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PROGRAMA DE POSTGRADO PARA DOCENTES DE EDUCACIÓN MEDIA Y TERCER CICLO, ESPECIALIDAD BIOLOGÍA
PROCESO DE DIAFANIZACIÓN
SEDE SANTA ANA BIOLOGÍA
EXPOCIENCIA DEL POSTGRADO EN BIOLOGÍA SANTA TECLA, 10 DE DICIEMBRE
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DIAFANIZACIÓN
PECES
ANFIBIOS
REPTILES
AVES
MAMIFEROS
ENTRE OTROS
ACLARAR LOS TEJIDOS DE UN ORGANISMO VERTEBRADO
PROCESO DURANTE UN PERIODO DETERMINADO,
QUE INCLUYE DIFERENTES ETAPAS
INTRODUCCIÓN
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OBJETIVO GENERAL
• Promover el interés, en los participantes sobre técnicas de laboratorio referidas a diafanización
OBJETIVO ESPECÌFICO
• Conocer los procesos que se siguen para colorear los huesos de un animal, sin utilizarla cirugía
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ESPECIMENES
• Conejos, ratones, murciélago, lagartija
• De 2-3 días de haber nacido
MATERIALES
• Envases de vidrio, según el tamaño del animal
• Pipeta, probeta, jeringas descartables, goteros
• guantes quirúrgicos
EQUIPO
• Equipo de disección (tijeras, pinza, estilete, bisturí,
• Balanza científica
MATERIALES
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PASOS
1-Preservación
o fijación
2-Clarificación o
diafanización 3-Coloración
4-Aplicación de soluciones de glicerina y
timol
PROCEDIMIENTO
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FIJACIÓN
• Formalina al 10%
• Formalina pura
CLARIFICACIÓN
• KOH al 3%.
• Agua destilada, agua oxigenada
COLORACION
• ROJO DE ALIZARINA
• Glicerina A,B,C y D, timol
REACTIVOS
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PRIMERA PARTE
PRESERVACION O FIJACION
SE SACRIFICA EL ANIMAL CON
FORMALINA
SE INYECTA FORMALINA AL
ANIMAL PARA SACRIFICARLO
MURCIELAGO POSA EN
SOLUCION DE FORMALINA AL
10%
EN DONDE PERMANECERÁ 2
SEMANAS
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EL RATONCITO POSA EN
FORMALINA AL 10% RATON TIERNO
Conejo permanece en solución
de HOK al 3% + 3 ml. de agua
oxigenada. Cada semana se
cambia la solución hasta
esclarecer los músculos y
observar los huesos
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TERCERA PARTE
COLORACIÓN DE LOS ESPECIMENES
• Se colocan los especímenes en solución de
KOH al 3 % con UNAS GOTAS de Rojo de
Alizarina hasta obtener una coloración de
vino tinto-morado),
• esta solución se dejan durante 24- 48
horas, hasta que los huesos estén
coloreados.
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• 2-CLARIFICACIÓN DIAFANIZACIÓN
* El organismo previamente fijado, se deja durante 2 horas en agua corrida O SE ENJUAGA VARIAS VECES para después diafanizarlo.
• Luego se coloca el animal en la solucion de HOK al 3% agregar 3 ml. de agua oxigenada hasta esclarecer los músculos, ver los huesos
• Esta preparación se lleva varias semanas, según el animal. La solucion se cambia cada semana.
• Conejo- murciélago -lagartija = 5 a 6 semanas
• Ratón tierno 2 semanas
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INICIA DIAFANIZACION CONEJO TIERNO DE 2 DIAS DE HABER NACIDO
EN LA SOLUCION DE KOH AL 3 % + 3 ML. DE AGUA OXIGENADA
CONEJITO POSA EN LA SOLUCION DE KOH + H202 CUARTA VEZ QUE SE LE CAMBIA LA SOLUCION
EN LA SOLUCION DE KOH + ARIZALINA
SE ENJUAGO CON AGUA DESTILADA VARIAS VECES LUEGO SE INTRODUCE EN LA SOLUCION DE KOH, PARA ESCLARECER LOS MUSCULOS
EN LA SOLUCION DE
KOH, PARA
ESCLARECER LOS
MUSCULOS
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VISTA SUPERIOR EN EL FRASCO
CASO MURCIELAGO EN SOLUCION DE
KOH+ ALISARINA
MURCIELAGO DENTRO DE LA
SOLUCION DE KOH+ ALIZARINA
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SE ENJUAGA EL ESPÉCIMEN CON AGUA DESTILADA Y SE COLOCAN EN LA
PRIMERA DE LAS 4 SERIES DE SOLUCIÓN DE GLICERINA, DONDE DEBEN ESTAR UNA SEMANA EN CADA UNA DE LAS SOLUCIONES.
CUARTA PARTE
SOLUCIÓN
A
B
C
D
GLICERINA
20ml
50ml
75ml
100 ml
KOH
3 ml
3ml
0 ml
0 ml
AGUADEST ILADA
77ml
47ml
25 ml.
0ml
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SOLUCION A
GLICERINA 20 ML
KOH 3 ML
AGUA DESTILADA 77 ML
SOLUCION B
GLICERINA 50 ML
KOH 3 ML
ADUA DESTILADA 47 ML
SOLUCION C
GLICERINA 75 ML
KOH O ML
AGUA DESTILADA 25 ML
MURCIELAGO EN
SOLUCION DE KOH AL 3%
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MURCIELAGO VISTA DE
PERFIL
MURCIELAGO VISTA DE
PERFIL 100 % GLICERINA
MURCIELAGO VISTA
SUPERIOR
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RATON POSA EN LA SOLUCION DE
KOH 3% +3 ML DE AGUA OXIGENADA
AHORA EL RATONCITO SE ENJUAGA VARIAS
VECES CON AGUA DESTILADA
LUEGO SE APLICARAN LOS PROCESOS DE LAS
PARTES A, B, C Y D DE GLICERINA KOH, MÁS
AGUA DESTILADA
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SOLUCION A CASO RATONCITO
GLICERINA 20 ML
KOH 3 ML
AGUA DESTILADA 77 ML
SOLUCION B
GLICERINA 50 ML
VISTA SUPERFICIAL
KOH 3ML
ADUA DESTILADA 47 ML
RATONCITO 100 % GLICERINA
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RATONCITO 100%
GLICERINA
VISTA SUPERIOR RATONCITO 100% GLICERINA
RATONCITO 100% GLICERINA
VISTA SUPERIOR
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CONEJITO EN LA GLICERINA VISTA SUPERIOR
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LAGARTIJA EN LA GLICERINA VISTA SUPERIOR
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CONEJITO POSA EN LA SOLUCION DE 100% DE GLICERINA
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CARLOS GRANIELO Y
CARLO CABRERA
ESTUDIANTES DE LA ESMA OBSERVAN EL
RESULTADO FINAL DE LA DIAFANIZACION
CONEJITO EN LA GLICERINA
ADOLFO JEDUVEL RODRIGUEZ,
ESTUDIANTE DE LA ESMA
DA POR TERMINADO EL TRABAJO
DE INVESTIGACION CIENTIFICA
DIAFANIZACION
TRABAJO FINALIZADO
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ESTUDIANTES DE LA ESMA SANTA ANA