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Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva
Dr. Hector Godoy MoralesProfesor TitularDr. Alfredo Ulloa AguirreProfesor AdjuntoPresenta:Dr. Horacio Alvarado Delgado R1BR
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Principios de Evaluación Hormonal
• Métodos Inmunológicos
– Anticuerpos• Medición de cantidades muy pequeñas de
hormonas
– Reacción antígeno – anticuerpo
• INMUNOENSAYOS• ENSAYOS INMUNOMETRICOS
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INMUNOENSAYOS
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Ensayos Inmunometricos
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Ensayos inmunometricos
Inmunolite
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Evaluación Hormonal• Sensibilidad
– Capacidad de medir exactamente el valor menor posible
• Especificidad– Capacidad de medir exactamente
unicamente la hormona en cuestión sin reacción con otras hormonas o substancias
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Evaluación Hormonal• Problemas con especificidad
– Hormonas proteicas• Isoformas
– Hormonas esteroides• Moléculas de tamaños muy pequeños
– Cantidades de hormona pequeña• Mujeres = testosterona
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Validación y control de calidad de Inmunoensayos• Validación del ensayo
– Antes de usar debe ser validado
• Exactitud• Precisión• Sensibilidad• Especificidad
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Exactitud del ensayo
• Métodos para establecer la exactitud
– Encontrar el paralelismo entre la curva estándar del ensayo y sus diluciones seriadas de muchas muestras que contienen altas concentraciones de lo que se va a analizar.
– La recuperación de patrón añadido, en los diferentes niveles, a partir de muestras de pacientes
Define el grado en que una medición dada está deacuerdo con el valor real
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Precisión
• Se determina
– Coeficiente de variación• Precision intraensayo• Precisión interensayo
Es la variabilidad que existe cuando múltiples mediciones de un compuesto son realizadas en la misma muestra.
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Precisión• Coeficiente de variación (%)
• Precisión Intraensayo– Se evalúa midiendo el análisis en muestras
repetidas del mismo ensayo.
• Precisión Interensayo– Análisis en muestras repetidas, cada una
incluida en diferentes ensayos
CV =SD
media de determinaciones repetidas de una prueba
X 100
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Especificidad
• Medición– Reacción cruzada del anticuerpo se
compara con la curva de dosis respuesta estándar obtenida de los compuestos que están presentes en la misma muestra de la substancia analizada y que pueda unirse a los anticuerpos
Grado de interferencia de una reacción cruzada que se encuentra a partir de
otras substancias del análisis
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Especificidad
• Medición– Comparar los valores analizados de un
grupo de muestras medidas por un método especifico de inmunoensayo, el cual es obtenido por un método clásico.
Grado de interferencia de una reacción cruzada que se encuentra a partir de
otras substancias del análisis
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Sensibilidad
• Depende de la precisión de la curva estándar, la cual se mide analizando 10 replicas de cada concentración estándar y de la estándar “zero”. Esto permite el cálculo de la cantidad media de marcador de anticuerpo límite, lo que corresponde a cada concentración estándar
Se define como la cantidad mas pequeña de substancia que se
requiere para ser distinguida de cero
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Control de calidad de un ensayo• Parámetros de control de confiabilidad de un
inmunoensayo
– Control de calidad externo
– Control de calidad interno• Curva estándar
– Cuenta total– Fijación no específica– Fijación cero estándar– Pendiente– Intecepción de “y”– the doses of the standard at which the percentage of label-
bound substance is equal to 20, 50 y 80%
• Lo que se mide en las muestras
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Sistemas de enzayos comerciales• Inmunoensayo de fluoresencia de
disosciación mayor de lanátidos
• Sistema inmunolite
• Sistema IMx
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Inmunoensayo de fluorecencia de disociación mayor de lanátidos• Fluorocromos
– Emiten luz visible durante la exitación con radiación• Isotiocinato
• Europium
– Elemento de la serie de lanátidos, que es quelado a un compuesto substituible.
– Para mejorar la florescencia, el europium quelado se disocia a un complejo que baja de pH y forma un nuevo quelato, que se fija a la solución para prevenir el enfriamiento
![Page 18: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/18.jpg)
Inmunoensayo de fluorecencia de disociación mayor de lanátidos• Fase solida
– Dos ensayos fluoroinmunométricos– Técnica de sandwich– Usa dos anticuerpos monoclonales
![Page 19: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/19.jpg)
Inmunoensayo de fluorescencia de disociación mayor de lanátidos• Flurecsencia depende de la
cantidad de concentración en una muestra
![Page 20: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/20.jpg)
Sistema Inmunolite• Usa tecnología
quimiolumiscente amplificada por enzimas.
