INTRODUCCIÓN:

Lípidos: Es un grupo de sustancias heterogéneas que sólo tienen en común dos características: son insolubles en agua y son solubles en disolventes orgánicos, como éter, cloroformo, benceno, etc. Sus funciones biológicas son: fuente de energía, reserva energética, estructural, reguladora y transportadora.

Clasificación: Existen diversos criterios para clasificar a los lípidos, presentamos la que se emplea con mayor frecuencia basada en su composición química:

Ácidos Grasos: se definen como ácidos orgánicos que presentan un mínimo de 9 carbonos.

Triacilglicéridos: compuestos de 3 residuos de ácidos grasos grasos esterificados al glicerol .

Reacciones de los triglicéridos:

La hidrólisis enzimática de los triglicéridos se produce mediante la escisión del enlace éster, y la formación de ácidos grasos y glicerol. Dicha hidrólisis es llevada a cabo en la interfase líquido—agua debido a que las grasas son no solubles en agua.

Pancreatina:

La pancreatina es una mezcla de las enzimas digestivas secretadas por el parénquima del páncreas. El páncreas humano es un órgano que reúne funciones secretoras endocrinas y exocrinas. Las secreciones exocrinas del páncreas son importantes en la digestión. El jugo pancreático consta de un componente acuoso, rico en bicarbonato, que ayuda a neutralizar el contenido duodenal y un componente enzimático. El componente enzimático contiene enzimas importantes para la digestión de la mayor parte de los alimentos. La ausencia completa de enzimas pancreáticas implica una mala absorción de lípidos, proteínas y carbohidratos. El jugo pancreático contiene µ-amilasa, tripsina, quimotripsina y carboxipeptidasa. El jugo pancreático contiene además diversas enzimas para la digestión de lípidos, llamadas lipasas. Entre las principales lipasas pancreáticas destacan la triaglicerol hidrolasa, el colesterol éster hidrolasa y fosfolipasa A2. La lipasa son enzimas muy lábiles al calor y el pH ácido, y su acción se lleva a cabo por medio de la hidrólisis de los enlaces éster, junto con los ácidos grasos. Estas enzimas actúan mejor en pH entre 7 y 9 y temperaturas entre 37o y 39º C y su actividad depende de la absorción sobre las partículas micelares. Sales biliares Las sales biliares son ácidos biliares mezclados con un catión, por lo general sodio, aunque a veces es potasio. Los ácidos biliares son ácidos esteroides que se encuentra principalmente en la bilis. En los seres humanos, las sales de ácido taurocólico y ácido glicocólico (derivados del ácido cólico) representan aproximadamente el 80% de todas las sales biliares. Las sales biliares se producen en el hígado por el Citocromo P450 mediado por la oxidación del colesterol. Se conjugan con la taurina o el aminoácido glicina, o con un sulfato o glucurónido, y luego se almacenan en la vesícula, que concentra las sales biliares mediante la eliminación de agua. Tras una comida, el contenido de la vesícula biliar se secretan en el intestino, donde las sales biliares sirven para emulsionar las grasas dietéticas incrementando la interfase lípido agua. Al hacerlo, facilitan el contacto entre enzima y sustrato, lo que permite la metabolización de los lípidos y su absorción en la pared intestinal. Leche homogeneizada Por definición la “leche de vaca” es la secreción, excluyendo el calostro, que se puede obtener mediante métodos normales de ordeño de la glándula mamaria lactante de vacas sanas, alimentadas normalmente. Se puede considerar que contiene tres componentes básicos: agua, grasa y sólidos no grasos (SNG). La materia orgánica de la porción no grasa consiste principalmente de las proteínas (caseina 80%, albúminas 5% y globulinas 12%), lactosa y ácidos láctico y cítrico. La homogenización de la leche se obtiene haciéndola pasar bajo presión elevada ( 180 – 200 bares) a través de orificios o válvulas muy estrechas con lo que el tamaño de los glóbulos grasos se reduce aproximadamente a 1/5 del inicial (unos 5 µm). También se destruyen parcialmente las micelas de caseína y los pedazos se adhieren a la superficie de los glóbulos grasos. Estos dos fenómenos estabilizan la emulsión retardando la decantación y coalescencia. La homogenización también mejora la consistencia de la leche, aumenta su blancura y hace los lípidos mas digestibles porque las lipasas digestibles penetran mejor en una emulsión mas fina . Por esta razón , la leche homogenizada es muy sensible a las lipasas endógenas de la leche.

