“Año de la Diversificación Productiva y del
Fortalecimiento de la Educación”
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO
FACUTAD DE INGENIERIA AMBIENTALY DE RECURSOS NATURALES
Biorremediacion de suelos contaminados por hidrocarburos
ALUMMNOS:
Rojas Ibarra Benilde
Ramírez Pérez, Katty
Ostos Vigo, Katherine
Augusto José Orihuela
1
2
ÍNDICE
Contenidoíndice.........................................................................................................................................2
INTRODUCCION...................................................................................................................3
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA...........................................................4
1.1. IDENTIFICACION Y DESCRIPCION DEL PROBLEMA..............4
1.2. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA........................................................4
1.3 OBJETIVOS................................................................................................................4
1.3.1 OBJETIVO GENERAL...................................................................................4
1.3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS........................................................................4
1.4 JUSTIFICACION DEL PROBLEMA................................................................5
1.5 LIMITACIONES.......................................................................................................5
2. MARCO TEORICO......................................................................................................5
2.1 SUELOS CONTAMINADOS POR HIDROCARBUROS.....................5
2.1.1 El suelo............................................................................................................5
2.1.2 Suelos contaminados por hidrocarburos.....................................6
2.2 HIDROCARBUROS................................................................................................8
1.1. Composición del suelo................................................................................................9
2.2.1 HIDROCARBUROS BIOGÉNICOS.......................................................10
2.2.2 . HIDROCARBUROS ANTRÓPICOS....................................................10
2.2.3 ACEITES LUBRICANTES.........................................................................10
2.3 DESCRIPCION BOTANICA DEL HONGO............................................11
2.4 CARACTERISTICAS DEL Pleurotos ostreatus sp...........................12
3. DESCRIPCION BOTANICA DE PLANTA..................................................13
3.2 FENOLOGÍA........................................................................................................13
3.3 FORMA DE RECOLECCIÓN............................................................................14
3.4 CULTIVO DE Aloe arborescens Mill.........................................................14
4. HIPOTESIS Y VARIABLES..................................................................................14
IDENTIFICACIÓN Y DEFINICIÓN CONCEPTUAL DE VARIABLES................14
7. PARTE EXPERIMENTAL......................................................................................16
7.1 FASE LABORATORIO.....................................................................................16
3
7.1.1.2 PROCEDIMIENTO.......................................................................................16
7.1.2 PREPARACION DE INOCULOS............................................................17
8. RESULTADOS........................................................................................................18
8.1 DETERMINACION DE LAS CONCENTRACIONES.........................18
8.2.3 PARAMETRO TEMPERATURA..............................................................25
9.1.3 PARAMETRO TEMPERATURA..............................................................33
10. CONCLUSIONES..................................................................................................37
11. RECOMENDACIONES.......................................................................................37
REFERENCIALES.............................................................................................................38
ANEXO I:................................................................................................................................39
4
INTRODUCCION
Perú, un país con una antigua tradición minera que se extiende hasta la
actualidad y que gracias a este potencial se posiciona entre los mejores del
mundo en materia de industria extractiva. A nivel mundial y
latinoamericano el Perú se ubica entre los primeros productores de
diversos metales, (oro, plata, cobre, plomo, zinc, hierro, estaño, molibdeno,
teluro, entre otros), lo cual es reflejo de la abundancia de recursos y la
capacidad de producción de la actividad minera peruana.
La contaminación por hidrocarburos y metales pesados que afecta
significativamente a los suelos y tal magnitud depende del área
contaminada y tipo de hidrocarburo. Tal es el caso ocurrido en la región
Loreto, Tramo I del oleoducto Norperuano cerca de 10 mil barriles de
petróleo se derramaron en un suelo que ahora es inutilizable.
De todas las técnicas posibles para la descontaminación de un suelo a
tratar, merecen mejor atención los de degradación biológica ya que son
útiles para muchos tipos de residuos orgánicos.
Son procesos naturales que además no generar un impacto sobre el
ecosistema también se puede realizar a un bajo costo. Esto genera muchos
beneficios debido a que mayormente se puede realizar en el mismo sitio
con lo cual se elimina el riesgo que puede causar el transportar materiales
peligrosos.
Debido a su capacidad enzimática, los hongos constituyen uno de los
grupos más importantes. El Pleurotus ostreatus sp ha sido ampliamente
estudiado, demostrando su importancia degradadora de suelos
contaminados por metales pesados (Cd, Zn, Pb)
Está presente investigación es tanto innovadora ya que radica en el uso de
hongos para remediar suelos contaminados por petróleo con ayuda de una
planta. La simbiosis en ambos es lo que se desea investigar para
posteriores estudios.
5
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1.1. IDENTIFICACION Y DESCRIPCION DEL PROBLEMA
En los últimos años se han implementado una serie de tecnologías
para remediar los suelos contaminados por hidrocarburos, de estas,
la biorremediación ha mostrado mayor eficiencia en la degradación
de los contaminantes hasta formas menos toxicas, mitigando el
impacto ambiental.
1.2. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
En la actualidad existen muchos problemas ambientales por derrame
de petróleo crudo, sin solución efectiva. Por ello al realizar este
estudio se plantea una posición para solucionar tal impacto.1 Tanto el
Pleurotos ostreatus sp como el Aloe arborescens Mill son
remediadores de suelos contaminados por metales pesado e
hidrocarburos pero, qué pasaría si existiera ¿La simbiosis entre el
Pleurotos ostreatus sp y el Aloe arborescens Mill serían una
herramienta eficiente para remediar suelos contaminados por
hidrocarburos?