• Hidrólisis de un substrato quimiolumiscente estable– Fosfato adamantil
dioxetano• Enzima
– Alcalin fosfato
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Sistema Inmunolite
Fosfato de Adamantil dioxetano
Anión adamantil dióxetano
Alcalin fosfato
Emisión de luz
![Page 22: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/22.jpg)
Sistema IMx• Analizador de inmunoensayo
automatizado, que incorpora
– Inmunoensayo de micropartículas (MEIA)• Para moléculas de gran peso • Hormonas proteicas• Fluorometría
– Inmunoensayo de polarización fluorescente (FPIA)• Para moléculas de bajo peso• Para hormonas esteroideas• Polarización óptica fluorescente
![Page 23: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/23.jpg)
Sistema IMx
![Page 24: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/24.jpg)
RIA combinado con bioensayos• El primer RIA – bioensayo
– Dafu et.al.• Midieron concentración de testosterona
en células de Leyding dispersas bajo la influencia de LH o hCG.
– Ventajas• Actividad biológica de las hormonas
cambia.
– Método de elección• Ausencia de hormona por actividad
biológica
![Page 25: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/25.jpg)
Médición de gonadotropinas• FSH Y LH = IU
• Preparaciones– LER 907– 2nd IRPHMG
• RIA– Baja sensibilidad y especificidad
• PULSATIBILIDAD
![Page 26: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/26.jpg)
Medición de gonadotropinas• Si se esperan bajos niveles
– IRMA– IFMA– ICMA
• LH – reacción cruzada con hCG– Pulsatibilidad (60 – 90 minutos)– Presición: toma muestra cada 15 – 20
minutos
![Page 27: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/27.jpg)
Medición de gonadotropinas
FSH Incrementad
aLevodopa
KetoconazolDisminuida Estrogenos Fenotiazidas
LH Incrementad
a KetoconazolDisminuida Esteroides FenotiazinasDigoxinaPropanolol
β-hCG 5 – 20ug Embarazo Tumor
productor de bhcg
Secreción hipofisiaria normal
Interferencia
![Page 28: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/28.jpg)
Niveles Sanguíneos de FSH y LH en la mujer• LH – FSH fase folicular
– RIA 4 – 15 mIU/ml
– ICMA:• NO: falla hipotalámica o hipofisiaria o
pubertad• Se usan ensayos de tercera generación.
Variaciones en laboratoriosLH: 8.2 ± 2.1 mIU/ml (4 – 12.4 mIU/mL)
FSH: 8 ± 1.8 mIU/ml (4.4 – 11.6 mIU/mL)
Razón FSH/LH: 1:1
![Page 29: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/29.jpg)
Niveles sanguíneos de LH y FSH en la mujer• Medio ciclo
– LH: incrementa cuatro a seis veces– FSH: dos a tres veces
• Fase lútea– LH y FSH: mismo valor que fase
folicular
![Page 30: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/30.jpg)
• Pacientes pediátricos
– Niveles menores– Tasa LH:FSH <1 (mas secreción FSH)– Uso de IRMA o ICMA de 3era generación
• Pediátricos• Pubertad precoz (LH: > 0.6 mUI/ml)• Hipogonadismo Hipogonadotripico
Niveles sanguíneos de LH y FSH en la mujer
![Page 31: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/31.jpg)
• Perimenopausia– FSH LH
• Postmenopausia– FSH y LH
• Senectud– LH
Niveles sanguíneos de LH y FSH en la mujer
=
![Page 32: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/32.jpg)
Niveles sanguineos de LH y FSH en la mujer• LH y relación FSH:LH
• LH y FSH
SOP
Falla ovárica prematura
![Page 33: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/33.jpg)
Pruebas dinámicas para la evaluación de gonadotropinas• Prueba de hormona estimulante de
gonadotropinas
– GnRH sintética para estimular FSH y LH Diferenciar entre causas
hipotalámicas o hipofisiarias de deficiencia de gonadotropinas
![Page 34: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/34.jpg)
Prueba de GnRH100 ug IM diario de
GnRH por una semana
2 muestras basales separadas por 15 minutos
25 o 100 ug IV GnRH
Muestras 20,30, 60, 90 y 120 min
