QUiMICA CLiNICA 1993; 12 (6); 428-432

Efecto de los detergentes ionicos y no ionicos en los inmunoanalisisturbidimetricos y nefelometricos

L. Borque de Larreaa , A. Iglesias Garriz. A. Rus Martinez

Resumen

En el preseme trabajo SI! lIa eSl/lCliado el ejeclO de diver­sos detergellfes ion;cQS, an/alitos )' no ionicos ell das tljJOSde inmllllO(mdlisis homogeneos: (urbidimerricQ J' nejelome­trieo.

Los resultados obullidos indican que fa inclusion de de­tergentes especialmente de lipo no i6nico. en primer fllgarpueden eliminar las prec;pilaciones inespecificas produd.tlas por eJ polietilenglico/ en los mitodos de innulnopreci.pi/acio" ell fase liquida en mas de /In 7/%. a 'ilia propor·cioll final de detergeme tiel 0,1%. En segwu/o II/gar esposible optimizar 51/ proporcion eIflre 0,01 y 0,05% filial,para garum;1,/1r 10 estabilidad de los reac/il'os tIe latex sell­sibili:.odos COli ant/geno 0 antlcllerpo. sin a/eclar a la res­puesta obtenlda.

Introduccion

Existen nurnerosos inll1unoamiJisis basados en la capacidadpara dispersar la luz que presentan los inmunocomplejosformados mediante In reaccion antigeno-anticuerpo, y enlos que se utilizan metodos lurbidimetricos y nefelometri­cos de medida. La imroduccion de las micropaniculas delatex recubiertas de amigeno 0 amicuerpo ha potenciadola ulilizaci6n de este tipo de inmunoamilisis, debido a quese mejora la detectabilidad alcanzada (I). Este lipo detccnicas homogeneas estan limitadas por la lurbidez quepresentan los especirnenes y por las precipilaciones quepueden producirse de forma inespecifica durante la deter­minacion (2). En este scmido, el uso de polietilenglicol comopotenciador de la reaccion amigeno-amicuerpo puedeproducir una interfertncia al inducir 1a precipilacion de laslipoproleinas y de otros conslituyemes endogenos (3).Por otra parte, en los inmunoanalisis con reactivo de lalexpueden producirse agregaciones no especificas de las mi­cropanlculas, ya sea como consecucncia de una faha de es­labilidad de los reactivos de lalex en el medio de reacciono por la presencia de cienos constituyentes sericos, distin­lOS del que sc desea cuamificar, capaces de aglutinar ella­lex (4).

La adicion de delergemes (5) al medio de reaccion es unprocedimienlo ampliamente usado para reducir la lurbidezde los especimenes y c1iminar las reacciones inespecificas.Ademas, aunque muchas protcinas son solub1cs en la solu­ci6n acuosa ell la que se desarrolla la reacci6n antigcno­anticucrpo, sus propiedades funcionales 0 inmunologicas amenudo depcnden de la presencia en el medio de un deler-

'Hospiull .san Millin•. ubol'alorio Cmllal.".lb. Aulooomia de: La Rioja. n· 1. 2t1Cll:M.1.0&",,1'10. 1.4 Rioja.Recibido: 11-11·92AcrpladO: I)..PH

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Summary

III this work, we have stlldied differellt ionic, amphotericamll/ol/-ionic (Ietergents in two different types ofhomoge­nOllS latex Immlllloan'ays: tlIrbldimetric ami nephelometric.

Resllits obtained Indicated that the addition ofdetergents.mainl)' ofnon-ionic t)·pe, has two effects: detergents can eli­minate non-specific precipitations callsed by polyethylene­glieol in a liquid-phase InllllllllopreclpltQtion melhod in morethan 7/% of the cases IIsillg a detergent proportion of0.10/,.Ami In acldition they make possible the optimization oft/ieirproportion of between 0.01% and 0.05% to warrant the SUl­hility of latex reagelllS semitlz,ed ",ItII Qlltigen or Qlltibocl)~

with no effect 01/ further a/lfigell-Qlltibody response.

genic adecuado (6). Sin embargo, es conocido que algunosdetergelllcs puedcn afectar a fa reacci6n antigeno-anlicuerpodisminuycndo la delectabilidad y el inlervalo analitico dela medida (7).

