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“Inmunoglobulinas, Gamapatías, Mieloma
Múltiple y Mononucleosis infecciosa”
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INMUNOGLOBULINAS
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INMUNOGLOBULINAS
Glicoproteínas originadas como productos de las células B diferenciadas que median la porción humoral de la respuesta inmune actuando como anticuerpos.
Pueden encontrarse circulando en sangre, en las secreciones o unidas a la superficie de las membranas de los linfocitos B.
La función primaria de los anticuerpos es de ligarse con especificidad a antígenos y llegar a la inactivación o remoción de sustancias que sean extrañas al cuerpo (patógenos). 3
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Composición• 2 cadenas polipeptídicas
ligeras L• 2 cadenas pesadas H• Unidas por puentes
bisulfuro• 2 mitades iguales, cada una
formada por una cadena H y una L
• Segmento amino terminal (región variable)
• Segmento carboxiterminal (región constante) 4
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Sustancias que actúan
sobre la molécula de
Ig
Papaína Pepsina
5
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Cuando son fragmentadas se dividen en 3 segmentos:• 2 Fragmentos Fab que
contienen la estructura que es capaz de enlazarse al antígeno.
• Un fragmento Fc o cristalizable que no puede unirse al antígeno.
6
PAPAÍNA
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7
Pepsina
• Pepsina corta las moléculas de Igs en la misma región que la papaína pero en el lado carboxiterminal de los puentes disulfuro, produciendo un fragmento F(ab’)2 en que los dos brazos de unión del Ag de la molécula de Ac permanecen unidos.
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Fragmentos Fab
Idénticos
Cadena ligera entera
Mitad aminoterminal de la cadena pesada
Se combina con el antígeno
Responsable del reconocimiento y unión con el Ag
Fragmento FcMitad de la cadena pesada (carboxiterminal)
No se combina con el antígeno
Determina especificidad y clase de los Ag
Fija complemento.
Propiedades de los segmentos
8
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Cadenas ligeras • Tipo Kappa (κ) ó Lambda (λ)• Moléculas de Ac contienen 2 cadenas L κ ó 2
cadenas L λ (no una de cada tipo)• Cantidad de móleculas con cadenas L κ es
mayor.
Cadenas pesadasIdentificadas por las diferencias antigénicas se clasifican en
• Gamma (ϒ)• Alpha (α)• Miú (μ)• Delta (δ)• Epsilon (ε)
Clases de cadenas polipeptídicas
9
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IgG: cadena pesada gamma
(γ)
IgA: cadena pesada alfa (α)
IgD: cadena pesada delta (δ)
IgM: cadena pesada miú (μ)
IgE: cadena pesada epsilón
(ε)
Clasificación de las Inmunoglobulinas
10
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Las formas solubles de las IgM y de la IgA pueden polimerizarse, gracias a la
asociación de una proteína denominada cadena J que mantiene
unida la estructura polimérica mediante puentes disulfuro con los extremos Ct de la cadena pesada
correspondiente. 11
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Propiedades biológicas
12
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Se secreta en la leche materna, por eso es responsable de la inmunidad fetal y la del
recién nacido.
Atraviesa la barrera placentaria*
Se une rápidamente con macrófagos y neutrófilos, para destruir patógenos.
Más abundante (80% del total de las Igs).
Mayor concentración en el suero.
Inmunoglobulina G
13
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Inmunoglobulina A
13% del total de inmunoglobulinas.
Se encuentra específicamente en secreciones serosas y mucosas, como son la leche o las lágrimas.
Rica en hidratos de carbono.
Mayor actividad antiviral.
Actúa protegiendo la superficie corporal y los conductos secretores.
Genera, junto con la IgG, la inmunidad al recién nacido, al encontrarse en la leche.
14
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6% del total de Igs.
Su mayor concentración
está en el suero.
Respuesta rápida, aglutinante eficaz
Mayor actividad antibacterial.
Aparece en los linfocitos B unida a su membrana plasmática.
Se manifiesta en la respuesta inmunitaria primaria activando el sistema del complemento*.
Inmunoglobulina M
15
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Inmunoglobulina D
Su mayor concentración está en tejido conjuntivo e
intersticial (0.1%)
Su función puede estar relacionada
con la activación de
los LB
Primeras Igs sintetizadas
por los linfocitos B.