1.3 OBJETIVOS
1.3.1 OBJETIVO GENERAL
Biorremediar suelos contaminados por hidrocarburos (Fracción de
hidrocarburos F2 (C10-C28)) estudiando el simbiosis entre el hongo
Pleurotos ostreatus sp y el Aloe arborescens Mill.
1 Biorremediación de suelos contaminados Por Katherine Torres DelgadoTatiana Zuluaga Montoya
6
1.3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
1) Determinar el grado de concentración del suelo contaminado
por hidrocarburos.
2) Efectuar pruebas de laboratorio para determinar la
biorremediacion utilizando el hongo Pleurotos ostreatus sp.
3) Estudiar el comportamiento de la simbiosis frente a las
distintas concentraciones de plomo en la parcela y sobre la
calidad de suelo
1.4 JUSTIFICACION DEL PROBLEMA
Las actividades extractivas pueden ocasionar graves daños
ambientales, propiciando la erosión y contaminación del suelo con
hidrocarburos. La biorremediación es una alternativa que ofrece un
bajo costo. Esta técnica incluye diferentes procesos tecnológicos que
permiten la recuperación de suelos contaminados mediante el cultivo
de plantas y la adaptación de hongos; por lo cual es necesario
conocer la eficiencia de cada especie para acumular metales en sus
tejidos y su resistencia a diferentes concentraciones de
contaminantes, así como las condiciones necesarias para el cultivo y
desarrollo de las especies que favorezcan la biorremediación de un
suelo contaminado.
1.5 LIMITACIONES
1) Medir la concentración del suelo contaminado antes de iniciar
la biorremediacion y posteriormente requiere un costo
elevado. Por lo que se hizo referencia en proyectos anteriores
afines a este.
2) Obtención de equipos para la medición de algunos parámetros
2. MARCO TEORICO
2.1 SUELOS CONTAMINADOS POR HIDROCARBUROS
2.1.1 El suelo
7
El suelo constituye la capa superficial del manto terrestre y su
profundidad es variable. Está formado por partículas minerales,
organismos vivos, materia orgánica, agua y sales. La mayoría de los
componentes provienen de la meteorización de rocas,
descomposición de restos vegetales y acción de microorganismos,
formando uno de los recursos naturales más importantes del planeta.
El suelo es un medio altamente complejo, formado, prevalentemente
por tres fases: sólida (50%), líquida y gaseosa. Estas tres fases se
pueden organizar de muy diferentes formas, adquiriendo diversas
proporciones para dar lugar a centenares de tipos de suelos.
Una de las formas de clasificación de suelos es mediante el tamaño
de las partículas que forman su fase sólida, tal y como se puede
observar en la tabla adjunta
Tabla 1: Clasificación de suelos según el tamaño de partículas
La materia orgánica y los compuestos minerales se organizan en el
espacio generando una estructura porosa, donde puede haber agua o
aire. En el agua contenida en estos poros hay sales minerales y
nutrientes y, por lo tanto, es el medio donde se puede desarrollar la
actividad metabólica de los microorganismos que habitan el suelo.
Figura 1. Esquema de la disposición en el espacio de los agregados constituyentes de
un suelo
8
2.1.2 Suelos contaminados por hidrocarburos
Los procesos de combustión dan lugar a un tipo de contaminación
difusa que afecta mayoritariamente a la atmósfera, pero que a causa
de procesos de precipitación y lixiviado se puede acumular en suelos
y sedimentos. En cambio, las actividades de producción, transporte y
utilización de combustibles fósiles dan lugar a emplazamientos
definidos, con la posibilidad de la existencia de un alto grado de
contaminación.
9
Los hidrocarburos se encuentran en el suelo en forma de mezclas
complejas que suelen constituir fases líquidas no acuosas.
Los crudos de petróleo son mezclas formadas por diversos miles de
compuestos, mayoritariamente hidrocarburos, formado a partir de la
fosilización o diagénesis sufrida por restos orgánicos sometidos a
condiciones de elevada presión y temperatura durante millones de
años. Así mismo, contienen derivados heteroatómicos sulfurados,
nitrogenados y oxigenados, en menor medida, y también metales
como hierro, vanadio, níquel, en forma de complejos
organometálicos. La composición química de crudos procedentes de
diversas regiones puede presentar gran variabilidad, aunque
siempre son las mismas familias de hidrocarburos, en mayor o menor
medida, las presentes en la mezcla de compuestos:
• Hidrocarburos saturados, básicamente n-alcanos e
isoprenoides pero también ciclo alcanos. Contienen el número
máximo de hidrógenos posibles.
• Hidrocarburos aromáticos, mono (con un anillo bencénico) o
policíclicos (con más de uno) y/o con sustituyentes alquilados,
representan entre un 1 y un 20% de los hidrocarburos totales
en la mayoría de crudos.
• Compuestos polares (resinas y asfaltenos), más pesantes,
con azufre, nitrógeno y/o oxígeno y pueden contener también
metales
10
Figura 2: Estructuras químicas de diferentes componentes mayoritarios del
petróleo crudo
A partir de la destilación del crudo de petróleo, se producen
diferentes fracciones, como se puede observar en la tabla 2. Conocer
las diferencias entre los hidrocarburos que forman estas fracciones
es imprescindible para entender su destino ambiental y para prever
la dificultad que implicaría en un proceso de biorremediación. Estas
diferencias, a nivel estructural, conducen a diferentes
comportamientos en relación a la adsorción a las partículas del suelo
y solubilidad en el agua, entre otros procesos que harán de la
descontaminación, un proceso más o menos complicado y/o costoso.
