Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo C U R S O DP R O T O C O L O : G e n o t i p i fe n h u e v o s , l a r v a s y h e mC o r r e l a c i ó n s e r o t i p oS a l v a d o r . 2 0 1 1P r e s e n t a d o p o r : DI n t r o d u c c i ó n .A nivel mundial el Paludismo y el Dengue se consideran como una de las
Enfermedades que ha ocupado algún lugar en las diez primeras causas de morbilidad y
mortalidad, de los reportes epidemiológicos del Ministerio de Salud.. Localizado en
muchos países como áreas endémicas y epidémicas con un alto riesgo. De igual forma
se ha reportado en todas las regiones del planeta.
Para septiembre 2011 se tiene sospecha por dengue
San Salvador y San Miguel
380 millones en riesgo de transmisión por
Se hacen esfuerzos mundiales auspiciados o dirigidos por la
controlar y erradicar el vector, pero que hasta el momento ha sido imposible de lograr
resultados prometedores. Se han utilizado diversos métodos de control, en las que se
destaca el uso de químicos en las plantaciones y áreas domiciliares
riesgo de causar intoxicaciones en el ser humano.
Al momento el Dengue
a que se invierten millones de dólares en erradicar el vector y tratar la enfermedad,
derivados del presupuesto nacional asignado a salud.
*1 Hay; Simón. y otros. Un mapa mundial de malaria: Endemicidad de
2007.
Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo D E P C R D E N G U E . E L S A L V A D O R 2 0 1 1f i c a c i ó n p o r R T - P C R / R S S - P C R d e l v i r um b r a s a d u l t a s c o m o d i a g n ó s t i c o p r e lc i r c u l a n t e e n l a z o n a m e t r o p o l i tM a s t e r D r . A n t o n i o V à s q u e z H i d a l g oM i c r o b i ó l o g o M e d i c o S a l u b r i s t aD o c e n t e d e l a F a c u l t a d d e M e d i c i n aU n i v e r s i d a d d e E l S a l v a d o r .nivel mundial el Paludismo y el Dengue se consideran como una de las
Enfermedades que ha ocupado algún lugar en las diez primeras causas de morbilidad y
mortalidad, de los reportes epidemiológicos del Ministerio de Salud.. Localizado en
áreas endémicas y epidémicas con un alto riesgo. De igual forma
se ha reportado en todas las regiones del planeta. 1
se tiene sospecha por dengue mas de 8000 casos, reportándose
con el mayor número de casos. A nivel mundial se estima 1
380 millones en riesgo de transmisión por M a l a r i a y D e n g u e . * 1
Se hacen esfuerzos mundiales auspiciados o dirigidos por la O M S , O Pcontrolar y erradicar el vector, pero que hasta el momento ha sido imposible de lograr
resultados prometedores. Se han utilizado diversos métodos de control, en las que se
destaca el uso de químicos en las plantaciones y áreas domiciliares, con el consiguiente
riesgo de causar intoxicaciones en el ser humano. 2el Dengue es un problema de Salud Pública y de gobiernos, debido
a que se invierten millones de dólares en erradicar el vector y tratar la enfermedad,
esupuesto nacional asignado a salud.
Hay; Simón. y otros. Un mapa mundial de malaria: Endemicidad de Plasmodium falciparum
1
Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo u s d e l d e n g u ei m i n a r v e r s u st a n a d e S a nnivel mundial el Paludismo y el Dengue se consideran como una de las
Enfermedades que ha ocupado algún lugar en las diez primeras causas de morbilidad y
mortalidad, de los reportes epidemiológicos del Ministerio de Salud.. Localizado en
áreas endémicas y epidémicas con un alto riesgo. De igual forma
casos, reportándose
nivel mundial se estima 1
P S y otros, para
controlar y erradicar el vector, pero que hasta el momento ha sido imposible de lograr
resultados prometedores. Se han utilizado diversos métodos de control, en las que se
, con el consiguiente
es un problema de Salud Pública y de gobiernos, debido
a que se invierten millones de dólares en erradicar el vector y tratar la enfermedad,
Plasmodium falciparum en el
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El Salvador no es la excepción, debido a que por su climatología y densidad
poblacional, hace favorable la transmisión palúdica, con predominio en la estación
seca y lluviosa con temperaturas entre 22
tropicales y desplazamiento en alturas menores de 300 mts hacen propicio
condiciones ideales para su estancia y propagación.