16
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Mayor concentración
en piel y epitelios
Concentraciones muy bajas en el
suero y secreciones al
exterior (0,002%)
Su concentración aumenta en los procesos
alérgicos, asma y parasitosis. *
Inmunoglobulina E
17
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IgG IgA IgM IgD IgE
Peso molecular 150 165-185 900 185 200
Coeficiente de Sedimentación 7S 7S-11S 19S 7S 7S-9S
Valencia al unirse al antígeno 2 2 ó 4 5 (10) 2 2
Propiedades físicas y químicas
18
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Ig G Ig A Ig M Ig D Ig E
Cadena Liviana λ, κ λ, κ λ, κ λ, κ λ, κ
Cadena Pesada γ α µ δ ε
Sub-clases 4 2 1 1 1
Vida media 21-25 5.8 5.1 2.8 2.2
% de Inmunoglobulinas 80 13 6 0.1 0.002
Concentración Sérica ( mg/100ml) 560-1900 60-350 45-145 0.3-4.0 0.03
% de Carbohidratos 3 8 12 13 12
Caraterísticas generales
19
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Pruebas de identificaciónpara los trastornos
de las inmunoglobulinas
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• Α-1-Antitripsina• Globulina Fijadora
Tirotoxina• α1 Glucoproteína
Ácida• α1 Lipoproteína
• Ceruloplasmina α• Haptoglobina• HDL• EPO• α2 Macroglobulina• α2 lipoproteína
• Transferrina• β2 plasminógeno• Β lipoproteína• C3 (Complement
• Diferentes tipos de anticuerpos.
Alfa 1 Alfa 2
Beta 1Gamma
21
GlOBULINAS
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Electroforesis de proteínas séricas
• Mide los tipos de proteína en suero
Inmunoelectroforesis
• Detecta el tipo de Ig monoclonal aumentada que produce un gran pico.
Inmunodifusión radial simple
• Cuantifica la concentración sérica de Ig monoclonal (proteína M).
22
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Electroforesis de proteína sérica• Se utiliza acetato de celulosa• Ventajas velocidad aplicación de micro cantidades de proteínas se adapta a los procedimientos
histoquímicos de tinción
23
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Electroforesis de proteína sérica
Sección A• Una pequeña
cantidad de suero u otro líquido se aplica en una tira de acetato de celulosa.
24
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Sección B • Se lleva a cabo una electroforesis de
la muestra en un amortiguador de electrolitos.
25
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Sección C• Se visualizan bandas separadas de proteínas en posición
característica después de teñirse.Sección D • El análisis, al densitómetro, de las tiras de acetato de celulosa
convierte las bandas en picos característicos de albúmina, alfa 1 globulina, alfa 2 globulina, beta globulina y gama globulina.
26
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Suero normal
Mieloma de IgG con pico gamma
27
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Suero normal
Macroglobulinemia de Waldenstrom con pico IgM
28
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Suero normal
Hipergammaglobulinemia policlonal
29
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Suero normal
Agammaglobulinemia
30
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InmunoelectroforesisSeparación
electroforética de proteínas
Precipitación
inmunitaria de
proteínas
Difusión de proteínas
Identifica proteínas individuales en:• Suero• Orina• Otros líquidos
biológicos
31
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Técnica de Inmunoelectroforesis• Se vierte el agar semisólido en un
portaobjeto y se corta un pozo para el antígeno y una hendidura para el antisuero en el agar.
32
![Page 33: Inmunoglobulinas, Mieloma Multiple, Gamapatías, Mononucleosis Infecciosa, Macroglobulinemia de Waldestron](https://reader033.vdocuments.co/reader033/viewer/2022061420/55720b05497959fc0b8c1811/html5/thumbnails/33.jpg)
El pozo de antígeno se llena con suero humano.
33
![Page 34: Inmunoglobulinas, Mieloma Multiple, Gamapatías, Mononucleosis Infecciosa, Macroglobulinemia de Waldestron](https://reader033.vdocuments.co/reader033/viewer/2022061420/55720b05497959fc0b8c1811/html5/thumbnails/34.jpg)
• El suero se prepara por electroforesis.
