esterilizacion y siembra
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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA
UNIDAD IZTAPALAPA
CIENCIAS BÁSICAS E INGENIERÍA
LICENCIATURA EN INGENIERÍA QUÍMICA
DISEÑO DE UNA PLANTA INDUSTRIAL PARA LA PRODUCCIÓN DE EDULCORANTE
NATURAL A PARTIR DE STEVIA
LABORATORIO DE PROCESOS Y DISEÑO
TESIS PROFESIONAL QUE PARA OBTENER EL GRADO DE
LICENCIATURA EN INGENIERÍA QUÍMICA PRESENTA BELLO CRUZ HILARIO 96216385 GUEVARA MARTINEZ MARTÍN 93220338 ASESOR. Dr. Jaime Vernon Carter
Vo. Bo.
1
1. INTRODUCCIÓN 2. ESTUDIO DE MERCADO 3. ¿QUÉ ES LA STEVIA? 4. ¿QUÉ ES EL ESTEVIÓSIDO? 5. ¿CÓMO SE LOGRO LA MICROPROPAGACIÓN? 6. PRUEBAS DE TOXICIDAD 7. LA SEGURIDAD DE LOS AZUCARES DE STEVIA 8. LOCALIZACIÓN DE LA ZONA DE CULTIVO Y DE LA NAVE
INDUSTRIAL 8.1 ZONA DE CULTIVO
8.1.1 CONDICIONES IDEALES PARA EL CULTIVO DE LAS PLANTAS DE STEVIA
8.1.2 HUMEDAD 8.1.3 TEMPERATURA 8.1.4 TOPOGRAFIA 8.1.5 FERTILIZANTES QUÍMICOS 8.1.6 DATOS CLIMÁTICOS DE LA ZONA DE CULTIVO 8.1.7 DATOS GENERALES SOBRE LA ZONA DE CULTIVO 8.1.8 UBICACIÓN DEL TERRENO DE SIEMBRA 8.1.9 SUB-ARRENDAMIENTO DE TERRENO DE CULTIVO
9. NAVE INDUSTRIAL 10. PROCESO DE OBTENCIÓN DEL EDULCORANTE
10.1 PARTE EXPERIMENTAL 10.2 EXTRACCIÓN 10.3 IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACION DE LAS MUESTRAS
OBTENIDAS POR LA EXTRACCIÓN CON METANOL 10.4 RESULTADOS
10.4.1 SECADO 10.4.2 EXTRACCIÓN DEL ESTEVIOSIDO USANDO METANOL
AL 100% 11. EXTRACCIÓN CON FLUIDOS SUPERCRÍTICOS
11.1 ¿QUE ES EL CO2 SUPERCRITICO? 11.2 EXTRACCIÓN DEL ESTEVIÓSIDO POR MEDIO DEL
EXTRACTOR CON FLUIDO SUPERCRÍTICO. 11.3 ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS POR LA EXTRACCIÓN DEL
EDULCORANTE CON FLUIDO SUPERCRITICO. 12. PROCESO
12.1 PROCESO DE OBTENCIÓN DEL ESTEVIOSIDO 12.2 MATERIA PRIMA 12.3 PROCESO PROPUESTO 12.4 CROQUIS DE LA PLANTA INDUSTRIAL
1133.. CCAAPPAACCIIDDAADD AA IINNSSTTAALLAARR,, MMOONNTTOO DDEE LLAA IINNVVEERRSSIIÓÓNN,, YY CCAAPPIITTAALL DDEE TTRRAABBAAJJOO.. 1133..11 PPEERRSSOONNAALL 13.2 CCOOSSTTOOSS DDEE PPRROODDUUCCCCIIÓÓNN 13.3 GANANCIA/ AÑO
3 4 7 9 10 11 12 12 12 12 12 13 13 13 13 15 15 15 16 18 18 18 19 20 20 21 23 24 26 27 27 27 27 28 29 30 31 32 33
INDICE
2
1144.. RREESSUULLTTAADDOOSS DDEELL DDIISSEEÑÑOO
1144..11 CCAARRAACCTTEERRÍÍSSTTIICCAASS DDEELL EEQQUUIIPPOO UUTTIILLIIZZAADDOO EENN EELL PPRROOCCEESSOO
14.2 LISTA DE EQUIPOS DEL PROCESO APÉNDICE A: PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES PARA MEDIO MS (MURASHIGE SCOOK) APÉNDICE B: EQUIPO DE SECADO APÉNDICE C: CUANTIFICACIÓN DE LA CANTIDAD DE ESTEVIÓSIDO POR MEDIO DE SOXHLET APÉNDICE D: ANÁLISIS DE LAS MUESTRA OBTENIDAS POR MEDIO DEL HPLC. APÉNDICE E: CROMATOGRÁMAS DE LOS ESTÁNDARES DE AZÚCARES APÉNDICE F: EXTRACCIÓN CON FLUIDO SUPERCRÍTICO APÉNDICE G: DATOS EXPERIMENTALES OBTENIDOS EN UN APARATO DE EXTRACCIÓN SUPERCRÍTICA PARA EL CASO DE LA STEVIA APÉNDICE H: S E G U R I D A D
STEVIA REBAUDIANA BERTONI APÉNDICE I: S E G U R I D A D
DIOXIODO DE CARBONO LIQUIDO Y GASEOSO
15. BIBLIOGRAFÍA
34 34 35 36 38 39 40 41 43 44 46 51 62
3
1. INTRODUCCIÓN
Dada su gran importancia y relación con la industria de los alimentos, los
edulcorantes han encontrado diversas aplicaciones. Una de ellas, esta en la fabricación de
bebidas dietéticas y productos bajos en calorías.
Diversas substancias edulcorantes son elaboradas químicamente para su uso en la
preparación de alimentos de consumo humano con diferente objetivo, ya sea para conservar
la vida de los alimentos, hasta mejorar el sabor, color, aroma y otros aspectos. Sin embargo,
la adicción a estas sustancias químicas se da muy fácilmente, y con el tiempo las
consecuencias a la salud pueden ocasionar un peligro. Se ha encontrado que el edulcorante
natural Stevia, posee grandes beneficios a la salud tanto de personas que sufren de diabetes
como de sobrepeso así como de toda la población en general. En la actualidad en México
una de cada tres personas esta afectado por la obesidad que afecta tanto a hombres como a
mujeres, y en el caso de Estados Unidos un estudio llevado a cabo revela que existen casi
160 millones de americanos que hacen uso de un sustituto dietético, siendo el Aspartame el
edulcorante más utilizado. Por otro lado en el ámbito mundial se ha generado un
movimiento al consumo de alimentos sanos de preferencia de origen natural porque la
gente se ha dado cuenta de la importancia de cuidar su salud.
El objetivo es crear una infraestructura adecuada a las necesidades de la planta
Stevia para obtener una cosecha y una producción mecanizada eficaz pues se pretende
lograr la producción en masa de esta planta, la cual es originaria del norte Paraguay,
creando el medio tanto climático como nutricional de la misma, una vez logrado esto el
procesamiento para la obtención del edulcorante esteviosido será el paso final de la
investigación.
4
2. ESTUDIO DE MERCADO
Estados Unidos de América es el país, con mayor venta de bebidas gaseosas, el
segundo lugar lo ocupa México, y el tercer lugar lo ocupa Brasil. En México, hay
aproximadamente casi 100 marcas de refresco, el 66% es de sabor de cola y el 34% de
sabores. Los refrescos de dieta bajos en calorías tienen una preferencia del 2% de las
ventas totales de la industria.
El sistema Coca cola maneja el 60% del mercado mexicano con ventas que superan
los 7 mil millones de litros, en Brasil se consumen 5 mil millones de litros de bebidas
gaseosas al año casi el 8% menos. Las empresas transnacionales siempre buscan que la
población a la que va dirigido su producto tenga una edad que oscila entre los 10 y 24 años
de edad, que es considerado como el intervalo de consumo de la bebida sabor cola.
Listos para dar la guerra están los edulcorantes bajos en calorías, y de origen
natural, como la Stevia que incluso en Brasil se propuso que fuera incluido en todas las
bebidas gaseosas. En Japón más de 50 compañías lo usan en bebidas gaseosas, comida
enlatada, helados, caramelos y Pepsi diet.
A pesar de las acusaciones, el negocio de los refrescos y otra bebidas no
alcohólicas, es uno de los más rentables de la industria alimentaría, pues es un importante
generador de fuentes de trabajo.
Los refrescos están compuestos de manera básica por agua carbonatada, azúcares
obtenidos de caña o maíz u otros edulcorantes como el Aspartame, Sacarina, Ciclamato de
Sodio, etc., muy usados en productos dietéticos, el concentrado proporciona el sabor y
color, y un ácido para dar la característica agridulce.
5
La razón de sustituir los edulcorantes artificiales por edulcorantes naturales es
principalmente a problemas asociados con la salud y el uso del Aspartame. Uno de los
importantes edulcorantes naturales que se comercializan a nivel mundial y que compite con
los artificiales es la Sacarosa del cual la Organización de las Naciones Unidas para la
Agricultura y la Alimentación(FAO), estimó que la producción mundial de azúcar de caña
para 1998/99 en 129 millones de toneladas, 6.5% más que el año anterior.
Para 1999/2001 la producción mundial de azúcar de caña se estimó en 134.3
millones de toneladas, 2% mas que el año anterior y superior a la demanda prevista. Sin
embargo, al final de febrero del 2001 el precio diario del azúcar, de acuerdo a un convenio
internacional llegó a su nivel mas bajo, 4.70 centavos de dólar por libra(11 centavos de
dólar por Kg.), pero en abril y finales de mayo el precio se recupero un 30%, esto debido a
la demanda de importaciones de mercados importantes como la Federación de Rusia,
Bangladesh, Pakistán e Indonesia.
Se prevé que en Brasil la producción aumentara en 300,000 ton. En Cuba la
producción debería alcanzar los 4 millones de toneladas. En México, se estima que la
producción azucarera se mantendrá estable en 5.1 millones de toneladas pese a las
condiciones atmosféricas.
Para los demás países como Brasil deberán disminuir su producción en 3,8 millones
de ton, o sea un 10% quedando a 16 millones de ton. En Cuba, la producción deberá
aumentar 200, 000 ton a 4,2 millones de ton como una muestra de mejorar la eficiencia de
la elaboración, mientras que en México la producción deberá mantenerse estable en 5
millones de toneladas, pues existen dificultades comerciales que afligen a la industria.
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Gráfica 1 .- Edulcorantes en algunos países.
De esta manera se presenta un panorama general en el cual tomando como base al
azúcar, el mercado para la Stevia podría resultar atractivo.
DEMANDA E IMPORTACIONES DE LAS HOJAS DE STEVIA
! Brasil es el primer productor de América Latina con 1200 Ha
! Paraguay cuenta con 700 Ha
! Canadá tiene un programa gubernamental de producción de Stevia con 100 Ha
! Japón es él mayor consumidor de azúcar de Stevia desde hace 25 años inclusive la
transnacional Coca-Cola tuvo que utilizar a usar este edulcorante natural, así mismo
el 75% de sus productos hechos a base de azúcar se elaboran con azúcar de Stevia.
Producción de Edulcorantes (1999-2000)
0
5000
10000
15000
20000
25000
30000
Francia Alemania Italia España RestoEuro.
TotalEuro.
TotalAfrica
Canadá EE.UU. México Cuba Resto ANyC
mile
s de
tone
lada
s po
r año
Azúcar de remolacha Azucar de caña Fructuosa
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3.-¿Qué es la Stevia?
La Stevia es un miembro de la familia de las Compositae. Y uno de los 154 miembros
del genero stevia. Depende de un tallo pequeño de 65 centímetro de alto. Las flores son
pequeñas (7-15 mm), de color blanco (Robinsón 1930) Esta especie se caracteriza por un
pequeño rango de habitas naturales, mejor conocidos como microclimas.
La Stevia es un diploide y tiene 11 cromosomas pares que es característico para la
mayoría de los miembros del género del Sur de América (Frederico et al) 1996)
La Stevia es una planta perenne (es decir siempre esta verde) que produce una
variedad de azúcares de alto-potencial (intensos) bajos en calorías, estos se encuentran en
el tejido de la hoja y en algunas partes a lo largo del tallo. Los azucares de la Stevia son
ampliamente utilizados en muchos alimentos, en varios países incluido Japón, Brasil y
China.
La Stevia, es normalmente conocida, en el valle de Río Monday en el Noroeste de
Paraguay. Los conquistadores habían informado de la Stevia a España durante el siglo XVI
pero esta información permanecía oculta, hasta que atrajo de nuevo la atención por los
europeos en 1888 debido principalmente a M.S. Bertoni. Antes del descubrimiento
europeo, mucho tiempo atrás, era conocida por las gentes Guaranís, indígenas nativos de
esa región. El Guaraní lo llamó el caá-êhê, que significa la hierba dulce y se utilizó para
endulzar las bebidas amargas.
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Las hojas de Stevia contienen diterpenoides steviol-glucósidos (SGs) los cuales son:
Esteviósido Rebaudiósido C
Rebaudiósido A Dulcosido A
Otros dos glucósidos que se encuentran presentes en el tejido de la planta son el
rebaudiósido D y rebaudiósido E. También el rebaudiósido B ha sido detectado pero los
estudios indican que es probable que se forme artificialmente durante el aislamiento de
estos glucósidos.
Las proporciones normales (en peso w/w) de los cuatro glucósidos más importantes
son: el esteviósido 5-10%, rebaudiósido A 2-4%, rebaudiósido C 1-2% y dúlcosido A 0.5-
1%. Ellos son 300 veces más dulces que el azúcar de caña. Se ha conocido por mucho
tiempo que el rebaudiósido A tiene las propiedades más sensitivas al gusto -más dulce- y
más marcadas de los cuatro glucósidos del steviol. Los glucósidos del steviol son estables
al calor y no cambian de pH, no son fermentables y no se oscurecen al cocinar. Por
consiguiente tienen una amplia gama de aplicaciones en los productos de comida. También
son no tóxicos y no mutagénicos.
Por consiguiente tales compuestos pueden ser usados con éxito como alternativas para
pacientes que sufren de diabetes y otras enfermedades relacionadas con las perturbaciones
en el metabolismo de los carbohidratos. Para lograr la extracción del edulcorante Esteviósido se logró la micropropagación de esta
planta.
4. ¿Qué es el esteviósido? Es un glucósido que pertenece al grupo de los hidrocarburos alifáticos, de los cuales
dependiendo de la ausencia o presencia de ligaduras, dependen sus propiedades
fisicoquímicas y toxicológicas.
Los azúcares de los diterpenos glucósidos de Stevia han sido sujetos de varias
revisiones (Kinghorn y Soejarto 1985, Crammer e Ikan 1986, y Hanson y De Oliveira
1993). Aunque el interés en la química de los principales azucares son de fecha muy
temprana de este siglo, el progreso significativo hacia la caracterización química de estos
no fue hecho hasta 1931, con el aislamiento del esteviósido (Bridel y Lavieille 1931a)
9
El tratamiento de esta sustancia con el jugo digestivo de un caracol dio las
cantidades de tres moles de glucosa y una mol de steviol, mientras que la hidrólisis con
ácidos dieron el isoesteviol (Bridel y Lavieille 1931b) El Isosteviol también fue obtenido
cuando el steviol estaba caliente en ácido sulfúrico diluido. Los estudios subsecuentes han
llevado al aislamiento de otros siete glucósidos dulces del steviol (Fig.1)
En el Merk. Index (8589) al esteviósido se le reporta como un agente edulcorante
calorigénico,
Sin datos de toxicidad hasta el momento (Sigma-Aldrich, 2002)
O
O
O
O HO H
O H
O H
O H
O H
O H O H
O
O
H O H 2 C
H O H 2 C
H O H 2 CO
O
C H 3
H 3 C
C
H 2 C
L a s h o j a s d e S t e v i a r e b a u d i a n a c o n t i e n e n h a s t a u n 6 . 0 % d e e s t e v i ó s i d o .
