Análisis por electroforesis en geles de poliacrilamida de fracciones obtenidas durante
la purificación por cromatografía de intercambio iónico.
Marcador o Estándar de Peso Molecular(valores en kiloDaltons)
225 kDa150100 75 50 (banda de mayor intensidad, señalada con una flecha) 35 25 15 10
GRUPO 3 - Gel NO Denaturante (al 12% )
1. Marcador Estándar
2. Extracto crudo – 2.5 uL
3. Extracto crudo – 3 uL
4. Extracto crudo – 5 uL
5. Tubo 3a (buffer sin NaCl) –fracción original.
6. Tubo 4c (0.5mM NaCl) -–fracción original.
7. Tubo 1d (1 mM NaCl) -–fracción original.
8. Tubo 4b (0.25 mM NaCl)-precipit.
9. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) –precipit.
10. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) – precipit.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
50 kDa
1. Marcador Estándar
2. Extracto crudo – 2.5 uL
3. Extracto crudo – 3 uL
4. Extracto crudo – 5 uL
5. Tubo 3a (en buffer fosfato)
6. Tubo 4c (0.5mM NaCl)
7. Tubo 1d (1 mM NaCl)
8. Tubo 4b (0.25 mM NaCl)-precipit.
9. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) –precipit.
10. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) – precipit.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
50 kDa
GRUPO 3 - Gel denaturante (al 12% )
GRUPO 2 - Gel denaturante (al 15% )
1. Tubo 2d (1 mM NaCl) - precipitado
2. Tubo 1d (1 mM NaCl) – fracción original
3. Tubo 1d (1 mM NaCl)- precipit.
4. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) -precipitado
5. Tubo 4c (0.5 mM NaCl) -fracción original
6. Tubo 4c (0.5mM NaCl) - precipitado
7. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) – precipitado
8. Marcador Estándar
9. Tubo 4a (buffer sin NaCl) –fracción original
10. Extracto crudo – 2.5 uL
NOTA : UTILIZAR ESTE GEL PARA HACER EL GRAFICO Y DETERMINAR EL PESO DE LA PIRAZINAMIDASA
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Pirazinamidasa
50 kDa
NOTA : Los datos de migración están en el último slide
Frente de corrida
Inicio de gel
GRUPO 2 - Gel NO Denaturante (al 12% )
1. Tubo 2d (1 mM NaCl) - precipitado
2. Tubo 1d (1 mM NaCl) – fracción original
3. Tubo 1d (1 mM NaCl)- precipit.
4. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) -precipitado
5. Tubo 4c (0.5 mM NaCl) -fracción original
6. Tubo 4c (0.5mM NaCl) - precipitado
7. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) – precipitado
8. Tubo 4a (buffer sin NaCl) –fracción original
9. Extracto crudo – 2.5 uL
10. Marcador Estándar
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
50 kDa
Pirazinamidasa??? Cree usted que se pueda tomar el tamaño calculado a partir de este tipo de gel como un dato preciso?
Datos de migración del Gel denaturante (al 15% ) del Grupo 2
Migración (cm) y Pesos Moleculares (kDa)
0,2 - 225 kDa0,3 - 1500,48 - 1000,65 - 751 - 50 (banda de mayor intensidad, señalada con una flecha) 1,4 - 351,9 - 25 3 - 153,6 - 10
4,6 - frente de corrida2,3 - Pirazinamidasa (carril 2)