Panreac Leche OK

12. CALCIO12.1. Principio.Se entiende por contenido en calcio de la leche la cantidad total de calcio expresada en porcenta- je en peso, determinada por el procedimiento expuesto a continuacin, que corresponde a la norma FIL-36: 1966 de la Federacin Internacio- nal de Lechera.Este mtodo se aplica a todas las leches lqui- das normales, as como a las leches reconstitui- das por dilucin o disolucin de leches concen- tradas o de leches desecadas.El calcio total se lleva a disolucin por precipi- tacin de las materias proteicas con cido triclo- roactico. El calcio contenido en el filtrado es pre- cipitado bajo forma de calcio oxalato, que se separa por centrifugacin y se valora con potasio permanganato.

12.2. Material y aparatos.12.2.1. Balanza analtica.12.2.2. Matraz aforado de 50 ml.12.2.3. Pipeta para leche de 20 ml.12.2.4. Papel filtro sin cenizas para filtracin lenta.12.2.5. Centrfuga que pueda desarrollar una aceleracin centrfuga de 1,400 g (g = aceleracin de la gravedad).12.2.6. Tubos de centrfuga cilndricos con fondo redondo de 30 ml, aproximadamente, mar- cados a 20 ml.12.2.7. Pipetas de 2 y 5 ml.12.2.8. Dispositivo de sifn por succin, pro- visto de un tubo capilar.

12.2.9. Bao de agua, a temperatura de ebulli- cin.12.2.10. Bureta graduada.12.3. Reactivos.131008 Acido Actico glacial PA-ACS

252373 Acido Tricloroactico solucin 20% p/v DC131074 Agua PA-ACS131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO131129 Amonaco 25% (en NH3) PA

131136 Amonio Oxalato 1-hidrato PA

131085 Etanol 96% v/v PA

182114 Potasio Permanganato 0,01 mol/l (0,05N) SV171617 Rojo de Metilo RE-ACS12.3.1. Acido Tricloroactico solucin 20% p/v DC.12.3.2. Acido Tricloroactico solucin acuosa al 12% p/v. Usese Acido Tricloroactico solucin 20% p/v DC y diluir convenientemente.12.3.3. Amonio Oxalato 1-hidrato PA: Solucin acuosa saturada en fro.12.3.4. Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS:solucin al 0,05% p/v en Etanol 96% v/v PA.

12.3.5. Acido Actico: solucin acuosa al 20% v/v. Usese Acido Actico glacial PA-ACS y diluir convenientemente.

12.3.6. Amonio Hidrxido: solucin acuosa obtenida mezclando volmenes iguales de Amonaco 25% (en NH3) PA y de Agua PA-ACS.12.3.8. Acido Sulfrico: solucin acuosa obtenida aadiendo 20 ml de Acido Sulfrico 96% PA- ISO a 80 ml de Agua PA-ACS.12.3.9. Potasio Permanganato 0,02N:NOTA: En un matraz aforado de 250 ml. introducir 100 ml. de Potasio Permanganato 0,01 mol/l (0,05N) SV, diluir y enrasar con Agua PA-ACS. Determinar el factor de la solucin 0,02N resultante.

Todos los reactivos deben ser puros para anlisis.12.4. Procedimiento.12.4.1. Preparacin de la muestra.- Antes del anlisis, poner la muestra a 20 2C y mezclar con cuidado. Si no se obtiene una dispersin homognea de la materia grasa, calentar lenta- mente la muestra a 40C, mezclar suavemente y enfriar a 20 2C.12.4.2. Defecacin de la muestra.- En un matraz aforado de 50 ml pesar exactamente alrededor de 20 g de leche, con una aproximacin de10 mg. Aadir poco a poco mientras se agita una solucin acuosa de Acido Tricloroactico 20% p/v DC y completar hasta 50 ml con este reactivo. Agitar fuertemente durante algunos segundos. Dejar reposar 30 minutos. Filtrar sobre papel filtro sin cenizas. El filtrado obtenido debe ser lmpido.12.4.3. Precipitacin del calcio en forma de oxalato y separacin del oxalato. En un tubo de centrfuga cilndrica de fondo redondo, introducir5 ml del filtrado lmpido; despus 5 ml de Acido Tricloroactico al 12%, 2 ml de una solucin acuosa saturada de Amonio Oxalato 1 hidrato PA, dos gotas de solucin alcohlica de Rojo de Metilo RE-ACS y 2 ml de Acido Actico al 20%. Mezclar mediante agitacin circular y aadir poco a poco solucin de Amonaco (12.3.6.) hasta coloracin amarillo plido; despus, algunas gotas de Acido Actico al 20% hasta coloracin rosa. Dejar reposar 4 horas a la temperatura ambiente.Diluir hasta 20 ml con Agua PA-ACS y centrifugar 10 minutos a 1.400 g (g = aceleracin de la gravedad). Mediante un dispositivo de succin, decantar el lquido lmpido que sobrenada. Lavar las paredes del tubo de centrifugacin (sin remo- ver el depsito de calcio oxalato) con 5 ml de solucin de Amonaco diluido (12.3.7.). Centrifugar 5 minutos a 1.400 g. Decantar el lquido que sobrenada con el dispositivo de succin. Proceder a tres lavados sucesivos.12.4.4. Valoracin del oxalato.- Despus de haber extrado con sifn el agua del ltimo lavado, aadir 2 ml de solucin acuosa de Acido Sulfrico y 5 ml de Agua sobre el precipitado de calcio oxalato. Poner el tubo en bao de agua hirviendo, y cuando el oxalato est completamente disuelto, valorar con solucin de Potasio Permanganato0,02N, hasta coloracin rosa persistente. La temperatura debe permanecer superior a los 60C durante la valoracin.12.4.5. Ensayo en blanco.- Efectuar un ensayo en blanco con todos los reactivos, utilizando 20 ml de Agua PA-ACS en vez de leche.12.5. Clculo.

Contenido

1.000en calcio% = 0,0004 x (V-v) x x K = P K= 0,4 x (V-v) x P

V = volumen en ml de MnO4K (0,02N) gastados en la valoracin de la muestra.v = volumen en ml de MnO4K (0,02N) gastados en el ensayo blanco.P = peso en gramos de la muestra inicial (alrededor de 20 g).K = coeficiente de correccin del volumen del precipitado resultante de la precipitacin tricloroactica.Para leche entera (3,5 a 4,5 por 100 de materia grasa):K = 0,972

Para leche con 3 por 100 de materia grasa: K = 0,976.Para leche con 2 por 100 de materia grasa: K = 0,980.Para leche con 1 por 100 de materia grasa: K = 0,985.

Para leche desnatada: K = 0,989.La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas simultneamente o una inmediatamente despus de otra por el mismo analista, no debe ser mayor de 0,002 g calcio por100 g de leche.12.6. Referencia.12.6.1. Norma Internacional FIL-IDF 36: 1966.