Baja respuesta = Problema Hipotalámico
Usada para probar la
maduración del eje H-H-O
![Page 35: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/35.jpg)
Prueba de GnRH
100 ug GnRH, pico de LH- Niñas: > 15 mIU/ml- Niños: > 25 mIU/ml
100 ug GnRH, pico de LH
> 8 mIU/ml
100 ug GnRH, pico de LH- Niñas: > 6.9 mIU/ml- Niños: > 9.6 mIU/ml
RIA
ICMA
IFMA
GD
PP
![Page 36: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/36.jpg)
Prueba de GnRH• Único método valido
• Pulsatibilidad espontanea de GnRH
– Fines de investigación|
![Page 37: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/37.jpg)
Prueba con citrato de clomifeno
100 mg clomifeno días 5 - 9
FSH día 10
FSH y estradiol día 3
+ = cualquier valor arriba del umbral que marque el laboratorio
como positiva(10 – 12 mIU/ml)
Para medir reserva ovárica
![Page 38: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/38.jpg)
Medición de Prolactina• Medida por RIA o IRMA
– Hombre: 15 – 20 ng/mL– Mujer: 20 – 25 ng/mL
– Influenciada por • Estrógenos• Medicamentos
– Fenotiazinas– Metoclopramida
• Estrés• Comida• Estimulación mamaria• Punción de vena
![Page 39: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/39.jpg)
Medición de Prolactina• Cambios diurnos• Incremento después de las
comidas– Muestra: al media mañana
• Hiperprolactinemia– 10% sin diagnóstico– Enfermedades autoinmunes– Precipitación con polietilen-glicol
• (elevación por PRL monomérica + PRL autoanticuerpo)
![Page 40: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/40.jpg)
Medición de Prolactina
Situación Clinica Valor ProlactinaEmbarazo 6 semanas Inicia IncrementoA termino 200 ng/mLMenopausia DisminuyeAdenoma Hipofisiario > 200 ng/mL
Adenomas no secretores de PRL 50 – 200 ng/mLHipotiroidismo 50 – 200 ng/mL
![Page 41: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/41.jpg)
Pruebas dinámicas de evaluación de PRL• Usadas antes de TAC o RM
• TRH– Estimula la secreción de TSH– Usada para medir secreción
hipofisiaria de PRL
Pacientes con prolactinoma, no presentan incremento en PRL después
de la estimulación con TRH
![Page 42: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/42.jpg)
Pruebas dinámicas de elevación de PRL• Prueba con TSH: para definir entre
– Formas funcionales de hiperprolactinemia– Adenoma Hiofisiario secretor de PRL
• TSH 200ug IV– Muestras: 30, 60 y 90 minutos– PRL = incremento 100%
• Metoclopramida 10 mg IV– Muestras: 30, 60, 90 y 120 minutos– PRL = 100 ng/mL, 60 y 120
![Page 43: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/43.jpg)
Medición de estradiol y otros estrógenos• RIA
• Bajos Niveles– Se extraen con solventes orgánicos y
se separan por cromatografía.
• Estriol– RIA en suero– Métodos espectofotometricos– RIA en orina
![Page 44: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/44.jpg)
Medición de estradiol y otros estrógenos
Situación Clínica ValorFase mediafolicular 20 – 80 pg/mLPico Ovulatorio 200 – 500 pg/mLFase lútea 60 – 200 pg/mLAntes de pubertad < 20 pg/mL
Después menopausia 10 - 20 pg/mL
Oferectomía < 10 pg/mL
Hombres < 40 pg/mL
Hombres estrona < 60 pg/mL
En hombres:Evaluación estradiol: Hipogonadismo y
ginecomastiaObesidad: Aumento de estrógenos
![Page 45: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/45.jpg)
Medición de Progesterona• Progesterona medida por una
variedad de inmunoensayos
• Especificidad alta y depende de la reacción cruzada con la 17 α OHP
![Page 46: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/46.jpg)
Niveles sanguíneos de progesterona y evaluación de la ovulación• Fase folicular: < 1.5 ng/mL• Incremento posterior a pico LH y tiene pico maximo 6 – 8 días
después de ovulación.• Postmenopausia: < 0.5 ng/mL
• Para evaluación ovulación– Fase media – lutea (21 – 22 ciclo)– > 7 ng/mL.