En estc trabajo se ha esludiado el componamiento de ungrupo amplio de detergenles de diferenles lipos: ionicos, an­folitos y no ionicos, seleccionandose aqueUos que sin aCec­tar la reaccion 3ntigeno-anlicuerpo son capaces de eliminarlas precipitaciones inespedficas producidas por el polietil­englicol en metodos lurbidim~lricos y de evilar las agluli­naciones no especificas de un reactivo lalex en metodos ne­fclom~lricos.

Material )' metodos

EspecimenesPara el estudio de las precipilaciones no cspecificas se se­leccionaron 10 sueros que presentaban un cambio de ab­sorbancia en allsencia de anticuerpo superior al corrcspon­dienle al segundo punlO de la curva de calibraci6n delm~lodo turbidimetrico recientemente descrito para 1a albu­mina (8).

ReaClivQsThrbidimelria: se emple6 una solucion de anlicuerpos (de

cabral contra la albumina humana (fechnicon, Tournai, Bel­gica, ref TOI-3009-01) y una solucion amortiguadom de fos­fato 0,1 mol/L cOllleniendo: 0,05 molll de NnCI, 0,015mollL de NaN). 50 giL de polietilenglicol y un pH de 7.4.Como calibrador se us6 una mezcln de sueros valorado paraalbumina como se ha descrito prcviameme (8).

Nefelometria: se emple6 un reaClivo prtparado can mi­croparliculas de I:ito( recubiertas covalememente con anti­cuerpos contra la proteina C rcacliva, segun un procedirnien­to anteriormenle dcscrito (9). EI latex se diluy6 1:15 en

Tabla I, Detergenles analizados, caracterislicas generales

Tipo HD D M, CMC (mmoI/L)---o IONICO$Tween 2~ Polioxielileno Baja No 1242 0,059Tween 4O!I Polioxielileno Baja No 0,027Tween 80!l Polioxielileno Baja No 1324 0,012Triton X-lOO!l Polioxietileno Baja No 647 0,240Triton X-405~ Polioxietileno 0,810Brij.35~ Polioxietileno Baja No 1200 0,091ThesitO!l Polioxietileno Baja No 583 0,090

IONICOSDimclilbenceno acido sulfonieo AIquil-aril-sulfonalO 222Cloruro de benzelonio Amonio cualernario 466Cloruro de benzalconio Amonio cualernarioCloruro de cetilpiridinio Alquil piridinio JS8Bromuro celilmelilamonio Amonio cUalemario 365Acido desoxicolico Acido biliar Alta No 417 20SDS Alquil sulfato Alta 51 288 1,1

ANFOLITOSAnfolito 3-08 Sulfobetaina Aha No 279 140Anfolito 3-10 Sulfobelaina Alta No 307 14Anfolito 3-12 Sulfobetaina Alta No JJ5 1,4Anfolito 3-14 Sulfobctaina Alta No 363 0,14

HD: Habilidad para di~pena! al!'~ados prolriros. 0: Oc:snatUr.l!iQ p.otrirw. Mr: Masa molar. CMC: Corn:eolraci6n mKdar crili<::l (0.1-0.2 moI/L <k /'laO).

solucion amortiguadora de glicina 0,1 mol/L, aCI 0,17mol/l, pH de 8,2 conteniendo 3 gil de albumina serica bo­vina (Miles Martin-Bayer, ref 81003.4). Como soluci6n amor­liguadora de diluci6n y reaccion se uso el N diluent (lnsti­tuto Behring, Barcelona, Espana; ref. OUMT 50/5\). Lacalibraci6n se realiz6 con cI N CRP standard (InstitutoBehring, Espana: ref OUSS lOll\) con un valor asignadode 16 mg/L de proteina C react iva.

