efecto de los aminoácidos sobre la expresión de genes
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Efecto de los aminoácidos sobre la expresión de genes relacionados con la traducción de proteínas y síntesis
de grasa en la leche bovina
Mónica Duque Q, Zoot, Esp, MSc, Dr. Sci. Anim.
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Transcriptoma
Componentes de alimentos Componentes genéticos
SNPs
Nutrigenética
Nutrigenómica
Regulación Dieta –Gen
Adaptada desde Lau et al., 2008
Regulación Gen - Dieta
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PROTEÍNAS
Los nutrientes afectan la expresión de genes
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INTRODUCCIÓN
Diferenciación
Proliferación
Apoptosis
Ruta de síntesis de grasa
Ruta de síntesis de proteína
Los estudios in-vitro ayudan a entender las rutas de diferentes genes que pueden ser afectados por las relaciones en la suplementación con aminoácidos como Metionina (Met) y Arginina (Arg).
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OBJETIVO
• Evaluar el efecto de la suplementación de Arg y la relación de Lys:Met en la expresión de genes relacionados con proliferación celular, traducción de proteínas y síntesis de grasa.
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MATERIALES Y MÉTODOS
Descongelar las células desde el N líquido al
baño María
Poner medio de crecimiento
Cel. en medio de crecimiento durante 24 h (cambiar c/24 h) a 37 °C y 5% CO2
Cel. en 80-90% de confluencia
Splitting
Colocar en 2 frascos
Evaluar cuantas cél/ml
Cel sembradas 20000 cel/cm2 190000 cel totales
PARA LOS TRATAMIENTOS
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Células MAC-T fueron usadas
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Análisis de qRT-PCR por triplicado
Medio de crecimiento (80 -90% confluencia
Toda la noche
6 horas
Medio lactogénico (-AAE)
AAE suplementados
Adicionado trizol (c/pozo)
Medio almacenado a -80°C
HG-DMEM (medio lactogénico)
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• Extracción de RNA
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Genes target incluídos: mTOR, RPS6KB1, AKT2, EIF4EBP1, SLC1A5, SLC7A1, PPARG, FASN, BCL2L1, AKT1, MKI67, JAK2,
MAPK1, SCREBF1, IRS1, STAT5B, ACACA
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RESULTADOS • Genes afectados con la suplementación de Met
Figura 1 (A y B). A: Genes que incrementaron con la suplementación de Met B: Gen que disminuyó con la suplementación de Met
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RESULTADOS
Figure 2: Genes que incrementaron con la suplementación de Arg
• Genes afectados por la suplementación con Arg
b
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• Genes afectados por la suplementación de Met y Arg
RESULTADOS
Figure 3: Genes que incrementaron con la suplementación de Met y Arg
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RESULTADOS • Genes que no fueron afectados por la suplementación de Met y Arg
Figure 4: Genes que no fueron afectados con la suplementación de Met y Arg
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Duque et al., 2018
Caroli et al., 2009
Bionaz and Loor, 2011
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CONCLUSIONES • La suplementación con Met incrementó la expresión de los genes mTOR,
RPS6KB1, AKT2 y disminuyó la de EIF4EBP1.
• La Arg incrementó el EIF4EBP1 y los genes involucrados en el transporte de AA (SLC1A5, SLC7A1).
• La expresión de PPARG (regulador de la transcripción de la grasa láctea), FASN (síntesis de novo de ácidos grasos), BCL2L1 (anti-apoptótico), AKT1 (sobrevivencia celular), MKI67 (proliferación celular), JAK2 (proliferación celular), MAPK1 y SCREBF1 (genes relacionados con la transcripción y traducción) incrementaron con la adición de ambos AA (Met y Arg).
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• Genes como IRS1 (señalización de la insulina), STAT5B, ACACA no cambiaron con los tratamientos
• Los resultados sugieren que la suplementación con Met y Arg puede afectar la regulación de genes importantes, que están involucrados en la síntesis de proteínas y grasa en la leche en la glándula mamaria.
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Gracias!