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“Purificación virtual de una proteína”
PRESENTA: MARTÍNEZ CASTAÑEDA FERNANDO
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Para empezar…
Estable a T>50 °C pH entre 3.5 y 11
¿QUÉ ESPERARÍAMOS?
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Como primer paso… PRECIPITACIÓN - Remoción contaminantes - Concentrar la muestra - Desnaturalizar proteínas
Tratamiento con calor
¿Qué condiciones
usar?
50 °C/15 min
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A continuación…
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
- pH 6.0 - Gradiente de 0.0 a 0.5 M - Resina dietilaminoetilcelulosa (DEAE) Aniónico (+), proteínas pH>6 (-)
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Cromatografía intercambio iónico
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De las 20 que tenía…
Separación en función de su tamaño Elución en orden decreciente de PM
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Filtración en gel
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Finalmente…
Cromatografía de afinidad Anticuerpo monoclonal MC10C (Alta afinidad)
Elución con Tris/HCl 2mM pH 7.4
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Y como resultado se tiene…
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GRACIAS POR SU ATENCIÓN