J U S T I F I C A C I O N .
Al utilizar el PCR como método de diagnostico de examen de laboratorio
casos de Dengue en la tipificación de huevos, larvas y hembras adultas, puede
contribuir a la comunidad a prevenir el riesgo de cual serotipo esta circulando en la
zona y tomar las medidas correspondientes en el plan de vigilancia y control
epidemiológico.
O B J E T I V O SG E N E R A L :Identificar por medio de RT
y zancudos del serotipo circulante en el país.
E S P E C I F I C O S :1. Utilizar el RT-PCR en la genotipificació
adultas hematófagas.
2. Identificar las zonas potenciales de riesgo en la zona metropolitana de San Salvador
3. Correlacionar el tipo de serotipo en relación al ciclo de vida del zancudo del dengue.
H I P O T E S I SH1: La correlación diagnostica entre genotipificació
hematófagas por medio de RT
H0: No existe correlación diagnost
hembras hematófagas por medio de RT
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El Salvador no es la excepción, debido a que por su climatología y densidad
poblacional, hace favorable la transmisión palúdica, con predominio en la estación
seca y lluviosa con temperaturas entre 220C a 30
0C en zonas costeras o sabanas
tropicales y desplazamiento en alturas menores de 300 mts hacen propicio
condiciones ideales para su estancia y propagación.
el PCR como método de diagnostico de examen de laboratorio
n la tipificación de huevos, larvas y hembras adultas, puede
contribuir a la comunidad a prevenir el riesgo de cual serotipo esta circulando en la
zona y tomar las medidas correspondientes en el plan de vigilancia y control
medio de RT-PCR y RSS-PCR la genotipificación de huevos, larvas
del serotipo circulante en el país.
PCR en la genotipificación de grupos de huevos, larvas y hembras
tificar las zonas potenciales de riesgo en la zona metropolitana de San Salvador
Correlacionar el tipo de serotipo en relación al ciclo de vida del zancudo del dengue.
iagnostica entre genotipificación de grupos de huevos, larvas y hembras
hematófagas por medio de RT-PCR a dengue indica el serotipo del virus del dengue
No existe correlación diagnostica entre genotipificación de grupos de huevos, larvas y
hembras hematófagas por medio de RT-PCR a dengue indica el serotipo del virus del dengue
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El Salvador no es la excepción, debido a que por su climatología y densidad
poblacional, hace favorable la transmisión palúdica, con predominio en la estación
costeras o sabanas
tropicales y desplazamiento en alturas menores de 300 mts hacen propicio
el PCR como método de diagnostico de examen de laboratorio en los
n la tipificación de huevos, larvas y hembras adultas, puede
contribuir a la comunidad a prevenir el riesgo de cual serotipo esta circulando en la
zona y tomar las medidas correspondientes en el plan de vigilancia y control
de huevos, larvas
n de grupos de huevos, larvas y hembras
tificar las zonas potenciales de riesgo en la zona metropolitana de San Salvador
Correlacionar el tipo de serotipo en relación al ciclo de vida del zancudo del dengue.
de grupos de huevos, larvas y hembras
PCR a dengue indica el serotipo del virus del dengue
n de grupos de huevos, larvas y
engue indica el serotipo del virus del dengue
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M A R C O T E O R I C OA N T E C E D E N T E SEn El Salvador desde hace varias décadas, se han realizado métodos de vigilancia,
control y erradicación entomológica de los vectores en zonas endémicos ya identificados en las
comunidades urbano marginales y rurales de nuestro país por el MSPAS.
En 1 9 9 3 la OMS tomó el liderazgo en la “Declaración Mundial en la lucha Antipalúdica”
en coordinación con los estados miembros para crear sistemas eficaces de Vigilancia y control
epidemiológico local. E l c i c l o d e v i d a :
H u e v o: la hembra deposita los huevos en partes húmedas o en agua. Cada hembra
puede depositar entre 100 a 500 huevecillos, eclosionando estos entre 24 a 72 hrs a una
temperatura de 21 C. los huevos pueden resistir has
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En El Salvador desde hace varias décadas, se han realizado métodos de vigilancia,
control y erradicación entomológica de los vectores en zonas endémicos ya identificados en las
comunidades urbano marginales y rurales de nuestro país por el MSPAS.
la OMS tomó el liderazgo en la “Declaración Mundial en la lucha Antipalúdica”
en coordinación con los estados miembros para crear sistemas eficaces de Vigilancia y control
: la hembra deposita los huevos en partes húmedas o en agua. Cada hembra
puede depositar entre 100 a 500 huevecillos, eclosionando estos entre 24 a 72 hrs a una
temperatura de 21 C. los huevos pueden resistir hasta por 450 días.
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En El Salvador desde hace varias décadas, se han realizado métodos de vigilancia,
control y erradicación entomológica de los vectores en zonas endémicos ya identificados en las
la OMS tomó el liderazgo en la “Declaración Mundial en la lucha Antipalúdica”
en coordinación con los estados miembros para crear sistemas eficaces de Vigilancia y control
: la hembra deposita los huevos en partes húmedas o en agua. Cada hembra
puede depositar entre 100 a 500 huevecillos, eclosionando estos entre 24 a 72 hrs a una
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L a r v a s :viven debajo de la superficie del agua tomando su alimento. Generalmente
nadan hacia el fondo haciendo un ocho y luego regresan a la superficie para obtener oxigeno.
Las larvas por lo general tienen 4 fases o estadios larvales: L1 es la que eclosional del
los dos días pierde el exoesqueleto y pasa al segundo estadio L2; el tercer y cuarto estadio L3,
L4 se desarrolla entre uno a dos días. La L4 se desarrolla en pupa, la larva cuando posa en agua
lo hace formando un ángulo de 45 grados.
A d u l t o s : es el zancudo que vive en caso o proximal a ella, es de color azul negro,
manchas plateadas a los lados del cuerpo, tiene anillos blancos en las patas, se posa en forma
horizontal.
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viven debajo de la superficie del agua tomando su alimento. Generalmente
nadan hacia el fondo haciendo un ocho y luego regresan a la superficie para obtener oxigeno.
Las larvas por lo general tienen 4 fases o estadios larvales: L1 es la que eclosional del
los dos días pierde el exoesqueleto y pasa al segundo estadio L2; el tercer y cuarto estadio L3,
L4 se desarrolla entre uno a dos días. La L4 se desarrolla en pupa, la larva cuando posa en agua
lo hace formando un ángulo de 45 grados.
es el zancudo que vive en caso o proximal a ella, es de color azul negro,
manchas plateadas a los lados del cuerpo, tiene anillos blancos en las patas, se posa en forma
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viven debajo de la superficie del agua tomando su alimento. Generalmente
nadan hacia el fondo haciendo un ocho y luego regresan a la superficie para obtener oxigeno.
Las larvas por lo general tienen 4 fases o estadios larvales: L1 es la que eclosional del huevo, a
los dos días pierde el exoesqueleto y pasa al segundo estadio L2; el tercer y cuarto estadio L3,
L4 se desarrolla entre uno a dos días. La L4 se desarrolla en pupa, la larva cuando posa en agua
es el zancudo que vive en caso o proximal a ella, es de color azul negro,
manchas plateadas a los lados del cuerpo, tiene anillos blancos en las patas, se posa en forma
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La hembra es hematófaga o antropofilica, pica de día o durante la noche,
veces al día, reposa en la vivienda. Algunas hembras pueden volar hasta 3 km para poner los
huevos otras viven a menos de 50 metros de las casas donde nacieron.P r i n c i p a l e s M é t o d o s d e C o n t rEntre los principales métodos de control u
Método químico. Se han descrito dos: insecticida y herbecida, derivados de organofosforados
y organoclorados, peritroides y otros. Son considerados como métodos temporales. En la
ultima década se han reportado cas
organoclorados y peritroides.
a nuevas generaciones 2 6 , 2. Control físico, 3. Control Patógeno, 4. Control Personal, 5. Control
Cultural, 6. Control Biológico, 7. Control Natural y 8. Control legal. T é c n i c a d e R T - P C R y R S S - P C RE s u n aVariante de la PCR donde inicialmente se realiza una Transcripción reversa a partir de
ARN para sintetizar el ADN complementario que luego es amplificado M A T E R I A L Y M E T O D O S .A.
E n c a d a b l o q u e se agreg
hembras adultas se tapan los recipientes colocando una gasa.
B. M u e s t r a s d e s u e r o en ratones lactantes alimentados con
sospecha de dengue. C . M u e s t r a s d e h u e v o s y l
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La hembra es hematófaga o antropofilica, pica de día o durante la noche, puede picar hasta 8
veces al día, reposa en la vivienda. Algunas hembras pueden volar hasta 3 km para poner los
huevos otras viven a menos de 50 metros de las casas donde nacieron. r o l .Entre los principales métodos de control utilizados a nivel mundial,
Método químico. Se han descrito dos: insecticida y herbecida, derivados de organofosforados
y organoclorados, peritroides y otros. Son considerados como métodos temporales. En la
ultima década se han reportado casos de resistencia especialmente a los organofosforados,
organoclorados y peritroides. 2 2 - 2 5 También se ha encontrado transmisión hereditaria por genes
, 2. Control físico, 3. Control Patógeno, 4. Control Personal, 5. Control
, 6. Control Biológico, 7. Control Natural y 8. Control legal. RVariante de la PCR donde inicialmente se realiza una Transcripción reversa a partir de
ARN para sintetizar el ADN complementario que luego es amplificado mediante una PCR.M E T O D O L O G I A.
se agregan 6 vasijas de 250 ml conteniendo: 100 huevos, 100 larvas
se tapan los recipientes colocando una gasa.
en ratones lactantes alimentados con hembras adultas con l a r v a s por medio de identificación P C R
5
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puede picar hasta 8
veces al día, reposa en la vivienda. Algunas hembras pueden volar hasta 3 km para poner los
tilizados a nivel mundial, 1 1 - 2 1 están: 1.
Método químico. Se han descrito dos: insecticida y herbecida, derivados de organofosforados
y organoclorados, peritroides y otros. Son considerados como métodos temporales. En la
os de resistencia especialmente a los organofosforados,
También se ha encontrado transmisión hereditaria por genes
, 2. Control físico, 3. Control Patógeno, 4. Control Personal, 5. Control
Variante de la PCR donde inicialmente se realiza una Transcripción reversa a partir de
mediante una PCR.
: 100 huevos, 100 larvas, 100
hembras adultas con
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D. E x t r a c c i ó n A R N V i r a l
. El ARN viral se extrae utilizando el QIA
según protocolo establecido por el fabricante.
E. U t i l i z a r R S S - P C R
para identificación de genotipo, el análisis se hace por
electroforesis en gel de agarosa 1.5 % del ARN extraído a partir de los serotipos
extraídos.
F. M é t o d o e s t a d í s t i c o
. Se utilizara la Prueba de Fisher, análisis de varianza, tabla de ANOVA
utilizando el método por diseños de bloques al azar.
G. Á r e a d e E s t u d i o . El ensayo se
H. C r i t e r i o s d e s e l e c c i ó n
. Para la selección de la muestra, se utilizara los siguientes d e i n c l u s i ó n: 1. Muestra en estadoA e d e s A e g y p t i
3. Igual número
7. Igual observación a las 24 hrs, e x c l u s i ó n, están: 1. Muestra contaminada. 2. Diferente especie diferente a la descrita en
los recipientes, 3. Mal dilución o concentración
Desigualdad en las observaciones, 6. Tratamiento inadecuado, 9
inadecuadas.
I. S e s g o s
: Carga viral disminuida, mal identificación morfológica, mal uso de la técnica PCR.
j. E x t r a c c i ó n d e A R N v i r a l y s í
"El sobrenadante (125 µL) de cultivos infectados se mezclaraC o r p.) y se incubara a temperatura ambiente por
cloroformo y después de extracción se centrifugó a 12 000 rpm. La fase acuosa recuperada se
mezcla con 250 µL de isopropanol y luego de centrifugación a 12 000 rpm el preci
lavó con 500 µL de etanol 75 % y se seca
en 50 µL de agua tratada con dietil
síntesis de ADN se usaron 5 µL del ARN extraído que se adici
que contenía 200 µM de cada dNTP, 0,5
0,25 U de enzima T t h DNA Polimerasa (
µL. La reacción se llevó a cabo a 90 °C por R S S - P C RVirus de referencia y aislados locales de cada serotipo se
descritos por H a r r i s y otros
5 y
adicionaron a una mezcla de reacción que contenía 2 mM de MgCl
0,35-0,8 µM de los iniciadores, 5 µL de
(P r o m e g a ), 5 µL de b u f f e r
de enzima, en un volumen final de 50 µL. La amplificación se realizó
por 32 ciclos de 94 °C por 1 min, 54 °C por 1 min y 72
°C por 10 min. El ARN de cada cepa fue amplificado por más de una vez para confirmar la
reproducibilidad del resultado.
Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo
. El ARN viral se extrae utilizando el QIAamp viral RNA Mini Kit
según protocolo establecido por el fabricante.
para identificación de genotipo, el análisis se hace por
electroforesis en gel de agarosa 1.5 % del ARN extraído a partir de los serotipos
. Se utilizara la Prueba de Fisher, análisis de varianza, tabla de ANOVA
método por diseños de bloques al azar. 3 2 - 3 4
El ensayo se realizara en los laboratorios de CENSALUD
. Para la selección de la muestra, se utilizara los siguientes
: 1. Muestra en estado huevo, larva, hembra adulta, 2. Misma especie de
número de huevos, larvas y adultas hembras en cada recipiente, 4.,
7. Igual observación a las 24 hrs, 8. Condición ambiental adecuada. Entre los
, están: 1. Muestra contaminada. 2. Diferente especie diferente a la descrita en
los recipientes, 3. Mal dilución o concentración técnica PCR, 4. Testigo otra especie,
igualdad en las observaciones, 6. Tratamiento inadecuado, 9. Condiciones ambiental
Carga viral disminuida, mal identificación morfológica, mal uso de la técnica PCR.í n t e s i s d e A D N *de cultivos infectados se mezclara con 375 µL de Trizol (
a temperatura ambiente por 5 min. Al término se adicionara
cloroformo y después de extracción se centrifugó a 12 000 rpm. La fase acuosa recuperada se
con 250 µL de isopropanol y luego de centrifugación a 12 000 rpm el preci
500 µL de etanol 75 % y se seca a temperatura ambiente. El ARN viral se resuspendió
en 50 µL de agua tratada con dietil-pirocarbonato (DEPC) y luego se almacenó a
síntesis de ADN se usaron 5 µL del ARN extraído que se adicionaron a una mezcla de reacción
que contenía 200 µM de cada dNTP, 0,5-1,0 µM de iniciadores anti-sentido,
DNA Polimerasa (P r o m e g a ), 2,5 µL de b u f f e r
, en un volumen final de 25
µL. La reacción se llevó a cabo a 90 °C por 2 min y luego a 60 °C por 30 min. “
Virus de referencia y aislados locales de cada serotipo se hará uso modificando los protocolos
y M i a g o s t o v i c h y otros. Brevemente, 10 µL de ADN viral copia se
zcla de reacción que contenía 2 mM de MgCl2, 200 µM de cada dNTP,
0,8 µM de los iniciadores, 5 µL de b u f f e r quelante, 0,25 U de T t h
de enzima, en un volumen final de 50 µL. La amplificación se realizó
clos de 94 °C por 1 min, 54 °C por 1 min y 72 °C por 2 min con una extensión final a 72
°C por 10 min. El ARN de cada cepa fue amplificado por más de una vez para confirmar la
reproducibilidad del resultado.
6
Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo
amp viral RNA Mini Kit
para identificación de genotipo, el análisis se hace por
electroforesis en gel de agarosa 1.5 % del ARN extraído a partir de los serotipos
. Se utilizara la Prueba de Fisher, análisis de varianza, tabla de ANOVA
. Para la selección de la muestra, se utilizara los siguientes c r i t e r i o s
, 2. Misma especie de
en cada recipiente, 4.,
. Condición ambiental adecuada. Entre los c r i t e r i o s d e
, están: 1. Muestra contaminada. 2. Diferente especie diferente a la descrita en
. Testigo otra especie, 5.
. Condiciones ambientales
Carga viral disminuida, mal identificación morfológica, mal uso de la técnica PCR.
