dx tecnicas en la acuicultura puno 2015
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Diagnóstico, prevención y control deEnfermedades en Acuicultura, la experiencia deChile una situación a considerar.
Relator invitado: Dr. Juan Battaglia Aljaro DMVUnidad de Microbiología de pecesVeterquimica S.A. [email protected]
Puno, Marzo del 2015.
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Enfrentando las patologías en acuicultura.
1 • Diagnóstico
2 • Muestreo
3 • Veterinario
4 • Laboratorio
5 • Autoridad
6 • Historial
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Mortalidad.
Indicadores de crecimiento:
Factor de condición
FCR
SGR
GF3
¿Qué ve el productor?
Deterioro Sostenido
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La observación del comportamiento de los peces y la aparición deanomalías externamente son las primeras señales que el productordebe pesquisar para tomar las medidas necesarias.
Observación de sintomatología.
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Necropsia.
Actividad que se realiza para analizar la sintomatología de los peces, queconsta de un análisis anatomopatológico externo e interno.
Aquí además se toman las muestras necesarias para los análisis posterioresque pueden incluir:
Siembra en medios.
Sistema miniaturizados Api®.
Frotis para tinción.
Frotis para IFAT.
Muestras para PCR.
Muestras para CC.
Muestras para ELISA.
Muestra para histología.
Antibiograma y MICs.
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Necropsia.
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Existen diversas metodologías de tinción de frotis, las más utilizadas son:
Tinción de Gram.
Tinción de AOS.
Tinción de Giemsa.
Frotis para tinción.
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Existe una gran variedad de pruebas bioquímicas que se realizan a lasbacterias pero existen algunas que son sumamente importantes, entrelas que se pueden destacar:
Forma celular
Motilidad
Gram
Oxidasa
Catalasa
Crecimiento a diferentes Tº y Salinidades.
Crecimiento en diferentes medios
Métodos convencionales en tubo y placa
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Comercialmente existen una serie de medios de cultivos que pueden ser divididos en tres categorías:
Generales
Selectivos o específicos
Metabólicos
Cultivos bacterianos.
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Estos medios se caracterizan por presentar los nutrientes necesarios para eldesarrollo de una gran variedad de bacterias, sin embargo, no todas las bacteriascrecen en este tipo de medio.
Medios generales.
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Entre los más utilizados en el diagnóstico en acuicultura están:
TSA con y sin suplemente de NaCl. En este medio se puede crecer bacterias como Vibrio anguillarum, V. ordalii, Aeromonas salmonicida y Yersinia ruckeri.
Agar Nutritivo: de amplio espectro.
Agar Chocolate: es un medio sumamente rico en nutrientes y se ocupa ampliamente en la microbiología. En la acuicultura se utiliza para el crecimiento de P. salmonis.
Agar Marino (2216 de Zobbels): Agar para el aislamiento de bacterias marinas.
Medios generales
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Estos medios se utilizan para aislar los patógenos de otras bacteriasambientales.
También don usados para aislar bacterias de fastidioso crecimiento,como Flavobacterium psychrophilum ,Tenacibaculum maritimum oRenibacterium salmoninarum.
Medios Selectivos o específicos
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Entre los más utilizados en el diagnóstico en acuicultura están:
TCBS: Selectivo para Vibrios.
MacConkey: Selectivo para Enterobacterias (Yersinia ruckeri y Aeromonas salmonicida).
Columbia Blood Agar: Bacterias β Hemoliticas (Streptococcus spp).
TYES / AOA: selectivo para bacterias de la familia Flavobacteriacea de FW.
FMM: Selectivo para bacterias de la familia Flavobacteriacea de SW.
KDMC / KDM2: Selectivo para el patógeno de peces Renibacterium salmoninarum.
Medios Selectivos o específicos
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Medios Selectivos o específicos
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Estos medios sirven para determinar actividades enzimáticas, degradación deazucares y aminoácidos principalmente.
Entre los más utilizados para la caracterización de patógenos bacterianospodemos encontrar:
Medio Descarboxilasa de Moller (Aminoácidos).
OF (Azucares).
Citrato de Simmons.
Medios metabólicos
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Medios metabólicos
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Immuno Florescent Antibody Technique.
Está técnica sirve para detectar al patógeno directamente en frotis deórganos y lesiones mediante el uso de anticuerpos específicos que estánmarcados con fluoróforos.
Existen una gran variedad de Kits comerciales para la realización de estaherramienta diagnóstica.
IFAT.
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La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una herramienta altamente utilizada para ladetección de patógenos bacterianos y virales principalmente.
Existen 2 tipos de PCR
PCR Convencional.
PCR en Tiempo Real.
PCR.
PCR convencional encontramos 3 tipos de protocolos:
PCR de Detección
PCR de Tipificación
RT–PCR.
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En la literatura existe una gran cantidad de protocolos de PCR para ladetección de patógenos bacterianos de peces, entre los que podemosencontrar:
Aeromonas salmonicida.
Yersinia ruckeri.
Flavobacterium psychrophilum.
Flavobacterium columnare.
Tenacibaculum maritimum.
Piscirickettsia salmonis.
Vibrio anguillarum.
Streptococcus phocae
Streptococcus iniae.
PCR convencional (Detección)
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PCR en tiempo real.
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PCR de tipificación.
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Cultivo Celular
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Enzyme Linked Immuno Sorbet Assay.
Ensayo Inmuno–Enzimatico.
Existen dos tipos:
Detección de antígenos.
Detección de anticuerpos.
ELISA
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Histología
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Antibiograma y MICs
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Antibiograma y MICs
20 µL de Inoculo bacteriano
80 µL de medio cultivo
100 µL de medio de cultivo con Ab
8 C+164210,50,250,1250,063C- 0,031
X XXXXXXXXX32 X
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Antibiograma y MICs.
16% 4%4%
4%
8%
8%
36%
20%
CMI FLU Flavobacterium
psychrophilum
0,031 ppm
0,063 ppm
0,125 ppm
1 ppm
4 ppm
8%
32%
16%
32%
8% 4%
CMI FFC Flavobacterium
psychrophilum
0,125 ppm
0,25 ppm
0,5 ppm
1 ppm
4 ppm
16% 4%4%
12%
24%
32%
4% 4%
CMI OT Flavobacterium
psychrophilum
0,031 ppm
0,063 ppm
0,25 ppm
0,5 ppm
2 ppm
4 ppm
8%8%
4%
8%
4%
68%
CMI AO Flavobacterium
psychrophilum
0,063 ppm
0,125 ppm
2 ppm
8 ppm
16 ppm
32 ppm
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Sistemas minuaturizados Api®.
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Aglutinación en porta objetos y Dot–Blot.
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Western–Blot.
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Secuenciación de genes.
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Muchas gracias por la atención….