curso histologÍa animal

HISTOLOGA ANIMALMag. Freddy Caldern RamosProfesor Principal a D. E. de la EAP de BiologaFacultad de [email protected]

OPTICA Y MICROSCOPIA

La ptica es el estudio de la interaccin de las ondas de luz con medios reflectores y medios refractores.La luz es una manifestacin de la energa universal que se desplaza por ondas y que no necesita medio elstico para su transporte (la longitud de onda es de 0,7 y 0,31 micras y tiene una velocidad de 300.000 Km x segundo).

OPTICA Y MICROSCOPIALa intensidad de la luz est en relacin inversa al cuadrado de la distancia.Los rabes descubrieron el cristalino.Alhazam fue el primero en publicar un libro llamado Los tesoros de la vista.


Lippershey fue el que tallando lentes invent el microscopio, y a partir de este Galileo lo mejor.Sensacin Luminosa El sentido de la vista nos pone en comunicacin con el medio exterior, proporcionndonos sensaciones de forma, color distancia de los objetos que nos rodean, por la accin que ejercen en nuestros ojos ciertas radiaciones.Los cuerpos que emiten o producen radiaciones capaces de impresionar nuestro sentido de la vista se llaman fuentes luminosas.


Los cuerpos que reflejan la luz que reciben de ella y la que de ese modo llega a nuestros ojos en forma indirecta se dicen que estn iluminados.El color es una caracterstica de impresin luminosa.Las fuentes luminosas pueden:- naturales- artificiales.

OPTICA Y MICROSCOPIALos cuerpos que interpuestos ente el ojo y los objetos permiten percibir sin modificacin sensible las sensaciones luminosas son transparentesLa luz se propaga en forma recta si el medio es homogneo.


El rayo luminoso es la radiacin que ha pasado por un pequeo orificio si la fuente de luz esta alejada.El conjunto de rayos que pasa por un punto consiste en un haz de rayos.La propagacin rectilnea de la luz se cumple siempre que los objetos interpuestos o las ranuras por donde se las hace pasar no sean pequeos pues entonces se produce la difraccin.

REFRACCION

Se produce cuando el objeto es transparenteEs la desviacin que sufre el rayo luminoso al atravesar un cuerpo transparente.El ndice de refraccin es la medida de la densidad ptica de un objeto

Reflexin

Consiste en que el rayo luminoso es desviado por un cuerpo en una sola direccin.

DIOPTRA

Dioptra:La superficie plana de separacin de dos medios de distinto ndice de refraccin separados uno de otro por una superficie esfrica constituye una dioptra esfrica.Un medio transparente limitado por dos dioptras cuyos ejes principales coinciden constituyen una lente.

ESPEJO

Una superficie perfectamente plana es un espejoTodos los rayos que partiendo de un punto S, (sus prolongaciones) se reflejan en un espejo, pasan por un punto S simtrico de S con respecto al plano del espejo.Al punto S lo llamaremos imagen de S como son prolongaciones de rayos reflejados esta imagen tiene carcter virtual.La imagen real es aquella en que los rayos y no sus prolongaciones se cortan en un punto.

ESPEJO

Si en lugar de uno solo, tenemos varios puntos, a cada punto objeto corresponder uno imagen.Como la imagen es simtrica del cuerpo con respecto al plano del espejo la imagen es virtual y de igual tamao siendo simtricas no se pueden superponer por eso la imagen de mano derecha es una mano izquierda.

Reflexin de la luz en un espejo planoSi el haz de rayos que incide sobre un espejo converge hacia un punto situado detrs del mismo el centro del haz constituye un foco virtual y su imagen ser en este caso real

ESPEJOS ESFERICOS

Cuando el espejo tiene la forma de un arco de esfera y la superficie de reflejo corresponde a la cara interior se llama cncavo y si corresponde a la cara exterior se llama convexo.

ESPEJOS ESFERICOS O CNCAVOSCuando el observador se encuentra justo en el centro de curvatura, ve su imagen a tamao real pero invertida.La imagen pasa a ser virtual y aparece derecha y aumentada cuando el observador se acerca al espejo.

TIPOS DE LENTESPueden ser biconvexas, plano convexas, bicncavas, cncavas y cncavo convexas.Si el ndice de refraccin es mayor que el medio que la rodea son convergentes.Las cncavo convexas son convergentes o divergentes segn la cara de mayor curvatura sea la convexa o la cncava.

Tipos de lentes convergentes

Tipos de lentes convergentesObserva que la lente 2 tiene menor distancia focal que la 1. Decimos, entonces, que la lente 2 tiene mayor potencia que la 1.La potencia de una lente es la inversa de su distancia focal y se mide en dioptras si la distancia focal la medimos en metros.

