Download - Mediso de cultivo & Crecimiento bacteriano
Medios de Cultivo
Dado el pequeño tamaño de los microorganismos, la cantidad de información que puede obtenerse de un individuo es muy limitada. Por ello es necesario el estudio de poblaciones, que contienen miles o millones de individuos. Estas poblaciones se obtienen al hacer crecer los microorganismos bajo condiciones más o menos bien definidas, se conocen como cultivos.
• La mezcla de sustancias, naturales, sintéticas o ambas, que permite el crecimiento y la reproducción de microorganismos o bien que permite mantener su viabilidad es lo que conocemos como Medio de Cultivo
• El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.
Medio de cultivo
Cultivo
Conceptos
Clasificación de los medios de Cultivo
Su consistencia
Su utilización
Su composición
Su origen
MEDIO DE CULTIVO SOLIDO
MEDIO DE CULTIVO LIQUIDO
MEDIO DE CULTIVO SEMI
SOLIDO
Según su consistencia
MEDIOS LÍQUIDOS
Llamado también caldo.
Según su Composición
• diluciones• homogenizar mezclas• enriquecer cultivos • rehidratar cepas
liofilizadas
USO:
MEDIOS SÓLIDOS
Llamado también
agar.
Se le añade 2% de agar.
En cajas petri o en
tubos
USO:
• Para separar microorganismos
• Para favorecer el desarrollo de colonias aisladas
Según su Composición
MEDIOS SEMISÓLIDOS
Consistencia leve o
gelatinosa.
Medio líquido al que se
adiciona agar (0.4 a 0.8%).
Según su Composición
USO:
• Para determinar la movilidad de los microorganismos microaerófilos.
MEDIO COMÚN
Contiene los nutrientes mínimos necesarios para el desarrollo de bacterias
poco exigentes: caldo común, caldo carne, etc.
Según su Utilidad
MEDIO DE ENRIQUECIMIENTO
Son medios líquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismo en particular.
Permite aumentar el número de microorganismos de ese tipo.
Según su Utilidad
MEDIO ENRIQUECIDO
Se le agrega una sustancia que aumenta el poder nutritivo.
Aporta algún factor de crecimiento necesario para el microorganismo
que el medio no lo posea.
Según su Utilidad
MEDIO SELECTIVO
Favorece el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhiben el crecimiento de otros.
Útiles en muestras mixtas.
Al medio se le adiciona sustancias inhibitorias como antibióticos o ciertos colorantes.
Según su Utilidad
MEDIO DIFERENCIAL
Permite diferenciar bioquímicamente a las
bacterias por su actividad metabólica.
Revela características fisiológicas de los microorganismos.
Según su Utilidad
MEDIO SELECTIVO DIFERENCIAL
Contiene sustancias inhibidoras y sustancias
diferenciales.
El medio Sal Manitol para Staphylococcus
Según su Utilidad
MEDIO DE TRANSPORTE
Medio líquido o semisólido.
Permite el mantenimiento de muestras clínicas
Contiene agua y amortiguadores del pH.
Según su Utilidad
Pesar Añadir agua Someter a baño maría
Colocar en cajas Petri o
tubos
Preparación de Medios de Cultivo
Medios de Cultivo Agar nutritivo• Gérmenes• Bacterias
Agar sangre• Estreptococos• Staphylococcus• S. Mitis• S. Pyogenes
Agar Chocolate• Haemophilus
influenzae• Bacterias
Agar cistina-lactosa deficiente en electrólitos o CLED• Proteus• organismos urinarios
Agar MacConkey•Bacterias gram negativas•Escherichia coli•Enterobacter•Klebsiella•Salmonella
Agar Manitol salado•Bacterias gram negativas•Staphylococci•'Micrococcaceae
FISIOLOGÍA BACTERIANA
Crecimiento: es el aumento ordenado de todos los componentes celulares → Duplicación celular
Metabolismo: son los pasos intermedios entre la captación de nutrientes y la división celular.