con 375 µL de Trizol (I n v i t r o g e n5 min. Al término se adicionaran 100 µL de
cloroformo y después de extracción se centrifugó a 12 000 rpm. La fase acuosa recuperada se
con 250 µL de isopropanol y luego de centrifugación a 12 000 rpm el precipitado se
a temperatura ambiente. El ARN viral se resuspendió
pirocarbonato (DEPC) y luego se almacenó a - 70 °C. Para
onaron a una mezcla de reacción
, 1 mM de MnCl2,
, en un volumen final de 25
uso modificando los protocolos
y otros. Brevemente, 10 µL de ADN viral copia se
, 200 µM de cada dNTP,
DNA Polimerasa
de enzima, en un volumen final de 50 µL. La amplificación se realizó
°C por 2 min con una extensión final a 72
°C por 10 min. El ARN de cada cepa fue amplificado por más de una vez para confirmar la
Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo S u b t i p o R S S - P C RLos productos de la amplifica
disuelto en tampón trisborato
y usando un estándar de tamaños de 100
colocaron 15-20 µL tanto de los amplificados obtenidos con virus locales como con los de
referencia del mismo serotipo. Para determinar el subtipo se comparó el patrón
electroforético (tamaño y número de fragmentos) generado por la cepa local
prototipo. T R A N S C R I P C I Ó N R E V E R S A Y AR T - P C R
Se utilizara el procedimiento por Harris et al, por la técnica multiplex RT
transcripción reversa y amplificación del ARN viral utilizando set según fabricante.
______________________________
� � � � � � � � � � � � Subtypes of dengue virus serotypes 2, 3 and 4 isolated in Santander District, Colombia.
A C T I V I D A D E S E N ED e f i n i c i ó n d e lt e m a d ei n v e s t i g a c i ó n X X XR e v i s i ó n d el i t e r a t u r a X X XE l a b o r a c i ó n d ea n t e p r o y e c t o X X XR e v i s i ó n d ea s e s o r e s XP r e s e n t a c i ó n yd e f e n s a XP r u e b a s e nl a b o r a t o r i oF a s e d e c a m p o /T o m a d e
Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo
Los productos de la amplificación se analizaran mediante electroforesis en gel de agarosa 2 %
disuelto en tampón trisborato-EDTA (Tris-HCl 89 mM pH 8, ácido bórico 89 mM, EDTA 2,5 mM)
y usando un estándar de tamaños de 100-pb (D N A l a d d e r . P r o m e g a ). En un mismo gel se
L tanto de los amplificados obtenidos con virus locales como con los de
referencia del mismo serotipo. Para determinar el subtipo se comparó el patrón
electroforético (tamaño y número de fragmentos) generado por la cepa local A M P L I F I C A C I Ó N P O RSe utilizara el procedimiento por Harris et al, por la técnica multiplex RT-PCR para la
transcripción reversa y amplificación del ARN viral utilizando set según fabricante.
____________________________________________________
Subtypes of dengue virus serotypes 2, 3 and 4 isolated in
Santander District, Colombia. 2007
C r o n o g r a m a 2 0 1 2F E B M A R A B R I M A Y J U N X X X X X X X X X X X X
7
Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo
ción se analizaran mediante electroforesis en gel de agarosa 2 %
HCl 89 mM pH 8, ácido bórico 89 mM, EDTA 2,5 mM)
). En un mismo gel se
L tanto de los amplificados obtenidos con virus locales como con los de
referencia del mismo serotipo. Para determinar el subtipo se comparó el patrón
electroforético (tamaño y número de fragmentos) generado por la cepa local v e r s u s
la
PCR para la
transcripción reversa y amplificación del ARN viral utilizando set según fabricante.
Subtypes of dengue virus serotypes 2, 3 and 4 isolated in
J U L A G
Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo m u e s t r a sF a s e d el a b o r a t o r i o /A n á l i s i s d em u e s t r a sA n á l i s i se s t a d í s t i c o d ed a t o sD i s c u s i ó n d er e s u l t a d o sE n t r e g a d ed o c u m e n t o f i n a lp a r a r e v i s i ó nP r e s e n t a c i ó nd e l t r a b a j o f i n a lE n t r e g a d ed o c u m e n t o f i n a l PM a t e r i a l y e q u i p o sT e r m o r e c i c l a d o rC e n t r i f u g a P C RT u b o s c ó n i c o sM i c r o p i p e t a sG r a d i l l a sR e a c t i v o sA l c o h o l e t í l i c oC l o r u r o d e m a g n e s i ob u f f e rK i t R T - P C RO T R O S I M P R E V I S T O ST O T A L
Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo X X XX X XX X X X X XX X XX X X X
P r e s u p u e s t o ( B O R R A D O R E S T I M A D O )U n i d a d C o s t o U n i t a r i o1 5 0 01 6 0 01 0 0 52 5 02 3 03 0 01 9 0 0
8
Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo
X X XC o s t o t o t a l5 0 06 0 05 0 01 0 06 03 0 09 0 0$ 5 0 0 0 A P R O X .
Protocolo dengue Master Dr. Antonio Vásquez Hidalgo
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