Claudia Rocío Castañeda Ramírez, Esp, MSc . Bacteriología Médica Universidad del VALLE
Bacteroides Fusobacterium Prevotella Porphyromonas
Coloración de Gram en Bacterias Anaerobias
Grampositivo
Bacilo
Actinomyces
Bifidobacterium
Eubactererium
Lactomacillus
Propionibaccterium
Clostridium
Coco
Peptococcus
Peptoestreptococcus
Gramnegativo
Coco
Veillonella
Bacilo
Bacteroides
Fusobacterium
Porphyromonas
Prevotella
Bacteriodaceae
Clasificación
• Familia Bacteroidaceae: – Bacteroides
– Fusobacterium
– Leptotrichia (raro en enfermedades humanas)
– Prevotella
– Porphyromomas
• Anaerobios no esporulados
Bacteriodaceae
– Pueden ser FN de Orofaringe, tracto urogenital y colon.
– Patógenos oportunistas
Morfología:
– Bacilos gram negativos
– Pleomórfico
– Tinción irregular o bipolar:
• Fusobacterium nucleatum: largos y delgados con extremos puntiagudos
Bacteriodaceae
Cada tipo de Colonia que crece debe ser
confirmado con coloración de Gram y subcultivado
bajo condiciones aerobias y anaerobias para
confirmar que es un anaerobio.
Bioquímica:
Tolerancia de la bilis
Producción de pigmentos
Sensibilidad a los antibióticos:
Vancomicina (V)
Kanamicina (K)
Colistina (C).
Bacteriodaceae
V K C Bilis Pigmento
Bacteroides fragilis R R R R -
Prevotella R R S S +/-
Porphyromonas S R R S +
B. fragilis: catalasa positivo
GLC – diferenciar Fusobacterium Fusobacterium es productor de ácido butírico mientras que
los demás producen ácidos mixtos.
F. nucleatum y F. necrophorum (lipasa+) son los principales patógenos.
Bacteroides sp
• Son los más frecuentemente aislados de infecciones por anaerobios en el ser humano*.
• Gran cantidad de factores de virulencia y mayores tasas de resistencia contra los antimicrobianos.
• 1898: Bacillus fragilis
• 1919: Bacteroides fragilis.
• Grupo heterogéneo: bacilos Gramnegativos, anaerobios obligados, pleomórficos, asociados al hospedero y que no podían ser asignados a ningún otro género.
• Nuevas técnicas de análisis filogenético redefine:
– Bacteroides, Prevotella y Porphyromonas
Bacteroides sp • Gram negativos resistentes a la bilis
• Contenido de guanina-citosina: 40 y 48%
• Sacarolíticos
• Se incluyen más de veinte especies
• Grupo Bacteroides fragilis (características bioquímicas, morfológicas e implicaciones clínicas similares):
– B. fragilis, B. caccae, B. distasonis, B. eggerthii, B. ovatus, B. merdae, B. stercoris, B. thetaiotaomicron, B. uniformis y B. vulgatus
– 2006: B. distasonis y B. merdae reclasificadas en el género Parabacteroides
• Implicaciones terapéuticas en las infecciones iguales.
Bacteroides sp
Flora Normal
• Colon: 1011 bacterias/mL
• Anaerobios vs aerobios : proporción de 1000:1
• Fermentación de carbohidratos produce un conjunto de ácidos grasos volátiles (reabsorbidos en intestino grueso) y constituyen una proporción importante de los requerimientos energéticos diarios del hospedero
Patógeno oportunista
• Infecciones importantes por su morbilidad y mortalidad
• Adquisición de genes que codifican para factores de virulencia.
• La mayoría de estos factores pueden encontrarse en diferentes especies del género.
• B. fragilis : más factores de virulencia*
Bacteroides sp: Importancia en la respuesta inmune del
hospedero
Polisacáridos de la cápsula de B. fragilis : – Activación de
los linfocitos T CD4+
– Desarrollo de la respuesta inmune T dependiente
Bacteroides sp: Factores de virulencia
• Adhesión: primer paso para la colonización o la infección.
• Unión de B. fragilis y B. ovatus a las células intestinales:
– Estructuras tipo pili.
– Fimbrias peritricas
– Adhesinas tipo lectina (algunas cepas de B. fragilis)
• Evasión del sistema inmune:
• B. fragilis (producción de ácidos grasos de cadena corta):
– Pueden inhibir la actividad bactericida de los neutrófilos
– Capacidad de interactuar con macrófagos peritoneales:
• Actividad procoagulante
• Depósitos de fibrina
Bacteroides sp: Factores de virulencia
• Polisacáridos capsulares de B. fragilis:
– Factor de virulencia más importante.