Anabolismo Catabolismo (Síntesis) (Destrucción)
H2O
Macronutrientes
Micronutrientes
Hierro
Factores de crecimiento
Nutrientes que se emplean en la biosíntesis y producción de Energía
• No todos los microorganismos responden de la misma manera a los factores ambientales, lo que para unos puede ser beneficioso para otros es perjudicial
• Los requerimientos para el crecimiento microbiano se pueden dividir en dos categorías:
• FISICOS: QUIMICOS:– TEMPERATURA *AGUA– pH *FUENTE DE C Y DE N– PRESION OSMOTICA *SUSTANCIAS MINERALES
*OXIGENO*FACTORES ORGANICOS
* FACTORES DE CRECIMIENTO
FACTORES AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO BACTERIANO
TEMPERATURAS CARDINALES: Tº MAXIMA, Tº OPTIMA Y Tº MINIMA
• Psicrófilas = 0 - 20ºC– Pseudomonas, Listeria
• Mesófilas = 20 - 45ºC– Staphylococcus, Streptococcus
• Termófilas = 55ºC o más– No patógenas
• Estenotérmicos = 35 - 36ºC– Neisseria
• Euritérmicos = 0- 44ºC– Enterococcus
Requerimientos de temperatura:
22
• Neutrófilas = 5,5 - 8,0– Staphylococcus
• Acidófilas = 0,0 - 5,5– Lactobacillus
• Alcalófilas = 8,0 - 11,5– Vibrio
Requerimientos de pH:
• Todos los organismos requieren H2O para vivir.
• Halófilos: microorganismos que viven en altas concentraciones de sales.algunas bacterias se han adaptado muy bien a ambientes con altas concentraciones de sal (nacl): – halotolarentes,(toleran
conentraciones de nacl) – halófilas ( requieren nacl para su
crecimiento, moderados (6-15%) y extremos (15-30% nacl).
• Osmófilos: microorganismos que viven en altas concentraciones de azúcares.
• Xerófilos: microorganismos que viven en ambientes secos.
DISPONIBLIDAD DE AGUA:
Crecimiento de algunas bacterias
depende de la presencia de oxigeno
(aerobias y facultativas)
Otras mueren (anaeróbicas)
La utilización de O2 genera productos
tóxicos como superoxido y H2O2
Algunos ya aerobios y facultativos poseen enzimas superoxido dismutasa y catalasa
para detoxificar estos productos
Crecimiento aeróbico y anaeróbico:
Presencia de O2
Aerobios
ObligadosO2(21%)
FacultativosNo requieren crecen mejor
en presencia de O2
Anaerobios(ausenciaO2)
AerotolerantesNo requieren
crecen peor en O2
Extrictos, obligadosO%, letal
MicroaerofilosRequiere(1-15%)
• CUANDO INTRODUCIMOS UNA POBLACION DE MICROORGANISMOS DENTRO DE UN MEDIO DE CULTIVO LIQUIDO, CADA ORGANISMO PRESENTA CUATRO FASES DE CRECIMIENTO TIPICAS:
» FASE LAG (latencia)» FASE LOGARITMICA (LOG)» FASE ESTACIONARIA» FASE DE MUERTE.
• ESTAS CUATRO FASES FORMAN LA CURVA ESTANDAR DEL CRECIMIENTO BACTERIANO
CRECIEMIENTO EXPONENCIAL• N° CELULAS : 1 2 3 4 8• EXPONENTE 20 21 22 23 24
FASES DEL CRECIMIENTO
•Fase de latencia: período de adaptación , gran actividad metabólica, células no se dividen (min-horas )
•Fase exponencial o logarítmica (log): aumento regular de la población que se duplica a intervalos regulares de tiempo (G). •Los Bllactamicos actuan en esta fase
Fase estacionaria: cese del crecimiento por agotamiento de nutrientes, por acumulación de productos tóxicos, etc.N|°cel.nuevas=n°cel.que mueren
Fase de declinación o muerte: el número de células que mueren es mayor que el número de células que se dividen.↓cel. viables
Las propiedades de un microorganismo dependerán de la fase de la curva en que se encuentren (la producción de antibióticos se lleva a cabo en la fase estacionaria).
Se mide siguiendo los cambios en el numero de células o el peso de la biomasa celular.• El cálculo del número de células que existen en una suspensión se puede llevar a cabo mediante el
recuento celular (microscopía, número de colonias), masa celular (peso seco, medida del nitrógeno celular, turbidimetría) o actividad celular (grado de actividad bioquímica en relación al tamaño de la población). todos estos métodos se clasifican en dos apartados: métodos directos y métodos indirectos
• Recuentos pueden clasificarse en:
– directos e indirectos– viables o totales Métodos
MEDIDAS DEL CRECIMIENTO MICROBIANO:
*Recuento en el microscopio*Recuento en placas *Numero mas probable
Directo *Turbidimetrìa*Filtración *Diluciones
Indirecto
SALES DE TETRAZOLIUM
VIABLES
FILTRO MEMBRANA
BREED
PETROFHAUSSEN
EPIFLUORESCENCIA
TOTALES
DIRECTOS
NMP RECUENTO EN PLACA
VIABLES
INDIRECTOS
RECUENTOS
TUIRBIDIMETRIA
DILUCIONES: