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ENZIMAS USADAS EN BIOLOGIA MOLECULAR
Enzimas de restricción
Enzimas de restricción
Corte:
- Extremo cohesivo
- Extremo romo
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ENZIMAS USADAS EN BIOLOGIA MOLECULAR
Enzimas de restricción
ADN polimerasa :
ADN ligasa
(Taq polimerasa: PCR)Síntesis de ADN in vitro, secuenciación
Ligasa
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ENZIMAS USADAS EN BIOLOGIA MOLECULAR
Enzimas de restricción
ADN polimerasa
ADN ligasa
Transcriptasa inversa
(Taq polimerasa)
Polinucleótido kinasa
Fosfatasa alcalina, etc.
ENZIMAS USADAS EN BIOLOGIA MOLECULAR
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Técnicas de clonado de ADN
In vivo
In vitro (PCR)
Clonado
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Vectores de clonado
Plásmidos
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Vectores de clonado
Plásmidos
Bacteriófagos
Bibliotecas
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Bibliotecas
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Vectores de clonado
Plásmidos
BacteriófagosConstrucción de genotecas: - genómicas
- de cDNA
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Vectores de clonado
Plásmidos
Bacteriófagos
Cósmidos
Transferencia de material genético a bacterias
- Conjugación
- Transducción
- Transformación
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Conjugación
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Transducción
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Vectores de clonado procariotas
Plásmidos
Bacteriófagos
Cósmidos
Vectores de clonado eucariotas
Baculovirus
YACs
Virus de mamíferos (ej.: vectores retrovirales)
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Técnicas de clonado de ADN
In vivo
In vitro (PCR)
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Reacción en cadena
de la polimerasa
(PCR)
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Electroforesis
Electroforesis
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Métodos de detección
- Hibridación de ácidos nucleicos
- PCR
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Southern-blot
Hibridación de ácidos nucleicos
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Southern-blot - Sustrato: ADN
Sonda: ADN o ARN
Northern-blot - Sustrato: ARN
Sonda: ADN o ARN
Western-blot - Sustrato: proteína
Detección mediante anticuerpos
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Hibridaciónin situ
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Hibridación in situ fluorescente (FISH)
Whole mount in situhybridization
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Hidromedusa Aequorea victoria
GFP (proteína fluorescente verde)
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Transgénesis
-Integración estable de ADN extraño dentro del genoma del huésped, confiriendo nuevas propiedades al mismo.
-Muy usada para estudiar la función de los genes en un organismo vivo.
Individuos transgénicos
Individuos que tienen secuencias insertadas en forma estable a través de ¨manos humanas¨.
Animales transgénicos pueden ser creados por microinyección o infección viral de embriones, o por la manipulación en cultivo de células madre embrionarias (“ES cells”) que son subsecuentemente incorporadas nuevamente al embrión.
Plantas transgénicas pueden ser creadas por inoculación de Agrobacterium (plásmido Ty) o por “particle bombardment”.
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Principales aplicaciones
- Biomedicina
-Producción animal y vegetal (resistencia a enfermedades, mejora en la calidad, etc.)
- Pharming - Producción de proteínas recombinantes de interés comercial en animales (cabras, vacas) y plantasEj.: antitrombina humana III, activador de plasminógeno, anticuerpos monoclonales, antígenos para malaria, tela de araña, factores de crecimiento
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Knock out
Modelos de Ratón Knock-out
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Comparación de ratones normales contra knock-out Spag6-/-