34
![Page 35: Inmunoglobulinas, Mieloma Multiple, Gamapatías, Mononucleosis Infecciosa, Macroglobulinemia de Waldestron](https://reader033.vdocuments.co/reader033/viewer/2022061420/55720b05497959fc0b8c1811/html5/thumbnails/35.jpg)
• La hendidura de antisuero se llena con antisuero contra suero humano total.
35
![Page 36: Inmunoglobulinas, Mieloma Multiple, Gamapatías, Mononucleosis Infecciosa, Macroglobulinemia de Waldestron](https://reader033.vdocuments.co/reader033/viewer/2022061420/55720b05497959fc0b8c1811/html5/thumbnails/36.jpg)
• El suero y el antisuero se difunden en el agar.
36
![Page 37: Inmunoglobulinas, Mieloma Multiple, Gamapatías, Mononucleosis Infecciosa, Macroglobulinemia de Waldestron](https://reader033.vdocuments.co/reader033/viewer/2022061420/55720b05497959fc0b8c1811/html5/thumbnails/37.jpg)
• Las líneas de precipitación de las proteínas séricas individuales.
37
![Page 38: Inmunoglobulinas, Mieloma Multiple, Gamapatías, Mononucleosis Infecciosa, Macroglobulinemia de Waldestron](https://reader033.vdocuments.co/reader033/viewer/2022061420/55720b05497959fc0b8c1811/html5/thumbnails/38.jpg)
• Comparación de los patrones de electroforesis de proteínas séricas e inmunoelectroforesis de suero normal.
38
![Page 39: Inmunoglobulinas, Mieloma Multiple, Gamapatías, Mononucleosis Infecciosa, Macroglobulinemia de Waldestron](https://reader033.vdocuments.co/reader033/viewer/2022061420/55720b05497959fc0b8c1811/html5/thumbnails/39.jpg)
Inmunodifusión Radial Simple
Medio de soporte de agarosa sobre una placa de vidrio . Y
Y
Y Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
YY
Y
Y
Y
Y
Y
YEl agar contiene el anticuerpo contra el antígeno por estudiar en una posición fija, por lo tanto este anticuerpo no migra.
39
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Sección A: la caja petri se llena con una solución semisólida de agar que contiene el anticuerpo contra el antígeno por estudiar. Después de que el agar se endurece, el pozo central se llena con una cantidad determinada de material que contiene el antígeno por estudiar.
Anti-S
40
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Sección B: se permite que el antígeno por estudiar se difunda rápidamente desde el pozo central durante 24 a 48 horas.
41
![Page 42: Inmunoglobulinas, Mieloma Multiple, Gamapatías, Mononucleosis Infecciosa, Macroglobulinemia de Waldestron](https://reader033.vdocuments.co/reader033/viewer/2022061420/55720b05497959fc0b8c1811/html5/thumbnails/42.jpg)
Sección C: en el sitio en el que el antígeno por estudiar se encuentra con su anticuerpo correspondiente en el agar, se presenta la precipitación. Después de que ha procedido la reacción en su totalidad o durante un tiempo determinado, se forma un anillo con bordes nítidos.
42
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Sección D: mediante una dilución seriada de una cantidad conocida estándar de antígeno S, S/2, S/4, S/8 se forman anillos de magnitud creciente progresiva. Se puede calcular la cantidad de antígeno desconocido y se compara con un estándar.
S
S/2
S/4
S/8
43
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GAMMAPATÍAS
44
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Enfermedades inmunoproliferativas que se caracterizan por la proliferación maligna de uno o varios clonos de células plasmáticas productoras de inmunoproteínas.
Se clasifican según el patrón electroforético que se observa por densitometría en: • Monoclonales• Policlonales• Inmunodeficiencias
Definición
45
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Monoclonales• Hipergammaglobulinemia de base estrecha debido a la
proliferación de una sola clona de células plasmáticas las cuales secretan un solo tipo de inmunoglobulinas.
46
Patrón normal
IgG aumentada
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Policlonales• Hipergammaglobulinemia de base ancha debido a la
proliferación de varias clonas de células plasmáticas las cuales secretan varios tipos de inmunoglobulinas.
