determinación de vitaminas a en alimentos infantiles instantáneas por cromatografía liquida de...

7/25/2019 Determinacin de Vitaminas a en Alimentos Infantiles Instantneas Por Cromatografa Liquida de Alto Rendimiento

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PEDRO DOMINGO MURILLO

TEMA:

DETERMINACIN DE VITAMINAS A EN ALIMENTOS INFANTILESINSTANTNEAS POR CROMATOGRAFA LIQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO

(HPLC)

ESTUDIANTE:

JULIO EDGAR CATARI CHURA

DOCENTE:

Lic. Ximena pozo

La paz Bolivia

020!20"!


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DETERMINACIN DE VITAMINAS A EN ALIMENTOS INFANTILES

INSTANTNEAS POR CROMATOGRAFA LIQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO

(HPLC)

Intr!"##$%n

Con la finalidad de controlar la calidad de alimentos infantiles instantneas se

efecta la validacin de la metodologa para la determinacin d la vitamina A por

cromatografa (hplc) con los resultados obtenidos se demuestro que el mtodo en

estudio es preciso. !acto" lineal # altamente sensible para ser utili$ados en elcontrol de calidad de dicho alimento.

Como sabemos la vitamina A es el nombre genrico utili$ado parta describir al

retinol sus esteres # lo correspondiente ismeros.

%a vitamina A no es ms que un alcohol polienico isoprenoide que se conoce

tambin con otro nombre como a!eroftol biosterol vitamina anti!eroftalmica #

vitamina anti infecciosa.

&el retinol derivan por o!idacin el retinal # el cido retinoico. l ''cisretinal uegan un papel decisivo en el proceso visual. n los vegetales # en algunos organismos marinos encontramos a la

vitamina A como provitamina A e en la forma de * caroteno. pigmentos

amarillentos constituido por dos molculas d retinal unidas en el e!tremo

aldehdo de sus cadena s carbonadas.

&entro de provitaminas # carotenos la proteccin de la piel # sus intervenciones

en el proceso de visin de la retina. +ambin participa en la elaboracin de

en$imas en el hgado # de hormonas se!uales # supra renales. l dficit de

vitaminas A produce ceguera nocturna" sequedad en los oos # en la piel #

afecciones diversas de la mocosa.


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,ientras que por otro lado el e!ceso de este puede provocar alteraciones -seas

# hemorragias en diversos teidos.

%a vitamina A se encuentra principalmente en productos lcteos" mantequilla"

queso" huevo" carne. gado # aceite de hgado de bacalao.

/e destru#e fcilmente por la accin de la lu$ con temperaturas elevadas.

D&t&r'$n#$%n !& *$t'$n A

%os mtodos espectrofotmetro # fotmetros empleado en la determinacin de la

vitamina A esta e!puesto a interferencias de algunas sustancias con la

presencia de carotenos" derivados # productos de descomposicin de la vitamina

A que de alguna forma podra absorber la lu$ en la regin ultravioleta o darcolores similares con los reactivos utili$ados en la determinacin fotomtrica . 0or

ello estos mtodos no son suficiententemente especficos para determinar etas

vitaminas agregando la confiabilidad de sus resultados dependern del !ito

en los pasos de purificacin # en los procedimientos de trabao.

n este sentido # buscando una ptima metodologa de anlisis en el presente

estudio se reali$aron la validacin de la metodologa por 0%C para

determinacin de vitaminas contenidas en alimentos infantiles instantneos.

+,& -$,t%r$# !& #r't.r/0

%a cromatografa es una tcnica de anlisis qumico utili$ada para separar

sustancias puras de me$clas compleas. sta tcnica depende del principio de

adsorcin selectiva (no confundir con absorcin). %a cromatografa fue descubierta

por el botnico ruso" de origen italiano" ,i1hail +s2ett en '345" pero su uso no se

generali$ hasta la dcada de '364. +s2ett separ los pigmentos de las plantas(clorofila) vertiendo e!tracto de hoas verdes en ter de petrleo sobre una

columna de carbonato de calcio en polvo en el interior de una probeta. A medida

que la solucin va filtrndose por la columna" cada componente de la me$cla

precipita a diferente velocidad" quedando la columna marcada por bandas


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hori$ontales de colores" denominadas cronogramas. Cada banda corresponde a

un pigmento diferente.

%a cromatografa es probablemente la ms verstil de las tcnicas de separacin7

es aplicable a cualquier me$cla soluble o voltil. &e hecho las tcnicas deseparacin suelen dividirse en dos grandes grupos7 cromatografas # no

cromatografas. %a eleccin de una tcnica cromatogrfica concreta depender de

la naturale$a # cantidad de la muestra" del obetivo de la separacin # de las

limitaciones del tiempo # equipo asequible.

