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Ultraestructura a la Vista:
Indicaciones de la Microscopía
Electrónica
Josep Lloreta Trull
Hospital del Mar
Universidad Pompeu Fabra
Curso de Primavera, Mayo 2010
S.E.A.P.
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Microscopía Electrónica:
¿Cómo, Cuándo y Porqué?
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Max Knoll Ernst Ruska
![Page 4: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/4.jpg)
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MICROSCOPIO
ELECTRONICO
• Electrones
• Campos magnéticos
• Sistema de vacío
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M. ELECTRONICO
TRANSMISION
M. ELECTRONICO
SCANNINGM. OPTICO
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PODER DE RESOLUCIÓN
• Capacidad de discriminar dos
puntos muy próximos como
puntos diferentes
• Se expresa como la distancia
entre estos dos puntos
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PODER DE RESOLUCIÓN
![Page 10: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/10.jpg)
PODER DE RESOLUCIÓN
M. OPTICO = 0,2 m M. ELECTRONICO = 0,2 nm
M. ELECTRONICO = M. OPTICO x 1.000
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MICROSCOPIA ELECTRONICA
• Identificar fenotipos celulares
• Identificar elementos extracelulares
• Relacionar la morfología y la función
• Entender procesos biológicos
normales y patológicos
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La microscopía electrónica es
la continuación morfológica natural
de la microscopía óptica
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Microscopía Electrónica:
¿Cómo?
![Page 15: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/15.jpg)
M. OPTICA vs. ELECTRONICA
Fijación importante
Formaldehido
Parafina
Cuchilla de metal
Cortes de 3 m
Portaobjetos
Colorantes
Fijación crítica
Glutaraldehido - Osmio
Resinas (polímeros)
Cuchilla de diamante
Cortes de 80 nm
Rejillas de 3 mm
Metales pesados
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OBTENCIÓN DE MUESTRAS
PARA M. ELECTRONICA (I)
• Tejido fresco: Fijación INMEDIATA en glutaraldehido
• Tejido en formol: Inmersión en tampón cacodilato
• Bloque de parafina: Obtención en el laboratorio de M.E. (Marcar zona de interés en preparación histológica)
• Muestras congeladas: No sirven para M.E.
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OBTENCIÓN DE MUESTRAS
EN FRESCO PARA M. E. (II)
• Antes de hacer nada más, tomar una lámina fina (1mm de grosor máximo) y sumergirla en glutaraldehido fresco– Utilizar hoja de bisturí nueva
– Tomar la muestra de • Zona recientemente cortada, no desecada, no
pintada ni lavada con agua u otros líquidos
• Si hace falta, “refrescar” la superficie
• Evitar áreas de necrosis, hemorragia o fibrosis
• Tomar muestras separadas de áreas macroscópicas diferentes
• Evitar desecación y compresión del tejido
![Page 18: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/18.jpg)
![Page 19: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/19.jpg)
OBTENCIÓN DE MUESTRAS
EN FRESCO PARA M. E.(III)
• Al acabar el procesado macroscópico de la pieza, cortar la lámina de tejido en cubos de <1mm
• Usar hoja de bisturí nueva
• No comprimir ni desecar la muestra (mantenerla sumergida en glutaraldehido durante el tallado)
• Poner fragmentos en recipiente con glutaraldehido fresco y guardar en nevera
![Page 20: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/20.jpg)
![Page 21: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/21.jpg)
FIJACIÓN EN
GLUTARALDEHIDO
• Proteínas
–Filamentosas
–Globulares
–Cristalinas
• Hidratos de carbono
• Acidos nucleicos
• Casi no fija los lípidos
![Page 22: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/22.jpg)
FIJACION (Y TINCION) EN
TETROXIDO DE OSMIO
• Lípidos insaturados
–Polares
• Membrana plasmática
• Membranas mitocondriales
• Vesículas y gránulos
• RER i REL
• Mielina y cuerpos mielínicos
–Vacuolas lipídicas
![Page 23: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/23.jpg)
TINCIÓN PARA M.E.
Medios de Contraste
• Citrato de Plomo
y
• Acetato de Uranilo
![Page 24: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/24.jpg)
Microscopía Electrónica:
¿Cuándo?
![Page 25: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/25.jpg)
EL TRIANGULO
ULTRAESTRUCTURAL
Formación
InvestigaciónDiagnóstico
![Page 26: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/26.jpg)
Time
Expectations
![Page 27: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/27.jpg)
Time
Expectations
1960-80 1980-2000 2001-10
![Page 28: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/28.jpg)
M.E. en la Sala de Tallado
Muestras Dirigidas a M.E.
• Enfermedades ciliares
• Biopsia de piel
• Enfermedades de depósito
• Hematología
![Page 29: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/29.jpg)
M.E. en la Sala de Tallado
¿Cuándo tomar muestras?
• Biopsias de músculo y nervio
• Biopsia renal y nefrectomía (tumoral y no tumoral)
• Tumores pleurales y mediastínicos
• T. cerebrales
• T. endocrinos-neuroendocrinos
• T. de partes blandas
• T. pediátricos y/o de cél. pequeñas
• Metástasis
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MICROSCOPIA ELECTRONICA
COSTOS
• Muestra en stock 6€
• Estudio completo 120€
![Page 31: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/31.jpg)
Microscopía Electrónica:
¿Porqué?
¿Para qué?