Figura 1.- Estructura del esteviosido.
10
5. ¿Cómo se logro la Micropropagación?
En el laboratorio de Biotecnología Vegetal se cuenta con una campana de flujo laminar
donde es posible controlar las condiciones estériles de los explantes nodales, en esta
campana se hacen los cortes y se transfieren a un medio aséptico (ver apéndice) que es
elaborado en el mismo laboratorio
Posteriormente estos explantes nodales se etiquetan con la fecha, de esta forma se lleva
un control sobre el periodo de crecimiento, y de cuando se debe realizar un cambio del
medio aséptico para evitar que la planta pierda los nutrientes que el medio de cultivo le
ofrece.
Con la utilización de este método (micropropagación por sembrado in vitro) se consigue
una multiplicación libre de contaminación.
Además con este método se necesita una cantidad pequeña de material para iniciar un
cultivo in vitro.
La Micropropagación in vitro puede suponer elevados ahorros en combustible, espacio
de invernadero, etc.
Debido a la existencia de condiciones perfectamente controladas (medio nutritivo y
medio físico), que permiten una gran precisión en el calendario de la producción de
explantes nodales, se puede eliminar el efecto estacional y conseguir una producción
homogénea a lo largo del año.
Todas las plantas se colocan en un cuarto o “Sala de Incubación”, aquí debe tenerse
muy en cuenta las instalaciones eléctricas, pues las diferentes fases del crecimiento de los
inóculos necesitaran diferentes fotoperiodos, temperatura, intensidad lumínica, etc.; además
no puede faltar el aire acondicionado y filtrado, anaqueles para incubación, etc.
11
Un laboratorio de cultivo de tejidos vegetales es, en esencia, igual a cualquier otro
laboratorio, sin embargo, las condiciones de esterilidad de éste son de fundamental
importancia porque todos los medios empleados contienen nutrientes, los cuales facilitan el
crecimiento de muchas bacterias y hongos.
Así, todos los medios, instrumentos y recipientes de cultivo deben esterilizarse para
matar las bacterias y el método más común de esterilización es el de vapor húmedo, por lo
que se utiliza con frecuencia un autoclave, generalmente el tiempo empleado para una
buena esterilización es de 15 minutos a una presión de 15 lb/in2 y a una temperatura de
120-1210C.
6. PRUEBAS DE TOXICIDAD
En 1991 un estudio con hámster consistía de tres grupos- 50 machos y 50 hembras-
a los cuales se les trato por dos años donde un grupo recibió una dosis de esteviósido de 2.5
% de su dieta diaria, un segundo grupo recibió 5% de esta dieta y un tercer grupo no recibió
esteviósido.
Después del periodo de tiempo, sus tejidos fueron examinado al microscopio, se
encontró que no había diferencia entre los que habían recibido esteviósido y los que no lo
recibieron. Algo interesante fue que las hembras que tomaron esteviósido decrecía la
incidencia de tumores, mientras que los machos presentaban una baja incidencia de daño en
el riñón.
Meses después, otra prueba realizada con cuatro grupos de 20 hámster-10 machos y
10 hembras- con un mes de edad. Al primer grupo se le administró una dosis diaria de 500
mg/kg de peso de esteviósido, al segundo grupo 1000 mg/kg, al tercer grupo 2500 mg/kg y
al cuarto grupo no se le administro nada de esteviósido.
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7. LA SEGURIDAD DE LOS AZUCARES DE STEVIA
Los azúcares de la Stevia tienen una larga historia de uso en América del Sur y
ahora en Japón y no hay reportes de efectos adversos, Pezzuto y colaboradores (1985)
informaron que la actividad metabólica del steviol es mutagénica, un resultado que ha sido
confirmado en más recientes estudios (Matsui et al 1996) Pero Kinghorn y Soejarto (1985)
y Kinghorn (1992) dirigieron dos revisiones de la literatura relacionadas a la seguridad de
los azucares de la Stevia y concluyeron que las hojas que contienen los azúcares de Stevia y
así como el esteviósido son seguros para el consumo humano. Sin embargo, la actividad
metabólica del steviol que es mutagénico no se ha identificado todavía y no es conocida si
la activación del steviol realmente ocurre en los humanos (Procinska et al. 1991, Matsui et
al. 1996).
Las investigaciones arrojaron resultados, que dosis mayores a 2.5 g/kg de peso de
cuerpo no afecta de ninguna manera el crecimiento ni la reproducción de estos hámsters.
8. LOCALIZACIÓN DE LA ZONA DE CULTIVO Y DE LA NAVE INDUSTRIAL 8.1 ZONA DE CULTIVO 8.1.1 CONDICIONES IDEALES PARA EL CULTIVO DE LAS PLANTAS DE
STEVIA
8.1.2 HUMEDAD
La exigencia de humedad es alta y de manera continua; es decir, no se debe dar la falta de
agua durante las diferentes etapas de su desarrollo, de ahí que la distribución natural de este
cultivo en Paraguay se observe en zonas donde las precipitaciones medias anuales son altas.
(1,400 mm. a 1,600 mm.)
13
8.1.3 TEMPERATURA
El buen desarrollo del cultivo se da a temperaturas menores de 20º C; en Paraguay y en las
áreas de desarrollo la temperatura media anual está entre 21º C y 23º C.
8.1.4 TOPOGRAFIA
En cuanto a la topografía, lo ideal es un terreno no muy accidentado, con un porcentaje de
pendiente menor a 5%.
8.1.5 FERTILIZANTES QIMICOS
Existen formulaciones y/o combinaciones que pueden ser utilizadas en el momento de la
fertilización química del cultivado de la Stevia, y una de las más recomendadas por
hectárea es:
60 Kg de Nitrógeno
60 Kg de óxido de potasio
120 Kg de anhídrido fosfórico
8.1.6 DATOS CLIMÁTICOS DE LA ZONA DE CULTIVO
De lo que se menciono anteriormente se muestra ver que el microclima de
Paraguay, donde crece y se cultiva la Stevia, es muy parecida al clima que se da en ciertas
regiones de México, tal es el caso de Metepec, Toluca Edo. De México.
Al no tenerse los datos de Temperatura promedio de Metepec, lo que hicimos fue
mostrar la grafica 1 sobre otros municipios cercanos y observamos que se alcanzan
temperaturas máximas de 230C aproximadamente, así como temperaturas mínimas de 100C,
por lo que la planta de Stevia no tendría problemas de adaptación en cuanto a la
Temperatura.
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De la Fig. 2 a) lo que mostramos son las precipitaciones pluviales anuales que se da
en distintos municipios de Toluca y en cuanto a Metepec vemos que se encuentra en una
región donde las precipitaciones varían entre 800 Y 1200 mm de agua anualmente.
Además la zona no es accidentada y el relieve es menor a 5%, lo que evitaría zonas
con exceso de humedad, y así no tener problemas de pudrición o de enfermedad de las
plantas de Stevia, lo que reduciría perdidas en la cosecha.
Figura 2. - temperatura promedios de las zonas adyacentes a Metepec, así como la ubicación de la que es una
zona probable para el cultivo de la Stevia.
8.1.7 DATOS GENERALES SOBRE LA ZONA DE CULTIVO
El terreno consta de 200 Ha: la cual solo es una expectativa de la cantidad inicial
del cultivo, porque lo que creemos, al ser una compañía grande se espera contar con más
hectáreas de cultivo para tener una ganancia aún mayor.
Mano de Obra: Al ser una zona poblada, además de ser una zona de cultivo, no
creemos tener dificultades para encontrar gente para el trabajo de cultivo de la Stevia, lo
que generaría nuevas fuentes de trabajo.
METEPEC
15
Servicios con los que cuenta
o Agua
o Electricidad
o Drenaje
o Vías de comunicación
o Fácil acceso.
8.1.8 UBICACIÓN DEL TERRENO DE SIEMBRA
Latitud
Norte
Latitud
Oeste
Altitud
Cabecera
Grados Min Grados Min Metros
Metepec
19
15
99
36
2,610
Tabla 1.- Ubicación de la zona de siembra.
Se encuentra cerca de Toluca y de la Nave Industrial a 12 Km, por lo que el
transportar ya sea las hojas secas o la cosecha de Stevia sería rápida
8.1. 9 SUB-ARRENDAMIENTO DE TERRENO DE CULTIVO
Usaremos el método que tienen algunas compañías que utilizan productos naturales
en la elaboración de sus productos (Barcel), y es que en nuestro caso, después de haber
logrado la Micropropagación por sembrado in vitro lo que haremos es rentar terrenos de
cultivo, y así lograremos una reducción en nuestra inversión inicial.
Equipo y recursos
El equipo constara con un laboratorio de Micropropagación para el sembrado in
vitro de la Stevia
Para lograr la Micropropagación por sembrado in vitro y su posterior sembrado a
tierra, se contará con el personal con conocimientos en Biología, para el trabajo a nivel
laboratorio en cuanto a la micropropagación por sembrado in vitro de la Stevia, y así tener
mayor cantidad de materia prima para iniciar el sembrado en tierra fértil de la Stevia.
16
9. NAVE INDUSTRIAL
Debido a la zona de cultivo ubicada en Metepec, Estado de México, se ha pensado
en la necesidad de ubicar la planta industrial en un lugar estratégico como Toluca, Estado
de México que ofrece las siguientes características, a través de sus parques industriales:
PARQUE INDUSTRIAL TOLUCA 2000 Tabla 2. Ubicación del parque industrial
Tabla 3. Ciudades más cercanas Distancia a las ciudades más cercanas Ciudad Km Al centro de la ciudad 10 DISTRITO FEDERAL 50 NAUCALPAN 52 TOLUCA 10
Equipamiento industrial Energía eléctrica (kVA/ha) 400 Drenaje Pluvial (l/seg/ha) 72
Subestación eléctrica SI Drenaje sanitario (l/seg/ha) 0.4
Red de gas NO Descargas industriales (l/seg/ha) 0.4
Planta de tratamiento de agua SI Espuela de ferrocarril NO
Agua potable (l/seg/ha) 0.5
Urbanización Camino de acceso (m) 0 Nomenclatura de calles SI
Guarnición (%) 100 Señalización SI
Banquetas (%) 100 Mobiliario urbano SI
Pavimentación (%) 100 Áreas verdes SI
Alumbrado Público SI
17
Tabla 4. Puertos cercanos Distancia a los puertos más cercanos Puerto km VERACRUZ 520 ACAPULCO 480 ZIHUATANEJO 356
Tabla 5. Unidades habitacionales Distancia a zonas habitacionales Zona habitacional km CONJUNTO SAN JOSE 3 TOLUCA 10 METEPEC 12
Tabla 6. Servicios publicos
Servicios de Apoyo Asociación de industriales SI Guardería SI
Vigilancia SI Servicios médicos NO Oficina de administración SI Bancos NO Sala de eventos especiales NO Áreas recreativas SI Mantenimiento SI Restaurantes SI Sistema contra incendio SI Hoteles NO
Estación de bomberos NO Área comercial SI
Gasolinera NO Aduana interior NO
18
10. PROCESO DE OBTENCIÓN DEL EDULCORANTE
10.1 PARTE EXPERIMENTAL
Para llevar a cabo la extracción del edulcorante a nivel laboratorio se procedió de la siguiente
manera:
Proceso de secado:
Por lo general el termino secado se refiere a la eliminación de humedad en una sustancia.
Por ejemplo, un sólido húmedo, como madera, tela o papel puede secarse por evaporación de la
humedad ya sea en una corriente de gas o sin el beneficio del gas para acarrear el vapor.
Se contó con hojas de la Stevia Rebaudiana B. las cuales se secaron con una balanza de humedad a
una temperatura de 35oC por un periodo de tiempo de 2 horas, esto con el fin de calcular la masa
en base seca. Los datos experimentales se muestran en el apéndice J
Molienda de las hojas
Este proceso se lleva a cabo con la ayuda de un mortero y pistilo hasta obtener un polvo
muy fino que se tamizo con un tamaño de malla No. 5 el cual se mezclaría con el solvente de
extracción que fue metanol
10.2 EXTRACCIÓN
i) Extracción del esteviósido por medio del Soxhlet.
Las hojas de Stevia ya secas, molidas y tamizadas (1 g) se colocan en un cartucho y
se coloca dentro del Soxhlet, así mismo en el matraz de bola se tiene metanol puro al 100%.
(Bondarev, et.al 2000 ) y este proceso de extracción se hace por periodos de tiempo cortos
al día ( 4 hrs.) vease apéndice “extracción del esteviósido con metanol por Soxhlet”
19
Una vez que se tiene el concentrado (aproximadamente 150 ml), se coloca en un
rotavapor, para así tener un residuo, este procedimiento se lleva a cabo a 700C.
Al tener este ser analiza por medio del HPLC, y así conocer las cantidades de
esteviósido encontrado en la cantidad de hoja utilizada para este experimento.
10.3 IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACION DE LAS MUESTRAS OBTENIDAS
POR LA EXTRACCIÓN CON METANOL
Análisis de los SGs por HPLC
Las muestras son analizadas con un aparato cromátografico (Agilent serie 1100) con
calibración de 10-ml y detección a 210 nm, las muestras son cromatografiadas con una
columna (Zorbax para carbohidratos )
Para saber el contenido de esteviósido en las hojas de Stevia, se inyecta una
cantidad conocida al HPLC y el pico que aparece se cálcula el área bajo la curva con ayuda
del software.Los cromatógramas se mostraran más adelante, para así compararlo con los
estándares que también serán analizados (ver apéndice I)
FIGURA 3 .- Cromatógrafo de líquidos de alta resolución HP.
20
10.4 RESULTADOS 10.4 .1 SECADO
Tabla 7.- Peso seco obtenido por medio del TGA ( análisis termo-gavimétrico) Gráfica 2.- Representación gráfica de la tabla 11, teniendo un comportamiento lineal.
Peso de la hoja fresca de Stevia (mg) a T = 350C
Peso de la hoja seca de Stevia (mg).
18.0 7.5 28.0 11.0 46.0 13.0 55.0 15.6 77.0 18.0 90.0 21.0 106.0 25.2 125.0 26.5 160.0 32.5
21
RESULTADOS
10.4.2 EXTRACCIÓN DEL ESTEVIOSIDO USANDO METANOL AL 100%
Peso de la hoja seca de Stevia (mg) Cantidad de esteviósido (µg/hoja seca) 18 1800 30 2850 36 3250 39 3700
Tabla 8.- Cantidad de esteviósido obtenido por medio del HPLC, una vez calculado el área bajo la curva que se tiene en el Cromatógrama.
Gráfica 3.- Representación gráfica de la tabla 12, teniendo un comportamiento aproximadamente lineal.
22
10.5 ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS POR LA EXTRACCIÓN DEL
EDULCORANTE CON METANOL.
En el proceso de secado observamos un periodo de secado decreciente sin embargo
el proceso es llevado a temperaturas bajas pues se tienen hojas con alto contenido de
humedad (78%) y las temperaturas altas podría dañar el producto, y así se tiene que el
secado para un 5% de humedad tarda 1.7 hrs. a T= 35 0C.
Al cabo de este tiempo se tiene un peso total de hoja seca de aproximadamente 25
% de peso seco con respecto al peso húmedo de hojas de Stevia.