El crudo se destila a temperaturas crecientes y como más elevada es
la temperatura, más carbonos tienen los hidrocarburos que se
obtienen y diferentes sus usos así como su peligrosidad y
recalcitrancia como contaminantes.
11
Tabla 2: Fracciones que se pueden obtener en la destilación fraccionada de un crudo
de petróleo.
2.2 HIDROCARBUROS
Los hidrocarburos son compuestos formados por átomos de carbono
e hidrógeno, de gran abundancia en la naturaleza, presentes
principalmente en el petróleo. El número de carbonos y su
estructura química determina su clasificación. Los hidrocarburos
alifáticos son de cadena lineal o ramificada y pueden ser saturados
(alcanos) o insaturados (alquenos y alquinos). Los hidrocarburos de
cadenas cíclicas, pueden ser saturados (ciclo alcanos) o con uno o
más anillos bencénicos (aromáticos).
1.1. Composición del sueloLa matriz de un suelo está compuesta por cinco componentes principales:
Minerales. Los materiales minerales constituyen los principales
componentes Estructurales de los suelos y suponen más del 50% del
volumen total. Aire – agua. Conjuntamente constituyen el volumen de
poros, que, por lo general, ocupa entre el 25 y 50% del volumen total. La
proporción aire – agua varíaconsiderablemente con la humedad del suelo.
Organismos vivos. Ocupan menos del 1% del volumen.Materia orgánica.
Oscilan entre el 3 y 6% del volumen, con valor medio.1.1.1. La fracción
12
mineral. El mineral predominante en un suelo es el dióxido de silicio
(SiO2). Igualmente se encuentran en abundancia el aluminio y el hierro,
mientras que el calcio, magnesio, potasio, titanio, manganeso, nitrógeno,
azufre, sodio y fósforo están presentes en menor cuantía (Alexander, 1991).
La Composición química varía de un suelo a otro y, en un mismo suelo, a
diferentes profundidades. Los microorganismos obtienen parte de los
nutrientes que necesitan de la fracción mineral del suelo, siendo dichos
nutrientes nitrógeno, fósforo, potasio, magnesio, azufre, hierro, calcio,
manganeso, zinc, cobre y molibdeno. Sin embargo los microorganismos
pueden disponer con facilidad únicamente de una pequeña parte de estos
minerales, convirtiéndolos más en una provisión de lento empleo, que en
una fuente de rápido uso. Los suelos se clasifican según el tamaño de sus
partículas2 teniendo en cuenta tres componentes principales:
Arcilla. Pasa por un tamiz de 0,002 mm (2 m).
Limo. Queda retenido en el tamiz de 0,002 mm pero pasa a través
del tamiz de 0,05 mm.
Arena. Queda retenida en el tamiz de 0,05mm aunque pasa a través
del de 2mm23
El área específica (área/volumen) de los diferentes tipos de partículas
afecta directamente las propiedades físicas, químicas y biológicas del suelo
(Tabla
1.1). La arcilla constituye el tipo de partícula que mayor efecto produce
sobre
Las propiedades de un suelo, principalmente debido a la alta actividad
superficial que la caracteriza. La mayor parte de sus partículas son de
naturaleza coloidal, tienen una carga superficial negativa y de forma plana;
además, son buenos absorbentes de agua, iones y gases.
2.2.1 HIDROCARBUROS BIOGÉNICOS
2 En general, la clasificación según tamaños está basada en el análisis granulométrico que proporciona el Departamento de Agricultura de los Estados Unidos (USDA3 2 Aquellas partículas que quedan retenidas en el tamiz de 2mm de paso se clasifican como grava o piedra.
13
Estos son sintetizados por casi todas las plantas, animales terrestres
y marinos, incluyendo la micro biota, bacterias, plancton marino,
diatomeas, algas y plantas superiores (Bedair & Al-Saad, 1992). La
síntesis de este tipo de hidrocarburos está controlada por rutas
metabólicas, lo cual trae como resultado mezclas de compuestos de
limitada complejidad estructural relacionada directamente con la
función biológica específica.
2.2.2 . HIDROCARBUROS ANTRÓPICOS
Son aquellos introducidos como resultado de cualquier tipo de
actividad humana. Los procesos de combustión industrial
contribuyen con niveles altos, debido al humo generado por carbón,
combustibles fósiles y petróleo refinado, las descargas de aguas
municipales, las actividades de transporte y los derrames son
algunas de las principales fuentes de estos contaminantes.4
2.2.3 ACEITES LUBRICANTES
Los aceites lubricantes están constituidos por una base lubricante y
una serie de aditivos. Dependiendo del uso del aceite, la base
lubricante será mineral (proveniente del petróleo crudo), sintética o
vegetal, siendo el uso mayoritario las bases lubricantes minerales.
Básicamente son una mezcla de hidrocarburos parafínicos,
naftenicos y aromáticos obtenidos por destilación de crudos
petrolíferos (aceites minerales) o por síntesis a partir de productos
petroquímicos (aceites sintéticos). La variación en la proporción de
los diferentes tipos de hidrocarburos en la mezcla determina las
características físicas y químicas de los aceites.