![Page 32: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/32.jpg)
INDICACIONES GENERALES
• Complemento con la MO, la IHQ y otras
técnicas
• Interés pronóstico, terapéutico o
científico
• Control de calidad (estudio de casos
aparentmente resueltos sin dudas)
![Page 33: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/33.jpg)
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• Enfermedades ciliares
• Biopsia renal
• Músculo y nervio
• Bacterias, virus, protozoos
• Biopsia de piel
• Enfermedades de depósito
• Hematología
![Page 34: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/34.jpg)
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• Discinesia ciliar
–Síndrome de Kartagener (“cilio inmóvil”,
esterilidad, dextrocardia)
–Alteraciones primarias de la motilidad
ciliar
![Page 35: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/35.jpg)
![Page 36: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/36.jpg)
![Page 37: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/37.jpg)
![Page 38: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/38.jpg)
DEFECTO PARCIAL BRAZOS DE DINEINA
![Page 39: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/39.jpg)
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• Biopsia renal: M.E. Imprescindible
–Nefropatía de cambios mínimos
–Enfermedades de la membrana basal
–Glomerulopatía del trasplante
–GMN con depósitos densos (MC tipo II)
–Acúmulos incipientes
(amiloide, fibrilar, IgA, cadenas ligeras)
![Page 40: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/40.jpg)
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• Biopsia renal: M.E. Aconsejable
–Casos sin glomérulos en IF
–Confirmación glomerulonefritis
–Estadificación nefropatía lúpica
–Patología del trasplante
![Page 41: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/41.jpg)
![Page 42: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/42.jpg)
NEFROPATIA DE CAMBIOS MÍNIMOS
![Page 43: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/43.jpg)
ALPORT HEMATURIA FAMILIAR
![Page 44: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/44.jpg)
GLOMERULOPATIA DEL TRASPLANTE
![Page 45: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/45.jpg)
GLOMERULONEFRITIS CON DEPÓSITOS DENSOS
![Page 46: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/46.jpg)
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• Biopsia de piel
–Enfermedades ampollosas
–Enfermedades de la colágena
– Ictiosis
–CADASIL
![Page 47: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/47.jpg)
![Page 48: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/48.jpg)
EPIDERMOLISIS BULLOSA SIMPLEX
![Page 49: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/49.jpg)
EPIDERMOLISIS BULLOSA ATRÓFICA
![Page 50: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/50.jpg)
EPIDERMOLISIS BULLOSA DISTRÓFICA
![Page 51: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/51.jpg)
EPIDERMOLISIS BULLOSA DISTRÓFICA
![Page 52: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/52.jpg)
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• Enfermedades de depósito:
alteraciones lisosomales
–Lipoidosis y lipoproteinosis
–Mucopolisacaridosis
–Glucogenosis
![Page 53: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/53.jpg)
ENFERMEDAD DE FABRY
![Page 54: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/54.jpg)
Biopsia Muscular
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
![Page 55: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/55.jpg)
![Page 56: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/56.jpg)
DISTROFIA MUSCULAR OCULOFARINGEA
![Page 57: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/57.jpg)
DISTROFIA MUSCULAR OCULOFARINGEA
![Page 58: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/58.jpg)
MIOSITIS CON CUERPOS DE INCLUSION
![Page 59: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/59.jpg)
MIOPATIA MITOCONDRIAL
![Page 60: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/60.jpg)
MIOPATIA MITOCONDRIAL
![Page 61: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/61.jpg)
MIOPATIA MITOCONDRIAL
0º 40º
![Page 62: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/62.jpg)
INDICACIONES M.E.
Patología no tumoral
• INFECCIONES
–Protozoos: Toxoplasma
Criptosporidio
Leishmania
–Bacterias: Angiomatosis bacilar
Enf. de Whipple
Espiroquetosis intestinal
–Virus: CMV, Herpes, HIV, LMP, PES
![Page 63: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/63.jpg)
ABSCESO CEREBRAL
![Page 64: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/64.jpg)
![Page 65: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/65.jpg)
TOXOPLASMA GONDII
![Page 66: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/66.jpg)
![Page 67: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/67.jpg)
CRIPTOSPORIDIO
![Page 68: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/68.jpg)
![Page 69: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/69.jpg)
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ANGIOMATOSIS BACILAR
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![Page 72: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/72.jpg)
VIRUS HERPES
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INCLUSION TUBULAR: CA. BRONQUIOLOALVEOLAR
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INDICACIONES M.E.
Patología tumoral I
• Carcinoma/ melanoma/ sarcoma
• Adenocarcinoma/ mesotelioma
• Tumores de células pequeñas
• Tumores de tejidos blandos
• Tumores de mediastino anterior
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INDICACIONES M.E.
Patología tumoral II
• Sistema nervioso y meninges
• Tumores endocrinos
• Tumores renales
• Metástasis de origen desconocido
• Lesiones raras
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LIMITACIONES DE LA M.E.
• No reconoce tumor
• No distingue benigno de maligno
• Puede identificar rasgos muy
escasos dispersos en el tumor
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![Page 78: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/78.jpg)
ADENOCARCINOMA
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MESOTELIOMA
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CA. LOBULILLAR DE MAMA
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![Page 82: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/82.jpg)
DIFERENCIACION ENDOTELIAL
![Page 83: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/83.jpg)
DESMOSOMAS
![Page 84: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/84.jpg)
![Page 85: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/85.jpg)
CARCINOMA RENAL CROMÓFOBO
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ZIMÓGENO
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NORADRENALINA
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Melan A
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MELANOSOMA
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MELANOSOMA
![Page 91: Ultraestructura a la Vista: Indicaciones de la Microscopía](https://reader036.vdocuments.co/reader036/viewer/2022071620/62d21c0f6c5b4a621751c72c/html5/thumbnails/91.jpg)
T. CÉLULAS PEQUEÑAS
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T. CÉL. PEQUEÑAS: NEUROBLASTOMA
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T. CÉL. PEQUEÑAS: RABDOMIOSARCOMA
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Muchas gracias
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