Así mismo en la segunda gráfica se observa que el % de esteviósido total obtenido
de las hojas secas es de aproximadamente el 9%, sin embargo en la literatura se destaca el
hecho de que este porcentaje varia de acuerdo al tipo y genero de la planta, y en este
proyecto se cuantifico las plantas desarrolladas por micropropagación en el laboratorio de
biotecnología vegetal.
Sin embargo en este proceso se utiliza metanol al 100% como solvente de
extracción y esto implicaría reducir en el proceso industrial al metanol hasta la medida
permisible (200 ppm), además de que resultaría extremadamente caro el proceso por la
cantidad de metanol a utilizar, por lo que se pretende buscar una alternativa que sea más
barato, libre de solventes tóxicos, fácil de adquirir y minimizar el riesgo de utilizar un
componente altamente volátil.
Una alternativa es la extracción con fluido supercrítico el cual es un proceso libre
de solventes orgánicos, que resultan ser no tóxicos, no flamables, fácil de adquirir y
barato, por ende se siguió la investigación de este proceso.
23
11. EXTRACCIÓN CON FLUIDOS SUPERCRITICOS
La extracción con fluidos supercríticos (SCE) en ingles (SFE) es un proceso de
separación que hace uso del poder de solvatación de ciertos fluidos cuando estos se
encuentran por encima de sus condiciones críticas tanto presión como temperatura, para
fraccionar mezclas de compuestos o separar compuestos orgánicos de componentes
inorgánicos.
Este proceso maximiza la recuperación y la calidad del material extraído, además de
minimizar los costes energéticos, debido a que es más rápido y selectivo que los métodos
convencionales de separación. Es altamente efectivo para aplicaciones en los procesos
químicos, farmacéuticos, alimentarios, en la eliminación de residuos y en la industria del
petróleo.
Los fluidos supercríticos, poseen propiedades intermedias entre las correspondientes
a gases y líquidos: alta difusividad y alta viscosidad junto con su alto poder de solvatación.
Aquellos solventes con temperatura crítica debajo de 373 0K tienen que ser también
investigados. Un solvente particularmente deseable, y es particular para el extracto de
químicos indeseables, valiosos, o sensible al calor de los productos naturales como
alimentos, es el Dióxido de carbono con una moderada presión critica una alta densidad
critica y una temperatura critica cercana a la temperatura ambiente.
24
11.1 ¿QUE ES EL CO2 SUPERCRITICO?
El Dióxido de carbono lo encontramos en su estado natural como un gas y está en
su estado de fluido supercrítico cuando ambos presión y temperatura son iguales o exceden
el punto critico de 310C y 73 atm. De esta forma el estado supercrítico del CO2 tiene
cualidades como gas y como líquido. Y es esta característica dual la que provee las
condiciones ideales para extraer compuestos con un alto grado de recuperación en un corto
periodo de tiempo.
Como dióxido de carbono es inflamable, no corrosivo, no toxico en bajas
concentraciones, muy disponible, barato y seguro es el solvente mas utilizado en la
industria. La separación del dióxido de carbono del soluto es siempre posible por una
simple reducción de la presión del extracto. Algunas de las aplicaciones en las que el
dióxido de carbono supercrítico ha sido utilizado son: la de extraer la cafeína del café, la
piperina de la pimienta, la capsina de los chiles, aceites de la nuez de moscada y la nicotina
del tabaco.
Los equipos importantes que conforman un proceso de extracción supercrítica y su
operación es la siguiente: primeramente tenemos al extractor (contiene las semillas o
lúpulos para que los saborizantes o aceites sean extraídos), el compresor (para recircular el
dióxido de carbono), la válvula de reducción de presión (para reducir la presión del gas), y
finalmente el separador. (Para recolectar el saborizante o el aceite extraído y separar el
dióxido de carbono). En la operación del proceso de extracción, el dióxido de carbono es
comprimido a la presión seleccionada, por ejemplo: 4000 psi (272.19 atm) y la temperatura
puede ajustarse a 500C, ya que a estas condiciones es un fluido supercrítico.
25
Procesos a gran escala usando Extracción con fluidos supercríticos (SCE)
Productos naturales
• Aceite de rosas • Extracción de aceites esenciales • Saborizantes y fragancias • Extracto de nicotina • Extracción de pigmentos naturales
Productos farmacéuticos • Producción de drogas sintéticas • Separación de isomeros • Purificación de drogas(por ética) • Enzimas catalizadoras de reacciones • Remoción de solventes residuales • Cristalización de micropartículas de
drogas Limpieza
• Componentes electrónicos • Partes de precisión
Polímeros • Terminación de fibras textiles • Solventes residuales y monómeros para
polímeros • Reacciones químicas y síntesis de
polímeros • Monómeros para empaques
Alimentos
• Extracto de lúpulo • Descafeinización • El colesterol de la mantequilla • Ácidos grasos de la cebada • El extracto del aceite de semilla
Textiles • El tinte con SCE
• Lanolina de lana y cuero
El chaleco tejido de estambre se tiño usando
SCE. Nutraceuticos
• Licoponas • Beta carotenos • Biosaborizantes
26
11. 2 Extracción del esteviósido por medio del extractor con fluido supercrítico.
Se utilizó un extractor de extractor de fluido supercrítico SFX-2-10, que se
encuentra en la UNAM, en el àrea de alimentos, bajo la asesoría del Dr. Eduardo Barzana
y la Dr. Sandra Pérez. (ver apéndice E).
Datos experimentales obtenidos en un aparato de extracción supercrítica para el caso
de la Stevia
Los resultados se muestran en el apéndice , variando presión y temperatura para así
conocer cual es el máximo porcentaje de recuperación obtenido por la extracción
supercrítica, estos análisis se muestran en la grafica siguiente:
Gráfica 4. La muestra a la cual se le extraerá el esteviósido contiene 0.5 mg de hojas de Stevia con las siguientes condiciones: T = 40 0C y P = 368 atm con fluido de extracción supercrítica (CO2)
Cantidad de esteviósiodo recuperado en las hojas de Stevia
0
10
20
3040 50 60 70 80 90 100 110 120
0102030405060708090
100
Tiempo de extracción (min)
% d
e re
cupe
raci
ón
27
11. 3 ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS POR LA EXTRACCIÓN DEL
EDULCORANTE CON FLUIDO SUPERCRITICO.
En este experimento se obtuvo que la presión ideal de extracción para la máxima
recuperación de esteviosido fue de 368 atm, y a una temperatura de 40 0C, a un tiempo de 2
hrs, para conocer la cantidad máxima de esteviosido extraído, sin embargo después de un
tiempo de 90 min se determino que el porcentaje de recuperación máxima fue de 88.4 %
de esteviósido.
12. PROCESO
12.1 PROCESO DE OBTENCIÓN DEL ESTEVIOSIDO
Este importante edulcorante se obtenía anteriormente por una extracción con
metanol. Sin embargo, este solvente deja residuos que pueden causar serios daños a la
salud, otro método es el intercambio iónico el cual resulta un tanto complejo por tratar de
encontrar la resina adecuada para dicha separación.
12.2 Materia Prima
La principal materia prima son las hojas de estevia, las cuales se obtendrán de la
técnica de micropropagación y la posterior sembrado a tierra. Se pretende cultivar 200 Ha
para que la inversión sea redituable y con una recuperación a un tiempo razonable.
28
12.3 Proceso propuesto
El proceso que a continuación se propone, está basado en la recuperación del
esteviósido con dióxido de carbono supercrítico sustentada en un extractor de lecho fijo.
DIAGRAMA DE PROCESO JJuussttiiffiiccaacciióónn:: El dióxido de carbono puede llegar a ser un buen disolvente si se utiliza a condiciones supercríticas, es decir superior a 73.5 atm y 32.5 0 C , por lo cual se utilizó una presión de 400 atm y una Temperatura de 50 0C, pues este gas no es toxico, ni flamable además del hecho de ser barato, además el hecho de ser un proceso simple, limpio y libre de algún tipo de solvente orgánico.
agua
1122..44 CCRROOQQUUIISS DDEE LLAA PPLLAANNTTAA IINNDDUUSSTTRRIIAALL
TANQUES DE CO2
S1 E1
E1= Extractor 1 S1= Separador 1
29
30
1133.. CCAAPPAACCIIDDAADD AA IINNSSTTAALLAARR,, MMOONNTTOO DDEE LLAA IINNVVEERRSSIIÓÓNN,, YY CCAAPPIITTAALL DDEE
TTRRAABBAAJJOO..
La planta esta diseñada para producir 111 ton/año de esteviósido pensando en cubrir la
demanda del país y exportar en caso necesario.
La tasa interna de retorno esta dada por:
=
ganancia por añoTasa de retornoinversion total
32,000,000 = 37000,000
Tasa de retorno
= 0.865Tasa de retorno
estos es indicativo que la inversión se recuperará en poco tiempo ( ver anexos de Excel).
Monto de inversión: 17,000,000 de Dólares
Inversión fija : 27,000,000 de Dólares
Capital de trabajo 10,000,000 de Dólares
Inversión Total: 37,000,000 de Dólares
1133..11 PPeerrssoonnaall
.- Alimentar al extractor y supervisar la temperatura y la presión así como el flujo .- Supervisar los intercambiadores de calor (flujo, presión, temperatura, bombas y compresores del proceso, así como el separador
Personal
Obreros
Actividad Personal
31
Número de empleados en la planta
Mano de obra Personas por turno
Número de turnos
Total de personas
Sueldo diario
Sueldo anual
Operador 2 3 6 111.69 40766.85 Laboratorista 1 3 3 148.92 54355.8 Almacenista 2 3 6 74.46 27177.9
Obrero general 3 3 9 74.46 27177.9 Jefe de
mantenimiento 1 3 3 223.38 81533.7
Ingeniero de turno
1 3 3 297.84 108711.6
Administrativos 3 1 3 260.61 95125.65 Vigilante 2 3 6 74.46 27177.9
Secretarias 3 1 3 111.69 40766.85 Importe total 42 502791.15
-Supervisas la bomba de desplazamiento, el extractor, las válvulas, así como el separador .-Limpieza de oficinas y espacio de la planta .-Limpieza del equipo de la planta
Técnicos
Mantenimiento
32
La organización de la compañía se presenta a continuación
1133..22 CCoossttooss ddee pprroodduucccciióónn
Los costos de la producción se cuantifican sumando los costos anuales del dióxido
de carbono, y las hojas de Stevia;
MATERIA CANTIDAD PRECIO COSTO PRIMA ton/año $/ton $/año
Hojas de Stevia Seca 1400 1000 1,400,000.00 Dioxido de carbono 600 10000 6,000,000
Tabla 3-. Costo de producción anual que se requieren para la producción de 111 ton de esteviósido.
Organigrama de la planta
Agente de ventas
Agente de compras
Secretaria
Gerente de vantas
Contador
Secretaria
Mantenimiento
Gerente de personal
Técnicos
Obreros
Secretria
Ayudante general
Laboratorista
Ingeniero de planta
Gerente general
33
Los costos de servicios se calcularon como un porcentaje del costo total de instalación para cada uno de los equipos, por lo que sumando los costos de cada equipo se obtiene el total siguiente.
Costos de servicios Cserv= 268,666
sumando los costos de mano de obra
Costos de mano de obra Cmano= 54,000
se tiene un valor de producción de:
Costos de producción Cproduc= 10,147,658 USD
1133..33 GGaannaanncciiaa// aaññoo
Cantidad Precio Ganancia Producto Ton/año $/ton $/año
Esteviósido 111.38 300,000 33,415,200
Tabla 4.- Como se observa en la tabla, la ganancia anual es redituable comparado con la inversión fija, es decir se puede recuperar el costo de la inversión en un periodo de tiempo corto.
34
1144.. RREESSUULLTTAADDOOSS DDEELL DDIISSEEÑÑOO
1144.. 11 CCAARRAACCTTEERRÍÍSSTTIICCAASS DDEELL EEQQUUIIPPOO UUTTIILLIIZZAADDOO EENN EELL PPRROOCCEESSOO
Condensadores
Como el nombre lo indica un condensador de vapor es un dispositivo en el cual el
vapor es condensado. El calor latente que cede el vapor en el proceso de condensación, lo
recibe el refrigerante, constituido por agua. El vapor que entra en un condensador sale en
forma de condensado, mientras que la temperatura del agua refrigerante que pasa a través
de l condensador es mayor a la salida que a la entrada.
Tanques de almacenamiento
Son receptáculos empleados para retener transportar o almacenar líquidos y gases. por lo
común, se obtiene el costo mínimo con una forma cilíndrica horizontal y el fondo
relativamente plano al nivel del terreno.
El diseño preliminar de un tanque de almacenamiento es directo y elemental solo se
necesita saber su tamaño, temperatura, presión y condiciones de exposición. a causa de sus
grandes superficies, los tanques de almacenamiento no pueden sostener diferencias de
presión apreciables, la presión se libera automáticamente en los tanques que tienen techos
flotantes los cuales pueden moverse libremente.
Los tanque elevados pueden proporcionar un flujo grande cuando se requiere pero las
capacidades de bombeo no deben de ser de más del flujo promedio. en esta forma es
posible ahorrar en inversiones de bombas y tuberías. un medio eficiente de evitar las
perdidas por ventilación es el utilizar un tanque de volumen variable.
35
Bombas
La mayoría de los procesos en las industrias de procesos químicos incluyen la conducción
de líquidos o transferencia de un valor de presión o de energía estática a otro, la bomba es
el medio mecánico para obtener esta conducción o transferencia. Las ventajas primordiales
en el uso de bombas centrífugas son: la simplicidad, el bajo costo inicial, el flujo uniforme (
sin pulsaciones), el pequeño espacio necesario para su instalación, los costos de
mantenimiento y su capacidad de adaptación para su uso con impulsor de motor o turbina.
14.2 LISTA DE EQUIPOS DEL PROCESO
Equipos cantidad Función Compresor 1 Circulación de aire
atmosférico a una presión de 2 atmósferas
Calentador 2 elevar la temperatura del dióxido de carbono antes de entrar al extractor.
Extractor de acero inoxidable 316L
1 Esta soportara las presiones altas y así llevara a cabo la extracción con fluido supercrítico.
Bombas 1 alimentar agua al condensador a la salida del separador.
Secador rotatorio 1 Para secar las hojas de Stevia.
Separador 1 Separa el dióxido de carbono del sólido (esteviósido)
Tanques de almacenamiento
4 almacenar, butano, maleico, agua y acetona
Bomba de Desplazamiento positivo
con cabezal enfriado
1
Esta bomba es para elevar la presión del dióxido de carbono a temperaturas bajas.
Molino de rodillo liso 1 Esta servirá para moler las hojas de Stevia
Condensador 2 remover calor para hacer liquido al dióxido de carbono.
36
APÉNDICE A Preparación de las soluciones para medio MS(MURASHIGE SCOOK) • Solución de fierro-EDTA(10x) en 1000mL.
1. Disolver 5.75 g de FeSO4
.7H2O en 350 mL de agua, aplicando calor si es necesario. 2. Disolver 7.45 g de Na2EDTA en 350 mL de agua, aplicando calor si es necesario. 3. Cuando ambas soluciones se hayan disuelto, combinarlas y aforar todo a 1000 mL,
conservar en frasco ámbar y refrigerarlo. 4. Use 5 mL por litro de medio MS(Murage Skoch)
• Solución de macronutrientes MS(10x), g/L.
COMPUESTO MASA POR LITRO KNO3 19.00 NH4NO3 16.50 MgSO4
.7H2O 3.70 CaCl2
.2H2O 4.40 KH2PO4 1.70
• Solución de micronutrientes MS(100x), mg/100mL.