0odemos distinguir 6 tipos de cromatografa dependiendo si la fase

estacionaria8fase mvil es slido8lquido" lquido8lquido o lquido8gas7

S$ &, ,%$!102"$!3 #4& !$,t$n."$r &ntr&:

Cr't.r/0 !& !,r#$%n:

l slido adsorbe al componente que inicialmente estaba en fase mvil (liquida o

gaseosa) (9uer$as de :an der ;aals).

Cromatografa de cambio inico:

l slido es un cambiador de iones (fuer$as electrostticas).

Cromatografa de exclusin (o de geles):

l slido es un gel formado por polmeros no inicos porosos que retienen a las

molculas de soluto segn su tama


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S$ &, 02"$!102"$!3 #4& !$,t$n."$r:

Cromatografa de particin:

l soluto se reparte entra la fase mvil (lquido o gas) # la fase estacionaria.

S$ &, 02"$!1.,3 #4& !$,t$n."$r &ntr&:

Cromatografa gas-liquido (CGL)3

=ue es una cromatografa de particin.

Cromatografa gas-slido (CGS)3

=ue es una cromatografa de adsorcin.

/i es un fluido supercrtico" (fluido calentado a una temperatura superior a la

temperatura crtica" pero simultneamente comprimido a una presin ma#or que

su presin critica)" se trata de la cromatografa de fluidos supercrticos (C9/)" que

puede ser de particin o de adsorcin.

%as tcnicas cromatografas" segn el dispositivo utili$ado para conseguir laseparacin entre la fase mvil # la estacionaria" pueden ser7 en columna # plana.

Cromatografa en columna:

/e utili$a un tubo cilndrico" en cu#o interior se coloca la fase estacionaria # a su

travs se hace pasar la fase mvil. l fluo de la fase mvil (lquido o gas) a travs

de la estacionaria se consigue7

') por presin"

>) por capilaridad"

6) por gravedad.


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Cromatografa plana:

%a fase estacionaria est colocada en una superficie plana que en realidad es

tridimensional" aunque una de sus dimensiones es mu# reducida" por lo que puede

considerarse bidimensional. /e divide en dos tipos generales7

'. C#oma$o%#a&'a en papel7 en la que el papel absorbente acta como soporte de

la fase estacionaria (cromatografa de particin). ?na muestra lquida flu#e por una

tira vertical de papel absorbente" sobre la cual se van depositando los

componentes en lugares especficos.

2. C#oma$o%#a&'a en capa &ina(en la que un slido acta como fase estacionaria

(cromatografa de particin)" se e!tiende en una capa delgada sobre una placa"generalmente de vidrio.

l uso de la cromatografa est ampliamente e!tendido en el anlisis de alimentos"

medicinas" sangre" productos petrolferos # de fisin radiactiva.

F,& M%*$:

fecto de despla$amiento eercido sobre los componentes de la me$cla por una

fase mvil" que puede ser un lquido o un gas" sobre una fase estacionaria.

F,& &,t#$nr$7

fecto de retencin producido sobre los componentes de la me$cla por una fase

estacionaria" que puede ser slida o lquida" anclada a un soporte slido.

T$5, !& #r't.r/0

/egn la naturale$a de la fase estacionaria # de la fase mvil.

6 /lido @ %iquido (stacionaria /lida # la ,vil %iquida)

46 %iquido @ %iquido (stacionaria %iquido anclado a un soporte solido)


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#. %iquido @ Bas (stacionaria %iquido no voltil impregnado en un slido # la

,vil Bas)

!. /lido @ Bas (stacionaria /olida # la ,vil Bas)

R&$7#$%n !& #r't.r/0 &n #5 /$n:

n este apartado se reali$aran placas de cromatografa DE ! E cm" las cuales

solo se podrn coger por los bordes # nunca tocar la parte de celulosa (la blanca)"

porque ello acarreara errores en la medicin.

?na ve$ obtenidas las placas" marcamos a lpi$ una lnea a ' cm de la base.

/obre esa lnea marcamos F puntos" donde se depositaran con las capilares

peque


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C'5, !& A5$##$%n !& HPLC

9rmacos7 Antibiticos" sedantes esteroides" analgsicos

*ioqumica7 Aminocidos" protenas" carbohidratos" lpidos

0roductos de alimentacin7 dulcorantes artificiales" antio!idantes"

aflato!inas" aditivos

0roductos de la industria qumica7 Aromticos condensados" tensoactivos"

propulsores" colorantes

Contaminantes7 fenoles" 0esticidas" herbicidas" 0C*

=umica forense7 &rogas" venenos" alcohol en sangre" narcticos

,edicina clnica7 Jcidos biliares" metabolitos de drogas" e!tractos de orina"

estrgenos.