47
![Page 48: Inmunoglobulinas, Mieloma Multiple, Gamapatías, Mononucleosis Infecciosa, Macroglobulinemia de Waldestron](https://reader033.vdocuments.co/reader033/viewer/2022061420/55720b05497959fc0b8c1811/html5/thumbnails/48.jpg)
Clasificación de las Inmunodeficiencias
Hipogammaglobulinemia
Reducción en conc.
TODAS Igs
Disgammaglobulinemia
Reducción en conc.
ALGUNAS Igs
Agammaglobulinemia
Ninguna Ig.
48
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Mieloma M
últiple
49
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Proliferación anormal de un clono de células plasmáticas, que da lugar a producción elevada de una Ig causando una hiperproteínemia.
Se puede dar HipoGB e incluso AGB cuando los plasmocitos no son secretadas.
50
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• Dolor de hueso y en la espalda
• Anemia• Hipercalcemia• Insuficiencia renal• Aumento de la
susceptibilidad a infecciones
• Parálisis derivada del tumor• Fracturas patológicas
Clínica
51
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Hallazgos hematológicos• Anemia normocítica
normocrómica• Velocidad de
eritrosedimentación elevada• Hematíes en pilas en
monedas (Fenómeno de Rouleaux)
• Aumento de plasmocitos en estudio de m.o
Laboratorio
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• Determinación química de los niveles de álbumina y globulina.
• La electroforesis de proteínas séricas o de orina.
• Inmunoelectroforesis: permite detectar el tipo de Ig monoclonal aumentada que produce un gran pico.
• Inmunodifusión radial simple: cuantifica la concentración sérica de Ig monoclonal (proteína M).
• Frecuentemente Ig G está aumentada, seguida en frecuencia Ig A, y raramente, Ig M, Ig D e Ig E.
53
Pruebas de Laboratorio
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54
• Proteínas Totales: evidencia el aumento de las proteínas que generalmente se encuentran entre 9-12 gr. (N: 3 - 4 gramos)
• Medir niveles de Nitrógeno de urea, la creatinina, el ácido úrico, que en MM se encuentran elevados en suero.
• Médula ósea: suelen mostrar un aumento del número de células plasmáticas.
Pruebas de Laboratorio
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• Es causada por síntesis asincrónica de cadenas pesadas y livianas por parte de las células plasmáticas, lo que da como resultado la aparición en orina de proteína de Bence – Jones que representa la eliminación de la cadena liviana sintetizada y no acoplada a la cadena H.
• Se encuentran en la orina puesto que son pequeñas, y por tanto son fácilmente aclaradas por los riñones.
• Prueba de precipitación al calor Las cadenas livianas son insoluble a 56 0C y precipitan. 55
Proteinuria de Bence-Jones
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56
Características de los Plasmocitos
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Plasmoblasto (célula mielomatosa inmadura)
• Morfología• Grande• Redonda u ovoide
• Núcleo• Redondo• Excéntrico •Uno ó más nucléolos• Cromatina reticulada y
delicada• Citoplasma • Basófilo • Sin granulación
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Plasmocito (célula miolomatosa madura)
• Morfología• Ovoide •Más estrecho en un extremo que
en el otro• Núcleo • Excéntrico• Cromatina densa• Sin nucléolos
• Citoplasma• Color azul intenso • Halo claro perinuclear acromófilo
• Función: sintetizar y secretar inmunoglobulinas (Ac) contra los Ag
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Variantes de Plasmocitos • Tamaño extraordinario • 2 a 3 núcleos
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Inclusiones intracelulares
Célula de Mott vacuolas en citoplasma
Cuerpos de Russell
pequeños cuerpos
eosinofílicos
Depósito cristalino de
proteínas
Célula en llama citoplasma eosinofílico
brillante
60
Variantes de Plasmocitos
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Cuerpos de Russell
Célula de Mott
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Depósito cristalino de proteínas
Célula en llama
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Macroglobulinemia
de Wald
estrom
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Etiopatogenia• Proliferación anormal de clonos de células plasmáticas,
denominados células Linfoplasmocitarias. • Los plasmocitos producen IgM.• También se producen cantidades apreciables de
aglutininas al frío, responsables del fenómeno de Raynaud.