COMPUESTO MASA POR LITRO H3Bo3 620 MnSO4
.4H2O 2230 ZnSO4
.7H2O 860 Na2MoO4
.2H2O 25 CuSO4
.5H2O 2.5 CoCl2
.6H2O 2.5 • Solución de vitaminas (100x), mg/100mL.
COMPUESTO MASA POR LITRO Ácido nicotínico 50 Tiamina–HCl 50 Piridoxina HCl 10 Mio-Inositol 1000
37
Medio de cultivo en medio MS (1000 ml)
El medio de cultivo que se utilizo para llevar a cabo la siembra de los explantes de Stevia, esta compuesto de las siguientes soluciones, con el fin de proporcionar a la planta un sistema rico en nutrientes, vitaminas y minerales para su buen crecimiento.
Solución Volumen(mL) Agua 400 Macronutrientes 50 Micronutrientes 10 Vitaminas 10 Fierro EDTA 5
Solución Masa(g) Sacarosa 10 Ácido Indolbutírico 0.01 Phytagel 2.5
PROCEDIMIENTO:
En un matraz Erlenmeyer de 2L, se mezclan todos los compuestos de la solución antes mencionados en las tablas anteriores, la solución debe estar en continua agitación, para tener una mezcla bien integrada. El AIB se debe disolver en Hidróxido de Sodio con una concentración (1N) antes de agregarlo a la solución. Se debe medir el volumen de la solución agitada, para posteriormente aforar al volumen requerido. Medir el pH de la solución el cual debe estar en un valor de [5.8] es decir ajustar el medio. Agregar el Phytagel después de medir el pH, a continuación se pone a calentar la solución, hasta que hierva por un tiempo de 5 min aproximadamente, se deja enfriar por otros 5 min. El Phytagel se usa con el fin de obtener un medio de cultivo sólido para el sembrado de la Stevia. Una vez fría la mezcla se coloca en tubos de ensaye, los necesarios de acuerdo al volumen de 1000 mL. Se procede a esterilizar en autoclave. La operación se lleva a cabo hasta una presión de 1 (Pa), después de lograr esto se deja por un tiempo de 15 minutos y se apaga el autoclave.
38
APÉNDICE B EQUIPO DE SECADO Utilizando TGA a 35 0C se obtuvo la siguiente curva de secado. Temp.: 10 0C hasta 200 0C. Estabilidad: ± 0.15 0C Dimensiones: 140 * 410 * 435 mm Peso : 15.2 kg
Gráfica 5.-. La correspondiente gráfica representa la humedad en base seca, así mismo el periodo de secado se comporta de manera decreciente con respecto al tiempo, del cual se logro el secado de las hojas de Stevia hasta un 5% de humedad.
Curva de secado
00.5
11.5
22.5
33.5
44.5
5
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8
tiempo (hr)
Húm
edad
(kg
hum
edad
/kg
de s
ólid
o se
co)
39
APÉNDICE C
Cuantificación de la cantidad de esteviósido por medio de soxhlet
Las hojas de Stevia secas (1 g) son mezcladas con metanol puro por tres horas en un
Soxhlet, utilizando un cartucho de 50 ml.
El extracto se concentró en un rotavapor y el residuo se trato por la técnica de
HPLC(High Performance Liquid Chromatography), esto con el fin de identificar al
esteviósido.
Las condiciones de operación en el Soxhlet se llevo a cabo a T= 35 0C utilizando
150 ml de metanol puro. Las condiciones en el rotavapor fueron a T= 80 0C,
Fig4.- Equipo de soxhlet y rotavapor utilizados para la extracción del esteviósido.
40
APÉNDICE D Análisis de las muestra obtenidas por medio del HPLC. Las muestras obtenida son analizadas con un aparato cromatográfico (Aligent serie 1100) con calibración de 10 µl con detección a 210 nm, la columna empacada (Agilent ZORBAX a 5 µm) se utiliza pues esta diseñada especialmente para azucares con las siguientes características del equipo: Compartimiento termostatico de columna. Calentamiento y refrigeración Peltier desde 10% bajo Tamb., hasta 80 0C. Soporta tres columnas de 30 cm. Dos intercambiadores de calor y contribuyen con volúmenes de solo 3 y 6µl. Modulo electrónico. Válvula opcional de alta calidad. Temp.: 100C hasta 80 0C. Estabilidad: ± 0.15 0C. Presión : ± 0.8 0C. Dimensiones: 140 * 410 * 435 mm Peso : 10.2 kg Todas la muestras están a las condiciones siguientes: # Fase móvil : Acetonitrilo al 75% # T: 30 0C # Velocidad de flujo : 1.4 ml/min # Inyección de la muestra: 5 ml. Figura 5.- HPLC (High Performance Liquid Chromatography) Agilent serie 1100, con columna empacada Agilent ZORBAX 5 µm
Columna empacada (Agilent ZORBAXa 5 µm)
Inyección de la muestra
41
APÉNDICE E Cromatógramas de los Estándares de azúcares
Cromatógrama 1-. Estándar de Glucosa, indicando que este azúcar se detecta a un tiempo de retención de 13.30 mi n, este nos dará una comparativa con los cromatógramas de las muestras que serán analizadas posteriormente, utilizando diferentes cantidades de hoja seca de Stevia. Cromatógrama 2-. Estándar de Stevia + azúcar refinada de caña, donde el esteviósido es el que tiene el tiempo de retención de 9.70 min. Cromatógramas de las muestras de las hojas de Stevia utilizando extracción del esteviósido por medio del Soxhlet.
42
Cromatógrama 3-. Estándar del esteviósido donde su tiempo de retención(tR) de 9.68 min, utilizando algún método numérico se calculara el área bajo la curva, teniendo así la cuantificación de la cantidad de esteviósido encontrado en la extracción de la hoja de Stevia( peso seco =18 mg). Cromatógrama 4-. Estándar del esteviósido con un peso seco de 30 mg, sin embargo aparecieron dos picos, el del tR = 13.30 pertenece a la glucosa, el otro pico a tR = 9.08 pertenece a la sacarosa, Cromatógrama 4-. Estándar del esteviósido con un peso seco de 39 mg, apareciendo nuevamente la sacarosa.
43
APÉNDICE F Extracción con Fluido Supercrítico
Extractor de fluido supercrítico SFX-2-10
Especificaciones del extractor
Rango de Temperatura: Desde T ambiente hasta 150 0C estable ± 10C.
Presión Máxima: 10,000 psi (dispositivo de control de seguridad 12,500 psi ± 750 psi)
Cartuchos para muestreo: Cartucho de acero inoxidable de 0.5 ml (DI= 6.9 mm), 2.5 ml
(DI= 7.6 mm)
Restrictor proporcionado: capilar de acero inoxidable
Recipiente de recolección: DI= 113 y 20 mm (8 y 30 ml) de tronollo enrroscable
Requerimientos de poder: 110/117/234 VAC, 50/60 Hz, 820 watts máximo.
Peso: 10 kg Fig 6.- Equipo utilizado en la UNAM, bajo la asesoria del Dr. Eduardo Barsana
44
APÉNDICE G Datos experimentales obtenidos en un aparato de extracción supercrítica para el caso de la Stevia
Se utilizo muestras pequeñas para conocer cuales serian las condiciones optimas de extracción para la recuperación máxima de esteviosido contenido en las hojas de Stevia.
Se vario la presión desde la presión critica del dióxido de carbono (73.5 atm ) hasta
400 atm y se observo que la máxima recuperación era de 88.4 % a una temperatura de 400C.
Así mismo se vario la temperatura sin embargo se observo que la temperatura debían ser bajas pues esta al incrementarse disminuía el porcentaje de recuperación.
I n f u e n c i a d e l a p r e s i ó n s o b r e e l p o r c e n t a j e d e r e c u p e r a c i ó n d e l e s t é v i o s i d o
0
1 0
2 0
3 0
4 0
5 0
6 0
7 0
8 0
9 0
1 0 0
0 5 0 1 0 0 1 5 0 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0
P r e s i ó n ( a t m )
Re
cu
pe
ra
c
Gráfica 6 .- Efecto de la recuperación con respecto a la presión superior a la presión critica del dióxido de carbono
4 08 0
1 0 0
C 10
1 0
2 0
3 0
4 0
5 0
6 0
7 0
8 0
9 0
1 0 0
% R
ec
up
er
T e m p e r a t u r a ( o C )
I n f l u e n c i a d e l a t e m p e r a t u r a e n l a r e c u p e r a c i ó n d e l e s t e v i ó s i d o
Gráfica 7.- Comportamiento de la recuperación del esteviosido con respecto a la temperatura.
45
APÉNDICE H
S E G U R I D A D
STEVIA REBAUDIANA BERTONI
- - - - - - - - - IDENTIFICACIÓN QUÍMICA- - - - - - - - - -
CATALOGO #: S5381
NOMBRE: HOJAS STEVIA REBAUDIANA BERTONI
- - - - - COMPOSICIÓN/INFORMACION DE INGREDIENTES - - - - - -
CAS #:NINGUNO
- - - - - - - - - IDENTIFICACIÓN DE RIESGOS- - - - - - - - -
ETIQUETA DE DECLARACIONES PREVENTIVAS
PRECAUCIÓN:
EVITE CONTACTO E INHALACIÓN.
- - - - - - - - - - MEDIDAS DE PRIMEROS AUXILIOS- - - - - - - - - - -
SI TRAGO, LAVE LA BOCA CON AGUA PROCURE QUE LA PERSONA ESTE
CONSCIENTE.
LLAME A UN MEDICO.
EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL, LAVE CON CANTIDADES COPIOSAS DE
AGUA.
POR LO MENOS DURANTE 15 MINUTOS. QUITE LA ROPA CONTAMINADA Y
LOS ZAPATOS.
LLAME A UN MEDICO.
SI ES INHALADA, REMUEVA CON AIRE FRESCO. SI RESPIRA CON DIFICULTAD
LLAME A UN MEDICO.
46
EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS, LAVE CON CANTIDADE COPIOSAS
DE AGUA POR LO MENOS DURANTE 15 MINUTOS. ASEGURE EL LAVADO
ADECUADO SEPARANDO LOS PARPADOS CON LOS DEDOS.
LLAME A UN MEDICO.
- - - - - - - - - MEDIDAS DE LUCHA CONTRA EL FUEGO- - - - - - - - - -
MEDIOS DE EXTINCIÓN
ROCIO DE AGUA.
DIOXIDO DE CARBONO, POLVO QUÍMICO SECO O UNA ESPUMA APROPIADA.
PROCEDIMIENTOS ESPECIALES DE LUCHA CONTRA EL FUEGO
ROPA DE PROTECCIÓN QUE CONTENGA EL USO DE UN APARATO
RESPIRATORIO
AUTONOMO PARA PREVENIR EL CONTACTO CON LA PIEL Y LOS OJOS.
. - - - - - - - - MEDIDAS DE DESCARGO ACCIDENTALES- - - - - - - - -
ROPA CON EQUIPODE PROTECCIÓN.
BARRA Y PONGA EN UNA BOLSA PARA DISPOSICIÓN DE DESECHOS.
EVITE EL POLVO QUE SUBE.
VENTILE EL AREA Y LAVE EL SITIO DEL DERRAME, DESPUES DE HABER
RECOGIDO EL MATERIAL COMPLETAMENTE.
. - - - - - - - - - - MANEJO Y ALMACENAMIENTO- - - - - - - - - - -
REFERIDO A LA SECCIÓN 8.
- - - - - - CONTROL DE EXPOSICIÓN/PROTECCIÓN PERSONAL- - - - - -
ROPA APROPIADA NIOSH/MSHA-RESPIRADOR APROPIADO, GUANTES
RESISTENTES A LOS QUÍMICOS, LENTES DE SEGURIDAD Y OTRA ROPA
PROTECTORA
- - - - - - - PROPIEDADES FÍSICAS Y QUÍMICAS - - - - - - -
47
LA APARIENCIA Y OLOR
HOJAS VERDES Y CAFES
- - - - - - - - -ESTABILIDAD Y REACTIVIDAD - - - - - - - - -
ESTABILIDAD
ESTABLE.
PELIGRO DE POLIMERIZACIÓN
NO OCURRE
- - - - - - - - - INFORMACIÓN TOXICOLOGICA - - - - - - - -
EFECTOS AGUDOS
PUEDE SER DAÑINO POR INHALACIÓN, LA INGESTIÓN O ABSORCIÓN POR LA
PIEL.
PUEDE CAUSAR IRRITACIÓN.
LAS PROPIEDADES TOXICOLOGICAS NO HAN SIDO COMPLETAMENTE
INVESTIGADAS.
. - - - - - - - - - INFORMACIÓN ECOLOGICA - - - - - - - - - -
LOS DATOS NO ESTAN DISPONIBLES TODAVIA.
. - - - - - - - - - CONSIDERACIONES DE LA ELIMINACIÓN- - - - - - -
DISUELVA O MEZCLE EL MATERIAL CON UN COMBUSTIBLE SOLVENTE Y
QUEME EN UN INCINERADOR QUÍMICO EQUIPADO CON UN DISPOSITIVO DE
POST-COMBUSTIÓN Y LIMPIADOR.
OBSERVE TODAS LAS REGULACIONES FEDERALES, ESTATALES Y LOCALES
MEDIO AMBIENTALES.
- - - - - - - - - - INFORMACIÓN DEL TANSPORTE- - - - - - - - -
AVISE A LA COMPAÑIA SIGMA-QUÍMICA PARA LA INFORMACIÓN DE
TRANSPORTE.
48
- - - - - - - - - INFORMACIÓN REGULATORIA- - - - - - - - - -
INFORMACIÓN EUROPEA
PRECAUCIÓN: LA SUBSTANCIA NO ESTA PROBADA TOTALMENTE.
SECCIÓN 16. - - - - - - - - - - OTRA INFORMACIÓN- - - - - - - - - - - -
SE CREE QUE LA INFORMACIÓN ANTERIOR ES CORRECTA PERO, PERO NO
PRETENDE QUE SEA TODO INCLUIDO. Y SOLO SE USARA COMO UNA GUIA.
SIGMA-ALDRICH FLUKA NO SE HARA RESPONSABLE POR CUALQUIER DAÑO
QUE RESULTE DE MANEJAR O TENER CONTACTO CON EL PRODUCTO
ANTERIOR.
49
Los compuestos y sus características
Aire: Desempeña un papel muy importante en la naturaleza; es indispensable para la vida
de todos los seres , permite la combustión y la respiración; es el vehículo del sonido. Lo
utiliza la industria tanto como en materia prima para muchas reacciones, tal como la
oxidación parcial del butano como benceno, así mismo para el secado de muchos
materiales como en este caso hojas de Stevia.
El aire cuyo peso molecular cuyo peso molecular es 28.97 g/mol es un fluido transparente,
inodoro, insípido y elástico, mal conductor del calor y la electricidad especialmente cuando
esta ionizado. El aire esta compuesto básicamente por:
Nitrógeno 78.084 %
Oxígeno 20.947 %
Argón 0.934 %
Dióxido de carbono 0.0314 %
Neón 0.0018 %
Helio 0.0005 %
Metano 0.0002 %
Kriptón 0.0001 %
Oxido Nitroso 0.00005 %
Hidrógeno 0.00005 %
Xenón 0.0000087 %
50
Dióxido de carbono:
El Dióxido de carbono se puede preparar por la oxidación total de cualquier
compuesto orgánico; por calentamiento de algunos carbonatos, por la acción de un ácido
sobre un carbonato etc.
Es un gas incoloro, inodoro e insípido, es moderadamente soluble en agua ; 100 g H2O
disuelven 0.154 g de C0” a 25 ºC
PM (g/mol) 44.01
P.f. (ºC y 5.2 atm) 217.5
Sublima a (ºK) 195
Temperatura crítica (ºK) 304.2
Presión critica (atm) 72.9
Calor de fusión (kcal/mol g) 1.99
Calor de formación(kj/mol) a 25oC 393.6
Peso especifico (aire) 1.53
Densidad del gas(0ºC y 1 atm) 1.976
Densidad del líquido (25ºC y 1 atm) 914
El CO2 no es inflamable ni mantiene combustión, es muy estable pero se puede
descomponer a 2000 ºC o más y reacciona hasta cierto punto con agua para formar ácido
carbónico. En presencia de luz solar y de un catalizador (clorofila) , se combina con el agua
para formar almidón o celulosa.
Se usa como agente refrigerante y de congelamiento de helados , carnes y otros
alimentos ; es importante como material extintor de incendios ; en síntesis químicas en
estado gaseoso tal como la fabricación de ácido salicílico, en industrias de bebidas, etc. La
concentración máxima permisible es de 5000 pmm en aire.
51
APÉNDICE I
S E G U R I D A D
DIÓXIDO DE CARBONO LIQUIDO Y GASEOSO
PRODUCTO QUÍMICO E IDENTIFICACIÓN DE LA COMPAÑÍA
PRODUCTO: ANHÍDRIDO CARBÓNICO (MSDS NO. P-4574-H)
NOMBRE COMERCIAL: ANHÍDRIDO CARBÓNICO
NOMBRE QUÍMICO: SINÓNIMOS DEL ANHÍDRIDO CARBÓNICO: ANHÍDRIDO
CARBÓNICO, ÁCIDO GASEOSO
FÓRMULA: CO2
FAMILIA QUÍMICA: ÁCIDOS ANHÍDRIDOS
TELÉFONO DE EMERGENCIA: 1-800-645-4633 *
NOMBRE DE LA COMPAÑÍA: PRAXAIR, INC.
CHEMTREC: 1-800-424-9300 * 39 CAMINO DE RIDGEBURY VIEJO
1-800-PRAXAIR, CT 06810-5113,
LLAME A EMERGENCIA LAS 24 HORAS DEL DÍA PARA CASOS DE :
DERRAMAMIENTOS, GOTERAS, FUEGO, EXPOSICIÓN, O ACCIDENTES.
PRODUCTO. PARA LA INFORMACIÓN RUTINARIA, AVISE A SU PROVEEDOR,
PRAXAIR VENTAS REPRESENTANTE, O LLAMAR AL 1-800-PRAXAIR (1-800-
772-9247).
COMPOSICIÓN / INFORMACIÓN DE LOS INGREDIENTES
ESTA SECCIÓN SÓLO CUBRE MATERIALES DE FABRICACIÓN
52
PARA LAS MEZCLAS PERSONALIZADAS DE ESTE PRODUCTO, PÍDALE A UN
MSDS PARA CADA COMPONENTE. VEA SECCIÓN 16 PARA LA INFORMACIÓN
IMPORTANTE SOBRE LAS MEZCLAS.
EL INGREDIENTE LA CAS NÚMERO CONCENTRACIÓN EL OSHA PEL ACGIH
TLV-TWA
EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO 124-38-9 >99% 5,000 PPM * 5,000 PPM * *
* EL SÍMBOLO> LOS MEDIOS “MAYOR QUE”; EL SÍMBOLO <, “MENOS DE.”
IDENTIFICACIÓN DE RIESGOS
APRECIACIÓN GLOBAL
¡PRECAUCION!
LÍQUIDO DE ALTA PRESIÓN Y GAS.
PUEDE CAUSAR SOFOCACIÓN RÁPIDA.
PUEDE AUMENTAR LA RESPIRACIÓN Y EL LATIDO DEL CORAZÓN.
PUEDE CAUSAR DAÑO AL SISTEMA NERVIOSO.
PUEDE CAUSAR VÉRTIGO Y ADORMECIMIENTO.
OLOR: LIGERAMENTE PICANTE
VALORES LÍMITE DE TOLERENCIA:
TLV-TWA, 5,000 PPM (ACGIH, 1998). TLV-TWA, 15 MIN STEL,
30,000 PPM. ACGIH RECOMIENDA UN TLV DE 5 MG/M3 PARA UN PERIODO DE
TRABAJO DE 8 HRS.
TLV-TWAS DEBE USARSE COMO UNA GUÍA EN EL MANDO DE RIESGOS DE
SALUD Y NO CUANDO LAS CONCENTRACIONES PELIGROSAS SEAN
PELIGROSAS.
53
LOS EFECTOS DEL GAS A LA SOBREEXPOSICIÓN:
EL GAS DE DIÓXIDO DE CARBONO ES ASFIXIANTE DEBIDO A LA FALTA DE
OXÍGENO. TAMBIÉN ES FISIOLÓGICAMENTE ACTIVO EN LA CIRCULACIÓN
ASÍ COMO EN LA RESPIRACIÓN.
LAS CONCENTRACIONES MODERADAS PUEDEN CAUSAR DOLOR DE
CABEZA, ADORMECIMIENTO, VÉRTIGO, PICAZÓN DE LA NARIZ Y
GARGANTA, EXCITACIÓN, RESPIRACIÓN Y AGITACIÓN RÁPIDA, TOS,
SALIVACIÓN EN EXCESO, VOMITO, E INCONSCIENCIA.
PUEDE OCASIONAR LA MUERTE POR FALTA DE OXÍGENO.
EVITE CONTACTO CON: EL GAS FRÍO, LÍQUIDO, EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO
SÓLIDO PUEDE
CAUSAR SEVERO DAÑO A LA PIEL O CONGELAMIENTO.
ESTE PRODUCTO ES UN GAS A LA TEMPERATURA NORMAL Y PRESIÓN.
OTROS EFECTOS DE SOBREEXPOSICIÓN
CAUSA DAÑO A LA RETINA O A LAS CÉLULAS DEL GANGLIO Y CENTRO
NERVIOSO
CONDICIONES MÉDICAS AGRAVADAS POR LA SOBREEXPOSICIÓN
LA TOXICOLOGÍA Y LAS PROPIEDADES FÍSICAS Y QUÍMICAS DEL
ANHÍDRIDO CARBÓNICO SUGIEREN QUE SEA IMPROBABLE UNA SOBRE-
EXPOSICIÓN
DATOS DEL LABORATORIO SIGNIFICANTES A LA SALUD HUMANA
LA EVALUACIÓN:
UN SOLO ESTUDIO HA MOSTRADO UN AUMENTO EN EL CORAZÓN EN RATAS
EXPUESTAS A 6%
EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO EN EL AIRE DURANTE 24 HORAS EN LOS
MOMENTOS DIFERENTES DURANTE LA GESTACIÓN. NO HAY NINGUNA
54
EVIDENCIA QUE EL DIÓXIDO DE CARBONO SEA MUTAGÉNICO EN LOS
HUMANOS.
CARCINOGENO: EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO NO SE LISTA POR NTP, OSHA, O
IARC.
LAS MEDIDAS DE PRIMEROS AUXILIOS
LA INHALACIÓN: INMEDIATAMENTE DELE AIRE FRESCO. SI NO ESTA
RESPIRANDO DE LA RESPIRACIÓN ARTIFICIAL. SI RESPIRAR LE ES DIFÍCIL
UN PERSONAL CALIFICADO PUEDE DAR OXÍGENO LLAME A UN MÉDICO.
EL CONTACTO SUPERFICIAL: PARA LA EXPOSICIÓN A VAPOR FRÍO O SÓLIDO,
INMEDIATAMENTE EXPONGA A UN MEDIO CALUROSO. EN CASO DE LA
EXPOSICIÓN PROLONGADA, QUITE LA ROPA CONTAMINADA MIENTRAS
ROCIÉ CON AGUA CALUROSA. LLAME A UN MÉDICO.
TRAGADO: ESTA ES UNA RUTA IMPROBABLE DE EXPOSICIÓN., PUES SE
TRATA DE UN PRODUCTO QUE ES UN GAS A LA TEMPERATURA Y PRESIÓN
NORMAL.
EL CONTACTO CON LOS OJOS: LAVE POR LO MENOS DURANTE 15 MINUTOS.
SOSTENGA LOS PÁRPADOS ABIERTOS. VEA A UN MÉDICO
INMEDIATAMENTE, PREFERENTEMENTE OFTALMÓLOGO.
LAS MEDIDAS Y LA LUCHA CONTRA EL FUEGO
EL PUNTO DE LLAMARADA
(EL MÉTODO DE LA PRUEBA)
NO AUTOIGNITION APLICABLE
LA TEMPERATURA
NO APLICABLE
LOS MEDIOS DE EXTINCIÓN:
EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO NO PUEDE APAGAR EL FUEGO. USE LOS MEDIOS
QUE SE DESTINAN PARA RODEAR EL FUEGO.
LOS PROCEDIMIENTOS DE LUCHA: ¡AVISE! ES LÍQUIDO DE ALTA PRESIÓN Y
GAS. EVACUE A TODO EL PERSONAL DEL ÁREA DE PELIGRO.
55
INMEDIATAMENTE ROCIÉ LOS CILINDROS CONTENEDORES CON EL AGUA
AL MÁXIMO. ALÉJESE HASTA EL FRESCO. BRIGADAS DE FUEGO EN EL SITIO
DEBEN OBEDECER OSHA 29 CFR 1910.156.
EL FUEGO Y RIESGOS DE LA EXPLOSIÓN: EL CALOR DEL FUEGO PUEDEN
AUMENTAR LA PRESIÓN EN EL CILINDRO Y CAUSAR QUE SE ROMPA.
NINGUNA PARTE DE CILINDRO DEBE SUJETARSE A UNA TEMPERATURA
SUPERIOR QUE 125°F (52°C).
LOS CILINDROS DEL ANHÍDRIDO CARBÓNICO ESTÁN PROVISTOS CON UN
DISPOSITIVO DE ALIVIO DE PRESIÓN.
LAS PRECAUCIONES DE MANEJO: PROTEJA LOS CILINDROS DEL DAÑO. USE
CONVENIENTEMENTE UN VEHÍCULO DE MANO PARA MOVER LOS
CILINDROS; NO ARRASTRE, RUEDE. NUNCA INTENTE ALZAR UN CILINDRO
POR SU GORRA, PIENSA SOLAMENTE QUE LA GORRA PROTEGE LA
VÁLVULA. NUNCA INSERTE UN OBJETO (EL EJ., TIRÓN, EL
DESTORNILLADOR, LA BARRA DE LA PALANCA)
EN LAS APERTURAS DE LA GORRA; HACIENDO PUEDEN DAÑAR LA
VÁLVULA ASÍ Y PUEDEN CAUSAR UNA GOTERA. USE UN TIRÓN DE LA
CORREA AJUSTABLE QUITE OXIDÓ DE LAS GORRAS CONSULTE A SU
PROVEEDOR. NUNCA APLIQUE LA LLAMA O EL CALOR DIRECTAMENTE A
CUALQUIER PARTE DEL CILINDRO. LAS TEMPERATURAS ALTAS PUEDA
DAÑAR EL CILINDRO Y PODRÍA CAUSAR QUE EL DISPOSITIVO DE ALIVIO DE
LA PRESIÓN PUEDE FALLAR PREMATURAMENTE.
PARA LA INFORMACIÓN ADICIONAL SOBRE EL ALMACENAMIENTO Y
MANEJANDO, REFIÉRASE A LA ASOCIACIÓN DE GAS COMPRIMIDA (CGA)
EL FOLLETO P-1, EL MANEJO SEGURO DE GASES COMPRIMIDOS EN LOS
RECIPIENTES, DISPONIBLE DEL CGA.
VENTILATION/INGENIERIA DE CONTROL:
DESCARGA LOCAL: USE UN SISTEMA DE LA DESCARGA LOCAL, SI
NECESARIO, PARA PODER CONTROLAR LA CONCENTRACIÓN DE CARBONO
SI ES QUE UN OBRERO ESTÁ RESPIRANDO EN LA ZONA.
56
MECÁNICO (GENERAL) BAJO CIERTAS CONDICIONES, LA VENTILACIÓN DE
LA DESCARGA GENERAL PUEDE SER ACEPTABLE PARA GUARDAR EL
ANHÍDRIDO CARBÓNICO DEBAJO DEL LÍMITE DE LA EXPOSICIÓN.
PROTECCIÓN RESPIRATORIA: NINGUNO REQUERIDO BAJO EL USO NORMAL.
UN RESPIRADOR DE AIRE DEBE SER PROPORCIONADO.
PROTECCIÓN SUPERFICIAL: EL USO DE GUANTES DE NEOPRENO PARA EL
MANEJO DEL CILINDRO.
PROPIEDADES FÍSICAS Y QUÍMICAS
EL PESO MOLECULAR: 44.01
GRAVEDAD ESPECÍFICA (EL AIRE = 1) A LAS 70°F (21.1°C) Y 1 ATM: 1.522
DENSIDAD DEL GAS A 70°F (21.1°C) Y 1 ATM: 0.1444 LB/FT 3 (1.833 KG/M 3)
DENSIDAD LÍQUIDA (SATURADO) A 70°F (21.1°C) Y 1 ATM: 47.6 LB/FT 3 (762
KG/M 3)
PRESIÓN DE VAPOR A 70°F (21.1°C): 838 PSIG (5778 KPA)
SOLUBILIDAD EN EL AGUA, VOL/VOL A 68°F (20°C) Y 1 ATM: 0.90
EL PUNTO DE SUBLIMACIÓN A 1 ATM: -109.3°F (-78.5°C)
LA APARIENCIA, OLOR, Y ESTADO: EL GAS DESCOLORIDO, INCOLORO,
LIGERAMENTE ÁCIDO.
LA ESTABILIDAD Y REACTIVIDAD
ES EN ESTADO ESTABLE
INCOMPATIBILIDAD (LOS MATERIALES A EVITAR): LOS METALES
ALCALINOS, LOS METALES ALCALINO-TERREOS, EL CROMO, TITANIO SOBRE
1022°F (550°C), URANIO SOBRE 1382°F (750°C), MAGNESIO SOBRE 1427°F
(775°C).
LOS PRODUCTOS DE DESCOMPOSICIÓN ARRIESGADOS: LAS DESCARGAS
ELÉCTRICAS Y LAS TEMPERATURAS ALTAS DESCOMPONEN EL ANHÍDRIDO
CARBÓNICO EN MONÓXIDO DE CARBONO Y OXÍGENO.
57
LA POLIMERIZACIÓN ARRIESGADA: PUEDE LLEGAR A OCURRIR
EL PROCESO DE LA SOLDADURA PUEDE GENERAR HUMOS ARRIESGADOS Y
GASES.
EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO ES UN ASFIXIANTE. ESTIMULA LA RESPIRACIÓN
INICIALMENTE. LAS CONCENTRACIONES ALTAS PRODUCEN EL
NARCOTISMO. LOS SÍNTOMAS EN LOS HUMANOS SON COMO SIGUE:
EL EFECTO: LA CONCENTRACIÓN:
LA PROPORCIÓN RESPIRATORIA AUMENTA LIGERAMENTE. 1%
LOS AUMENTOS DE LA PROPORCIÓN RESPIRATORIA A 50% SOBRE EL NIVEL
NORMAL. PROLONGADAS EXPOSICIÓN PUEDE CAUSAR DOLOR DE CABEZA,
EL CANSANCIO 2% .
