta gráfica se puede observar que solamente en los meses de Junio, Julio, Agosto y Octubre encontramos por lo menos una casa con huevos de Triatoma dimidiata parasitados. En Julio se muestra el mayor pico del número de casas donde se encontró Telenomus.
Tabla No. 3
Numeroy porcentaje de huevos parasitados dentro del total de huevos recuperados en cada una de las casas muestreadas a lo largo de el año. *
* muchos huevos de los que fueron colocados originalmente en las casas se extraviaron.
Casa 3
Casa 6
Casa 9
Casa 13
Casas con Presencia de Parasitoide
Casa 14
Gráfica No.2 En la gráfíca se observa el número de las casas en donde se encontró parasitoide y el número de huevos parasitados en cada una de ellas. Se observa que solamente en 5 de las 14 casas muestreadas fue encontrado Telenomus y que en la casa número 6 y 9 fue donde más huevos parasitados se encontraron (5 huevos ).
B. Duración del tiempo de vida de la hembra parasitoide
Tabla No. 1
Tiempo de vida de una hembra parasitoide ante distintos tratamientos alimenticios
TIEMPO DE VIDA PROMEDIO (D~AS) 2
1,7 4 2
No. 1 2 3
TRATAMIENTOS Sin Comida Con Huevos Con Comida
Sin Comida Con Huevos Con Comida
Diferentes Tramiento Alimenticios
Gráfica No. 1 Se puede observar el tiempo de vida de una hembra de Telenomus fariai ante los tres distintos tratamientos, 1) control, 2) con huevos y 3) con agua azucarada al 5 % . Se concluye que sí hay diferencia significativa en la duración del tiempo de vida de una hembra de Telenomus ante los tres tratamientos con un p=0.0000 (Análisis de Kruskall-Wallis). La hembra parasitoide dura viva más tiempo con comida (agua azucarada al 5%) que sin comida y dura menos tiempo con la presencia de huevos que sin comida.
C. Duración del ciclo de vida
Tabla No. 1
Duración del ciclo de vida y el numero de parasitoides que conforman las progenies resultante de Telenomus fariai a tres diferentes temperaturas.
TRATAMIENTOS DURACION DEL CICLO (X)
HEMBRASIPROGENIE MACHOSIPROGENIE TOTAL PROGENIE
28 "C 22,2 7,3 1
8,3
23 "C 40,8 6,s 1 2 7,7
26 "C 25,2 6,5 2,25 8-7
Diferentes Temperaturas
Gráfica No. 1 Se puede observar la duración en días del ciclo de vida de Telenomus ante tres distintas temperaturas. Se concluye que sí hay una diferencia significativa en la duración del ciclo a diferentes temperaturas con un p=0.0000 (Análisis de Kruskal-Wallis). A menor temperatura la duración del ciclo es mayor y a una mayor temperatura la duración del ciclo es menor. Existe entonces una relación inversamente proporcional entre temperatura y duración del ciclo de vida.
HEMBRAS BMACHOS
TOTAL
Diferentes Temperaturas
Gráfica No.2 Se puede observar el número de parasitoides que conforman las progenies de Telenomus resultantes de tres temperaturas diferentes. Se concluye que sí hay diferencia significativa en la proporción de sexos de la progenie resultante de Telenomus a tres temperaturas diferentes con un P= 0.0000 (Análisis de Ji-Cuadrado) . A 26 OC la proporción de machos es mayor que a 23 OC y 28 'C.
D. Capacidad de parasitismo de una hembra
Tabla No. 1
Huevos de Triatoma dimidiata parasitados por Telenomus fariai ofrecidos en diferentes cantidades.
Y - 3 Mevos 5 Mevos 7 Mevos 10 Hinros 15 HRlos
Diferentes Cantidades de Huevos de T. dimidiata
TRATAMIENTOS 3 Huevos 5 Huevos 7 Huevos 10 Huevos 15 Huevos
Gráfica No. 1 Se muestra el número y porcentaje de huevos de Triatoma dimidiata que fueron parasitados y que no lo fueron, por su parasitoide Telenomus, ante una cantidad creciente de huevos ofrecidos Se concluye que sí hay diferencia siwcativa en la proporción de huevos parasitados y no parasitados con un P=0.0000 (Análisis de Ji-Cuadrado). Hay una relación inversa entre el número de huevos parasitados y el aumento de la cantidad de huevos de T. dimidiata ofrecidos a Telenomus. A menor número de huevos ofrecidos es mayor el parasitismo.
SI PARASITADOS
No. 2,83 4,56 5,58 5,4,1 4,67
NO PARASITADOS
YO 94,3 91,2 79,7 54,l 31,l
No. 0,17 0,43 1,42 4,59 10,33
% 5,7 8,6
20,3 459 68,9
Macho de Telenot?~us.foricli saliendo del liuevo. Auinento 100s. Mildred Mejía. 1996.
Mildred Mejía. 1996.
Antenas de un Maclio de TelennniusJ~rini.. Aumento 300':. Mildred Mejia, 1.996.