• Aumenta la viscosidad de la sangre y hay tendencias a trastornos hemorrágicos y anemia hemolítica.
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Célula maligna que se encuentra en una etapa de desarrollo entre el linfocito B maduro y la célula plasmática.
Características• Núcleo • Tamaño irregular • Cromatina oscura
• Citoplasma• Intensamente basófilo.
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Células linfoplasmocitarias
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Laboratorio
Hallazgos Hematológicos• Anemia normocítica
normocrómica• Hematíes en pilas de moneda • Velocidad de eritrosedimentación
elevada• Ligera trombocitopenia• Fibrosis reticulínica en estudio de
médula ósea con aumento en la proliferación de células linfoplasmocitaria
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• Electroforesis de proteínas séricas Presenta una banda estrecha de proteína homogénea IgM.
• Pruebas de coagulación: tendencia a hemorragia debido al reclutamiento de las plaquetas por la proteína monoclonal, lo que origina una prolongación del tiempo de sagrado.
• Test de SIA: útil para gammapatías monoclonales y para detectar la presencia de macroglobulinas. Se fundamenta en la baja solubilidad de las macroglobulinas en solventes de contenido electroforético, por lo que precipitan.
67
Pruebas de laboratorio
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MONONUCLEOSIS INFECCIOSA
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Mononucleosis Infecciosa (Enfermedad Del Beso)
• Agente etiológico• VEB (Herpesviridae)
• Transmisión• Saliva• Contacto oral íntimo• Compartiendo cepillos de dientes y vasos
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Hallazgos Clínicos
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Hallazgos de Laboratorio• Ac IgM que se desarrollan por un estímulo “X”• Reaccionan contra antígeno específico no siendo el
mismo que lo produjo.• Hemolizan los eritrocitos de:• Carnero• Caballo• Buey
• No hemolizan los eritrocitos humanos
Anticuerpos heterófilos
• 1a semana: leucopenia ( 3mil GB X mm3)
• 2da y 3ra semana: leucocitosis (10milGB x mm3).
• Frotis periférico: linfocitos reactivos de 50-90%
Cuadro hemático
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• NúcleoExcéntricoIrregularHendidurasCromatina con espacios
claros (Apariencia de nucleolos)
• CitoplasmaTono azul intenso (basofilia)Múltiples vacuolasBordes rasgados o alargados
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LINFOCITOS REACTIVOS
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•No son patognomónicos de MI•Puede presentarse en herpes, rubéola, sarampión y CMV
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Pruebas serológicas basadas en la detección del título de anticuerpos heterófilos de la MI• Monotest• Estudio de anticuerpos virales IgM ó IgM ANTI VCA• Prueba de Inmunofluorescencia Indirecta para la
determinación del VEB
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Monotest• Prueba rápida sobre portaobjetos que utiliza eritrocitos de caballo
formulados, como indicador inmunológico con exactitud del 99%.
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Hematíe de caballo
Suero del paciente Mezclar durante 2min
POSITIVO NEGATIVO
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Estudio de anticuerpos virales IgM ó IgM ANTI-VCA
• Basada en que durante la infección primaria con VEB se originan Ac contra varios Ag específicos del VEB.
• Su utilidad se debe a que 10-15% de los pacientes con MI pueden ser heterófilos negativos si son sometidos a una sola prueba durante la primera semana de la enfermedad, por lo que esta prueba indicará si la enfermedad es reciente o aguda.
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Antígeno similar al humano
Suero del paciente en estudio conteniendo el Ac
incubado con la sección que tiene el Ag
Prueba de Inmunofluorescencia Indirecta para la determinación del VEB • Es específica
• Permite detectar y confirmar la presencia del VEB ya que ninguno de los virus humanos que pertenecen al grupo del los virus herpes reacciona con los cultivos celulares del linfoma de Burkitt.
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YY
Substrato: tejido animal
Anticuerpo unido a fluoresceína dirigido contra Igs humanas
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• Positividad de IFIRevelan que el paciente posee en su suero Ac contra VEB, si se observan dichos Ac como áreas fluorescentes dentro de las células infectadas por el virus. Se obtiene una fluorescencia brillante de color verde porque varios anticuerpos fluorescentes pueden unirse a uno de los anticuerpos del paciente.
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