Se buscaron aquellas condiciones en las que el reactivoresultaba inestable durante la reaccion produciendose ade­mas una pobre rtSpuesta de sei\al en la curva de ealibraci6n.Para ello se seleccion6 en un estudio previo un nnticuerpocontra In proteina C reactiva (NIT-antiserum Human-CRP,OSCD 14/15, lote nr> 154525 D) que resultaba inestable so­bre el latex induciendo su autoagrcgacion. Ademas, en Indilucion de las particulas de latex recubiertas de anticuer­pos se emplc6 una soluci6n amortiguadora con una propor­cion de albumina (3 gil) 3 veces menor a la usada en el pro­cedimiento original (9).

DetergentesLa mayoria de los detergentes (tnbla I) fueron suminsilrn·dos por Senoa (Serva, Feinbiochemica, Heidelberg, Alema­nia) cxcepto los anfolitos, suministrados por Calbiochem(Calbiochent Corporation, la Jolla, EEUU) y el detergenteThesit«l suministrado por Boehringer Mannhcim (Boehrin­ger Mannhcim, Mannhcim, Alemania).

Instrumentaci6nTurbidimelria: las mcdidas se realizaron en un analiza­

dor centrifugo Cobas-Bio (Hoffman-La Roche. Basilea. Sui­za) equipado con la opti6n DE S (C\'3luaci6n de datos parafunciones de calibrnci6n no lineales).

Nefelometria: sc utiliw el analizador nefelOffietrico de Beh­ring BNA (lnstituto Behring, Espann). EI BNA es un siSle­rna para amilisis inmunoquimicos tOlalmente autom:itico yfacilmente programab1c. Las medidas se realizaron a 2 ticm­pos fijos: 10 scgundos y 6 minutos despues. Como fuenteluminosa sc utiliza un diodo que emite a 840 nm, estandocI detector colocado en un angulo entre 12 y 24r>.

ProcedimientoA) Condiciones de reaccion

Turbidimetria. En el procedimiemo IUrbidimetrico elCobas-Bio mezda 15 III del especimen y 200 J.(l de solu­cion amorliguadora de fosfato conteniendo 50 giL de po­lietilenglicol. Tras un periodo de incubaci6n de 20 segun­dos y una lcetum inicial (blanco de especimen), anade 7J.(lde soluci6n de amicuerpos contra la albumina humana. EIinstrumemo realiza una medida a los 0.5 segundos. acontinuaci6n realiza 10 lceturas mas con un intervalo de30 segundos entre cada una de elias. La temperatura delanalisis es 25r>C y la longitud de onda de medida de340 nm.

Nefelometria. En el procedimicnto ncfelomctrico eI ana·lizador BNA mezda 40 J.(L de especimen 0 calibrador pre­diluido en N diluent con 20 J.(L de dislimas soluciones delos detergentes en solucion salina, 40 p.L de reactivo 1:'ite.1(de proteina C reactiva y 120 J.(L de solud6n amortiguadornde reacci6n (N reaclion Buffer). La mezela se incuba a tem­peratura ambieme 6 minutos. La cur,'3 de calibration cons­ta de 7 puntOS obtenidos por diludones seriadas y autom3­ticas del calibrador, progrnmadas en el analizador desde 1:40(v:v) en N diluem.8) EJeclo de los detergemes sabre /u rellct.:i6" owlgello­ul1licuerpo.

Para cstudiar el cfecto de los detergenles sabre la reacci6nantigeno·anticuerpo se adicionaron ell distintas proporcio­nes que fueron de 0,05 a 0,2a/o en la soluci6n amortiguado­ra de reaccion usada en el metodo turbidimetrico, procedien­dose a continuaci6n a la calibracion del metodo. Se calcul6en tanto por ciemo las desviaciones de las absorbnncias decada pumo de eslas cunoas respttto a los ,oalortS medios co­rrespondiemes a 10 curvas de calibraci6n oblenidas en ausen­cia de delergeme.C) EJeclo de los detergemes sabre Ius precipilUciofles ines­pecificus en rurbidimelda.