• En embarazo: 40 ng/mL• A término: 150 ng/mL• 6 – 8 semanas: < 10 ng/mL = Ectópico
![Page 47: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/47.jpg)
Medición de andrógenos• Andrógenos en la mujer
– Ovarios– Glandula suprarrenal– Compartimiento periferico
– Se miden varios andrógenos• Testosterona sérica
– Ovario ,2/3 de conversión periférica androstenediona
• Sulfato de DHEA– Suprarrenal
![Page 48: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/48.jpg)
Medición de Andrógenos• Testosterona sérica
– RIA o ICMA– Costoso– Baja especificiad– Sobreestimación de los valores
• Testosterona no fija = testosterona libre– Se calcula el pocentaje libre de SHBG
• 75% testosterona fiaja a SHBG– Fija a albúmina– LIbre
![Page 49: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/49.jpg)
Medición de Andrógenos• Testosterona libre
– Se mide relación entre testosterona y SHBG
(T (ng/ml) x 3.467)
SHBG X 100TL =
![Page 50: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/50.jpg)
Medición de andrógenos• Otros andrógenos útiles
– 11 b- hidroxyandrostenediona• Porducción suprarrenal de
androstenediona
– Productos de 5 a-reductasa– 3 a- glucoronil - androstenediol
• Refleja el metabolismo periferico de T en hirsurtismo
![Page 51: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/51.jpg)
Niveles sanguíneos de androgenos
Situación clinica Valor de TestosteronaMujer edad reproductiva
20 – 50 ng/mL
Neoplasia ovarica > 200 ng/mL
SOP < 100 ng/mL
Situación clínica Valor de DHEASMujer edad reproductiva 0.8 – 2.8 ug/mLNeoplasia suprarrenal > 8 ug/mL
N suprarrenal productora de T
3 – 4 ug/ml
![Page 52: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/52.jpg)
Niveles sanguíneos de andrógenos• Androstenediona sérica
– 1 – 2.5 ng/mL
• Testosterona libre– 1 – 8.5 pg/mL
• SHBG– 30 – 90 nmol/L
![Page 53: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/53.jpg)
Medición de percursores de andrógenos circulantes en la mujer
• Medición de intermediarios del metablismo de los esteroides es útil para el diganóstico de deficiencias suprarrenales enzimáticas.
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Medición de percursores de andrógenos circulantes en la mujer• 17 a-OHP
– Deficiencia de 21 hidroxilasa forma neonatal: 50 – 200 ng/mL.
– No clasica: 10 – 20 ng/mL.– Mujer Sana: < 1ng/mL– Hiperandrogenismo: Niveles elevados
![Page 55: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/55.jpg)
Medición de percusores de andrógenos circulantes en la mujer• Deficiencia de 11 b-Hidroxilasa
– 11 deoxycortisol
• Deficiencia de 3 b – Hydroxyesteroide– Razón 17 OHP y 17 a-
hydroxipregnenolona
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Pruebas para establecer el tipo de androgenismo• Evaluan secreción suprarrenal de
andrógenos– Prueba con supresión con
dexamentasona– Prueba con estmulación con ACTH
• Evalúan secreción ovárica de andrógenos– Prueba con agonista de la GnRH
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Prueba de supresión con dexametasona• Dexametasona 0.5 mg VO cada 6
hrs
– Evaluación de T y T libre• 3 días
– Evaluación de DHEAS• 7 días• Solo en tumor suprarrenal o DHEAS >
8ug/mLDisminución en 60% de los valores basales de T y T libre
HIPERANDROGENISMO SUPRARRENAL
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Prueba de estimulación con ACTH• Deficiencia de cortisol• Deficiencias enzimaticas
suprarrenales• Distinguir entre
hiperandrogenismo ovarico y suprarrenal– Baja especificidad
![Page 59: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/59.jpg)
Prueba con agonistas de GnRH• Causa regulación a la baja de la
secreción de gonadotropinas hipofisiarias e inhiben la secreción de esterodies ováricos
• Uso para SOPMejor Clínica y resultado de laboratorio
basales.