Una alta fracción de hidrocarburos parafínicos confiere al aceite una
mayor resistencia a la oxidación, mientras que un alto contenido de
hidrocarburos aromáticos favorece la estabilidad térmica. Para
mejorar las características del aceite es común añadir aditivos (Tabla
1), en proporciones de un 15 y un 25% en volumen de producto
4 Maestría en Ciencias del Ambiente Alternativa de biorremediación con bacterias autóctonas de sedimento contaminado de la Laguna de Tamiahua, Veracruz, México.Biol. Wendy Lizbeth Mendo Pascual
14
terminado estos son de distinta naturaleza y confieren al aceite
propiedades específicas.
Tabla 3. Valores típicos de composición de los aceites minerales,
indicando la función de diferentes aditivos
2.3 DESCRIPCION BOTANICA DEL HONGO
Es fundamental que el hongo que se va a cultivar se identifique
correctamente desde el punto taxonómico, ya que de ello
dependerán las técnicas que se utilizaran en el cultivo.
Nombre científico: Pleurotos ostreatus sp
Nombre comunes: Setas, hongo ostra, orejas blanca, orejas de
palo.
Sistemática: La identificación de las distintas especies de hongos es
necesaria para decidir si son o no apropiadas para el consumo.
Taxonomía:
Reino: Fungí
Subreino: Fungí superior
Clase: Basidiomycetos
15
Subclase: Eubasidiomycetos
Orden: Agaricales
Familia: Pleurotaceae
Género: Pleorotus
Especie: Ostreatus
2.4 CARACTERISTICAS DEL Pleurotos ostreatus sp
La producción de este hongo es el resultado de la utilización de
los residuales de fácil biodegradación, la cual en una ambiente
particular requiere de la presencia de los microorganismos
apropiados, que en mucha ocasiones pueden consistir en una
comunidad microbiana compleja. 5
Para que esto suceda el ambiente debe ser apto tanto pare l
crecimiento de los microorganismos como para la producción de
reacciones químicos de transformación n velocidades
significativas.
Hay que tener en cuenta factores que son muy importantes en lo
que se citan: características del sustrato, concentración de
nutriente, temperatura, pH, humedad, entre otros.
Las ventajas de cultivas Pleurotus, con respecto a otros hongos
son las siguientes:
Son agentes biológicos capaces de convertir la materia
orgánica no comestible y de bajo valor económico en un
producto con un importante valor agregado.
No se requiere de sustratos preformados. Se pueden cultivar
en sustratos sin fermentar previamente.
Fructifica bien en residuos con bajo contenido de nitrógeno
produciendo frutos con alto contenido de ese elemento.
Se caracteriza por un rápido crecimiento micelial que facilita
una colonización activa de residuos lignocelulosicos y otro tipo
de residuos contaminantes.
5 file:///C:/Users/compumega/Downloads/T72379.pdf evaluación de la producción del hongo pleurotos ostreatus sobre cinco tipos de sustratos
16
Pueden tolerar altas concentraciones de CO2 en la atmosfera
ambiental.
2.5 GENERALIDADES SOBRE SU CULTIVO
El cultivo de esta seta es posible realizarlo con diferentes
técnicas, pero en todas ellas lo fundamental consiste en sembrar
el micelio sobre un sustrato humedito (casi siempre
pasteurizado), incubarlo a 20-25° C, mientras permanece cubierto
con plástico y, por último, mantenerlo descubierto en sitios muy
húmedos y frescos, generalmente a , menos de 15 °C, hasta que
salgan las setas.
2.6 SIEMBRA E INCUBACION
La siembra consiste en mezclar el micelio con el sustrato ya
preparado de un modo uniforme. La cantidad de micelio
comercial varía entre 1 y 4 % del peso húmedo. A mayor
cantidad el desarrollo del hongo será más rápido y abundante
pero la temperatura también será mayor, lo que perjudicara el
desarrollo del micelio.
El micelio se prepara en laboratorio, germinando las esporas en
placas con agar maltosa u otros medios de cultivo. Después se
hace crecer sobre granos de cereales esterilizados, y una vez
colonizados se realiza la incubación en un ambiente cerrado para
evitar la contaminación o la deshidratación y para mantener la
humedad de 85%.
La duración de esta etapa puede variar, pero en general es de
cuatro semanas, tiempo que tarda el micelio en cubrir toda la caja
y empezar a aparecer unos puntos pequeños y en cantidad
llamados primordios ya que indican que es el momento de
llevarlas a fructificación.
3. DESCRIPCION BOTANICA DE PLANTA
3.1 DESCRIPCIÓN
Hierba carnosa generalmente de 50-70 cm de altura. De la parte
basal surgen varios tallos formando un "plantón". Hojas
agrupadas hacia el extremo de los tallos, de 30-40 cm de
17
longitud, con el borde espinoso-dentado. Flores tubulares,
colgantes, rojas, agrupadas en espigas situadas en el extremo de
cortos escapos. Fruto capsular, dehiscente.
3.2 FENOLOGÍA
Flores entre septiembre y diciembre por espacio de unas 9
semanas. Es perenne.
3.3 FORMA DE RECOLECCIÓN
Tomar hojas bien desarrolladas y sanas. Lavar antes de consumir.
Utilizar preferentemente frescas o conservarlas en frío.