Las enzimas digestivas de los triacilglicéridos son hidrosolubles, su digestión se lleva a cabo en interfases lípido-agua. La velocidad de este proceso, depende entonces del área superficial de la interfase, la cual se incrementa por los movimientos peristálticos del intestino combinados con la emulsificación de los ácidos biliares (detergentes digestivos sintetizados en el hígado y llevadas al intestino delgado en donde la digestión y absorción lipídica se lleva a cabo). Latriacilglicerol lipasa presenta activación superficial i.e. su actividad se incrementa al entrar en contacto con la interfase lípido-agua, no se une a la interfase, está en contacto con la colipasa. Los productos de la digestión de los lípidos, son absorbidos por las células de la mucosa intestinal (en el intestino delgado) el proceso es facilitado por los ácidos biliares que ayudan a formar micelas. Los ácidos biliares son esenciales para el transporte de los productos de la digestión de los lípidos, no sólo para su degradación, así mismo son necesarios para el transporte de vitaminas liposolubles (A,D,E y K). Las lipasas pancreáticas existen en dos tipos: las especificas para romper la unión ester en la posición alfa o alfa prima de los triglicéridos, y las especificas para las uniones beta. La hidrólisis completa de los triglicéridos procede entonces por pasos. Primero se hidrolizan

OBJETIVO Demostrar la acción de la lipasa pancreática en presencia y ausencia de la bilis.

PROCEDIMIENTO

RESULTADOS

A) Datos de la resta de ml:

B) graficas

DISCUSIÓN

Primero realizamos la resta de los ml usados de KOH del testigo 1 a los matraces 1,2,3 y del testigo 2 a los matraces 4,5,6, esto fue ya que a los matraces que sirvieron como testigos se les agrego la pancreatina con un proceso térmico, como no va a presentar acción en la reacción nos permitirá saber si la leche tenia algunos ácidos grasos ya liberados y así no sean tomados en cuenta mas adelante. Después se construyeron las graficas y pudimos observar claramente la función que tienen las sales biliares en la reacción, pues hubo un aumento en el volumen de KOH en la grafica 2, lo que significa que hubo un mayor numero de ácidos grasos liberados, pues la lipasa tuvo una mayor actividad enzimática en presencia de la bilis.

CONCLUSIÓN

La hidrólisis de los triglicéridos se lleva a cabo por medio de enzimas lipolìticas elaboradas en el páncreas. Estas reacciones se aceleran con las sales biliares como taurocolato o glicocolato de sodio, que emulsifican y solubilizan a los lípidos. Las sales biliares vienen en la bilis. Los substratos de la lipasa son los triglicéridos de cadena larga a los cuales hidroliza; rompen la unión Ester en la posición alfa y por lo tanto hay más triglicéridos después del rompimiento, para lo cual se necesita más ml de KOH, que es proporcional a los ácidos liberados. Por lo que concluimos que la lipasa Cataliza la hidrólisis de los ácidos grasos, rompiendo su larga cadena y se observó la actividad de la enzima lipasa indirectamente por titulación de los ácidos grasos liberados.

CUESTIONARIO

1.- ¿Cuál es la interpretación de las gráficas obtenidas?

En la grafica 1 se puede observar que la titulación se realizo de forma correcta, ya que la recta de ml usados en la titulación, fue ascendiendo conforme el tiempo de incubación aumentaba, por lo que la presencia de ácidos grasos fue normal.

En la grafica 2 se puede observar un aumento en el volumen de titulante conforme aumentaba el tiempo de incubación, pero se puede notar que los volúmenes fueron mayores a los volúmenes de la grafica 1, por lo que podemos decir que la liberación de ácidos grasos en la leche fue mayor ante la presencia de bilis.

2.- ¿Cuál es el objeto de agregar bilis en el experimento?

Es necesario el empleo de agentes emulsificantes como lo son las sales biliares (que producen una estimulación de la hidrólisis enzimática de los lípidos) las cuales son uno de los principales componentes de la bilis.

3.- ¿Cómo se clasifican los lípidos? 4.- ¿Cuáles son los ácidos grasos más importantes de la grasa humana?

5.- ¿Cuál es la importancia clínica de la lipasa en un diagnóstico? La lipasa (LPS) es una enzima pancreática necesaria para la absorción y digestión de los nutrientes, cataliza la hidrólisis de los esteres de glicerol de los ácidos grasos. La determinación de la LPS es útil para el diagnostico de enfermedades del páncreas como pancreatitis aguda y obstrucción pancreática. El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio. 6.- ¿Cuál es la composición y el funcionamiento del tejido adiposo?