![Page 60: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/60.jpg)
Prueba con agonista de GnRH• Nafarelin, Buserelin y leuprolide• Leuprolide 500 o 1000 ug SC eb
mañana 5 – 8 ciclo.• Muestras 0, 8 y 24 hrs.
• 17 a- hidroxyprogesterona mayor de 2.6 ng/mL PCOS
![Page 61: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/61.jpg)
Evaluación Hormonal del Hirsurtismo• Exceso de crecimiento de cabello
en la mujer, con distribución central– T, DHEAS y SHBG
![Page 62: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/62.jpg)
Niveles de andrógenos en el varón• Solo se miden testosterona total y testosterona
libre
• Testosterona– 300 – 1000 ng/dL– Biodisponible: 66 – 417 ng/dL
• Testosterona libre– 50 – 210 pg/mL
• DHT– 30 – 85 ng/dL– Útil para evaluar deficiencia de 5 a-reductasa
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Medición de Inhibinas• Inhibina A y B
– RIA, ELISA– Secreción de varias poblaciones de
células de la granulosa.
– Valores sericos varian en el ciclo mesntrual
– Inhibina A: baja en fase folicular y tiene pico en fase mediolutea
– Inhibina B: contrario
![Page 64: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/64.jpg)
Medición de Inhibinas• En el embarazo
– Inhibina A disminuye en segundo trimestre
– Inhibina B pico en tercer trimestre.
• Menopausia– Ambas disminuyen marcadamente
![Page 65: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/65.jpg)
Medición de Inhibinas• Utilidades
– Tumores de células de la granulosa
– Monitoreo postoperatorio de tumores de células de la granulosa
– Complicaciones del embarazo
– Evaluación de folículos presentes en el ovario en fase folicular temprana.
– Envejecimiento reproductivo
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Medición de Inhibinas• En hombres
– Producida por células de Sertoli– Marcador de espermatogenesis– Diagnostico diferencial
• Criptorquídea
• Anorquía
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Medición de AMH y valoración de la reserva ovárica • Valoración de reserva ovárica
– Envejecimiento ovárico• Acelerado después de 35 años• Mujeres jóvenes
– Tratamiento de cáncer
– Metodos de evaluación• FSH y E2 día 3• Prueba citrato de clomifeno• AFC• Inhibina B• AMH
![Page 68: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/68.jpg)
Medición de AMH y valoración de la reserva ovárica• AMH es dependiente del ciclo y no
fluctua como FSH
• Valor debajo de 0.35 ng/ml pobre pronostico
![Page 69: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/69.jpg)
Medición de b hCG• Placenta en grandes cantidades• Hipófisis
![Page 70: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/70.jpg)
Medición de b hCG• Util
– Confirmar embarazo– Monitor de función trofoblástica– Complicaciones del embarazo
• Embarazo ectópico• Aborto espontáneo
– Screening de trisomias– Enfermedad trofoblástica– Monitorización de recurrencia de
tumoración
![Page 71: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/71.jpg)
Medición de resistencia a la Insulina• Resistencia a la insulina
– Probema importancia en salúd publica– Fisioptatología de SOP
• Métodos de medición– Glycemic clamps = Investigación– Modelo de Bergman FSIGT (tolerancia a
la glucosa intravenosa son muestras frecuentes) es el test gold estándar
– Prueba de tolerancia a la insulina– Tolerancia oral a la glucosa
![Page 72: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/72.jpg)
Prueba de glucosa IV con muestras frecuentes• Se colocan dos cateteres en vena
antecubital– Glucosa e Insulina
• Glucosa 0.3 g/kg por un minuto IV• 20 minutos despues Insulina 0.03 U/Kg)
– Muestra de sangre• 5, 10 y 15 minutos• 1 minuto después de la toma de glucosa y
después cada minuto por 10 minutos y después 12, 14, 16, 20, 22, 23, 24, 25, 27, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120 y 180 (33)
![Page 73: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/73.jpg)
Prueba de glucosa IV con muestras frecuentes• Se modifico a solo 12 muestras
– 5 minutos antes de la toma de glucosa– Y luego 2,4,8,20,22,30, 40,50, 70, 100 y
180 minutos.