3.4 CULTIVO DE Aloe arborescens Mill.
Se multiplica por propágulos o "hijos", los que se localizan
alrededor de la planta "madre". Presenta pocas exigencias
culturales, por lo que desarrolla bien en todo tipo de suelo ligero.
Requiere ser cultivada a pleno sol y puede ser plantada en
macetas.
4. HIPOTESIS Y VARIABLES
4.1 FORMULACION DE HIPOTESIS
El sinergismo entre el son una herramienta eficiente para
remediar suelos contaminados por hidrocarburos
IDENTIFICACIÓN Y DEFINICIÓN CONCEPTUAL DE VARIABLES
4.1.1 VARIABLE INDEPENDIENTE (X)
X= Simbiosis
4.1.2 VARIABLES DEPENDIENTE (Y)
Y= Suelos contaminados por hidrocarburos
4.1.3 OPERACIONALIZACION DE LAS VARIABLES
18
VARIABLE DEFINICION CONCEPTUAL
DEFINICION OPERACIONAL
INDICADORES
VARIABLE INDEPENDIENT
E
Sinergismo
Se aplica a la interacción biológica, a
la relación estrecha y persistente entre
organismos de diferentes especies.
Propiedad de cómo se
relacionan el hongo y la planta
para utilizarse para un mismo fin.
1. pH 2. Temperatura
3. Humedad
VARIABLE DEPENDIENTE
Suelos contaminados
por hidrocarburos
Son suelos que han sido alterados en su
composición química y física limitando sus
propiedades afines.
Cambio de la concentración del
suelo por hidrocarburo
alterando su uso.
1. Concentración
de hidrocarburo
(F2)
5. METODOLOGIA DE LA INVESTIGACION
5.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN
El presente trabajo se realizará de investigación experimental
5.2 DISEÑO DE INVESTIGACIÓN
Este proyecto es experimental.
5.3 COBERTURA DE LA INVESTIGACIÓN
El trabajo de investigación se efectuara por cuatro personas que por
consiguiente serán responsables del proyecto “Biorremediacion de suelos
contaminados por hidrocarburos mediante fitosimbiosis entre el hongo
Pleurotos ostreatus sp y el Aloe arborescens Mill.”
5.4 POBLACIÓN Y MUESTRA
El universo del presente trabajo serán las cinco orificios cilíndricos que se
realizó en la parcela, y nuestra muestra será la cantidad de contaminante
que absorbe el hongo Pleurotos ostreatus sp y el Aloe arborescens Mill.
6. LUGAR DE INVESTIGACION
19
El proyecto de investigación se llevó a cabo en parcela experimental en los
alrededores de la Facultad de Administración, ubicada en la Universidad
Nacional del Callao, cuyas coordenadas son 10º 15` de latitud S, 77º47'`
de longitud W y cuya altitud es de 5 m.s.n.m.
Figura 3: Ubicación del lugar de investigación
7. PARTE EXPERIMENTAL
7.1 FASE LABORATORIO
7.1.1 REACTIVACION DEL MICELIO Pleurotos ostreatus sp
Los hongos necesitan nutrientes ricos en carbono, por esta razón se escogió el Agar Agar debido a su alto contenido de dextrosa (fuente de C)
7.1.1.1 MATERIALES Y EQUIPOS
Cepa de Pleurotos ostreatus sp 5 Placas Petri 1 pinza Agua destilada Estufa de cultivo 2 Vasos precipitados Matraz Autoclave Agua de jardín o agua de grass
7.1.1.2 PROCEDIMIENTO
20
Preparar el medio de cultivo
Preparar 300 ml en 5 placas Petri o 25 ml en cada una
Preparar el medio de cultivo con el agua de jardín o de grass
Pesar 50 g del agua de jardín o de grass Colocarlo en un Matraz de 500 ml (agua hasta 300 ml) Hervir hasta que se evapore Filtrar el grass que queda Disolver todo el medio de cultivo
Sembrar sobre las 5 placas con Agar Verter el agua de grass en las 5 placas con Agar
Crecimiento de la cepa en las 5 placas con Agar Aislar la cepa en las 5 placas con Agar Introducir en la incubadora por 3 a 5 días Esperar a que invada por toda la placa Petri
7.1.2 PREPARACION DE INOCULOS
El sustrato es el material sobre el cual crece el micelio. Las propiedades físicas y químicas del sustrato son las que determinan que hongos o que microorganismos pueden crecer en él. Como sustrato se utilizó granos de arroz.
7.1.2.1 MATERIALES Y EQUIPOS
Medio kilo de arroz Una estufa Un matraz Una olla 1 litro de agua destilada Bolsas herméticas Sulfato de Calcio Pinza
7.1.2.2 PROCEDIMIENTO
Preparar el sustrato Escoger los granos de arroz Remojar el arroz en agua caliente durante 15 minutos
21
Pesar 150 g para cada bolsa hermética que se usara. Esterilizar en autoclave (20 min a 121 °C)
Inocular la cepa en el sustrato Echar la muestra de la cepa que está en la placa Petri a
cada bolsa hermética que contiene el arroz Introducir en la incubadora para su crecimiento Esperar a que invada todo el cereal listo para el
proyecto.
7.2 FASE CAMPO
7.2.1 ACONDICIONAMIENTO DEL AREA DE TRABAJO
Reconocimiento del área de estudio y habilitación Limpiar el área de trabajo Se removió la tierra de la parcela Excavar los hoyos en el área de trabajo Formación de cercos vivos Delimitar el área con cuerdas Tamizar la tierra
7.2.2 PREPARACION DE LOS MATERIALES
Incubar el hongo en la parcela Sembrar el Aloe arborescens Mill.
