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COLORACIONES ESPECIALES II
LIC. T.M. RICARDO A. SANTOS SALCEDO
UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS - FILIAL CUSCOUNIVERSIDAD ALAS PERUANAS - FILIAL CUSCO FACULTAD DE MEDICINA Y CIENCIAS DE LA SALUD FACULTAD DE MEDICINA Y CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE TECNOLOGIA MEDICAESCUELA DE TECNOLOGIA MEDICA
HISTOQUÍMICA
ESTUDIO de las SUSTANCIAS o COMPOSICION QUIMICAS de los TEJIDOS O CORTES (Glucógeno, cationes, lípido, etc.) utilizando Métodos de análisis Variado ( Técnicas Histológicas); ósea permite la identificación y localización en las células y tejidos de compuestos radicales químicas, formando productos insolubles que son coloreados y visualizados por el microscopio.
PRINCIPIOS BASICOS DE LA HISTOQUIMICA:
1. Los COMPUESTOS que deben ser analizados NO SON DIFUSIBLES. Proceso de insolubilización del compuesto que va a ser estudiado.
2. El PRODUCTO DE LA REACCION debe ser INSOLUBLE. Evita su difusión en la solución de los reactivos o migración.
3. El METODO utilizado es ESPECIFICO PARA LA SUSTANCIA o grupo químico que se va analizando. Favoreciendo la interpretación de los resultados obtenidos.
* En algunas Reacciones Histoquímicas la INTENSIDAD del COLOR producido es PROPORCIONAL a la CC. de la sustancia analizada.
PRINCIPALES SUSTANCIAS DEMOSTRABLES HISTOQUIMICAMENTE:
1. CARBOHIDRATOS: Demostración de GLUCOGENO (Polisacáridos) por el Método de COLORACION de PAS (Reacción Acido Peryodico de Schiff), entre otros.
2. LIPIDOS: Demostración de GRASAS NEUTRAS por el Método de COLORACION con SUDAN III o IV entre otros.
3. FOSFOLIPIDOS: Demostración de la presencia de FOSFOLIPIDOS por el Método de SUDAN BLACK (Sudan Negro).
4. AMILOIDES: Demostración de AMILOIDES por el Método de ROJO CONGO BENNHOLD.
5. HIERRO: Demostración de HIERRO TRIVALENTE por el Método de PERLS (Azul de Prusia).
6. CALCIO: Demostración de depósitos insolubles DE CALCIO por el Método de VON KOSSA.
7. PIGMENTOS MELÁNICOS: Demostración de PIGMENTOS MELANINICOS por el Método de MASSON FONTANA.
AMILOIDE
Depósito hialino y trasparente que no es normal.
Formado en enfermedades diversas
Llamado por Romanosky (1842) enfermedad Landacea.
Virchow en 1854 tiñe de azul con una mezcla de iodo y ac. sulfúrico
Es deposito proteico patológico en espacios extracelulares de tejidos y órganos del cuerpo.
Naturaleza Física del amiloide
-Fibrillas no ramificadas.
- Componente P.
Constitución Química
- Proteínas.- fibrilares (91%)
AL
AA
-Glicoproteinas
- Glucosaminoglicanos ácidos
COLORACION METODO DE ROJO CONGO BENNHOLD
I.- OBJETIVO: DEMOSTRACION de AMILOIDE en CORTES DE TEJIDOS HISTOLOGICOS.
II.- RESULTADOS: AMILOIDE PRIMARIO………….......AMARILLO AMILOIDE SECUNDARIO……ROJO O NARANJAAL MICOROSCOPIO DE POLARIZACION……………..VERDE ESMERALDA
COLORACION ROJO CONGO DE BENNHOL
Amiloide primario = Amarillo
COLORACION METODO DEL CARMIN DE BEST
I.- OBJETIVO: DEMOSTRAR la presencia de GLUCOGENO en CORTES DE TEJIDOS HISTOLOGICOS.
II.- RESULTADOS: GLUCOGENO………………………. ROJO; La lamina sometida a digestión con amilasa salival no debe presentar coloración positiva, NUCLEO …………………………..… AZUL
COLORACION SUDAN III O IV
I.- OBJETIVOS: DEMOSTRACION de GRASA NEUTRA en CORTES DE TEJIDOS HISTOLOGICOS.
II.- FIJACION: Tejidos frescos o fijadas por el Liquido de Backer.
III.- MICROTOMIA: 4 – 8 u (congelación)
IV.- REACTIVOSIV.- REACTIVOS- - Solución colorante de sudan Solución colorante de sudan - Alcohol al 70% - Alcohol al 70% - Alcohol al 50 %- Alcohol al 50 %- Solución colorante de hematoxilina de Harris- Solución colorante de hematoxilina de Harris- Gelatina Glicerinada. - Gelatina Glicerinada.
