INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL- ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Efecto de los colorantes sobre el crecimiento de
los microorganismosLaboratorio de microbiología general
Grupo 3QM1Laboratorio 3 y 4. Equipo 6
IntroducciónUn colorante es un compuesto orgánico natural o sintético, que al aplicarlo a un sustrato le confiere un color más o menos permanente.
Las sustancias coloreadas son las que absorben luz en la región visible del espectro (400 a 750 nm). Una sustancia presenta el color complementario del que absorbe ya que este se resta de la luz reflejada o transmitida. F. Klages.Tratado de Química Orgánica. Colorantes. 1968
Naturaleza química de los colorantesCromóforos: (del griego portador de color) es el responsable del color.
Son rearreglos de dobles enlaces conjugados en sistemas aromáticos o lineales, que dan la disponibilidad electrónica para absorber cuantos de la región del visible del espectro electromagnético, poseen átomos electrodonadores o electroatractores al final de estas conjugaciones.
NITRONITROSO
IMINA
AZO
JA Kiernan. Classification and naming of dyes, stains and fluorochromes. Biotechnic and Histochemistry · September 2001
Auxocromos: Evita las interferencias generadas en el cromóforo, intensificando el color del mismo y también permite acoplarse a las estructuras deseadas de un sustrato.
BÁSICOS O CATIÓNICOS:
ÁCIDOS O ANIÓNICOS:
-COOH, -OH, -SO3H-NHR, -NR2, -NH
FRY, B. A. (1957). J. gen. Microbiol. 16, 341-349
Usos de colorantes en microbiología
Colorantes por acción antimicrobiana
Derivados del trifenilmetano. Intervienen en la síntesis de pared celular.
Ejemplos: Verde brillante, Verde de malaquita, Cristal violeta.
Derivados de la acridina. Intervienen en la síntesis de ácidos nucléicos y proteínas.
Ejemplos: Acriflavina, Proflavina, Naranja de acridina.
Feduchi, Blasco, Romero, Yánez. Bioquímica. Conceptos esenciales. 2010.
Derivados del trifenilmetano. Mecanismo de acción:
La Pseudobase, adquiere carácter más lipofílico, lo que le confiere una mejor incorporación a la célula, y posteriormente pueda fijarse a los grupos Fosfato de los ácidos nucléicos.
Se ha demostrado su capacidad inhibitoria en la síntesis de glutamina en modelos bacterianos de Staphylococcus aureus. (Fry,1957).
Verde de Malaquita Cristal violeta
Estructuras de los colorantes
Derivados de la acridina. Mecanismo de acción:
Cuadro tomado de: Journal of Antimicrobial Chemotherapy (2001) 47, 1-13
Su mecanismo de acción es, la formación de un complejo DNA-acridina, que interfiere en la biosíntesis de ácidos nucléicos.
Azul de metileno
Safranina
Proflavina
Naranja de acridina
Estructuras de los colorantes
ObjetivoRealizar dos técnicas que permitan observar el efecto de los colorantes sobre la viabilidad de los los microorganismos.
ProcedimientoI. Efecto de colorantes en tubo
*La concentración de colorante en el tubo 1 es de 2 (㎍ / mL)Los colorantes utilizados fueron: cristal violeta, safranina, azul de metileno y verde de malaquita
II. Efecto de los colorantes en placa
*Las 3 concentraciones de los colorantes en las cajas fueron de: 1 ㎍ / mL, 0.1 ㎍ / mL y 0.01 ㎍ / mL
Resultados en tubo Laboratorio 3
Colorante
Escherichia coli Staphylococcus aureus
Dilución CMI (㎍ / mL)
Efecto Dilución CMI (㎍ / mL)
Efecto
Cristal violeta
10-1 2 bactericida
10-2 0.2 bactericida
Safranina
- >2 bactericida
10-2 0.2 bactericida
Azul de metileno
- >2 bactericida
10-2 0.2 bactericida
Verde de malaquit
a
- >2 bactericida
10-3 0.02 bactericida
CMI= Concentración mínima inhibitoria
- = Se desconoce la dilución
Resultados en tubo Laboratorio 4
Colorante
Escherichia coli Staphylococcus aureus
Dilución CMI (㎍ / mL)
Efecto Dilución CMI (㎍ / mL)
Efecto
Cristal violeta
10-2 0.2 X 10-8 2X10-7 X
Safranina
- >2 X - >2 X
Azul de metileno
- >2 X 10-1 2 X
Verde de malaquit
a
- >2 X No se sembróCMI= Concentración mínima inhibitoria
- = Se desconoce la dilución X= no se determinó
Resultados en tubo ambos laboratorios
Safranina
Dilución Escherichia coli Bacillus subtilis Staphylococcus aureus Klebsiella pneumoniae
10-4 + +/- +/- +
10-5 + +/- +/- +
10-6 + + +/- +
CMI >1μg/ml >1μg/ml >1μg/ml >1μg/ml
Cristal violeta
10-4 - - - +
10-5 - - - +
10-6 - - - +
CMI <0.01μg/ml <0.01μg/ml <0.01μg/ml >1μg/ml
Resultados en en placa Laboratorio 4
Resultados en en placa Laboratorio 3Safranina
Dilución Escherichia coli Bacillus subtilis Staphylococcus aureus Klebsiella pneumoniae
10-4 + +/- +/- +
10-5 + +/- +/- +
10-6 + + +/- +
CMI >1μg/ml <0.1μg/ml <0.1μg/ml >1μg/ml
Cristal violeta
10-4 - - - +
10-5 - - - +
10-6 - - - +
CMI <0.01μg/ml <0.01μg/ml <0.01μg/ml >1μg/ml
EvidenciasEvidencias del crecimiento con Safranina en placa
Dilución 10-6 Dilución 10-5 Dilución 10-4
Bacillus subtilis, Escherichia coli Escherichia coli (+) Escherichia coli (+) Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+)
Donde 1: Bacillus subtilis 2: Escherichia coli 3: Staphylococcus aureus 4: Klebsiella pneumoniae
EvidenciasEvidencias del crecimiento con Cristal violeta en placa
Dilución 10-6 Dilución 10-5 Dilución 10-4
Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+) Klebsiella pneumoniae (+)
Donde 1: Bacillus subtilis 2: Escherichia coli 3: Staphylococcus aureus 4: Klebsiella pneumoniae
BibliografíaFeduchi, Blasco, Romero, Yánez. Bioquímica. Conceptos
esenciales. 2010.Editorial Médica Panamericana.F. Klages.Tratado de Química Orgánica. Colorantes. 1968. Ed.
Reverté Pág 33