8. RESULTADOS
8.1 DETERMINACION DE LAS CONCENTRACIONES
Dimensiones del lugar de trabajo:
22
C1
C2
C3
Blanco
2,8 m
3,00 m
Dimensiones de cada orificio
Foto1: Ubicación de las muestras en el lugar del trabajo
23
C4
D= 0,60 m
D= 0. 70 m
50 cm 50 cm
C1 C2
Siendo
C1 = 1000 mg /kg MS
C2 = 1100 mg /kg MS
C3= 1200 mg /kg MS
C4= 1300 mg /kg MS
8.2 MEDICION DE LOS PARAMETROS
8.2.1 PARÁMETRO pH
Se utiliza un potenciómetro calibrado para la medición de los parámetros en el orificio C1
24
Blanco
C4C3
La medición de parámetro se hace en el mismo lugar Se obtuvieron los siguientes resultados
Para la C1
Para la C2
25
Fecha Blanco C1
02 de Mayo 7,53 8,2309 de Mayo 7,52 8,1611 de Mayo 7,52 7,5613 de Mayo 7,51 7,4615 de Mayo 7,5 7,2116 de Mayo 7,49 7,1919 de Mayo 7,47 6,7121 de Mayo 7,42 6,6523 de Mayo 7,39 6,5525 de Mayo 7,36 6,4227 de Mayo 7,34 6,2329 de Mayo 7,32 6,1930 de Mayo 7,33 6,211 de Junio 7,3 6,323 de Junio 7,31 6,495 de Junio 7,27 6,618 de Junio 7,23 6,659 de Junio 7,21 6,6912 de Junio 7,22 6,7013 de Junio 7,24 6,7216 de Junio 7,25 6,7518 de Junio 7,27 6,7919 de Junio 7,31 6,81
Fecha Blanco C2
02 de Mayo 7,53 8,2209 de Mayo 7,52 8,1811 de Mayo 7,52 7,6613 de Mayo 7,51 7,5415 de Mayo 7,5 7,3216 de Mayo 7,49 7,1119 de Mayo 7,47 6,8121 de Mayo 7,42 6,7623 de Mayo 7,39 6,5325 de Mayo 7,36 6,3127 de Mayo 7,34 6,3829 de Mayo 7,32 6,4530 de Mayo 7,33 6,531 de Junio 7,3 6,693 de Junio 7,31 6,715 de Junio 7,27 6,778 de Junio 7,23 6,819 de Junio 7,21 6,8312 de Junio 7,22 6,8513 de Junio 7,24 6,8716 de Junio 7,25 6,9118 de Junio 7,27 6,9719 de Junio 7,31 7,04
Para la C3
26
Fecha Blanco C4
23 de Mayo 7,39 8,3525 de Mayo 7,36 7,3127 de Mayo 7,34 6,8729 de Mayo 7,32 6,6930 de Mayo 7,33 6,581 de Junio 7,3 6,653 de Junio 7,31 6,755 de Junio 7,27 6,798 de Junio 7,23 7,719 de Junio 7,21 7,7312 de Junio 7,22 7,7713 de Junio 7,24 7,8116 de Junio 7,25 6,7618 de Junio 7,27 6,8919 de Junio 7,31 7,09
Para la C4
Fecha Blanco C3
23 de Mayo 7,39 8,1125 de Mayo 7,36 7,3427 de Mayo 7,34 7,3729 de Mayo 7,32 7,4930 de Mayo 7,33 7,551 de Junio 7,3 7,683 de Junio 7,31 7,775 de Junio 7,27 6,788 de Junio 7,23 6,859 de Junio 7,21 6,8712 de Junio 7,22 6,9213 de Junio 7,24 6,9416 de Junio 7,25 6,9518 de Junio 7,27 6,9719 de Junio 7,31 7,09
27
8.2.2 PARAMETRO HUMEDAD
Se usa el método analítico La medición del parámetro se hace en laboratorio En una bolsa hermética se introduce una cantidad de
suelos, para luego en laboratorio proceder a pesarlo. Luego del pesado, se echa al calienta para evaporar
todo el líquido. Se pesa nuevamente y la diferencia de peso es la
variación de la humedad. Se utiliza la siguiente formula
Humedad%=Peso final−Peso inicialPeso incial
∗100
Se obtuvieron los siguientes resultados
Para la C1 - C2
28
Para C3
29
Fecha Blanco C1 C2
02 de Mayo 18,87 21,22 32,1509 de Mayo 17,98 21,19 30,1511 de Mayo 16,45 20,14 28,1413 de Mayo 16,35 19,57 31,1515 de Mayo 16,12 24,14 32,4716 de Mayo 15,42 27,48 29,1519 de Mayo 15,35 23,15 30,1421 de Mayo 14,22 22,57 27,1123 de Mayo 13,78 20,43 22,1925 de Mayo 14,06 19,15 21,7827 de Mayo 13,15 18,63 19,4529 de Mayo 12,47 17,15 17,8130 de Mayo 18,01 20,19 20,211 de Junio 23,11 21,15 20,823 de Junio 27,58 22,95 22,215 de Junio 28,14 25,33 25,368 de Junio 30,15 27,28 26,489 de Junio 33,15 28,14 28,18
Para C4
8.2.3
PARAMETRO TEMPERATURA
Se utiliza un termómetro de alcohol La medición de parámetro se hace en el mismo lugar Se obtuvieron los siguientes resultados
Para la C1 - C2
30
Fecha Blanco C3
23 de Mayo 13,78 23,4125 de Mayo 14,06 22,6727 de Mayo 13,15 21,1929 de Mayo 12,47 20,5930 de Mayo 18,01 19,141 de Junio 23,11 19,483 de Junio 27,59 23,155 de Junio 28,17 22,678 de Junio 30,19 20,539 de Junio 33,12 19,25
Fecha Blanco C4
23 de Mayo 13,78 21,2225 de Mayo 14,06 21,1927 de Mayo 13,15 20,1429 de Mayo 12,47 19,5730 de Mayo 18,01 24,141 de Junio 23,11 27,483 de Junio 27,59 23,155 de Junio 28,17 22,578 de Junio 30,19 20,439 de Junio 33,12 19,15
Fecha Blanco C1 C2