Para cstudiar cl efecto de los detergcntcs sobre las prcci­pilaciones illcspecificas en lurbidimetria que se presentancon algunos sueros, se midi6 el incremenlo de absorbanciaproducido en presencia de diferentes proporciones de

Quimka Clillka 1993: 12 (6) ·U9

SDS550

500

4500 40000

x 350

"" 300'ut:: 250"".D;:; 200'".0 150~

100

50

00 0,02 0,04 0.06 0,0 0.10 0,12 0,14 0.16

bumina. L

Thesit

0,06 0,08 0,10 0.12 0,14 0,16

Ibumina. giL

0,02 O.

550

500

4500 4000;::

350x'" 300"u<::

250'".0...2000

'".0 150~

100

50

00

Fi Ur:l I . Ermo dcl lklcrseme Thesil' bre I CUf'\'3 dc calibration CDlurbidimcuilJ. Thesil 0.5 • cn wludon amoniguadorn lkrosralo; x 2s dc 10 CUI'\ lk caJibr.ldon sin delcrg DIe.

Iguna Ib Ermo dd dnCfiC:Jlu: 0 rc la 011'\'" de caJibrnci6n enIUrbudimenia. 0 0.5". en tucion aIDOIuguadota de~ falO;~ xi.l.S d I cun d cali rncion sin det"'!lente.

detergeme en la 0luci6n amoniguadora de reacdon y enau enda de anti uero.

EI tanto por ciemo de inhibici6n producida por cada de­tergeme se e tablecio efectuando la media de 10 incremen­£0 de ab orbancia en 10 10 uero analizados y calculandosu valor en tanto por demo respecto a Ia misma media ob~

tenida en au encia de delergeme.D) EJecto de los detergenles en 10 eliminocion de los oglu­

tinaciones no espedjicas del MIa en nejelometr{aLa influencia de 10 derergenre sobre la estabilidad del

reactivo de lale a i como obre la reaccion antigeno­anticuerpo, se estudi6 di poniendo 10 detergeme como se­gundo reactivo en el procedimienlo nefelometrico. Median­te la programacion de di ferenres vohimene de egundo reac­tivo (de 5 a 40 ~.L) e obtuvieron diferentes proporcionesfinale de detergente en el medio de reacci6n. Obteniendoselas curvas de calibraci6n en las di timas condiciones esta­blecidas. La proporcione utilizadas de detergente fueroninferiore ala. empleada en turbidimetria en funcion dela mayor diluci6n del esptkimen empleada en el procedimien­to nefelometrico.

Resultados

Ejecta de {as detergenles sabre la reaccion anligeno­onlicuerpo en (urbidimetria.

En la figura Ja se pre entan las cur as de calibracion ob­renida para distima proporcione de The it ,asi como lax±2 s de la 10 curva de ealibracion obtenida con el me­tOdo original. Re uhado imilare e obtuvieron con el re ­to de 10 detergente no ionico, iendo, 10 porcentajes dedesviacion de 10 alore de ab orbancia corre pondiemesa 10 distimo pUnlO de la curva de calibraei6n respeclO almetodo original ~ I 070 n todo 10 caso . En la figura Ibe expre an 10 r uhado obtenido para el delergeme DS.

Efeeto de inhibi ion imiJare 0 uperiore obre la curvade calibra ion fueron ob ervado on el re to de 10 derer­geme i6ni o. I omportamielllo d 10 detergent de tipoanfolilo fu imilar a la ob ervada con 10 detergemes noioni 0 on de ia ione < 22 0 en lodo 10 ca 0 .Eliminacion de las precipitaciones inespedjicas en turbidi­metria.