V.- RESULTADOS:V.- RESULTADOS:GRASAS NEUTRAS ………...… NARANJA (Sudan GRASAS NEUTRAS ………...… NARANJA (Sudan III) .GRASASN NEUTRAS………....ROJO (Sudan III) .GRASASN NEUTRAS………....ROJO (Sudan IV )IV )NUCLEOS …………………………..AZULNUCLEOS …………………………..AZUL
Grasa neutra = Naranja (sudan III)Grasa neutra = Rojo (sudan IV)Núcleos : Azules
COLORACION SUDAN III - IV
COLORACION SUDAN III
COLORACION DE VON KOSSADepósitos de calcio = Negro o marrón oscuro
Núcleos = Morado Citoplasma : Rosado
COLORACION DE MASSON FONTANAPigmentos melaninicos y sustancias argentafines = Negro
Núcleos = MoradoCitoplasma = Rosado
METODO DE METODO DE COLORACIÓNCOLORACIÓN
OBJETIVO O OBJETIVO O PROPÓSITOPROPÓSITO
RESULTADOSRESULTADOS
PAS (ACIDO PAS (ACIDO PERYODICO DE PERYODICO DE SCHIFF)SCHIFF)
GLUCOGENO GLUCOGENO
(POLISACARIDOS, (POLISACARIDOS, CELULAS CELULAS MUCOSAS Y MUCOSAS Y MEMBRANA MEMBRANA BASAL)BASAL)
Glucógeno = Rojo a Glucógeno = Rojo a púrpurapúrpura
Mucina y membrana Mucina y membrana basal = Rojo a basal = Rojo a púrpura.púrpura.
Núcleos = AzulNúcleos = Azul
Hongos = Rojo a Hongos = Rojo a púrpurapúrpura
ALCIAN BLUE ALCIAN BLUE
(AZUL ALCIANO)(AZUL ALCIANO)GlucosaminoglicanoGlucosaminoglicanos Ácidos Sulfatados s Ácidos Sulfatados y no sulfatados y no sulfatados
Glucosaminoglicanos Glucosaminoglicanos Ácidos Sulfatados y no Ácidos Sulfatados y no sulfatados = Azul sulfatados = Azul verdosoverdoso
Núcleo = MoradoNúcleo = Morado
HIERRO HIERRO COLOIDAL DE COLOIDAL DE HALEHALE
GlucosaminoglicanoGlucosaminoglicanos Ácidos Sulfatados s Ácidos Sulfatados y no sulfatados y no sulfatados
Glucosaminoglicanos Glucosaminoglicanos Ácidos Sulfatados y no Ácidos Sulfatados y no sulfatados = Azul sulfatados = Azul turquesa intensoturquesa intenso
Núcleos = Azul Núcleos = Azul
Citoplasma = RosadoCitoplasma = Rosado
COLORACIONES HISTOQUIMICA
CARMIN DE BESTCARMIN DE BEST GlucogenoGlucogeno Glucogeno = Rojo Glucogeno = Rojo
Núcleos = AzulNúcleos = Azul
SUDAN III ó IVSUDAN III ó IV Grasas neutrasGrasas neutras Grasas neutras = Grasas neutras = NaranjaNaranja
(sudan III)(sudan III)
Grasas neutras = Grasas neutras = RojoRojo
sudan IVsudan IV
Núcleos = AzulNúcleos = Azul
SUDAN BLACK B SUDAN BLACK B (SUDAN NEGRO)(SUDAN NEGRO)
Fosfolípidos Fosfolípidos Fosfolípidos = Negro Fosfolípidos = Negro
Núcleos = Rojo Núcleos = Rojo
ROJO CONGO DE ROJO CONGO DE BENNHOLBENNHOL
Amiloide Amiloide Amiloide primario = Amiloide primario = AmarilloAmarillo
Amiloide segundario Amiloide segundario = negativo al color = negativo al color amarilloamarillo
PERLSPERLS Depósito de hierro Depósito de hierro trivalentetrivalente
Depósito de hierro Depósito de hierro trivalente = azul trivalente = azul turquesaturquesa
Núcleos = moradoNúcleos = morado
Citoplasma = rosadoCitoplasma = rosado
VON KOSSA VON KOSSA Depósito Depósito insoluble de insoluble de calciocalcio
Depósito de calcio = Depósito de calcio = negro ó marrón oscuro.negro ó marrón oscuro.
Núcleos = moradoNúcleos = morado
Citoplasma = rosadoCitoplasma = rosado
MASSON MASSON FONTANAFONTANA
Pigmentos Pigmentos melaninicosmelaninicos
Pigmentos melaninicos Pigmentos melaninicos y sustancias y sustancias argentafines = negroargentafines = negroNúcleos = moradoNúcleos = morado
Citoplasma = rosadoCitoplasma = rosado
FEULGENFEULGEN Ácido Ácido dexosiribonucldexosiribonucleicoeico
Ácido Ácido dexosiribonucleico del dexosiribonucleico del núcleo = rojo púrpuranúcleo = rojo púrpuraCitoplasma = rosadoCitoplasma = rosado