– Directamente relacionados con la formación de abscesos intraabdominales.
• Capacidad de producir enzimas – Hialuronidasa y la condroitin sulfatasa: degradación de la matriz
extracelular del hospedero
– Neuroaminidasa, colagenasa, fibrinolisina y heparinasa
– Hemolisinas
• Cepas enterotoxigénicas de B. fragilis producen una metaloproteinasa termosensible dependiente de zinc (fragilisina): – Enfermedad diarreica en animales, niños pequeños y adultos
– Puede tener importancia en infecciones extraintestinales .
Bacteroides sp: Principales infecciones
• Polimicrobianas.
• Infecciones intraabdominales: – Abscesos intraperitoneales y viscerales
– Peritonitis causados por la alteración de la integridad de la mucosa intestinal (Cirugías, ruptura de un divertículo, apendicitis o cáncer de colon.
• Infecciones en tracto genital femenino – Ocasionalmente en cultivos vaginales
– Abscesos en la glándula de Bartolino y en las trompas de Falopio
– Aborto espontáneo a mitad de gestación
• Infección de heridas, tejido subcutáneo y abscesos del área rectal (úlceras de decúbito y abscesos perisacrales).
Bacteroides sp: Principales infecciones
• Osteomielitis: – Huesos largos pos trauma o fractura o relacionada con enfermedad
vascular periférica, úlceras de decúbito
– Huesos craneales y faciales
– Pélvica después de cirugía
• Bacteriemias por anaerobios son poco frecuentes – Asociadas con cirugías y enfermedades intestinales
• Pericarditis: diseminación vía sanguínea a partir de lesiones del tracto gastrointestinal.
• Abscesos cerebrales
• Diarrea acuosa autolimitada (niños), diarrea asociada a antibióticos y enfermedades inflamatorias del intestino.
Bacteroides sp: Diagnóstico Microbiológico
Coloración de Gram a partir de Hemocultivo positivo a las 28 horas de incubación
Bacteroides sp: Diagnóstico Microbiológico
Cultivo en agar sangre en anaerobiosis de B. fragilis.:
• 48 horas de incubación • Colonias : 1 a 3 mm de
ancho, de color gris brillante.
• Aspecto macroscópico de las colonias: grises o blancas, enteras, convexas, traslúcidas u opacas y no hemolíticas.
Bacteroides sp: Diagnóstico Microbiológico
Tinción de Gram Microscopía óptica. Aumento 1000x:
• Bacilos gramnegativos ovoides con extremos redondeados. Se disponen en forma aislada o en pares.
Fusobacterium sp
El género Fusobacterium tiene tres especies de importancia clínica:
F. nucleatum
F. alocis
F. sulci
Son bacilos gramnegativos que forma parte de la microbiota del surco gingival.
F. nucleatum: está muy relacionado con la angina de Vincent.
Fusobacterium sp
Inmóviles
Respiracion: anaerobios estrictos.
Factores de virulencia: Compuestos volátiles para nuestras células.
Proteínas de superficie (adhesinas).
Fimbrias
Libera lipopolisacáridos-> inhiben la quimiotaxis de neutrófilos.
Leucotoxina
Metabolitos tóxicos-> ácidos grasos de cadena corta
Sustancias volátiles: ácido butírico, NH3, SH2, metil captano y el indol (halitosis)
Fusobacterium sp
Morfología: Pleomórficas, con forma de huso con extremos
puntiagudos.
Metabolismo: No fermentativas, no utilizan azúcares.
Clínica: Gingivitis y periodontitis.
Habitat: Placa subgingival.
Equivalente: Prevotella intermedia.
Especies: F. nucleatum, F. periodonticum, F. aloci, F. sulci
Angina de vincent:
Combinación de especies de Fusobacterium
y espiroquetas
Sobrecrecimiento: faringitis anaeróbica
Membrana gris
Mal olor
Fusobacterium nucleatum
Microbial ecology of subgingival plaque as a pathogenic biofilm
Nishihara Tatsuji and Koseki Takeyoshi, Periodontology 2000:2004;36:14
Porphyromonas sp
Bacilos Gram negativos. Inmóviles.
Respiración: anaerobios estrictos.
Factores de virulencia:
Fimbrias para agregarse a otras bacterias.
Forman vesículas de superficies:
Señuelos para consumir factores defensivos (complemento,
péptidos antimicrobianos, anticuerpos, etc).
Colagenasas: destruyen colágeno sostén de los tejidos.
Secretan diversas enzimas: desoxirribonucleasas, fosfolipidasas.
Pueden degradar fibrinógeno.
Gingipaínas: proteasas inespecíficas, hemolíticas (obtienen Fe).
