5/13/2018 Reconocimiento de Los Microorganismos Del Reino Protista - slidepdf.com
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1 MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
RECONOCIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS DEL REINO
PROTISTA
1. OBJETIVOS:
Demostrar la presencia de diversos tipos de microorganismos en la
naturaleza.
R econocer la coloración simple y compuesta.
Buscar algas, bacterias, protozoarios.
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2 MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
2. MARCO TEOR ICO
El R eino Protista está conformado por un grupo de organismos que presentaban unconjunto de características que impedían colocarlos en los reinos ya existentes de una
manera plenamente definida. Esto se debe a que algunos protistas pueden parecerse yactuar como individuos del reino plantas, otros protistas pueden parecerse y actuar
como organismos del reino animal, pero los organismos del reino protista no son ni
animales ni plantas.
Los individuos del reino de los protistas son los que presentan las estructuras biológicasmás sencillas entre los eucariotas (ya que su ADN está incluido en el núcleo de la
célula), y pueden presentar una estructura unicelular (siendo esta la más común),multicelular o colonial (pero sin llegar a formar tejidos). Los protistas son autótrofos (en
su mayoría) y producen un alto porcentaje del oxígeno de la tierra. Sin embargo, es
complicado establecer un cuadro de características generales para los organismos del
reino protista. Con todo, procuraremos presentar las características más comunes en la
mayoría (No están presentes en todos los protistas) de estos organismos a continuación:
El microscopio de campo claro es más útil para la observación de especímenes teñidos. Los colorantes son compuestos químicos utilizados para aumentar el contraste. Existenalgunos, llamados colorantes vitales, que pueden añadirse directamente a una
preparación en fresco; por tanto, colorean células vivas. No obstante, la mayoría de loscolorantes son solamente efectivos después de que los microorganismos hayan sido
fijados, es decir, se encuentren muertos y adheridos al portaobjetos.
TIPOS DE COLORANTES.- Casi todos los colorantes son sales, compuestos
formados por iones cargados. Los colorantes básicos son aquellos en los cuales elagente que tiñe es el ion cargado positivamente, mientras que en los ácidos, el colorante
es el ion cargado negativamente. Los colorantes más utilizados son los de tipo básico,va que la mayor parte de las células microbianas Poseen cargas débilmente negativas en
su superficie, lo cual facilita su unión. Entre los colorantes básicos más comunes seencuentran la safranina, la fucsina básica, el cristal violeta y el azul de metileno. Los
colorantes ácidos se unen a las partes de las células cargadas positivamente. Se utilizan
para teñir tejidos animales infectados con microorganismos. Entre los más frecuentes
están la eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo.
La forma más simple de preparar un espécimen para su examen microscópico es hacer
una preparación en fresco. Existen dos técnicas, una preparación en fresco simple
("entre porta y cubre")
Las preparaciones en fresco se utilizan para observar microorganismos vivos. Por
ejemplo, para la búsqueda de Trichomonas vaginalis en secreciones vaginales. Este
protozoo de gran movilidad causa inflamación de la vagina y la uretra. Si en la
preparación se observan células en forma de huso que se mueven mediantecontracciones o sacudidas cruzando el campo, probablemente se tratará de T. vaginalis,
pudiéndose efectuar el diagnóstico.
Sin embargo, el inconveniente de la observación en fresco es que no permite aumentar
el contraste de la preparación. Por tanto, su uso, con un microscopio óptico de campo
claro, está bastante limitado. Normalmente, para observar microorganismos vivos se
utiliza alguno de los otros microscopios ópticos que hemos mencionado anteriormente.
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3 MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
COLORACIÓ N SIMPLE.- Un colorante; proporciona contraste para observar mejor un
organismo completo.
COLORACIO N COMPUESTA (GRAM).- Dos o más colorantes; distingue entre
bacterias Gram positivas y Gram negativas
3. PR OCEDIMIE NTO EXPER IME NTAL:
- MATERI AL ES:
Microscopio
Cubre objeto
Porta objeto
Agua estancada
Azul de metileno
Cristal violeta
Lugol
Alcohol
Safranina
Aceite de inmersión
mechero
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4 MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
OBSERV AC IÓN AL AGUA EST A N CADA:
Tomamos pequeñas muestras del agua estancada y colocamos algunas gotas en
el porta objeto para luego ser cubierto con el cubre objeto.