02 de Mayo 25 24 2509 de Mayo 24 25 2511 de Mayo 24 25 2513 de Mayo 24 26 2515 de Mayo 25 26 2516 de Mayo 25 27 2519 de Mayo 26 26 2521 de Mayo 25 27 2623 de Mayo 25 27 2625 de Mayo 25 26 2627 de Mayo 25 26 2729 de Mayo 25 26 2730 de Mayo 25 25 271 de Junio 26 27 253 de Junio 26 27 255 de Junio 26 25 268 de Junio 27 26 269 de Junio 26 26 2612 de Junio 25 26 2613 de Junio 25 26 2516 de Junio 26 26 2718 de Junio 25 26 3619 de Junio 26 26 25
Para C3
31
Para C4
9. ANALISIS DE RESULTADOS
9.1.1 PARÁMETRO pH
Grafico 4: Valores de pH
del Blanco
Gráfico 5: Valores de pH del C1
32
Fecha Blanco C3
23 de Mayo 25 2625 de Mayo 24 2727 de Mayo 24 2729 de Mayo 24 2830 de Mayo 25 281 de Junio 25 293 de Junio 26 285 de Junio 25 268 de Junio 25 259 de Junio 25 2412 de Junio 25 2413 de Junio 25 2416 de Junio 26 2318 de Junio 25 2519 de Junio 26 25
Fecha Blanco C3
23 de Mayo 25 2825 de Mayo 24 2927 de Mayo 24 2829 de Mayo 24 2830 de Mayo 25 271 de Junio 25 273 de Junio 26 265 de Junio 25 268 de Junio 25 269 de Junio 25 2612 de Junio 25 2513 de Junio 25 2516 de Junio 26 2418 de Junio 25 2419 de Junio 26 24
0 5 10 15 20 250
1
2
3
4
5
6
7
8
9
C1
Tiempo (dìas)
pH
Grafico 6: Valores de pH del C2
0 5 10 15 20 250
1
2
3
4
5
6
7
8
9
C2
Tiempo (dias)
pH
Grafico 7: Valores de pH del C3
33
0 2 4 6 8 10 12 14 166
6.5
7
7.5
8
8.5
C3
Tiempo (dias)
pH
Grafico 8: Valores de pH del C4
0 2 4 6 8 10 12 14 160
1
2
3
4
5
6
7
8
9
C4
Tiempo (dias)
pH
Grafica 9: Valores de pH para todas las muestras
34
0 5 10 15 20 250
1
2
3
4
5
6
7
8
9
BlancoC1C2C3C4
Tiempo (dias)
pH
Notamos que la variación del pH del blanco es casi lineal, mientras que los valores de las concentraciones varían con el tiempo.
9.1.2 PARAMETRO HUMEDAD
Grafico 10: Variación de la humedad del Blanco
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 200
5
10
15
20
25
30
35
Blanco
Tiempo (dias)
Hum
edad
35
Grafico 11: Variación de la humedad del C1
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 200
5
10
15
20
25
30
C1
Tiempo (dias)
Hum
edad
Grafico 12: Variación de la humedad del C2
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 200
5
10
15
20
25
30
35
C2
Tiempo (dias)
Hum
edad
36
Grafico 13: Variación de la humedad del C3
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 200
5
10
15
20
25
C3
Tiempo (dias)
Hum
edad
Grafico 14: Variación de la humedad del C4
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 200
5
10
15
20
25
30
C4
Tiempo (dias)
Hum
edad
37
Grafico 15: Variación de la humedad para todas las muestras
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 200
5
10
15
20
25
30
35
BlancoC1C2C3C4
Tiempo (dias)
Hum
edad
Debido a que la humedad del suelo se veía variando debido a que el grupo rego las plantas 3 veces por semana se calculó el % de humedad del suelo solo los días en los que se tomaban los datos
9.1.3 PARAMETRO TEMPERATURA
Grafico 16: Variación de la Temperatura para el blanco
0 5 10 15 20 2522.5
23
23.5
24
24.5
25
25.5
26
26.5
27
27.5
Blanco
Tiempo (dias)
Tem
pera
tura
38
Grafico 17: Variación de la Temperatura para C1
0 5 10 15 20 2522.5
23
23.5
24
24.5
25
25.5
26
26.5
27
27.5
C1
Tiempo (dias)
Tem
pera
tura
Grafico 18: Variación de la Temperatura para C2
39
0 5 10 15 20 250
5
10
15
20
25
30
35
40
C2
Tiempo (dias)
Tem
pera
tura
Grafico 19: Variación de la Temperatura para C3
0 5 10 15 20 250
5
10
15
20
25
30
35
C3
Tiempo (dias)
Tem
pera
tura
Grafico 20: Variación de la Temperatura para C4
40
0 5 10 15 20 250
5
10
15
20
25
30
35
C4
Tiempo (dias)
Tem
pera
tura
Grafico 21: Variación de la Temperatura para todas las muestras
0 5 10 15 20 250
5
10
15
20
25
30
35
40
BlancoC1C2C3C4
Tiempo (dias)
Tem
pera
tura
41
10. CONCLUSIONES
A través de este proyecto se presentará y se demostrará los
beneficios de la biorremediación como método de limpieza
de suelos contaminados por hidrocarburos que es una
alternativa viable con el hongo Pleurotus Ostreatus, que
tiene la capacidad de hacer simbiosis con la sábila.