En la figura 2 e repre ema el tanto por ciemo de inhibi­ci6n de la pr ipitacion ine pecilicas con r peelO a la

proporoon en tantO por demo en peso) de detergenre en laoludon amoniguadora de reaccion para Thesi y Tween

20 . Resultado semejames e ob ervaron con el resta de 10detergeme no ionjco con inhibiciones mayores del 10:0 auna proporcion final de delergeme de 0 2 0 aumentando di­cha inhibicion al ir aumemando la proporci6n de de(ergeme.

La detergente ianico a excep ion del bromuro de cetil­metilamonio a las proporcione analizadas no on solubleso como en el ca 0 del dimetilbenceno acido sulf6n.ico tie­nen poco efeclO sobre la precipitaciones inespecifiea . Lodetergeme anfolilico produjeron un incremento en las pre­cipitacione inespecifica que aumentaba con la proporcionde detergeme utilizada (dalo no mostrados).

E te incremento no e ob er 0 en ausencia de espe­cimen y cuando la condi ione de medida se reprodujeronen un espectr6metro con encional a temperatura ambieme.Un efecto amilogo e pre ento con eJ acido desoxicoljco.Ejecta de los deter>elltes en el flu!todo lIejelomeTrico canreactivo Idtex

La resultados obtenido con 10 detergente para estabili­zar el reactivo de J::\tex durante la reaccion asi como para me­jorar la respue ra en la calibraci6n e exponen en la labia 11.

La diferencia en 10 incremento de luz dispersada entreeJ ealibrador de alIa y baja proporcion aumema can la adj·cion de detergente al medio de reaccion. Sin embargo, enel intervalo de proporcione utilizada , eSte incremento traalcanzar un maximo, di minuye al aumentar la proporcionde deterg nre.

Por otra parte, el incremento de eoal correspondiente alPUntO ma bajo de la cur a de calibracion, di minuye al adi­cionar el detergeme al aumemar u propor ion 10 que in­dica un aumento en la e labilidad del reacti o. En el inter·valo de propor ione e IUdiado con todo los detergemeno ionico ceptO el Triton -40 a i omo en el bromu­ro de cetiJmetilamonio y con 10 anfolito 3-12. 3-14 fuepo ible alcanzar un ompromi 0 entre e labilidad e inhibi­cion que permite la obten ion de una curva de calibracionoptima.

n la figura 3 pre man algun de e 1a urvas de ca­libra ion oplimizada. n la curva 1 que repr ema la dife­ren ia entre do puntO de medida (10 egundo y 6 minu­to de pu' ) en ausen ia de proteina C rea (iv3. se ob ervala autoagrega ion dcllcit. decir. eJ latex e inc table enlas condicion de reaccion. ya que en au encia de antigenoproduce un aum mo de la eoal de 1000 bit en estas on-

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120

100

Los detergentes anfolitos 3-08, 3-10, asi como los ionicosacido desoxicolico, SOS y el cloruro de benzalconio pare­cen producir una agregacion inespecifica durame la reacciOn.

Discusion

Los delergentes se han utilizado habitualmeme en procedi­mientos de aislamiento y separacion de proteinas, asi comoen todas aquellas situaciones en las que es necesario estabi­lizar las soluciones de las mismas (JO).

La estabilidad de algunas proteinas sericas y de los real'­tivos de lalex, especialmeme en presencia de polietilengli­col, SOD un requisito basico para el desarrollo de inmunoa­nalisis sin imerferencias debidas a reacciones inespecificasde precipitacion 0 agregacion de las paniculas de latex. Ellose consigue medianle la utilizacion de diversos adith'os, en­Ire los euales deslacan los detergemes. Sin embargo las con­diciones cstablecidas en estOS procedimiemos no deben afec­tar a la reaccion anligeno-anticuerpo.

