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Transferencia de material genético II
Transformación
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Código génetico
Es el conjunto de normas por las que la información codificada en el material genético (secuencias de ADN o ARN) se traduce en proteínas.
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Está organizado en tripletes o codonesEs degenerado: un mismo aminoácido puede estar determinado por más de un triplete o codónEl triplete de inicio es AUG.Existen tres tripletes sin sentido o de terminación que no codifican para ningún aminoácido: UAA (ocre), UAG (ambar) y UGA.
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Plásmido o vector de clonación
Son cadenas dobles de DNA circular de 1 kb a 200 kb que se pueden encontrar en las bacterias.
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Características
1. ORIGEN DE REPLICACIÓNCapaz de hacer copias exactas de si mismo independiente del cromosoma del hospedero
2. MARCADORES DE SELECCIÓN
Permite aislar a las células que poseen el gen deseado, generalmente resistencia a un antibiótico
3. SITIO DE CLONACIÓN MULTIPLE (SCM) Sitios de enzimas de restricción en regiones no esenciales. Permite abrir al plásmido e insertar DNA.
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Enzimas de restricción
Permiten cortar DNA de hebra doble en enlaces fosfodiester donde reconocen secuencias palindrómicas.
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Nomenclatura Ejemplo Corresponde a:E Escherichia Género de la bacteriaco coli Especie de la bacteriaR RY13 Cepa de la bacteriaI La primera enzima identificada Orden de identificación de la enzima
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TRANSFORMACIÓN
Es la introducción y expresión de material genético externo (DNA)
En bacterias, generalmente se introduce mediante un choque térmico o por electroporación.
CHOQUE TÉRMICO
Las bacterias (hospederas) son pretratadas con agentes como como CaCl2 (células competentes) y sometidas a un choque de temperatura que ocasiona un incremento en la permeabilidad membranal y facilita la entrada del plásmido.
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ELECTROPORACIÓN Aumento de la conductividad electrica y la permeabilidad de la membrana causado por un campo eléctrico aplicado externamente, formando poros.
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Proceso de transformación bacteriana
Células competentesHielo
45 s
1-5 uL plásmido
Resistencia a antibiótico
PlásmidoBacteria30 min hielo Selección
Sin Antibiotico
Con Antibiotico
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Microinyección permite introducir DNA en el núcleo celular (Ej. microinyección de DNA en óvulos fecundados para obtención de animales transgénicos)
En Eucariontes…..
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ORGANISMO TRANSGÉNICO
Cualquier planta, animal o bacteria que tiene información genética de otra especie introducida mediante ingenieria genética.
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ORGANISMO TRANSGÉNICO
Producción de Proteínas Recombinantes de uso médico• Insulina: para diabéticos • Factor VIII: para pacientes con hemofilia A • Factor IX: para hemofilia B • Hormona del crecimiento humana: enanismo • Eritropoyetina: para el tratamiento de anemias • Interferón: defensa contra infecciones • Antígeno de superficie de hepatitis B: vacunas • Activador del plasminógeno tisular: disolución de coágulos