el diagnóstico de enfermedades en peces de...
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El Diagnóstico de Enfermedades en Peces de Producción
Luis Jorge García Márquez
1er Congreso Internacional de Ciencias Veterinarias Acuacultura
Etapas de Sistema
intensivo
HATCHERY PRE ENGORDA ENGORDA PLANTA DE PROCESO
Reproductores Incubadora Biofloc Crianza 2 Crianza 3
Etapas del Sistema intensivo HATCHERY
Reproductores Incubadora Biofloc Crianza 2 Crianza 3
ETAPA RELACIÓN PESO
REPRODUCTORES Hembra-Macho 3: 1 700-800 g
Reproductores Incubadora Biofloc Crianza 2 Crianza 3
ETAPA DÍAS
INCUBACIÓN 3-5
Reproductores Incubadora Biofloc Crianza 2 Crianza 3
Etapa Días cultivo
Peso
Número organismos
BIOFLOC 13 .01 gr .1 gr 250 000
Reproductores Incubadora Biofloc Crianza 2 Crianza 3
Etapa Días cultivo Peso Número organismos
CRIANZA 2 9 .1 gr a 1.2 gr 3 hapas con 60 000
Reproductores Incubadora Biofloc Crianza 2 Crianza 3
Etapa Días cultivo Peso Número organismos
CRIANZA 3 11 1.2-1.4 gr 3 hapas con 60 000
PRE ENGORDA
ETAPA Días Peso
PRE ENGORDA 35 1 g 12-15 g
ENGORDA
ETAPA DÍAS PESO DENSIDAD
MEDIANO 100-130 12g 500 g 100 000
ENTERO 130-180 500g 700 g 70 000
FILETE 180-200 700g 1100 g 50 000
PLANTA DE PROCESO
pH O2
O2
O2
O2
O2
O2
CO2
CO2 CO2
NH3
E Q U I L I B R I O
pH O2
CO2
NH3
CH4
H2 S
H2S
CH4
H2 S CH4
D E S E Q U I L I B R I O
De que se murieron ?
1. Anamnesis/Historia Clínica 2. Exámenes clínicos-físicos (signos-lesiones) 3. Patología clínica 4. Necropsia e Histopatología 5. Examen directo en fresco (parasitología) 6. Bacteriología/Micología 7. Serología (ELISA) 8. Métodos moleculares (PCR) 9. Microscopía electrónica/barrido 10. Bioensayos
Pasos para el diagnóstico de Enfermedades en peces
Anamnesis/Historia Clínica
Exámenes clínicos-físicos (signos-lesiones)
Patología Clínica: Biometría hemática: Eritrocitos Leucocitos Trombocitos Pruebas bioquímicas: Funcionamiento: Hepático Renal Pancreático
Histopatología Citología Parasitología Bacteriología Micología Virología Serología PCR ME Toxicología
Población
n
Prevalencia
2%
Prevalencia
10%
Prevalencia
20%
Prevalencia
40%
Prevalencia
50%
100 75 23 11 7 6
500 130 26 10 8 7
1 000 140 27 10 9 8
4 000 145 27 10 9 8
10 000 145 27 10 9 8
Necropsia e Histopatología
Técnica de Necropsia
Formol al 10% pH 7.2
*Imágenes tomadas de www.wesapiens.org
Técnica Histológica
Se colocó el tejido en un molde y se le agregó lentamente la parafina (para evitar la formación de burbujas) con ayuda de un
dispensador de parafina, dejándolo solidificar por un periodo de 24 horas.
Se rodea a los tejidos con una sustancia
firme, como la parafina
Aclaramiento
Infiltración en parafina
El agua removió al primero el fijador (Formol al 10%).
Fue utilizado el xileno para aclarar los tejidos (es un
elemento miscible tanto en alcohol como en parafina).
Se usaron alcoholes
graduados que iban de la concentración más baja hasta la más alta
Deshidratación
Infiltración
Inclusión
A partir de los bloques se
obtuvieron cortes de 5 μm de grosor con un microtomo, se colocaron en un baño de
flotación de tejidos, al que se le adicionó grenetina. Los
cortes que se seleccionaron durante esta operación se
recuperaron con portaobjetos, los cuales fueron colocados unos minutos en una platina
térmica, los cortes en los portaobjetos fueron
almacenados al menos durante 24 horas antes de su
coloración.
Corte
Se realizó en un histokinette; el cual fijo las muestras con
cuatro diferentes pasos:
Lavado
Examen directo en fresco (parasitología)(citologías)
TEJIDOS
SSF
Fijadores
Frotis
Raspados
Improntas
Punciones
Observación
directa
Citología
Biopsia
Cerebro
Ojos
Branquias
Músculo
Aletas
Hígado
Estómago
Intestino
Sangre
Microscopía Directa (análisis en fresco)
Bacteriología/Micología
– Peces vivos, agua, alimento, sedimento.
– Muestras lavadas con agua de mar, agua
estéril o SSF.
– Desinfectar el material y el área a
muestrear con yodo, formol o alcohol al
70%.
– Muestra de líquido: 100 µL.
Macerado de órganos: SSF estéril
Sangre: Corazón
TCBS (Tiosulfato citrato bilis sal sacarosa )
Agar Marino
TSA (agar Tripticasa soya)
Agar sangre, Agar Mc Conkey, verde brillante
Agar
Peces
Serología (ELISA)
Suero
• Líquido obtenido al dejar coagular la sangre.
• Se puede congelar por tiempo indefinido a -70ºC.
Métodos moleculares (PCR)
PCR Multiplex
20-35 ciclos
Electroforesis
Resultado Gel de agarosa
Termociclador (tiempo-temperatura) Fases Desnaturalización Hibridación Elongación
Se emplean los genes 16S y 23S ARNr para la identificación de microorganismos
Microscopía electrónica/barrido
Bioensayos