A continuación se deberá colocar en el microscopio para poder observar los
microorganismos existentes en la muestra tomada la medida que utilizamos fue
10x 40x Pudimos distinguir los siguientes microorganismos:
- S e pudo observar protozooarios y bacterias(chica)
OBSERV AC IÓN A LA N U ESTR A D E S AL IV A:
Tomamos pequeñas muestras de la saliva y colocamos al porta objeto para luego
llevarlo al mechero para que la llama pueda fijar la muestra, teniendo en cuenta
que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por la llama), puesto que el calor
excesivo puede cambiar la morfología celular de las bacterias a observar . El
calor deseable es aquél en el que el portaobjetos sea apenas demasiado caliente
para ser colocado sobre el dorso de la mano.
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5 MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
C O LO R AC IÓN SI MPL E:
Con azul de metileno se utiliza una cantidad
suficiente sobre la muestra, luego se debe
enjuagar la lámina conteniendo la muestra
con agua destilada. Para realizar el lavado, se
debe tener en cuenta que el chorro de agua
NO debe caer directamente sobre la muestra,ésta debe caer sobre la parte superior de lalámina que no contiene muestra. El chorro
debe ser un chorro delgado,aproximadamente de medio a un milímetro
de espesor . También el enjuague se deberealizar poniendo la lámina portaobjetos en
posición inclinada hacia abajo.
Pudimos distinguir los siguientes microorganismos:
-Estafilococos, estreptococos.
C O LO R AC IÒN C O MPU EST A:
Se utiliza cristal violeta como para lograr cubrirla por completo; se deja actuar el
colorante por 1 minuto. Esta tinción de 1 minuto está dada para trabajar a una
temperatura ambiente de 25 °C. Luego se enjuaga con agua destilada
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6 MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como mordiente yodo o lugol
durante 3 minuto más. El mordiente es cualquier sustancia que forme
compuestos insolubles con colorantes y determine su fijación a las bacterias.
Pasado el minuto de haber actuado el mordiente, el frotis se decolora con
alcohol-acetona, hasta que ya no escurra más líquido azul. Para esto se utiliza elgotero del frasco del decolorante. Se van añadiendo cantidades suficientes del
decolorante, hasta lograr que éste salga totalmente transparente, es decir, hastaque ya no escurra más líquido azul.
Una vez que la lámina ya secó, procedemos a teñir nuevamente, pero esta vez se
va a utilizar un colorante de contraste como por ejemplo la safranina, dejar
actuar durante 1 minuto.
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7 MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de
inmersión.
Pudimos distinguir los siguientes microorganismos:
- Staphylococcus aureus (Coco Gram positivo) y Escherichia coli (bacilo Gram negative)
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4. CO NCLUSIÓ N
Los protozooarios se trasladan más rápido que las bacterias.
Los virus no pueden ser observados por microscopios normales.
El aceite de inmersión tiene los siguientes usos:
a) Los objetivos de mayor aumento, tienen una distancia focal muy pequeña y además la
primera lente del objetivo es de pequeño diámetro.
b) Los rayos que desde la muestra se dirigen al objetivo atraviesan el vidrio del
cubreobjetos y al pasar al aire se separan de la normal . Algunos rayos incluso sufren
reflexión total en la interface vidrio-aire
c) Solo llega al microscopio una pequeña parte de la luz que parte de la muestra, con el
problema que conlleva para la visión.
d) Al intercalar, entre el objetivo y el cubreobjetos una gota de aceite de cedro o aceite
de inmersión, al índice de refracción casi igual al vidrio, los rayos emergentes ya no se
apartan de la normal, sino que continúan su camino sin desviación, consiguiendo así que
una mayor cantidad de luz llegue al objetivo, mejorando notablemente la visión.
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5. BIBLIOGRAFÍA
http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni
_ 02/56/cap304.htm
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n__Gram
http://www.slideshare.net/andresricote/tincin-simple- presentation
http://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20080212164301AAO7moG
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