– Insulina– Glucosa – Sesibilidad a la insulina
• Inversamente proporcional a resistencia a la insulina
• Se calcula usando el metodo modelo mínimo usando un algoritmo computarizado
![Page 74: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/74.jpg)
Prueba de tolerancia a la Insulina• Se usa para tener acceso a la
resistencia a la insulina y tiene buena correlación con la FSIGT y clamp studies.
– Noche anterior infusión IV de insulina regular (0.1 U/kg) por un minuto• Glucosa 0,2,5,8,10 y 15 minutos después
de infusión de insulina,
![Page 75: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/75.jpg)
Prueba de tolerancia a la insulina• Noche anterior infusión IV de
insulina regular (0.1 U/kg) por un minuto– Glucosa 0,2,5,8,10 y 15 minutos
después de infusión de insulina• Hipoglicemia 15 minutos• Dextrosa 50% en agua se inyecta para
bolquear hipoglicemia.• Afectada por
– GH– Cortisol– Catecolaminas
![Page 76: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/76.jpg)
Prueba de Tolerancia a la Insulina
![Page 77: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/77.jpg)
Prueba de tolerancia oral a la glucosa• Usada para evaluar la tolerancia a la
glucosa– Área bajo la curva de glucosa / área bajo
la curva de insulina– Área bajo la curva de glucosa x área bajo
la curva de insulina– SI horas despues de OGTT (calcular
108/glucosa a las 2 horas x insulina a las 2 horas x 150 x kg)
– Ecuación de Cederholm (calculacon que considera el total y la media de los niveles de glucosa e insulina
![Page 78: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/78.jpg)
Cálculos de insulina y glucosa en ayuno• Evaluación de resistencia a la insulina
usando cálculos matemáticos– Tasa glucosa – insulina– Índice de resistencia a la insulina en
ayuno = (glucosa x insulina)/25– Evaluación del modelo de homeostasis de
resistencia a la insulina (HOMA-IR) = (glucosa x insulina)/22.5
– Logartimo de HOMA –IR– Indíce de sensibilidad cuantitativo de
insulina (QUIKI) = 1/(log glucosa + log insulina)
RI=
.335
![Page 79: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/79.jpg)
Medición de Hormonas adiposas• Leptina
– Proteína aminoácido– Factor de señalización de tejido
adiposo a SNC– Indicador de energía– 10 – 30 pg/mL– Aumento
• Obesidad• PCOS
– Bajo• Niños
![Page 80: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/80.jpg)
Medición de Hormonas adiposas• Adiponectina
– Proteína compuesta de 244 aminoacidos– Prevenir el desarrollo de resistencia a la
insulina provocado por la dieta– Previene daño celular endotelial– RIA o ELISA– 8 – 18 ug/mL– Disminuye en
• Obesidad– Uso
• Puede ser predictor de riesgo de aterosclerosis
![Page 81: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/81.jpg)
Evaluación de la cantidad y distribución de grasa• Indice de masa corporal
– Peso/altura2• >30 = obesidad• >40 = Obesidad severa• 25 – 30 = sobrepeso• 19 – 25 = Normal
• DEXA (cuantificación de grasa directamente por absometria por rayos x de cuerpo completo
• Medición de cintura– Mujer >88 cm= Incremento riesgo CV
![Page 82: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/82.jpg)
Evaluación de la cantidad y distribución de la grasa corporal
![Page 83: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/83.jpg)
Síndrome Metabolico
![Page 84: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/84.jpg)
Medición de GH y factores de crecimiento• GH
– RIA o IRMA– Nivel basal muy bajo y secreción
pulsatil la medición puede ser subestimada.
• Medición de la GH en orina– Baja y a veces no detectable
![Page 85: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/85.jpg)
Medición de GH y factores de crecimiento• IGF-1
– Inmunoensayos específicos– Reflejan las concentraciones integradas de
GH en 24 horas– Screening de deficiencia de GH– Niveles bajos
• Prepuberes• Desnutrición• Hipotiroidismo• Falla renal• DM
– Útil en hipersecreción de GH• ´Tratamiento de acromegalia
![Page 86: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/86.jpg)
Medición de GH y factores de crecimeinto• IGF-2
– IRMA• Hipoglicemia por tumor de células de
islotes pancreáticos.