LA INFORMACIÓN ECOLOGICA
NINGÚN EFECTO ECOLÓGICO ADVERSO ESPERADO. EL ANHÍDRIDO
CARBÓNICO NO CONTIENE NINGUNA CLASE DE OZONO. EL ANHÍDRIDO
CARBÓNICO NO SE LISTA COMO UN CONTAMINANTE MARINO.
EL MÉTODO DE LA DISPOSICIÓN DE DESECHO: NO INTENTE DISPONER DE
RESIDUO O LAS CANTIDADES SIN USAR. EL RETORNO DEL CILINDRO AL
PROVEEDOR.
EL PROGRAMA DE DIRECCIÓN PARA ACCIDENTES QUÍMICOS
REQUIERE EL DESARROLLO Y LA APLICACIÓN DE DIRECCIÓN DE RIESGO
LOS PROGRAMAS EN LOS MEDIOS DE LA FABRICACIÓN, USO, EL ASA
REGULÓ LAS SUBSTANCIAS EN CANTIDADES QUE EXCEDEN LOS UMBRALES
ESPECIFICADOS.
EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO NO SE LISTA COMO UNA SUSTANCIA REGULADA
EL PRODUCTO: EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO LA FECHA DE P-4574-H: MAYO DE
1999
58
TSCA: EL ACTO DE MANDOS DE SUBSTANCIAS TÓXICAS: EL ANHÍDRIDO
CARBÓNICO SE LISTA EN EL TSCA EL INVENTARIO.
OSHA: LA SEGURIDAD PROFESIONAL Y ADMINISTRACIÓN DE SALUD:
29 CFR 1910.119: LA DIRECCIÓN DE SEGURIDAD DE PROCESO DE MUY ALTO
RIESGO
LOS QUÍMICOS: EXIGE A LOS MEDIOS A DESARROLLAR UN PROCESO DE
SEGURIDAD DE DIRECCIÓN
EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO NO SE LISTA COMO UN QUÍMICO MUY
ARRIESGADO.
LAS REGULACIONES ESTATALES:
CALIFORNIA: EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO NO SE LISTA POR CALIFORNIA
ADVIRTIENDO: LA COMBUSTIÓN DE ESTE GAS PRODUCE EL QUÍMICO
MONÓXIDO DE CARBONO
PENNSYLVANIA: EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO ESTÁ SUJETO AL OBRERO DE
PENNSYLVANIA Y A LA COMUNIDAD CON DERECHO A SABER EN EL ACTA
(35 P.D. SECCIONES 7301-7320).
OTRA INFORMACIÓN
ESTÉ SEGURO DE LEER Y ENTENDER TODAS LAS ETIQUETAS E
INSTRUCCIONES PROPORCIONADAS CON TODOS LOS RECIPIENTES DE ESTE
PRODUCTO.
HUMOS Y GASES PUEDEN SER PELIGROSOS A SU SALUD Y PUEDEN CAUSAR
LA ENFERMEDAD DE PULMÓN. SACAR SU CABEZA FUERA DE HUMOS. NO
RESPIRE HUMOS Y GASES. USAR BASTANTE VENTILACIÓN, LOCAL,
MANTENERSE ALEJADO DE HUMOS Y GASES DE LA ZONA DE RESPIRACIÓN
Y EL ÁREA GENERAL.
LA SOBRE EXPOSICIÓN A CORTO PLAZO A LOS HUMOS PUEDE CAUSAR
VÉRTIGO, NÁUSEA, Y SEQUEDAD O IRRITACIÓN DE LA NARIZ, GARGANTA,
Y OJOS O PUEDE CAUSAR OTRA INCOMODIDAD SIMILAR.
CONSIGA UN MSDS PARA CADA MATERIAL QUE USTED USA.
59
CONSULTAR LAS PUBLICACIONES DE LA SOCIEDAD DE LA SOLDADURA
AMERICANA, O VE EL SITIO DE WEB DE OSHA
A HTTP://WWW.OSHA-SLC.GOV/SLTC/WELDINGCUTTINGBRAZING /.
LAS NOTAS A MÉDICO:
AGUDO: LOS GASES, HUMOS, Y POLVOS PUEDEN CAUSAR LA IRRITACIÓN A
LOS OJOS, PULMONES, NARIZ, Y GARGANTA. ALGUNOS LOS GASES TÓXICOS
ASOCIADOS CON SOLDAR Y LOS PROCESOS RELACIONADOS PUEDEN
CAUSAR EL EDEMA PULMONAR, LA ASFIXIA, Y MUERTE. LA SOBRE
EXPOSICIÓN AGUDA PUEDE INCLUIR SEÑALES Y SÍNTOMAS COMO ACUOSO
LOS OJOS, LA NARIZ E IRRITACIÓN DE LA GARGANTA, EL DOLOR DE
CABEZA, EL VÉRTIGO, LA DIFICULTAD LA TOS RESPIRATORIA, FRECUENTE,
O LOS DOLORES DEL PECHO.
CRÓNICO: LA INHALACIÓN PROLONGADA DE CONTAMINANTES AÉREOS
PUEDE LLEVAR A SU ACUMULACIÓN EN LOS PULMONES, UNA CONDICIÓN
QUE PUEDE VERSE COMO LAS ÁREAS DENSAS EN LAS RADIOGRAFÍAS DEL
PECHO. LA SEVERIDAD DE CAMBIO ES PROPORCIONAL A LA LONGITUD DE
EXPOSICIÓN. LOS CAMBIOS VISTOS NECESARIAMENTE NO SE ASOCIAN CON
SÍNTOMAS O SEÑALES DE FUNCIÓN PULMONAR REDUCIDA O ENFERMEDAD.
ADEMÁS, LOS CAMBIOS EN LAS RADIOGRAFÍAS PUEDEN SER
CAUSADOS TAMBIÉN POR LOS FACTORES DE NO TRABAJO RELACIONADOS
COMO EL FUMAR, ETC.,
OTRO EQUIPO PROTECCIONISTA: LOS GUANTES DE USO, CABEZA, Y
PROTECCIÓN DEL CUERPO. (VEA ANSI Z49.1.)
OTRAS CONDICIONES ARRIESGADAS DE MANEJAR, EL ALMACENAMIENTO,
Y USO:
DE ALTA PRESIÓN EL LÍQUIDO Y GAS. EL CONDUCTO DEL USO Y EQUIPOS
DISEÑADOSPARA RESISTIR PRESIONES DEBEN SER ENCONTRADOS
ADECUADAMENTE. EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO ES MÁS PESADO QUE EL
AIRE. TIENDE A AUMENTAR CERCA DEL SUELO DE UN ESPACIO ADJUNTO,
60
MIENTRAS ESTA CAMBIANDO DE SITIO EL AIRE Y EMPUJÁNDOLO
ASCENDENTE. ESTO CREA UNA ATMÓSFERA DEFICIENTE EN OXIGENO
CERCA DEL SUELO. VENTILE EL ESPACIO.
ANTES DE LA ENTRADA. VERIFIQUE LA CONCENTRACIÓN DE OXÍGENO
SUFICIENTE. CERCA LA VÁLVULA DEL CILINDRO DESPUÉS DE CADA USO.
LAS MEZCLAS: CUANDO USTED MEZCLA DOS O MÁS GASES O LICUA LOS
GASES, USTED PUEDE CREAR RIESGOS INESPERADOS. OBTENGA Y EVALÚE
LA INFORMACIÓN DE SEGURIDAD PARA CADA COMPONENTE ANTES DE QUE
USTED PRODUZCA LA MEZCLA. CONSULTE AL HIGIENISTA INDUSTRIAL U
OTRA PERSONA ESPECIALIZADA CUANDO USTED EVALÚA EL PRODUCTO
FINAL.
RECUERDE, LOS GASES Y LÍQUIDOS TIENEN PROPIEDADES QUE PUEDEN
CAUSAR LESIÓN SERIA O MUERTE.
LAS CONEXIONES DE LA VÁLVULA NORMALES PARA EE.UU. Y CANADÁ:
ENHEBRADO: CGA-320
EL YUGO ALFILER-PUESTO EN UN ÍNDICE: CGA-940 (EL USO MÉDICO)
LA CONEXIÓN DE EXTREMISTA-ALTO-INTEGRIDAD: CGA-716
USE LAS CONEXIONES DE CGA APROPIADAS. NO USE LOS ADAPTADORES.
ADICIONAL LIMITADO-NORMAL
LAS CONEXIONES PUEDEN APLICAR. VEA FOLLETO DE CGA QUE V-1 LISTÓ.
PREGÚNTELE A SU PROVEEDOR PRAXAIR DE SEGURIDAD COMO SE HA
REFERIDO EN ESTE MSDS Y EN LA ETIQUETA PARA ESTE PRODUCTO. MÁS
ALLÁ PUEDE ENCONTRARSE INFORMACIÓN SOBRE ESTE PRODUCTO EN LOS
FOLLETOS SIGUIENTES PUBLICADOS POR EL
LA ASOCIACIÓN DE GAS COMPRIMIDA, INC. (CGA), 1725 JEFFERSON DAVIS
HIGHWAY, ARLINGTON, VA 22202-4102,
EL TELÉFONO (703) 412-0900.
EL AV-1 CAJA FUERTE MANEJO Y ALMACENAMIENTO DE GASES
COMPRIMIDOS
EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO DE G-6
61
LA NORMA DE G-6.1 PARA LOS SISTEMAS DE ANHÍDRIDO CARBÓNICO DE
PRESIÓN BAJOS A CLIENTE SITES
LA G-6.2 ARTÍCULO ESPECIFICACIÓN PARA EL ANHÍDRIDO CARBÓNICO
EL P-1 CAJA FUERTE MANEJO DE GASES COMPRIMIDOS EN LOS RECIPIENTES
LA P-14 ACCIDENTE PREVENCIÓN EN OXÍGENO-RICH, LAS ATMÓSFERAS
OXÍGENO-DEFICIENTES
SB-2 LAS ATMÓSFERAS OXÍGENO-DEFICIENTES
V-1 COMPRESSED LA GAS CILINDRO VÁLVULA ENTRADA Y CONEXIONES DE
LA TOMA DE CORRIENTE
EL MANUAL DE GASES COMPRIMIDOS, TERCERA EDICIÓN,
PRAXAIR LES PIDE A LOS USUARIOS DE ESTE PRODUCTO ESTUDIAR ESTE
MSDS Y DARSE CUENTA DE RIESGOS DEL PRODUCTO Y SEGURIDAD
LA INFORMACIÓN. PARA PROMOVER USO SEGURO DE ESTE PRODUCTO, UN
USUARIO DEBE (1) NOTIFIQUE A LOS EMPLEADOS, AGENTES, Y
CONTRATISTAS DE LA INFORMACIÓN EN ESTE MSDS Y DE CUALQUIER OTRO
RIESGO DEL PRODUCTO CONOCIDO Y SEGURIDAD DE LA INFORMACIÓN.
62
15. BIBLIOGRAFÍA
Ahmed, M. S., Dobberstein, R. H. and Farnsworth, N. R. 1980. Stevia rebaudiana. I. Use of p-bromophenacyl bromide to enhance ultraviolet detection of water-soluble organic acids (steviolbioside and rebaudioside B) in high-performance liquid chromatographic analysis. J. Chromatogr. 192: 387-393.
Ahmed, M. S. and Dobberstein, R. H. 1982a. Stevia rebaudiana. II. High-performance liquid chromatographic separation and quantitation of stevioside, rebaudioside A and rebaudioside C. J. Chromatogr. 236: 523-526.
Ahmed, M. S. and Dobberstein, R. H. 1982b. Stevia rebaudiana. III. High-performance liquid chromatographic separation and quantitation of rebaudiosides B, D, and E, dulcoside A, and steviolbioside. J. Chromatogr. 245: 373-376.
Bennett, R. D., Lieber, E. R., and Heftmann, E. 1967. Biosynthesis of steviol from (-)-kaurene. Phytochemistry 6: 1107-1110.
Bonvie, L., Bonvie, B., and Gates, D. 1997. The stevia story, a tale of incredible sweetness and intrigue. B.E.D. Publications, Atlanta.
Brandle, J.E., and Rosa, N. 1992. Heritability for yield, leaf:stem ratio and stevioside content estimated from a landrace cultivar of Stevia rebaudiana. Can. J. Plant Sci. 72: 1263-1266.
Bridel, M. and Lavieille, R. 1931a. Le principe à saveur sucrée du Kaà-hê-é (Stevia rebaudiana) Bertoni. Bull. Soc. Chim. Biol. 13: 636-655.
Bridel, M. and Lavieille, R. 1931b. Le principe sucré du Kaà-hê-é (Stevia rebaudiana Bertoni). II. L’hydrolyse diastasique du stévioside. III. Le stéviol de l’hydrolyse diastasique et l’isostéviol de l’hydrolyse acide. Bull. Soc. Chim. Biol. 13: 781-796.
Carneiro, J.W.P. 1990. Stevia rebaudiana (Bert.) Bertoni, production of seed. M.Sc Thesis, State University of Maringa, Brazil (English abstr.).
Chang, S. S. and Cook, J. M. 1983. Stability studies of stevioside and rebaudioside A in carbonated beverages. J. Agric. Food Chem. 31: 409-412.
Chang, K.F., Howard, R.J. and Gaudiel R.G. 1997. First report of stevia as a host for Sclerotinia sclerotiorum. Plant Disease 81: 311.
Chappell, J. 1995. Biochemistry and molecular biology of the isoprenoid biosynthetic pathway in plants. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 46: 521-547.
Cook, I. F. and Knox, J. R. 1970. A synthesis of steviol. Tetrahedron Lett. 4091-4093.
Crammer, B. and Ikan, R. 1986. Sweet glycosides from the stevia plant. Chem. Brit. 22: 915-916.
Darise, M., Kohda, H., Mizutani, K., Kasai, R. and Tanaka, O. 1983. Chemical constituents of flowers of Stevia rebaudiana Bertoni. Agric. Biol. Chem. 47: 133-135.
63
Das, S., Das, A.K., Murphy, R.A., Punwani, I.C., Nasution, M.D., and Kinghorn, A.D. 1992. Evaluation of the cariogenic potential of the intense natural sweeteners stevioside and rebaudioside A. Caries Res. 26: 363-366.
Djerassi, C., Quitt, P., Mosettig, E., Cambie, R. C., Rutledge, P. S. and Briggs, L. H. 1961. Optical rotatory dispersion studies. LVIII. The complete absolute configurations of steviol, kaurene and the diterpene alkaloids of the garryfoline and atisine groups. J. Amer. Chem. Soc. 83: 3720-3722.
Dolder, F., Lichti, H., Mosettig, E. and Quitt, P. 1960. The structure and stereochemistry of steviol and isosteviol. J. Amer. Chem. Soc. 82: 246-247.
Donalisio, M.G.R., Duarte, F.R., Pinto, A.J.D.A., and Souza, C.J. 1982. Stevia rebaudiana. Agronomico 34: 65-68.
DuBois, G.E. and Stephenson, R.A. 1984. Diterpenoid sweeteners. Synthesis and sensory evaluation of stevioside analogues with improved organoleptic properties. J. Med. Chem 28:93-98.
Fors, A. 1995. A new character in the sweetener scenario. Sugar J. 58: 30.
Frederico, A.P., Ruas, P.M., Marinmorlaes, M.A., Ruas, C.F. and Nakajima, J.N. 1996. Chromosome studies in some Stevia (Compositae) species from southern Brazil. Braz. J. Genet. 19: 605-609.
Fujinuma, K., Saito, K., Nakazato, M., Kikuchi, Y., Ibe, A. and Nishima, T. 1986. Thin layer chromatographic detection and liquid chromatographic determination of stevioside and rebaudioside A in beverages and foods following reverse phase column chromatography. J. Assoc. Off. Anal. Chem. 69: 799-802.