Las células adiposas, adipocitos o lipocitos son las células que forman el tejido adiposo. Existen dos tipos de tejido adiposo, y por tanto dos tipos de adipocitos diferentes que los forman. Adipocitos blancos: contienen una gran cantidad de lípidos rodeados por un anillo de citoplasma. El núcleo es plano y se localiza en la

periferia. Contienen grasa en un estado semilíquido, y compuesta principalmente por triglicéridos y ésteres de colesterol. Secreta resistina, adiponectina y leptina.

Adipocitos marrones: tienen una característica forma poligonal, y a diferencia de los adipocitos blancos tienen una gran cantidad de citoplasma con fracciones dispersas de lípidos. Su núcleo es redondo, y aunque esté ligeramente desplazado del centro de la célula no se encuentra en la periferia. Su color marrón se origina por la gran cantidad de mitocondrias que poseen.

La función más importante del tejido adiposo consiste en proporcionar un lugar donde almacenar energía, para que pueda ser usada por el organismo cuando la ingesta calórica sea inferior a los requerimientos. Esta energía se almacena fundamentalmente en forma de triglicéridos, los cuales pueden sintetizarse en el propio adipocito, generalmente a partir de la glucosa. Otra función del tejido adiposo es la movilización de los triglicéridos almacenados, cuya posterior hidrólisis produce ácidos grasos libres que abandonan la célula y son transportados por la sangre unidos a la albúmina. La hidrólisis de los triglicéridos almacenados está sujeta a un control hormonal estricto, de modo que la cantidad de ácidos grasos liberados en sangre depende de los requerimientos energéticos del organismo.

¿ES POSIBLE DEMOSTRAR LA ACCIÓN DE LA LIPASA PANCREÁTICA EN PRESENCIA DE BILIS?

EQUIPO 1

MATERIAL

8 Matraces Erlenmeyer de 125 ml 1 Pipeta de 5 ml

Pinza para bureta 1 Bureta de 25 ml

1 Pipeta de 10 ml 1 Soporte universal

1 Pipeta de 1 ml Termómetro y baño maría a 37 °C

REACTIVOS

Pancreatina al 1% en agua Etanol al 95%

KOH 0.05 N Fenolftaleína

Leche homogeneizada Bilis

Etanol (95%)

Fórmula: C2H6O Peso molecular: 46.07 g/mol Apariencia y olor: Líquido transparente e incoloro, olor característico. Punto de fusión:-114.1°C Punto de ebullición: 78.5°C Densidad: 0.789 g/cm3 Grado Alcoholimétrico: 95° G.L. Mínimo Solubilidad: Miscible con agua

Hidróxido de Potasio (0.05 N)

Fórmula: KOH Peso molecular:56.1056 g/mol Apariencia y olor: Sólido blanco, delicuescente, inodoro. Punto de fusión: 380°C Punto de ebullición: 1324°C Densidad: 2,04 g/cm3 Solubilidad en agua, g/100 ml a 25°C: 110

Fenolftaleína

Fórmula: C20H14O4 Peso molecular: 318,33 g/mol Apariencia y olor: Sólido, cristales blancos o blancos amarillentos, sin olor. Punto de fusión: 258-262ºC (se descompone completamente) Densidad a 20°C: 1,29 g/cm3

Solubilidad en agua: Muy soluble en Acetona - Soluble en Tolueno - Moderadamente soluble en Alcohol Etílico y Dietil Éter - Insoluble en Benceno y Éter de Petróleo.

MATRAZ NÚMERO

REACTIVOS (ml) T1 1 2 3 4 5 6 T2

Leche homogeneizada 5 5 5 5 5 5 5 5

Extracto neutro de pancreatina al 1%

0 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 0

Extracto de pancreatina caliente a ebullición por 3 minutos.

1.5 0 0 0 0 0 0 1.5

Bilis 0 0 0 0 1 1 1 1

Tiempo de incubación a 37 °C 45’ 15’ 30’ 45’ 15’ 30’ 45’ 45’

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

0 15 30 45 60

ml

de

KO

H

Tiempo de hidrolisis

SIN BILIS

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

0 15 30 45 60

ml d

e K

OH

Tiempo de hidrolisis

CON BILIS