Tipos de lentes divergentes

Si miramos por una lente divergente da la sensacin de que los rayos proceden del punto F. A ste punto se le llama foco virtual.

MICROSCOPIA

La palabra microscopio viene de micro y del gr. Skopein = mirar, examinar.

El microscopio sirve para aumentar la imagen de los objetos muy diminutos.

MICROSCOPIALa Microscopa va a estudiar a las partes ms pequeas a travs del microscopio (el ms comn: microscopio ptico) Sus reas de la Microscopa son:a)Organografa Estudio de los rganos.b)Histologa (propiamente dicha, tejidos)c)Citologa o biologa celular.

Microscopio de Leeuwenhoek

Partes del microscopio ptico.

Las preparaciones teidas son observadas por transiluminacin.El microscopio : una parte mecnica y una parte ptica (un sistema de lentes)Entre ellas podemos encontrar al pie o pedestal puede ser circular, cuadrada, rectangular y semilunar.El tornillo macromtrico (enfoca la imagen) y por el micromtrico (afina la imagen);Porta objetos, carro de movimientos que nos van a

MICROSCOPIALa parte ptica: lentes convergentes: plano convexa, biconvexa, concavoconvexa.- condensador- Objetivos- OcularesEl condensador proyecta un rayo cnico de luz para iluminar el objeto a ser observado.Los objetivos: envan la imagen a los lentes oculares.El ocular: la imagen la proyecta a la retina del observador o a las pantallas.

MICROSCOPIA.Subplatina. vamos a encontrar el condensador, que va a concentrar la luz para poder observar la imagen, tornillo permite ascenso y descenso. Diafragma que es una serie de lminas sobrepuestas que se abren y cierran permitiendo el paso de luz; por debajo de este encontramos filtros que son de color azul que van a transformar la luz amarilla en luz blanca. El espejo que puede ser plano con una cara cncava.

Microscopio ptico

Microscopio electrnico

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METODOS DE ESTUDIOUnidades de medida: um y nmAl microscopio de luz los tejidos son estudiados por transiluminacin.Tcnicas de preparacin= tejidos delgados y translcidosTejidos fijados=> preparacin permanenteExtendidos en una placa de vidrio, coloreados o teidos y cubiertos para su observacin al microscopio.

MICROSCOPIA

TECNICA HISTOLOGICA ES EL CONJUNTO DE PROCEDIMIENTOS REALIZADOS PARA OBTENER UN

PREPARADO HISTOLOGICO

TECNICA HISTOLOGICA PREPARADO HISTOLOGICO:

Es una rebanada de tejido colocada sobre una lmina portaobjetos, coloreada y cubierta por una lmina cubre-objetos.

TECNICA DE LA PARAFINAOBTENCION DEL MATERIAL:

BIOPSIA

AUTOPSIAHISTOLOGIATEJIDOS NORMALESANATOMIA PATOLOGICA TEJ. PATOLOGICOSCon AgujaIncisionalExcisional

Tcnica de la Parafina2. FijacinDebe ser inmediataSe sumerge en fijador o por perfusinCloruro de Hg, cido picrico, formalina y glutaraldehdoLiquido de Bouin: cido picrico, formalina , cdo actico y agua

TECNICA HISTOLOGICASI LA MUESTRA DE TEJIDONO SE FIJASE FIJAAUTOLISISCONSERVA LASCARACTERISTICAS

Tcnica de la ParafinaEquipo de perfusinEquipo de diseccin

Fijadores-Formalina de Zenker: formalina, dicromato de potasio, cloruro de mercurio y agua.-Formalina al 10% disuelta en solucin salina y una solucin buffer al 2% de glutaraldehdo

Tcnica de la Parafina

4. Inclusin en Parafina:56C1h 30

3. Deshidratacin

Tcnica de la ParafinaFormacin de bloquesFactura del taco para cortar

Corte: Micrtomo

EL CORTEA.- Se corta en el microtomoC.- Se monta el corte en la lmina PortaobjetosB.- Se coloca en el Bao de Mara

TECNICA HISTOLOGICACOLORACION:COLORANTEES UNA SUSTANCIA CAPAZ DE COMUNICAR SU COLORACION A OTROS CUERPOSHEMATOXILINA - EOSINALa coloracin ms usada es

Tcnica de la ParafinaAclaracinColoracinMontaje

CORTES HISTOLOGICOSHEMATOXILINA-EOSINA

HISTOQUIMICA Y CITOQUIMICALa histoqumica y la inmunohistoqumica unen los mtodos histolgicos y citolgicos con los de la qumica y la bioqumica.Objetivo: la composicin qumica y bioqumica de los tejidos y clulas ms all de la distribucin cido-bsica mostrada mediante los mtodos de tincin standard, sin alterar la distribucin de las sustancia qumicas.