Ambos son ideales para la biorremediacion de suelos que
han sido contaminados por hidrocarburos ya que poseen
una propiedad de hiperacumulacion de sustancias toxicas
evaluándose la eficacia en relación con el hidrocarburo
presente en la muestra.
A partir de este estudio se da hincapié a la contaminación
minera que existe en nuestro país y lo poco que ha sido
cuidada, dando una opción económica para mejorar el
ambiente que nos rodea y de la cual somos beneficiaros.
11.RECOMENDACIONES
Desde la primera etapa del proyecto hasta el término del
proyecto se recomienda tener las siguientes consideraciones.
Después del plantado se recomienda regar la planta
periódicamente dejando un día-
Antes del regado se debe remover la tierra desde el nivel
radicular para que en el momento del regado permita la
oxigenación del suelo.
En el momento de la medición de los parámetros se deben
de hacer con los respectivos equipos de protección, ya que
el suelo está contaminado por hidrocarburo
En lo que respecta en la metodología, en el laboratorio se
recomienda tener rotulados los crisoles para la medición de
la humedad en la estufa
En la medición del pH se debe utilizar un potenciómetro
calibrado.
42
Extraer la muestra de suelo de la zona radicular para
obtener un valor representativo
REFERENCIALES
1. http://www.bdigital.unal.edu.co/815/1/32242005_2009.pdf
2. file:///C:/Documents%20and%20Settings/Administrador/
Escritorio/Suelos/236T0045.pdf
3. file:///C:/Documents%20and%20Settings/Administrador/Mis
%20documentos/Downloads/3294%20(2).pdf
4. www.plomoambienteperu.com
5. http://www.uv.mx/pozarica/mca/files/2012/10/WENDY-L.-MENDO-
PASCUAL.pdf
6. https://books.google.com.pe/books?
id=Nxb3iETuwpIC&pg=PA33&dq=bacterias+biorremediacion+p
etroleo&hl=es&sa=X&ved=0CBoQ6AEwAGoVChMI94LN_vjhyAI
VhFkmCh1QDQ1L#v=onepage&q=bacterias%20biorremediacion
%20petroleo&f=false
7. https://books.google.com.pe/books?id=8-
TBF3JbVzkC&pg=PA325&dq=bacterias+biorremediacion+petrol
eo&hl=es&sa=X&ved=0CDIQ6AEwBGoVChMI94LN_vjhyAIVhFk
43
mCh1QDQ1L#v=onepage&q=bacterias%20biorremediacion
%20petroleo&f=false
ANEXO I:
CRONOGRAMA DE TRABAJO
S E M A M A SACTIVIDAD 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1
011
12
13
14
Reconocimiento del área de estudio y habilitación
x
Acondicionamiento de la parcela x x x xLimpieza de la parcela xRemoción de la tierra x xCercos vivos x xAcondicionamiento del proyecto x x x xPerforación a las parcelas x xTamizado xContaminación de suelos con hidrocarburos
x
Compostaje - Humus x xPlantación de alfalfa y sábila x xTrabajo de laboratorio x x xAnálisis x x x x x X X
44
ANEXO II
CRONOGRAMA DE ANALISIS DE TEMPERATURAD I A S
Análisis (T, pH)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
1 análisis (T, pH)
x
2 análisis (T, pH)
x
3 análisis (T, pH)
x
4 análisis (T, pH)
x
5 análisis (T, pH)
x
6 análisis (T, pH)
x
7 análisis (T, pH)
x
8 análisis (T, pH)
x
9 análisis (T, pH)
x
10 análisis (T, pH)
x
11 análisis (T, pH)
x
12 análisis (T, pH)
x
13 análisis (T, pH)
x
14 análisis (T, pH)
x
15 análisis (T, pH)
x
16 análisis (T, pH)
x
17 análisis (T, pH)
x
45
18 análisis (T, pH)
x
19 análisis (T, pH)
x
20 análisis (T, pH)
x
46
ANEXO III
CRONOGRAMA DE ANALISIS DE HUMEDAD
D I A S
Análisis (Humedad)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
1 análisis (Humedad)
x
2 análisis (Humedad)
x
3 análisis (Humedad)
x
4 análisis (Humedad)
x
5 análisis (Humedad)
x
6 análisis (Humedad)
x
7 análisis (Humedad)
x
8 análisis (Humedad)
x
9 análisis (Humedad)
x
10 análisis (Humedad)
x
47
48