Fujita, S., Taka, K. and Fujita, Y. 1977. Miscellaneous contributions to the essential oils of the plants from various territories. XLI. The components of the essential oil of Stevia rebaudiana. Yakugaku Zasshi 97: 692-694; Chem. Abstr. 87: 122621v (1977).
Fullas, F., Kim, J., Compadre, C. M. and Kinghorn, A. D. 1989. Separation of natural product sweetening agents using overpressured layer chromatography. J. Chromatogr. 464: 213-219.
Goenadi, D.H. 1983. Water tension and fertilization of Stevia rebaudiana Bertoni on Oxic Tropudalf (English abstr.). Menara Perkebunan. 51: 85-90.
Haga, T., Ise, R., and Kobayashi, T. 1976. A method for purifying stevioside (English abstr.). Jap. Patent 51-131900.
Hanson, J. R. and De Oliveira, B. H. 1993. Stevioside and related sweet diterpenoid glycosides. Nat. Prod. Rep. 10: 301-309.
Hanson, J.R., and White, A.F. 1968. Studies in terpenoid biosynthesis II. The biosynthesis of steviol. Phytochemistry 7: 595-597.
Hashimoto, Y., Moriyasu, M., Nakamura, S., Ishiguro, S. and Komuro, M. 1978. High-performance liquid chromatographic determination of Stevia components on a hydrophilic packed column. J. Chromatogr. 161: 403-405.
Hedden, P., and Kamiya, Y. 1997. Gibberellin biosynthesis: enzymes, genes and their regulation. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 48: 431-460.
64
Itagaki K., and Ito, T. 1979. Purification of stevioside (English abstr.). Jap. Patent 54-041898.
Kaneda, N., Kasai, R., Yamasaki, K. and Tanaka, O. 1977. Chemical studies on sweet diterpene-glycosides of Stevia rebaudiana: conversion of stevioside into rebaudioside-A. Chem. Pharm. Bull. 25: 2466-2467.
Kasai, R., Yamaguchi, H. and Tanaka, O. 1987. High-performance liquid chromatography of glycosides on a new type of hydroxyapatite column. J. Chromatogr. 407: 205-210.
Katayama O., Sumida, T, Hayashi, H. and Mitsuhashi H. 1976. The practical application of Stevia and research and development data (English translation). I.S.U. Company, Japan. 747 pp.
Kim, K.K., Sawa, Y., and Shibata, H. 1996a. Hydroxylation of ent-kaurenoic acid to steviol in Stevia rebaudiana Bertoni- Purification and partial characterization of the enzyme. Arch. Biochem. Biophys. 332: 223-230.
Kim, K.K., Yamashita, H., Sawa, Y., and Shibata, H. 1996b. A high activity of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase in chloroplasts of Stevia rebaudiana Bertoni. Biosci. Biotech. Biochem. 60: 685-686.
Kinghorn, A.D. 1992. Food ingredient safety review: Stevia rebaudiana leaves. Herb Research Foundation, Boulder.
Kinghorn, A. D., Nanayakkara, N. P. D., Soejarto, D. D., Medon, P. J. and Kamath, S. 1982. Potential sweetening agents of plant origin. I. Purification of Stevia rebaudiana sweet constituents by droplet counter-current chromatography. J. Chromatogr. 237: 478-483.
Kinghorn, A. D. and Soejarto, D. D. 1985. Current status of stevioside as a sweetening agent for human use. Pages 1-52 in H. Wagner, H. Hikino and N. R. Farnsworth, eds. Economic and medicinal plant research. Academic Press, London.
Kinghorn, A. D., Soejarto, D. D., Nanayakkara, N. P. D., Compadre, C. M., Makapugay, H. C., Hovanec-Brown, J. M., Medon, P. J. and Kamath, S. K. 1984. A phytochemical screening procedure for sweet ent-kaurene glycosides in the genus Stevia. J. Nat. Prod. 47: 439-444.
Kitada, Y., Sasaki, M., Yamazoe, Y. and Nakazawa, H. 1989. Simultaneous determination of stevioside, rebaudioside A, and C and dulcoside A in foods by high-performance liquid chromatography. J. Chromatogr. 474: 447-451.
Kobayashi, M., Horikawa, S., Degrandi, I. H., Ueno, J. and Mitsuhashi, H. 1977. Dulcosides A and B, new diterpene glycosides from Stevia rebaudiana. Phytochemistry 16: 1405-1408.
Kohda, H., Kasai, R., Yamasaki, K., Murakami, K. and Tanaka, O. 1976. New sweet diterpene glucosides from Stevia rebaudiana. Phytochemistry 15: 981-983.
Lee, J.I., Kang, K.K., and Lee, E.U. 1979. Studies on new sweetening resource plant stevia (Stevia rebaudiana Bert.) in Korea. I. Effects of transplanting date shifting by cutting and seeding dates on agronomic characteristics and dry leaf yields of stevia (English abstr.). Res. Rep. ORD 21: 171-179.
Lee, J.I., Kang, K.H., Park, H.W., and Ham, Y.S. 1982. New high rebaudioside - A stevia variety "Suweon 11" (English abstr.). Res. Rep. ORD 24: 186-188.
65
Lewis, W.H. 1992. Early uses of Stevia rebaudiana (Asteraceae) leaves as a sweetener in Paraguay. Econ. Bot. 46: 336-337.
Liu, J. and Li, S. F. Y. 1995. Separation and determination of Stevia sweeteners by capillary electrophoresis and high performance liquid chromatography. J. Liq. Chromatogr. 18: 1703-1719.
Lovering, N.M. and Reeleder, R.D. 1996. First report of Septoria steviae on stevia (Stevia rebaudiana) in North America. Plant Disease 80: 959.
Makapugay, H. C., Nanayakkara, N. P. D. and Kinghorn, A. D. 1984. Improved high-performance liquid chromatographic separation of the Stevia rebaudiana sweet diterpene glycosides using linear gradient elution. J. Chromatogr. 283: 390-395.
Martelli, A., Frattini, C. and Chialva, F. 1985. Unusual essential oils with aromatic properties-I. Volatile components of Stevia rebaudiana Bertoni. Flav. Frag. J. 1: 3-7.
Matsui, M., Matsui, K., Kawasaki, Y., Oda, Y., Noguchi, T., Kitagawa, Y., Sawada, M., Hayashi, M., Nohmi, T., Yoshihira, K., Ishidate, M., Jr, and Sofuni, T. 1996. Evaluation of the genotoxicity of stevioside and steviol using six in vitro and one in vivo mutagenicity assays. Mutagenesis 11: 573-579.
Matsushita, K., and Kitahara, T. 1981 Separation of stevioside and rebaudioside A by crystallization (English abstr.). Jap. Patent 56-121454.
Mauri, P., Catalano, G., Gardana, C. and Pietta, P. 1996. Analysis of Stevia glycosides by capillary electrophoresis. Electrophoresis 17: 367-371.
McGarvey, D.J., and Croteau, R. 1995. Terpenoid metabolism. Plant Cell 7: 1015-1026.
Metivier, J. and Viana, A. M. 1979. Determination of microgram quantities of stevioside from leaves of Stevia rebaudiana Bert. by two-dimensional thin layer chromatography. J. Exp. Bot. 30: 805-810.
Miyazaki, Y., and Watanabe, H. 1974. Studies on the cultivation of Stevia rebaudiana Bertoni; On the propogation of the plant (English abstr.). Jap. J. Trop. Agric. 17: 154-157.
Mizukami, H., Shiiba, K. and Ohashi, H. 1982. Enzymatic determination of stevioside in Stevia rebaudiana. Phytochemistry 21: 1927-1930.
Mori, K., Nakahara, Y. and Matsui, M. 1972. Diterpenoid total synthesis-XIX. (±)-Steviol and erythroxydiol A: rearrangements in bicyclooctane compounds. Tetrahedron 28: 3217-3226.
Morita, T. 1987. Dried leaves (English abstr.). Jap. Patent 62-96025
Mosettig, E. and Nes, W. R. 1955. Stevioside. II. The structure of the aglucone. J. Org. Chem. 20: 884-899.
Mosettig, E., Beglinger, U., Dolder, F., Lichti, H., Quitt, P. and Waters, J. A. 1963. The absolute configuration of steviol and isosteviol. J. Amer. Chem. Soc. 85: 2305-2309.
Murai, N. 1988. Stevia drying system (English abstr.) Jap. Patent 63-258553.
66
Nabeta, K., Kasai, T. and Sugisawa, H. 1976. Phytosterol from the callus of Stevia rebaudiana. Agric. Biol. Chem. 40: 2103-2104.
Nakahara, Y., Mori, K. and Matsui, M. 1971. Diterpenoid total synthesis. Part XVI. Alternative synthetic routes to (±)-steviol and (±)-kaur-16-en-19-oic acid. Agric. Biol. Chem. 35: 918-928.
Nakamura, S. and Tamura, Y. 1985. Variations in the main glycosides of stevia. Jap. J. Trop. Agric. 29:109-115.
Nikolova-Damyanova, B., Bankova, V. and Popov, S. 1994. Separation and quantitation of stevioside and rebaudioside A in plant extracts by normal-phase high performance liquid chromatography and thin-layer chromatography: a comparison. Phytochem. Anal. 5: 81-85.
Nishiyama, P., Alvarez, M. and Vieira, L. G. E. 1992. Quantitative analysis of stevioside in the leaves of Stevia rebaudiana by near infrared reflectance spectroscopy. J. Sci. Food Agric. 59: 277-281.
Ogawa, T. 1980. Decolorization and purification of a stevia sweet component (English abstr.). Jap. Patent 55-111768.
Ogawa, T., Nozaki, M. and Matsui, M. 1980. Total synthesis of stevioside. Tetrahedron 36: 2641-2648.
Oshima, Y., Saito, J. and Hikino, H. 1986. Sterebins A, B, C and D, bisnorditerpenoids of Stevia rebaudiana leaves. Tetrahedron 42: 6443-6446.
Oshima, Y., Saito, J. and Hikino, H. 1988. Sterebins E, F, G and H, diterpenoids of Stevia rebaudiana leaves. Phytochemistry 27: 624-626.
Pendergast, W.R. 1991. GRAS Affirmation Petition Number 2G0390.
Pezzuto, J.M., Compadre, C.M., Swanson, S.M., Nanayakkara, N.P.D., and Kinghorn, A.D. 1985. Metabolically activated steviol, the aglycone of stevioside, is mutagenic. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 2478-2482.
Phillips, K.C. 1989. Stevia: steps in developing a new sweetener. Pages 1-43 in T.H. Grenby ed. Developments in sweeteners, Volume 3. Elsevier Applied Science, London.
Planas, G.M., and Kuc, J. 1968. Contraceptive properties of Stevia rebaudiana. Science. 162: 1007.
Procinska, E., Bridges, B.A., and Hanson, J.R. 1991. Interpretation of results with the 8-azaguanine resistance system in Salmonella typhimurium: no evidence for direct acting mutagenesis by 15-oxosteviol, a possible metabolite of steviol. Mutagenesis 6: 165-167.
Rajbhandari, A. and Roberts, M. F. 1983. The flavonoids of Stevia rebaudiana. J. Nat. Prod. 46: 194-195.
Robinson, B.L. 1930. Contributions from the Gray Herbarium of Harvard University. The Gray Herbarium of Harvard University, Cambridge.
Ruddat, M., Heftmann, E., and Lang, A. 1965. Biosynthesis of steviol. Arch. Biochem. Biophys. 110: 496-499.
67
Sakamoto, I., Yamasaki, K. and Tanaka, O. 1977a. Application of 13C NMR spectroscopy to chemistry of natural glycosides: rebaudioside-C, a new sweet diterpene glycoside of Stevia rebaudiana. Chem. Pharm. Bull. 25: 844-846.
Sakamoto, I., Yamasaki, K. and Tanaka, O. 1977b. Application of 13C NMR spectroscopy to chemistry of plant glycosides: rebaudiosides-D and -E, new sweet diterpene-glucosides of Stevia rebaudiana Bertoni. Chem. Pharm. Bull. 25: 3437-3439.
Saxena, N.C., and Ming, L.S. 1988. Preliminary harvesting characteristics of stevia. Phys. Prop. Agric. Mat. Prod. 3: 299-303.
Schiffman, S.S., Pecore, S.D., Booth, B.J., Losee, M.L., Carr, B.T., Sattely-Miller, E., Graham, B.G., and Warwick, Z.S. 1994. Adaptation of sweeteners in water and in tannic acid solutions. Phys. Behavior 55: 547-559.
Schiffman, S.S., Booth, B.J., Carr, B.T., Losee, M.L., Sattely-Miller, E., and Graham, B.G. 1995. Investigation of synergism in binary mixtures of sweeteners. Brain Res. Bull. 38: 105-120.
Schock, C.C. 1982. Experimental cultivation of Rebaudi's stevia in California. University of California Agronomy Progress Report No. 122.
Shaffert, E.E. and Chetobar, A.A. 1992. Development of the male gametophyte in Stevia rebaudiana (English abstr.). Buletinul Academiei de Schtintse A Republica Moldava 6: 3-9.
Shaffert, E.E. and Chetobar, A.A. 1994a. Development of the female gametophyte in Stevia rebaudiana (English translation). Buletinul Academiei de Schtintse A Republica Moldava 6: 10-18.
Shaffert, E.E. and Chetobar, A.A. 1994b. Structure, topography and onogeny of Stevia rebaudiana (English abstr.). Botanicheskii Zhurnal 79: 38-48.
Shibata, H., Sonoke, S., Ochiai, H., Nishihashi, H., and Yamada, M. 1991. Glycosylation of steviol and steviol-glucosides in extracts from Stevia rebaudiana Bertoni. Plant Physiol. 95: 152-156.
Shibata, H., Sawa, Y., Oka, T., Sonoke, S., Kim, K.K. and Yoshioka, M. 1995. Steviol and steviol-glycoside. Glucosyltransferase activities in Stevia rebaudiana Bertoni. Purification and partial characterization. Arch. Biochem. Biophys. 321: 390-396.
Shizhen, S. 1995. A study on good variety selection in Stevia rebaudiana. Scientia Agricultura Sinica 28: 37-41.
Shuping, C., and Shizhen, S. 1995. Study on storage technique of Stevia rebaudiana seed (English abstr.). Acta Agronomica Sinica 21: 102-105.
Shyu, YT, Liu, S.Y., Lu, H.Y., Wu, W.K. Su, C.G. 1994. Effects of harvesting dates on the charateristics, yield and sweet components of stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) lines. J. Agric. Res. China 43:29-39.
Sholichin, M., Yamasaki, K., Miyama, R., Yahara, S. and Tanaka, O. 1980. Labdane-type diterpenes from Stevia rebaudiana. Phytochemistry 19: 326-327.
Sincholle, D. and Marcorelles, P. 1989. Study of the anti-androgenic activity of extracts of Stevia rebaudiana Bertoni (English abstr.). Med. Plants and Phytotherapy 23: 282-287.
68
Soejarto, D.D., Compadre, C.M., Medon, P.J., Kamath, S.K., and Kinghorn, A.D. 1983. Potential sweetening agents of plant origin. II. Field search for sweet-tasting Stevia species. Econ. Bot. 37: 71-79.
Soejarto, D.D., Kinghorn, A.D., and Farnsworth, N.R. 1982. Potential sweetening agents of plant origin. III. Organoleptic evaluation of stevia leaf herbarium samples for sweetness. J. Nat. Prod. 45: 590-599.
Striedner, J., Czygan, F.-C. and Braunegg, G. 1991. Contributions to the biotechnological production of sweeteners from Stevia rebaudiana Bertoni. I. A method for the serial analysis of diterpene glycosides by HPLC. Acta Biotechnol. 11: 495-499.
Sumida, T. 1968. Reports on Stevia rebaudiana Bertoni M. introduced from Brazil as a new sweetness resource in Japan. Misc. Pub. Hokkaido Natl. Exp. Sta. 2: 69-83.
Sumida, T. 1980. Studies on Stevia rebaudiana Bertoni as a new possible crop for sweetening resource in Japan (English summary). J. Cent. Agric. Exp. Stn. 31: 1-71.
Tan, S., and Ueki, H. 1994. Method for extracting and separating sweet substances of Stevia rebaudiana Bertoni (English abstr.). Jap. Patent 06-007108.
Tanaka, O. 1982. Steviol-glycosides: new natural sweeteners. Trends Anal. Chem. 1: 246-248.
Tanaka, O. 1997. Improvement of taste of natural sweeteners. Pure Appl. Chem. 69:675-683
Uneshi, H., Ise R., and Kobayashi, T. 1977. Purification of a stevia sweetening agent (English abstr.). Jap. Patent 54-030199.
Valio, I.F.M. and Rocha, R.F. 1966. Effect of photoperiod and growth regulators on growth and flowering of Stevia rebaudiana Bertoni. Jap. J. Crop Sci. 46:243-248.
Van Calsteren, M.-R., Bussière, Y. and Bissonnette, M. C. 1993. Spectroscopic characterization of two sweet glycosides from Stevia rebaudiana. Spectroscopy 11: 143-156.
Van Hooren, D.L., and Lester, H.R. 1992. Stevia drying in small scale bulk tobacco kilns. In Methods to utilize tobacco kilns for curing, drying and storage of alternate crops, final report. Ontario Ministry of Agriculture and Food, Delhi.
Vis, E. and Fletcher, H. G. 1956. Stevioside. IV. Evidence that stevioside is a sophoroside. J. Amer. Chem. Soc. 78: 4709-4710.
Wood, H. B., Allerton, R., Diehl, H. W. and Fletcher, H. G. 1955. Stevioside. I. The structure of the glucose moieties. J. Org. Chem. 20: 875-883.
Xiang, Z.P. 1983. Stevia (partial English translation). General Bureau of State Farms, Heilongjiang, China.
Xili, L., Chenggjiany, B.C., Eryi, X., Reiming, S., Yuengming, W., Haodong, S., and Zhiyan, H. 1992. Chronic oral toxicity and carcinogenicity study of stevioside in rats. Food Chem. Tox. 30: 957-965.
Yamasaki, K., Kohda, H., Kobayashi, T., Kasai, R. and Tanaka, O. 1976. Structures of stevia diterpene-glycosides: application of 13C NMR. Tetrahedron Lett. 1005-1008.
EQUIPO DESCRIPCION enfriador 2 Costo de compra
CP= 36564 $DOLARESCosto instalacionCBM= 104,938 $DOLARESCosto total de instalacionCTBM= 123,827 0.18 fracción caract. para la contingencia Costos de sitios y los honorariosCsite= 6,191 0.05 del CTBM Costos de serviciosCserv= 6,191 $DOLARESCostos de asignacionCasig= 0 $DOLARES
INV. DIRECTA PERMANENTE CDPI= 277,711 $DOLARES
Costos de contingenciasCcontig= 97,199 $DOLARES 0.35 del CDPI
CAP. TOTAL DEPRECIABLE CTDC= 374,909 $DOLARES
Costos de terrenoCterr= 7,498 $DOLARES 0.02 del CTDCCostos de regaliasCreg= 7,498 $DOLARES 0.02 del CTDCCostos de arranqueCarran= 37,491 $DOLARES 0.1 del CTDC
INV. TOTAL PERMANENTE CTPI= 427,397 $DOLARES 0.95 factor típico para MéxicoCTPImod= 406,027Capital de trabajo
Ctrabajo= 0 $DOLARESCAP. TOTAL INVERSION CTCI= 406,027 $DOLARES
consumo articulo precio unidades(m3) m3/año total anualvapor $ 2.646E-05 $/Kg. 0 0electricidad $ 518.4 $/Kwattaño 0 0agua de enfriamiento $ 0.211 $/m3 0 0agua de proceso $ 1326.85 $/m3 0 0refrigeracion $ 0 /ton 0 0liquido desechos $ 0 /1000gpy 0 0
total gral= 0
EQUIPO DESCRIPCIONtanque de dióxido de carbono Costo de compra
CP= 73,801 $DOLARESCosto instalacion
CBM= 233,455 $DOLARESCosto total de instalacion
CTBM= 275,477 0.18 fracción caract. para la contingencia Costos de sitios y los honorarios
Csite= 13,774 0.05 del CTBM Costos de servicios
Cserv= 13,774 $DOLARESCostos de asignacion
Casig= 0 $DOLARESINV. DIRECTA PERMANENTE CDPI= 610,280 $DOLARES
Costos de contingenciasCcontig= 213,598 $DOLARES 0.35 del CDPI
CAP. TOTAL DEPRECIABLE CTDC= 823,879 $DOLARES
Costos de terrenoCterr= 16,478 $DOLARES 0.02 del CTDC
Costos de regaliasCreg= 16,478 $DOLARES 0.02 del CTDC
Costos de arranqueCarran= 82,388 $DOLARES 0.1 del CTDC
INV. TOTAL PERMANENTE CTPI= 939,222 $DOLARES 0.95 factor típico para MéxicoCTPImod= 892,261
Capital de trabajoCtrabajo= 0 $DOLARES
CAP. TOTAL INVERSION CTCI= 892,261 $DOLARESconsumo
articulo precio unidades(m3) m3/año total anualvapor $ 2.646E-05 $/Kg. 0 0 $
electricidad $ 518.4 $/Kwattaño 0 0 $agua de enfriamiento $ 0.211 $/m3 0 0 $agua de proceso $ 1326.85 $/m3 0 0 $
refrigeracion $ 0 /ton 0 0 $liquido desechos $ 0 /1000gpy 0 0 $
total gral= 0 $
EQUIPO compresor de aire Costo de compra
CP= 642,082 $DOLARESCosto instalacion
CBM= 334,017 $DOLARESCosto total de instalacion
CTBM= 394,140 0.18 fracción caract. para la contingencia Costos de sitios y los honorarios
Csite= 19,707 0.05 del CTBM Costos de servicios
Cserv= 19,707 $DOLARESCostos de asignacion
Casig= 0 $DOLARESINV. DIRECTA PERMANENTE CDPI= 1,409,653 $DOLARES
Costos de contingenciasCcontig= 493,379 $DOLARES 0.35 del CDPI
CAP. TOTAL DEPRECIABLE CTDC= 1,903,032 $DOLARES
Costos de terrenoCterr= 38,061 $DOLARES 0.02 del CTDC
Costos de regaliasCreg= 38,061 $DOLARES 0.02 del CTDC
Costos de arranqueCarran= 190,303 $DOLARES 0.1 del CTDC
INV. TOTAL PERMANENTE CTPI= 2,169,456 $DOLARES 0.95 factor típico para MéxicoCTPImod= 2,060,983
Capital de trabajoCtrabajo= 0 $DOLARES
CAP. TOTAL INVERSION CTCI= 2,060,983 $DOLARESconsumo
articulo precio unidades(m3) Kwattaño total anualvapor $ 2.646E-05 $/Kg. 0 0 $electricidad $ 518.4 $/Kwattaño 0 $agua de enfriamiento $ 0.211 $/m3 0 0 $agua de proceso $ 1326.85 $/m3 0 0 $refrigeracion $ 0 /ton 0 0 $liquido desechos $ 0 /1000gpy 0 0 $
total gral= 0 $
DESCRIPCION
EQUIPOBomba de dezplamiento directa Costo de compra
CP= 642,082 $DOLARESCosto instalacion
CBM= 4,359,147 $DOLARESCosto total de instalacion
CTBM= 5,143,793 0.18 fracción caract. para la contingencia Costos de sitios y los honorarios
Csite= 257,190 0.05 del CTBM Costos de servicios
Cserv= 257,190 $DOLARESCostos de asignacion
Casig= 0 $DOLARESINV. DIRECTA PERMANENTE CDPI= 10,659,402 $DOLARES
Costos de contingenciasCcontig= 3,730,791 $DOLARES 0.35 del CDPI
CAP. TOTAL DEPRECIABLE CTDC= 14,390,193 $DOLARES
Costos de terrenoCterr= 287,804 $DOLARES 0.02 del CTDC
Costos de regaliasCreg= 287,804 $DOLARES 0.02 del CTDC
Costos de arranqueCarran= 1,439,019 $DOLARES 0.1 del CTDC
INV. TOTAL PERMANENTE CTPI= 16,404,820 $DOLARES 0.95 factor típico para MéxicoCTPImod= 15,584,579
Capital de trabajoCtrabajo= 0 $DOLARES
CAP. TOTAL INVERSION CTCI= 15,584,579 $DOLARESconsumo
articulo precio unidades(m3) Kwattaño total anualvapor $ 2.646E-05 $/Kg. 0 0 $electricidad $ 518.4 $/Kwattaño 0 $agua de enfriamiento $ 0.211 $/m3 0 0 $agua de proceso $ 1326.85 $/m3 0 0 $refrigeracion $ 0 /ton 0 0 $liquido desechos $ 0 /1000gpy 0 0 $
total gral= 0 $
DESCRIPCION
EQUIPO DESCRIPCIONBomba para el agua Costo de compra
CP= 12,400 $DOLARESCosto instalacion
CBM= 39,680 $DOLARESCosto total de instalacion
CTBM= 46,822 0.18 fracción caract. para la contingencia Costos de sitios y los honorarios
Csite= 2,341 0.05 del CTBM Costos de servicios
Cserv= 2,341 $DOLARESCostos de asignacion
Casig= 0 $DOLARESINV. DIRECTA PERMANENTE CDPI= 103,585 $DOLARES
Costos de contingenciasCcontig= 36,255 $DOLARES 0.35 del CDPI
CAP. TOTAL DEPRECIABLE CTDC= 139,839 $DOLARES
Costos de terrenoCterr= 2,797 $DOLARES 0.02 del CTDC
Costos de regaliasCreg= 2,797 $DOLARES 0.02 del CTDC
Costos de arranqueCarran= 13,984 $DOLARES 0.1 del CTDC
INV. TOTAL PERMANENTE CTPI= 159,417 $DOLARES 0.95 factor típico para MéxicoCTPImod= 151,446
Capital de trabajoCtrabajo= 0 $DOLARES
CAP. TOTAL INVERSION CTCI= 151,446 $DOLARESconsumo
articulo precio unidades(m3) Kwattaño total anualvapor $ 2.646E-05 $/Kg. 0 0 $electricidad $ 518.4 $/Kwattaño 0 0 $agua de enfriamiento $ 0.211 $/m3 0 0 $agua de proceso $ 1326.85 $/m3 0 0 $refrigeracion $ 0 /ton 0 0 $liquido desechos $ 0 /1000gpy 0 0 $
total gral= 0 $
EQUIPO Costo de Edificios (laboratorio de micropropagacion,secador rotatorio Costo de compra planta industrial, terrenos de cultivo de 250 Has. 10,000,000 USD.
CP= 158,041 $DOLARES costo total de equipos 19,998,318 USD.Costo instalacion costo total de instalacion= 10,969,713 USD.
CBM= 200,000 $DOLARESCosto total de instalacion Inversion total = 19,998,318 USD.
CTBM= 236,000 0.18 fracción caract. para la contingencia Costos de sitios y los honorarios
Csite= 11,800 0.05 del CTBM Costos de servicios
Cserv= 11,800 $DOLARESCostos de asignacion
Casig= 0 $DOLARESINV. DIRECTA PERMANENTE CDPI= 617,641 $DOLARES
Costos de contingenciasCcontig= 216,174 $DOLARES 0.35 del CDPI
CAP. TOTAL DEPRECIABLE CTDC= 833,816 $DOLARES
Costos de terrenoCterr= 16,676 $DOLARES 0.02 del CTDC
Costos de regaliasCreg= 16,676 $DOLARES 0.02 del CTDC
Costos de arranqueCarran= 83,382 $DOLARES 0.1 del CTDC
INV. TOTAL PERMANENTE CTPI= 950,550 $DOLARES 0.95 factor típico para MéxicoCTPImod= 903,023
Capital de trabajoCtrabajo= 0 $DOLARES
CAP. TOTAL INVERSION CTCI= 903,023 $DOLARESconsumo
articulo precio unidades(m3) Kwattaño total anualvapor $ 2.646E-05 $/Kg. 0 0 $electricidad $ 518.4 $/Kwattaño 0 $agua de enfriamiento $ 0.211 $/m3 0 0 $agua de proceso $ 1326.85 $/m3 0 0 $refrigeracion $ 0 /ton 0 0 $liquido desechos $ 0 /1000gpy 0 0 $
total gral= 0 $
DESCRIPCION
CALCULO DE LA RECUPERACION DE LA INVERSION
FLUJOS ANUALESMATERIA CANTIDAD PRECIO COSTO
Flujos Negativos $usd Flujo Positivo $usd PRIMA ton/año $/ton $/año$ PROYECTO =30,000,000 REGALIAS= 0 Hojas de Stevia Seca 1400 1000 1,400,000.00
INV.INICIAL= 37,400,000 INFLACION= 0.2 % Dioxido de carbono 600 10000 6,000,000GASTOS= 16,799,212.70 IMPUESTO= 0.15 %$EQUIPO= 15,896,221.41 RESCATE= 4,768,866 Total= 7,400,000
P.E= 351.5567568 PRIMER AÑOP.E= 351.5567568 SEGUNDO AÑO
CANTIDAD PRECIO GANANCIAPRODUCTO ton/año $/ton $/añoEsteviosido 111.384 300000 33,415,200
FAI Ganancia Beneficios Ingreso Flujo Neto Flujo AÑOS sin inflación por año Gastos de Operación Depreciación Grabable Impuestos despues de impuestos Constante VPN
0 -37,400,000 0 0 0 0 0 0 0 0 01 16,615,987 33,415,200 16,799,213 0 -476,887 16,139,101 -2,420,865 14,195,122 14,195,122 -25,056,4152 16,615,987 33,415,200 16,799,213 0 -476,887 16,139,101 -2,420,865 14,195,122 14,195,122 -14,322,8643 16,615,987 33,415,200 16,799,213 0 -476,887 16,139,101 -2,420,865 14,195,122 14,195,122 -4,989,3404 16,615,987 33,415,200 16,799,213 0 -476,887 16,139,101 -2,420,865 14,195,122 14,195,122 3,126,7675 16,615,987 33,415,200 16,799,213 0 -476,887 16,139,101 -2,420,865 14,195,122 14,195,122 10,184,2516 16,615,987 33,415,200 16,799,213 0 -476,887 16,139,101 -2,420,865 14,195,122 14,195,122 16,321,1947 16,615,987 33,415,200 16,799,213 0 -476,887 16,139,101 -2,420,865 14,195,122 14,195,122 21,657,6678 16,615,987 33,415,200 16,799,213 0 -476,887 16,139,101 -2,420,865 14,195,122 14,195,122 26,298,0779 16,615,987 33,415,200 16,799,213 0 -476,887 16,139,101 -2,420,865 14,195,122 14,195,122 30,333,21710 16,615,987 33,415,200 16,799,213 0 -476,887 16,139,101 -2,420,865 14,195,122 14,195,122 33,842,034