![Page 87: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/87.jpg)
Medición de GH y factores de crecimiento• Hay 6 proteinas fijadoras de IGF
– IGFBP 1, 2 y 3 con los que se evaluan para propositos clínicos
– IGFBP – 3 para alteraciones en GH– IFGBP – 1 Influenciados por hiperinsulinemia– IGFBP – 2 se relaciona inversamente con la
GH • Junto con la relacion IGFBP 3/1 es un marcador
de la acción de la GH• Incrementa en tumores como gliomas y cacer de
prostata
![Page 88: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/88.jpg)
Pruebas dinámicas para la evaluación de la secreción de GH• Se usan pruebas provocativas o de
inhibición– Disminución en respuestas en al
menos dos pruebas provocativas es diagnostico.
– Punto de cohorte de un pico normal de GH en pruebas provocativas es :• 10 ng/ml = ensayo policlonal• 2.5 – 3.5 ng/ml = ensayo monoclonal
![Page 89: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/89.jpg)
Prueba de tolerancia a la insulina• Primera opción en diagnostico
– Muestras de sangre a los 0,15,30, 60 y 90 minutos.
– Medición de GH• Mas de 10 ng/mL excluye diagnostico• Menos de 3 ng/mL Deficiencia severa de
GH– Glucosa
• Hipoglicemia ( <40 mg/dL)
![Page 90: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/90.jpg)
Prueba de GHRH y arginina• Prueba alternativa• Realizada en caso de
contraindicación de hipoglucemia
– GHRH 1ug/kg– Arginina 0.5 g/kg
![Page 91: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/91.jpg)
Prueba de tolerancia oral a la glucosa• Prueba primaria para
hipersecreción de GH– Administración durante la noche de
75 a 100 gr de glucosa para causar supresión de GH sérica• Muestras cada 30 minutos por 2 horas• RIA policlonal• Disminución de GH a 2ng/mL
![Page 92: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/92.jpg)
Medición de hormonas que regulan el calcio y de marcadores de hueso• Hormonas reguladoras de calcio
– PTH– 1,25 dihidroxivitamina D
• PTH– Metabolismo complejo– Multiples formas moleculares en
circulación– Forma bioactiva circula en pequeñas
cantidades.
![Page 93: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/93.jpg)
Medición de hormonas que regulan el calcio y marcadores de hueso• PTH
– Inmunoensayos que detectan anticuerpos • Reconocen la región media o
carboxiterminal• Hiperparatiroidismo primario
– Los ensayos que detectan anticuerpos contra las moleculas intactas o el fragmento aminoterminal• Falla renal• Cambios fisiológicos asociados con la
función de PTH
![Page 94: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/94.jpg)
Medición de hormonas que regulan el calcio y marcadores de hueso• PTH
– Valor Normal: 10 – 65 pg/mL.– Se debe correlacionar con calcio
HIPERPARATIROIDISMO PTH CA
DEFICIENCIA VIT DPTH = CA
![Page 95: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/95.jpg)
Medición de hormonas que regulan el calcio y marcadores de hueso• Vitamina D
– Menos 10 ug/L• Deficiencia severa de vitamina D
– 10 – 20 ug/L• Deficiencia parcial de vitamina D
![Page 96: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/96.jpg)
Métodos para medición de densidad mineral ósea• Esencial para diagnostico de
osteopenia y osteoporosis– Evaluación por US de calcáneo– DEXA
• Columna lumbar, cadera, femúr y cuello
• T score– Numero de SD
– Osteopenia: SD : -1, -2.5– Osteoporosis SD: menor de -2.5
![Page 97: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/97.jpg)
Medición y Niveles sanguíneos de hormonas tiroideas• TSH
– Ensayos inmunometricos• Enzimas• Componentes luminisentes• I 125
Situación Clínica ValorNormal 0.5 – 4 ug/mLHipotirodismo subclinico < 2.5 ug/mLHipertiroidismo subclinico
> 4 ug/mL
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Prueba de estimulación con TRH• Evaluación de hipotiroidismo
central• Hipertiroidismo dependiente de
TSH• Tumores hipofisiarios
– 200 ug de TRH IV.• TSH 0. 30 y 60 minutos
![Page 99: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/99.jpg)
Evaluación de glucocorticoides y función adrenal• Cortisol
– Mineralocorticoide– Suprarrenal– Inmunoensayo
• Reacción cruzada con prednisona, prednisolona y cortisona