O+8ETIVO

&eterminar de la vitamina A esta e!puesto a interferencias de algunas

sustancias con la presencia de carotenos" derivados # productos

Conocer las partes de la cromatografa de gases

MATERIALES 9 MTODOS


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E2"$5

quipo de cromatografa de liquida de alto rendimiento(hplc) de marca

shimad$u Kn#ector automtico *omba de sistema de desgasificacin Kntegrador o sistema de registro /oft2are para el procesado de datos cromatograficos &etector de arreglos d diodos(longitud de banda variable) Columna cromatografa de acero ino!idable para fase reversa (>Ecm L

"5cm de dimetro interno. Emm de dimetro de partcula con columna de

cartucho)

D&,#r$5#$%n !& &2"$5

CONDICIONES DE OPERACIN

/istema isocratico 9luo '.>ml8min :olmenes de in#eccin de >4ml &eteccin ?: >>nm +emperatura de horno Ambiente +iempo de corrida Fmin 9ase mvil7 metanol al '44H grado 0%C.

REACTIVOS

,etanol grado 0%C stndar alltransretinol e!ano p.a. tanol absoluto p.a.


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/olucin de hidr!ido de potasio al E4H *+ o cido ascrbico Agua tridestilada /olucin stoc1 estndar de vitamina A 7 se disolvieron '44mg

del estndar en '44ml de etanol absoluto con

apro!imadamente 4.44>gramos de *+ # se guard la

solucin en congelacin ( >4)

PROCEDIMIENTO

/e pesaron >4 gramos de la muestra de alimento infantil un recipiente

de base plana # se adiciono F4ml de etanol absoluto ambas me$clas secolocaron en los tubos de refluo # se agito hasta su ebullicin con

corriente de nitrgeno. %uego se adiciono >4ml de solucin de M- al E4H saponificando la

me$cla por 64min con agitacin moderada. Antes de finali$ar esta etapa se

enuago el contenido con E4 ml d agua en 6 porciones %a solucin se enfri a temperatura ambiente # luego se filtr al vaco"

colocando rpidamente el contenido en un embudo de decantacin de

>E4ml a la cual se adiciono E4 ml de he!ano p.a. para proceder a lae!traccin.

/e agito la me$cla por >4min # al separarse se evidencia la formacin de

la fase orgnica (en la parte superior) el cual se trasvaso en un baln de

>E4ml de base redonda que contena apro!imadamente 4.Egramos de

*+ o cido ascrbico .se efectu dos veces ms al e!traccin # se

untaron los e!tractos en el baln de >E4ml /e evaporo a sequedad el solvente haciendo uso de un rota vapor con

ba


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CLCULOS

Concentracin de vitamina A (mg8g o ppm)amLcsLd8as 2m

&nde7

A'7 rea del pico de vitamina A en la muestra

A,7 rea del pico de vitamina A en el estndar

C,7 concentracin de vitamina en el estndar mg8ml

D7 factor de dilucin

;':peso de la muestra g

CONCLUSIN

&e acuerdo a los resultados obtenidos podemos concluir que el mtodo de

ensa#o es por 0%C es preciso" e!acto" especifico # sensible para los parmetros

evaluados en este estudio #a que se encuentra ron dentro de rangos establecidos.

+I+LIOGRAFIA

c#oma$o%#a&'a l')*i+a +e al$o #en+imien$o. ;ile#. &e la crtica ung" %*O 0archer"P9O /hores" PCO ;ard" ('3GG). Q9undamentacin terica # e!perimental para la

programacin de superficie de cobertura en la cromatografa gasslido con un

gas portador adsorbibleQ
http://translate.googleusercontent.com/translate_c?depth=1&hl=es&prev=/search%3Fq%3Dhplc%26biw%3D1280%26bih%3D920&rurl=translate.google.com.bo&sl=en&u=http://www.osti.gov/energycitations/product.biblio.jsp%3Fosti_id%3D7013902&usg=ALkJrhgxVISuTOlqYhW9NidmDX5bsPIWgAhttp://translate.googleusercontent.com/translate_c?depth=1&hl=es&prev=/search%3Fq%3Dhplc%26biw%3D1280%26bih%3D920&rurl=translate.google.com.bo&sl=en&u=http://www.osti.gov/energycitations/product.biblio.jsp%3Fosti_id%3D7013902&usg=ALkJrhgxVISuTOlqYhW9NidmDX5bsPIWgA


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Berber" 9.O Mrummen" ,.O 0otgeter" .O Roth" A.O /iffrin" C.O /poendlin" C. (>44).

QAspectos prcticos de la cromatografa lquida de alta resolucin en fase reversa

rpida usando partculas 6Sm columnas de relleno # columnas monolticas en el

desarrollo farmacutico # la produccin trabaa bao buenas prcticas de

fabricacin actualesQ

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