Los resultados del presente trabajo indican que cuando seutilizan soludones amortiguadoras de reaceion con elevadasproporciones de polietilenglicol (superiores a 50 giL), los de­tergentes que mejor eliminan las precipilaciones no especifi­cas, con minima afmacion de Ia reaccion 3nligeno-amicuerpo(desviaciones < 18~,), son los de lipo no ionico en proper­ciones finales enlre 0,2 y 0.5':•. En estas condiciones los deter­gentes i6nicos producen mayores desviaciones. disminu~n la

20,5 1,0 1,5Concentracion detergerlle ('J.)

o+---~--~-~--~o

~ 40

2J)

diciones no se puede medir. Sin embargo. al observar las cur­vas 2 y 3 se puede ver como el empleo de pequeilas propor­ciones de dislimos detergemes en el medio de reaction re­duce la autoagregati6n del latex y ademas se obtienen cuevasde calibracion adecuadas para In medida nefelometrica.

.1_.fI 2. Eliminadon de la~ prttipiladona ;ne5peeifieas en rundon de unmngtfl lI.mpl;o de rol\Cl:mracion para dos dele'lemes no i6nico~: • __ •The,il. :tl~ T"'~ll 20".

Tabla II. Inrlucncia del detergente sobre la eslabilidad del hilex en el melodo nefelometrico

DETERGENTE Conccntrad6n en volumen final (010)

0.00 0.011 0,023 0,045 0.068 0.090

NO IONICOSThesit· 69' 1]68- 1241- 11]4 104' 911

1158 903-- 434 69 58 47Brij-3S· 69' 1168 660 459 189 36

1150 46 20 13Twecn-8~ 69' 1023 955 707 634 498

1150 87 '6 25Twcen-4~ 69' 1309 1328 1258 1115 980

1150 3'6 150 58 36 37Twcen-2~ 69' 1197 980 687 478 245

1150 180 120 42 38Triton X~I~ 69' 1078 918 768 659 367

1150 62 " 47 30 13Triton X-405 69' 1189 1303 128] 1276 1225

1150 698 550 488 .., 343IONICOS

SDS 69' 19191150 1953

Addo desoxic6lico 69' 1754 1698 12381150 1282 1087 789

Cloruro de benzalconio 69' 1955 653 1871150 1354 86' 302

Dimctilbc::nccno acido sulf6nico 69' 882 453 1971150 1301 734 J25

Bromuro cetilmetilamonio 69' 1254 1220 1070 867 3671150 345 153 18

ANFOllTOSAnfolilo ]..Q8 69' 1754 1527

1150 787 678AnfolilO ]·10 69' 1805 1834 1731

1150 637 '87 632Anfolilo ]-12 69' 1198 661 322 156 78

1150 J8 18 15Anfolito 3-14 69' 1450 1387 1338 983 9'0

1150 489 398 270 154 40

'Pif(fenda del ir>crenlCmo de I.. dispcnion tic.' luz en unid:&del: nddomo!1ric:as arbllrlr;ai emre los pumo' de Ihl ). baja ro"""mraciOn o:k l:l an":1 o:k calibraci6n."lnc:rememo tic: la di~lXniOn de lll.luz en unidadc5 ndelornt1ricas ~..,rr0:5pondio:nle al punlo o:k ron~lrll.ci6n m!5lQja de 1.1 t\lr'o'a tic.' calibrarian.

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Bibliogrnfia

cion antigeno-anticuerpo 0 para eliminar la reaccione noespecificas ha sido menos estudiada.

En este uabajo no se ha encontrado ninguna relaci6n sin­gificativa entre la proporcion micelar critica de los deter­gentes y su capacidad para elimjnar las precipitaciones noespeciJicas en turbidimetria 0 para eSlabilizar las particuJasde latex durante la inmunorreaccion en nefelometria, en lascondiciones utilizadas. Hay que tener en cuenta que se di­suelven en una soluci6n que contiene ele adas proporcio­nes de polietilenglicol.

Los detergentes anfolitos, debido a sus ele ada concen­traciones micelares criticas, han sido citados como buenoscandidatos para mantener proreinas en solucion y no afec­tar a su union a un sopone plastico de poliestireno (15).

Sin embargo, excepto el anfoUto 3-14 y el anfoLito 3-12,que tienen un aceptable comportamiemo en nefelometria,los detergentes anfolitOs producen una precipitacion ines­pecifica dependiente de la concentraci6n de proteinas pre­sente y de las condiciones de reaccion y 00 son utile en es­tas tecnicas.

