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EL ADN
Sus aplicaciones en Medicina Forense
Esperanza López Hidalgo.
Médico Forense.
IML de Málaga.
APLICACIONES
Investigación de la paternidad Identificación criminal Identificación no criminal
Alec Jeffreys 1985
CARACTERISTICAS DEL ADN Unico Mismo en todas las células Estable Hereditario
ESTRUCTURA
Dos largas cadenas de nucleótidos unidas formando una doble hélice
En el núcleo de la célula, en los cromosomas
Cariotipo humano 46 cromosomas
FUNDAMENTO de la aplicación del ADN en MFPolimorfismo
Fragmento de ADN presentes en todos los individuos pero que son altamente variables
Mediante el análisis de varias regiones polimórficas, la probabilidad de que dos individuos sean iguales es prácticamente nula. Excepción gemelos univitelinos
Tipos de Polimorfismos
Modificación de un solo nucleótido (SNPs)
P. de Longitud (VNTR). Secuencia de nucleótidos repetidos en tandem
a) Minisatélites (MVR), secuencias 30 pb
a) Microsatélites (STR), 2 a 6 pb, normalmente 4, ATTCATTC... Homo o heterocigótico
TIPOS DE ADN
ADN nuclear ADN mitocondrial Polimorfismo del cromosoma Y
ADN mitocondrial
Se encuentra en las mitocondrias
Herencia por vía materna
Utilidades
a) ADN deteriorado
b) Células carentes de núcleo
c) Linajes maternos
P. Cromosoma Y
Filiación en ausencia de progenitor Linajes por línea paterna Delitos sexuales Identificación de sexo en
catástrofes
Inconveniente, todos los individuos de la línea paterna comparten la misma información.
METODO DE ANALISIS
Hibridación con sondas
Reacción en cadena de la polimerasa PCR
HIBRIDACION CON SONDAS
Sonda, fragmento monocatenario de ADN con una secuencia conocida que se une a un fragmento complementario de ADN.
Sondas marcadas radiactivamente o con un producto quimioluminescente.
Se pone en contacto con la muestra y se separan los fragmentos según su longitud.
Wyman y White, 1980.
TIPOS DE SONDAS
Mono-locus (SLP): Específicas para una región de un cromosoma.
1 o 2 bandas, homo o heterocigótico.
Multi-locus (MLP): Hibridan secuencias minisatélite, 33 pb, en varios locus de diferentes cromosomas.
Patrón de múltiples bandas, huella genética.
Ventajas de las SLP
- Mas específicas- Exclusivas del ADN humano- Menor cantidad de muestra, 20 a
100 ng de ADN, no necesariamente en buenas condiciones
TECNICA DE LA PCR
Es la de mayor aplicación.
Enzima Taq polimerasa se van uniendo de forma complementaria fragmentos de ADN delimitados con sondas, primers.
Repetición cíclica del proceso permite obtener múltiples copias del fragmento de ADN.
UTILIDAD, escasa cantidad de ADN o degradado.
MUESTRAS
Cualquier célula o tejido vivo o posmortem.
- Sangre, manchas.- Células, frotis.- Tejidos, piel, huesos.- Pelos.
Instrucciones básicas
Sangre con anticoagulante
Secado al aire
Muestras testigo
Muestras indubitadas
Máxima higiene
Envasar los indicios por separado
Etiquetado e identificación
Filiación de quienes intervienen en la investigación
INTERPRETACION DE RESULTADOS
Se expresa mediante un valor de probabilidad basado en el teorema de Bayes.
Cálculo de la probabilidad en función de la frecuencia en la población de los perfiles analizados.
PROBABILIDAD DE PATERNIDAD
Si no se produce la exclusión directa.
PP = ( X/X+Y).100
X = probabilidad de transmitir el rasgo al hijo
Y = frecuencia del marcador en la población
INVESTIGACION CRIMINAL
Si los perfiles analizados coinciden se analiza la frecuencia de los polimorfismos analizados en la población general.
Las combinaciones de los polimorfismos que se analizan en la actualidad permiten determinar una probabilidad de repetición al azar de hasta 1/ 1015
Si la frecuencia fuera de 1%
FALACIA DEL FISCAL: SI solo 1 de cada 100 personas tendrían ese perfil, el acusado tiene el 99% de posibilidades
FALACIA DE LA DEFENSA: En una población de 100.000 personas 1000 tendrían ese perfil, el acusado y 999 personas mas podrían ser culpables
Los dos son razonamientos falsos, aplicando el análisis Bayesiano, obtenemos la probabilidad, con lo que se denomina RAZON DE VEROSIMILITUD, que sería el razonamiento correcto
Frecuencia 1%
Probabilidad de ser culpable = 1
Probabilidad de no ser culpable = 1/100 = 0.01
RV = 1/0.01 = 100
El sospechoso es 100 veces mas probable de ser culpable que otra persona escogida al azar