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Estudio de EnfermedadResidual Mínima en niños con Leucemia Linfoblástica Aguda(LLA) por citometría de flujo
Marinov N 1, Cabrera ME 1, Campbell M.21 Laboratorio de Hematología
Hospital del Salvador 2 Coordinadora PINDA
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INTRODUCCION
• La velocidad de reducción de la masaleucémica durante los primeros mesesde tratamiento, es un factor pronósticoen LLA.
• Estudio ERM permite identificarprecozmente el riesgo de recaída y adecuar las estrategias terapeuticas.
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OBJETIVO
Determinar el nivel de ERM porcitometría de flujo, en niños con leucemia linfoblástica aguda ( LLA) que fueron tratados con el protocolo PINDA.
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MATERIAL• Médula ósea de niños LLA, 2003-2005.• Citómetro de flujo FACSCalibur Becton &
Dickinson.• Panel anticuerpos monoclonales conjugados
con 4 fluorocromos:FITC( Isotiocianate de fluoresceína), PE( phycoerithrin), PerCP (peridinin chlorophyll-A protein), APC ( allophycocyanin).
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METODO• Basado en la identificación de
combinaciones fenotípicas aberrantesen células leucémicas, que no estánpresentes en las células normales.
• Aplicable a más del 90% de lospacientes.
• Sensibilidad: 1x10-5.• ERM positiva: > 0.01% ó 1x10-4.
• Puntos de estudio: semana 5 y 12.
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• Clasificación de riesgo, según ERM: semana 5 y 12, del inicio de la
quimioterapia
BAJO INTERMEDIO ALTO
Semana 5 (+)“ 12 (+)
Semana 5 (+)“ 12 (-)
Semana 5 (-)“ 12 (-)
Van Dongen JJM, Lancet 1998;352:1731-38.
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TECNICA• Primera
incubación• FITC/ PE/ PerCP /APC
IgG1/ IgG1/ IgG1/ IgG138 / 10 / 34 / 1913 / 5633455866c15TdT/ 10 /34 /1922
• Segundaincubación
• Marcadoresseleccionados segúnantígenos (+) Ej: 38 / 10 / 34 / 19
45 / 10 / 34 / 19TdT / 10 / 34 / 19
Coustain-Smith E, Blood 2000;98:2691-96.
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CD45(-), CD58 (+++), CD66c(++), CD15(+)
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Segundaincubación
al diagnóstico
(solo agaberrantes).
Se repitesemana 5 y
12
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RESULTADOS
%Nº
1210Sin Ag asociadosleucemia
43Problemas técnicos
7964Con seguimiento
54Sin muestra
10081Niños estudiados
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RESULTADOS
14-16%30-55 %Literatura
6 (35%)7 (41%)2005
11 (32%)10 (29%)2004
0 2 (14%)2003
ERM(+)semana 12
ERM (+) semana 5
Año
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Distribución según grupos de riesgo
154343Literatura
3512532005
3315512004
714782003
Alto(%)
Intermedio(%)
Bajo(%)
Año (n)
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CONCLUSIÓN
• Factible de realizar estudio ERM en Chile y en el sistema público.
• Mejoría progresiva de resultados en semana 5.
• Exceso falsos positivos semana 12, poraumento de progenitores normales.
• Esta técnica requiere de experienciapara que sea reproducible y confiable.
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