DOSAJE DE GLUCOSA EN SANGRE TOTALMETODO DE FOLN-WU

I. MATERIALES:1. Material biolgico: Sangre total2. Material y equipo de laboratorio: Juego de pipetas 1 y 10 mL Tubos de ensayo Gradilla Papel filtro Whatman N 1 Klett Summerson3. Reactivos: Solucin de H2SO4 2/3N Solucin de tungstato de sodio al 10% Solucin cprico alcalina Solucin fosfomolbdica

II. PROCEDIMIENTO:

A) Obtencin de filtrado libre de protenas

En un tubo de vidrio agregamos un 1ml de sangre total ms 7ml de agua destilada y mezclando por inversin, para esto tuvimos que tapar la boca del tubo con el dedo pulgar, luego aadimos 1ml de solucin H2SO4 2/3N, mezclar nuevamente y dejamos en reposo por 5 minutos; una vez pasado el tiempo dicho aadimos 1 ml de solucin de Tungsteno de Sodio al 10%.

Luego tapamos la boca del tubo con el dedo pulgar y agitamos enrgicamente el contenido del tubo, hasta que obtuvimos un precipitado achocolatado.

Dejamos en reposo unos dos minutos aproximadamente y luego filtramos el contenido empleando un papel de filtro WHATMAN.

B) Cuantificacin e glucosa en el filtrado libre de protenas(PASO A)PROCEDIMIENTO DEL TUBO BLANCO: Se le agrega 1ml de agua destilada. Luego se le aade 1ml de solucin cprica alcalina.PROCEDIMIENTO DEL TUBO PROBLEMA Se le agrega 1 ml de filtrado libre de protenas. Luego se le aade solucin cprico alcalina: 1 ml.AMBOS TUBOS DE VIDRIO: BLANCO-PROBLEMA Despus se le coloca en agua hirviente por 8 minutos, luego enfriar en agua corriente. Luego se le agrega 1ml de solucin fosfomolbdica. Mezclar enrgicamente el contenido del tubo, luego dejar en reposo por tres minutos y completar con agua destilada hasta llegar a 10 ml. Mezclar el contenido por inversin, luego dejar en reposo por un minuto. Realizar lectura fotocolorimtrica empleando el Klett Summerson o Spectronic 20, con filtro azul 420 nanmetros.REALIZAMOS LOS CALCULOS CORRESPONDIENTES:a) Dar lectura del problema restar la del blanco:520 O = 520b) Este valor(absorbancia diferencial) multiplcalo por el factor real(F.R); se obtendr:Factor Real (F.R) x (Absorbancia del problema Absorbancia del blanco)520 x 0.246 = 127.92

RESULTADOS:

Al presentar 127.92 en sangre est considerado en un rango normal ya que la muestra fue extrada de una persona que no fue expuesta a un ayuno horas antes de esta prctica.

FUNDAMENTO QUMICOGLUCONEOGNESIS Aunque el hgado tiene la funcin fundamental de mantener la glucosa en la sangre la homeostasis y por lo tanto, es el sitio principal de la gluconeognesis, el rin desempea un papel importante. Durante los perodos de hipoglucemia grave que se produzcan en condiciones de insuficiencia heptica, el rin puede proporcionar glucosa a la sangre a travs de gluconeognesis renal. En la corteza renal, la glutamina es la sustancia preferida para la gluconeognesis.

Proceso:

Lasenzimasque participan en lava glucolticaparticipan tambin en la gluconeognesis; ambas rutas se diferencian por tres reacciones irreversibles que utilizan enzimas especficas de este proceso y que condicionan los dos rodeos metablicos de esta va.

Estas reacciones son:Deglucosaa glucosa-6P.Defructosa-6P a fructosa-1,6-bisfosfato.Defosfoenolpiruvatoapiruvato.

* La conversin de piruvato a fosfoenolpiruvato en la gluconeognesis se lleva a cabo en dos pasos. El primero de ellos es la reaccin de piruvato ydixido de carbonopara dar oxaloacetato. La enzima que cataliza esta reaccin es lapiruvato carboxilasa, unaenzima alostricaque se encuentra en lamitocondria. Este paso requiere energa, la cual queda disponible por hidrlisis de ATP.

La conversin de oxaloacetato a fosfoenolpiruvato la cataliza la enzimafosfoenolpiruvato carboxiquinasa, que se encuentra en la mitocondria y en elcitosol. Esta reaccin tambin incluye la hidrlisis de unnuclesido-trifosfato, en este caso elGTPen vez del ATP.

* La reaccin de lafosfofructoquinasa1 de la gluclisis es esencialmente irreversible pero slo debido a que est impulsada por la transferencia de fosfato del ATP.

La reaccin que tiene lugar en la gluconeognesis para evitar este paso consiste en una simple reaccin hidroltica, catalizada por lafructosa-1,6-bisfosfatasa.* La glucosa-6-fosfato no puede convertirse en glucosa por la accin inversa de lahexoquinasao laglucoquinasa; la trasferencia de fosfato desde el ATP hace a la reaccin virtualmente irreversible.Otra enzima especfica de la gluconeognesis, laglucosa-6-fosfatasa, que tambin requiere Mg2+, es la que entra en accin en su lugar. Esta reaccin de derivacin se produce tambin mediante una simple hidrlisis.METODO DE FOLIN WUDespus de un ayuno de varias horas y en condiciones de reposo la concentracin de glucosa en sangre es de 65 a 100 mg por 100 ml. Despus de la ingestin de alimentos, sobrevienen alzas hasta de 120 a 140 mg por 100 ml y, unas horas despus, regresan a los valores en ayunas.Este es un ejemplo de ajuste fisiolgico constante para conservar la concentracin de glucosa en los lquidos sin grandes cambios.De la misma manera, la modificaciones producidas por las emociones violentas, el ejercicio intenso y la an inanicin, son equilibradas para volver a lo normal.Si la glucosa de la sangre se mantiene dentro de los lmites estrechos, es porque la serie de fenmenos que concurren a proporcionar glucosa a la sangre se equilibran con los mecanismos que la sustraen de ella.En ayunas, la nica fuente de glucosa sangunea es el hgado.La velocidad de formacin y degradacin del glucgeno heptico es uno de los factores ms importantes en la regulacin de la glicemia. Como la salida de glucosa del hgado depende, en gran parte, de la concentracin de glucosa en la sangre, cuando sta se modifica, funciona el mecanismo glucognico, o por el contrario, el glucogenoltico, debido a las hormonas relacionadas:La insulina, que favorece la utilizacin y captacin de glucosa y es secretada al elevarse la glucemia, el glucagn y la epinefrina, impulsores de la glucogenlisis, y son secretados por el pncreas y glndulas suprarrenales cuando hay hipoglucemia.La hormona insulina tiene gran importancia en la participacin de la regulacin de glucosa sangunea, se produce en las clulas Beta del pncreas en respuesta a la hiperglucemia, la administracin de insulina produce hipoglucemia inmediata. La adrenalina y la noradrenalina impiden la liberacin de la insulina.Por otro lado, el glucagn se opone a la accin de la insulina, es producido en las clulas A del pncreas y es secretado cuando hay hipoglucemia llegando a travs de vena porta al hgado para producir glucogenlisis y gluconeognesis.Otras hormonas influyen en la hiperglucemia como la hormona del crecimiento que inhibe la utilizacin de la glucosa y favorece la de cidos grasos, los glucocorticoides que aumentan la gluconeognesis, la adrenalina secretada cuando hay estmulos estresantes causa glucogenlisis y las hormonas tiroideas.La glucosa es un azcar que es utilizado por los tejidos como forma de energa al combinarlo con el oxgeno de la respiracin. Cuando comemos el azcar en la sangre se eleva, lo que se consume desaparece de la sangre, para ello hay una hormona reguladora que es la insulina producida por el pncreas (islotes pancreticos). Esta hormona hace que la glucosa de la sangre entre en los tejidos y sea utilizada en forma de glucgeno, aminocidos, y cidos grasos. Cuando la glucosa en sangre est muy baja, en condiciones normales por el ayuno, se secreta otra hormona llamada glucagn que hace lo contrario y mantiene los niveles de glucosa en sangre.Causas de aumento de glucosa en sangre.Al ascenso de la glucosa sangunea por arriba de 120 mg/dl se denomina hiperglucemia y puede ser signo de muchas enfermedades, la hiperglucemia siempre se da despus de una comida pero se regula por medio de la insulina que lleva la glucosa a los tejidos para su almacenamiento ya que es el principal combustible celular.La hiperglucemia se da por la disminucin de la entrada de glucosa a las clulas, por la disminucin de la utilizacin de glucosa por varios tejidos y por el aumento en la produccin de glucosa por el hgado.La entrada de glucosa a las clulas la da la insulina, si la glucosa no entra a las clulas el cuerpo necesita tomar energa de otro lado, por lo general de las grasas, la degradacin de las grasas causa cuerpos cetnicos y consecuentemente cetosis, el hgado en este caso aumentara la produccin de glucosa al ver que las clulas no estn recibiendo la suficiente, agravando el problema.Causas de disminucin de glucosa en sangre.La hipoglucemia est presente en el ayuno pero es fcilmente regulada por los procesos gluconeognicos o glucogenolticos si existe una buena reserva de glucgeno, se considera una hipoglucemia cuando los niveles de glucosa sangunea estn por debajo de los 60 mg/dl y esta es mucho ms peligrosa que la hiperglucemia ya que fcilmente puede causar un choque hipo glucmico con convulsiones y coma por la falta de glucosa para el funcionamiento cerebral.La principal causa de hipoglucemia es la presencia de insulina en exceso y se puede regular por el glucagn o la adrenalina como se mencionaba en el punto nmero uno, ya que son antagnicos.Las causas principales de la hipoglucemia en una persona sana son muy obvias, como por ejemplo ayunos prolongados, desnutricin, por vmito y diarrea, ejercicio en exceso, etctera.En el caso de una persona que se le suministre insulina tendr que ser muy bien controlada ya que al drsela entra en vastedad y si no hay buenos niveles de glucosa en sangre la insulina en exceso que entr se encarga de la poca glucosa que existe poniendo en riesgo al paciente, causndole una hipoglucemia severa.