– Variación circadiana• Nivel más alto: mañana• Nivel más bajo: tarde
– 50nm/L (1.8 ug/mL) excluye Cushing
![Page 100: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/100.jpg)
Evaluación de glucocorticoides y función adrenal• Cortisol urinario libre en 24 horas
– 50 – 60 ug/día (100 – 130 ug/día)– Cromatografía y RIA– Ensayo doble ciego competitivo
– 3 o 4 colecciones normales excluyen diagnóstico
![Page 101: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/101.jpg)
Evaluación de glucocorticoides y función adrenal• ACTH
– Ayuda a interpretar los resultados del cortisol
– IRMA– 100 pg/mL cortisol = Adisson– ACTH 20 pg/ml 9 AM = Cushing
dependiente de ACTH– ACTH 10pg/mL Causa suprarrenal de
Cushing
![Page 102: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/102.jpg)
Prueba de supresión con dexametasona• 1mg dexametasona a las 11PM• Medición de cortisol en la mañana
– Cortisol > < 5ug/dl =respuesta normal
• 0.5 mg dexametasona cada 6 horas por 2 días– Cortisol > 1.8 ug/dl = indicador de
CUshing
![Page 103: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/103.jpg)
Prueba de estimulación con CRH• CRH
– Estimula la secreción de ACTH– 1ug/kg CRH IV
• ACT y cortisol 0,15,30 y 60 min
• ACTH: incrementa 100%• Cortisol: 50%
– Para diferenciar Cushing hipofisiario o ectopico.
![Page 104: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/104.jpg)
Prueba de Dexametasona -CRH• Para una mayor exactitud en el
diagnóstico de hipercortisolismo.– Supresión con dexametasona (inicia
en la tarde de día 1, con la ultima dosis a las 6 am del 3 er día)
– CRH (1ug/kg IV) a las 8 am.
• Cortisol: mas de 1.4 ug/dl 15 min despues de administración de CRH sugiere síndrome de Cushing.
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Estudios de Imagen en Sindrome de Cushing• 40% microadenomas no se
observan• Realizar RMN con gadolineo
• Para tumor suprarrenal TAC– Tumor mayor de 6 cm es maligno
• Realizar TAC de tórax para identificar causa ectópica de secreción de ACTH
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Procedimiento diagnóstico en sospecha de síndrome de Cushing
![Page 107: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/107.jpg)
Pruebas para Insuficiencia Suprarrenal• Pruebas de ACTH
– Estimulación con 250 ug ACTH IV• Medición cortisol 0, 30, 60 min
• Cortisol Menor de 13 ug/dL: Insuficiencia suprarrenal
• Cortisol 13 -18 ug/dL: Requiere evaluación adicional
• Cortisol arriba de 18ug/dL: excluye el diagnóstico
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Pruebas para Insuficiencia suprarrenal• Prueba de Tolerancia a la insulina
– Ayuno nocturno– Insulina 0.1U/kg IV 1min– Glucosa y Cortisol
• 0,15,30,45,60,75 y 90 minutos
– Excluye el diagnóstico• Hipoglucemia (gluc menor de 40 y cortisol
mas de 18 g/dL)
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Pruebas para Insuficiencia Suprarrenal• Prueba Metyrapona
– Bloquea 11 b-hidroxilación– Usada para probar la respuesta
suprarrenal a ACTH endógena
• Reduce cortisol y induce a insuficiencia suprarrenal
• Usada en CI de IIT
![Page 110: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/110.jpg)
Procedimiento diagnóstico en sospecha de tumores hipofisiarios
Dolor de cabezaDiabetes insipida
Alteraciones visuales
AcromegaliaSíndrome de
CushingAmenorreaGalactorrea
Sx
HOR +
RMN
![Page 111: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/111.jpg)
Procedimientos diagnostico en sospecha de tumores hipofisiarios
![Page 112: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/112.jpg)
Procedimientos diagnosticos en sospecha de tumores hipofisiarios
![Page 113: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/113.jpg)
Evaluación pélvica• Importante para la evaluación
reproductiva– Función ovárica– Desarrollo endometrial
![Page 114: Métodos y técnicas de estudio de la función reproductiva](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062315/568162b6550346895dd33edb/html5/thumbnails/114.jpg)
Evaluación pélvica• SOP
– Ovarios poliquisticos• Criterio diagnóstico de Rotterdam
• Anomalías Müllerianas– Ultrasonido 3D
• Miomatosis Uterina