Destruyen proteínas defensivas (ej.: lactoferrina y transferrina).
Porphyromonas sp
Metabolismo:
Utilizan principalmente aminoácidos y no
fermentan hidratos de carbono.
Obtienen menos moléculas de ATP que los
microorganismos con cadena respiratoria.
Liberan metabolitos tóxicos para las células
del hospedador, algunos son volátiles
(halitosis).
Porphyromonas sp
Porphyromonas gingivalis
Clínica:
Asociada a las periodontitis crónicas.
Importante relación con la gingivitis:
Permite a la Porphyromonas gingivalis infectar
el área más cercana a la raíz de los dientes
causando caries e infecciones.
La gingivitis toma una forma nueva, llamada
gingivitis ulcerativa necrotizante aguda
(GUNA).
Porphyromonas sp
Porphyromonas gingivalis
Clínica:
GUNA: destrucción acelerada de los tejidos
afectados y diseminación local o sistémica
de la infección.
Propagación más allá de la gingiva (encías)
e invade los tejidos locales de la boca y la
cara: el síndrome se llama el NOMA.
También se producen abcesos periapicales.
Porphyromonas sp
Porphyromonas gingivalis
Habitat:
Surco gingival: formando parte de la placa subgingival. Ambiente anaeróbio : bolsas periodontales.
Cultivo:
Agar-sangre con suplementos (vitamina K y hemina) incubando en anaerobiosis.
Las colonias crecen muy lentamente (7-15 días).
Importante-> colonias pigmentadas --> marrón -->negro (brillantes).
Porphyromonas sp
Porphyromonas gingivalis
Tratamiento:
Realizando raspado y alisado radicular
No se consigue una erradicación definitiva,
ya que esta bacteria suele localizarse en
áreas de difícil acceso como las furcas o la
base de las bolsas periodontales.
Cirugía resectiva también es más
predecible que la cirugía de acceso.
Porphyromonas sp
Porphyromonas gingivalis
Tratamiento:
El tratamiento antimicrobiano sistémico es
eficaz si se combina con raspado y alisado
radicular y cirugía resectiva.
Porphyromonas gingivalis
Determinantes patogénicos de Porphyromonas gingivalis en la enfermedad periodontal
Teixeira S et al. J Clin Periodontol 2009
Porphyromonas sp
Porphyromonas endodontalis
Es menos patógena por poseer menos
factores de virulencia.
P. assacharolytica
Se aisla en heces y está en un bajo
número en la cavidad oral.
Porphyromonas gingivalis (Pg)
Determinantes patogénicos de Porphyromonas gingivalis en la enfermedad periodontal
Socransky S, Haffajee A. Periodontology 2000, 2005 Cortesia: Dra. Sonia Gutierrez.
Género Prevotella
Bacilos Gram negativos. Inmóviles.
Respiración: anaerobios estrictos.
Factores de virulencia:
Proteasas que degradan inmunoglobulinas.
Fimbrias que participan en la agregación y
coagregación bacterianas.
Metabolitos tóxicos-> muerte de células del
hospedador por contacto.
Género Prevotella
Clínica:
Periodontitis, gingivitis, abscesos periodontales y
periapicales.
Gingivitis en embarazadas: éstas bacterias degradan
hormonas que se sintetizan en el embarazo.
Ejemplo de Disbiosis de un ecosistema oral:
Las hormonas del embarazo inducen el crecimiento excesivo
de una/s especies del ecosistema del surco gingival.
La acción nociva de esas bacterias induce, a su vez, una
respuesta inflamatoria (gingivitis de la embarazada)
reversible cuando desaparece la causa (las hormonas del
embarazo).
Género Prevotella
Habitat: Surco gingival, forma parte de la placa subgingival. Coloniza
ese habitat debido a que existe anaerobiosis.
Medios de cultivo: Muestra: surco gingival, donde no hay O2.
Agar-sangre. Utilizar en los medios de cultivo vitamina K y hemina como suplementos.
La mayoria de las especies de Prevotella que se aislan en la especie humana son pigmentadas.
Si se exponen las placas con colonias crecidas (aprox 10 días) a la luz ultravioleta (UV) se observan que las colonias poseen un color rojizo. Esto permite diferenciarlas de las colonias de Porphyromonas gingivalis que tambien son pigmentadas (negras) pero que no fluorescen bajo luz UV.
Género Prevotella
Especies de mayor interés del género: Sin pigmento:
P. bivia
P. buccae
P. buccalis.
Pigmento variable: P. denticola
Con pigmento: P. intermedia
P.melaningenica
P. corporis
P. nigrescens
P. loescheii.