En conclusion, e puede afirmar que la inclusion de de­tergentes en los inmunoanalisis homogeneos basados en lacapacidad para dispersar la luz por los inmunoagregados,especialmente de tipo no ionico, puede en primer lugar eLi­minar las precipitaciones inespecificas atribuibles al empleode las elevadas concentraciones de poLietiJenglicol habitua­les en los metodos de inmunoprecipitacion en fase liquiday, en segundo lugar, es posible optimizar su proporcion paragarantizar la eSlabilidad de los reacrivos de laleX sensibili­zados con antigeno 0 anticuerpo sin afectar su tanciaLmentea la respuesta obtenida.

° ,o 0,020 0,0400,0600,0800,1000,1200,1400,160

Proleina C reacliva, giL

'" 500'"-0os

:'S!c~

'"os'Cosb:e 1500os

2000

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respuesta producida por la reacci6n amigeno-anticuerpo 0

algunos no son solubles.Por otra parte, es conocido que los reactivos de micro­

particulas de latex sensibilizados con antigeno 0 con anti­cuerpo poseen una tendencia a la autoagregaci6n cuandolas condicione no son las adecuadas para garantizar su es­labilidad en soluci6n acuosa (11). En nuestro caso, el reacti­vo uliLizado presentaba una pobre respuesta en la curva decaJibracion junto a una imponante tendencia a la autOagre­gaci6n en ausencia de antigeno.

La adkion de detergente en el medio de reaccion provocoun aumento inmediato de la reactividad y un aumenro gra­dual en la estabilidad del reactivo. Sin embargo, el aumentoen la proporcion de detergente determino, en todos los ca­sos, un descenso posterior de reactividad incluso con losdetergentes que tenlan poco efecto sobre la reaccionantigeno-anticuerpo en el estudio realizado en turbidimetria.

La raz6n de esta discrepancia, tal vez se encuentre rela­cionada con la di ferente forma de presentacion del anticuer­po sobre una superficie s61ida 0 en soluci6n acuosa y conel probable aumento en la repulsion entre las microparticu­las sensibilizadas de latex al aumentar la proporcion de de­tergente. En todo caso, la importancia cuantitativa de esteefecLO va a depender de la afinidad/avidez del anticuerpomilizado, de las condicione de reacci6n y de la naturalezay propiedade de la micropaniculas de laleX empleadas (12).

Una primera cooelu i6n que se puede oblener de los re­sultados obtenidos es que los detergentes no ionico en ge­neral, el brol11uro de cetill11etilal11onio y 10 anfoliro 3-12y 3-14, permitirian la facil optimizacion de su proporci6npara obtener la maxima estabilidad del reactivo de latex conla minima afectacion en la reacci6n antigeno-amicuerpo.

A menudo, la propiedades de los detergentes estan engran parte determinada por do parametros caracteri ticocomo son la concentracion micelar critica y el lamano me­dio de la micela en 0luci6n (13). Detergente de elevada con­centracion micelar critica son adecuados cuando e deseasu facil eliminacion po terior con procedimientos como ladialisis y similares (14). Dtras caracteristicas, como son lacapacidad para inhibir la union de la proteinas a un soporteplastico, parecen aumentar al disminuir la concentraci6n l11i­celar critica del detergente (15). La relacion de e to para­metros con la capacidad del detergente para inhibir la reac-

Figu ..... 3. Unidadcs ncfclometrica; arbitrarias en funci6n de la conccmraci6nde proteina C react iva. La Curva I reprc cOla la diferencia entre dos pumosde medida (10 segundos y 6 minutos despues) en ,llIscncia dc dctcrgcme. Enlas curvas 2 y 3 se rcprcscnta cI creelO de la adiei6n de detergeme: 2.Thesit al 0,5 "10; 3. AnfolilO 3·12 al 0,5 oro.

432 Quimica Iinica 1993; 12 (6)