HISTOQUIMICA Y CITOQUIMICALos trminos histoqumica y citoqumica son usados principalmente para indicar los mtodos y para localizar diferentes sustancias en secciones de tejidos.Muchos iones (ejemplo hierro-fosfato) fueron localizados en el tejido con estos mtodos

ColorantesCOLORANTES NATURALES:Animales (carmn)Vegetales (hematoxilina, orsena, azafrn)

Coloracin1) Secado de los cortes en estufa a 58C, 15'. 2) Xilol o toluol (I), 15' en estufa. 3) Xilol o toluol (II), 2'. 4) Alcohol 100, 30". 5) Alcohol 96, 30". 6) Alcohol 70, 30". 7) Alcohol 50, 30". 8) Agua destilada, 30". 9) Hematoxilina, 130". 10) Agua corriente, 2. 11) Alcohol 50, 15". 12) Eosina, 30". 13) Alcohol 96, 10". 14) Alcohol 100, 10". 15) Xilol, 1 por lo menos. 16) Montaje con Blsamo de Canad sinttico.

Colorantes artificiales o sintticos- cidos: sales cuya base es incolora y su cido es coloreado (eosina o eosinato de sodio). Son colorantes citoplasmticos.Bsicos: sales cuya base es coloreada y el cido es incoloro (azul de metileno o clorhidrato de azul de metileno). Son colorantes nucleares.

Colorantes artificiales o sintticosNeutros: sales en las que tanto el cido como la base son coloreados. Tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro.Indiferentes: no forman sales. Tien aquellas sustancias que tienen un poder disolvente superior al del lquido que ha servido para preparar la solucin colorante (Sudn lll, rojo escarlata).

TECNICA HISTOLOGICACOLORACION EOSINAColorante ACIDO, tie deRosado o Rojo elementos bsicosEj. CitoplasmaHEMATOXILINAColorante BSICO tie deAzul o prpura, elementos cidosEj. El Ncleo

ColorantesHematoxilina: colorante vegetalEosina: colorante sinttico

HISTOQUIMICA Y CITOQUIMICAReaccin de Feulgen: cidos nuclicosPAS: PolisacridosOrsena: fibras elsticasSudan IV y Sudn negro: Confieren el rojo y negro a los LpidosFosfatasa cida: enzimas

CORTES HISTOLOGICOSHEMATOXILINA-EOSINASUDANTejido adiposo con distintas coloraciones

COLORACIONES ESPECIALESIMPREGNACION ARGENTICA

Otras tcnicas histolgicasClulas y tejidos vivos- Clulas vivas en suero, luego autolsisCultivo de tejidos vivos: medios de cultivo cambiarse constantemente (rigurosa asepsia)Raspado de lenguaMesentreo de rana

Otras tcnicas histolgicasCentrifugacin diferencial- Fraccionamiento de clulaCentrifugacin: fuerza centrfuga para separar organelos- Funcin y composicin qumica de los organelos se determina in vitroSe basa en la diferencia del peso especficoEstudio en detalle

Otras tcnicas histolgicasRadioautografa-Permite localizacin de sustancias radioactivas en tejidos-Se basa en el efecto de las radiaciones sobre emulsiones fotogrficas-Cristales de bromuro de plata, actan como detectores de la radioactividad.-Los cristales son transformados en grnulos de plata metlica por la radiacin

Las clulas vivas recientemente aisladas del cuerpo de un animal pueden ser colocadas en un lquido apropiado (soluciones salinas, suero) y examinadas por algn tiempo en el microscopio. Tales clulas sin embargo morirn y entraran en un estado de autolisis.El estudio de las clulas y tejidos vivos, por tiempo prolongado, puede realizarse por medio de cultivos en soluciones que contengan sustancias nutritivas necesarias para mantener las clulas vivas por largos periodos de tiempo. La solucin que mantiene vivas las clulas, o medio de cultivo, debe ser renovada con frecuencia, puesto que las sustancias nutritivas se agotan, al mismo tiempo que se acumulan en el medio, productos txicos del metabolismo.Otra medida que se debe adoptar en la prctica de cultivos es la observacin de una rigurosa asepsia, para evitar la contaminacin del medio nutritivo, lo que conducir a un crecimiento rpido de microorganismos en su interior, con perjuicio para el desarrollo de las clulasCiertos medios de cultivo contienen plasma sanguneo y extracto de tejidos embrionarios cuya composicin qumica definida es variable y compleja. Existen medios sintticos de composicin qumica definida, formada por la mezcla de cantidades exactas de diversas sustancias nutritivas requeridas por las clulas.Para la preparacin de los cultivos, las clulas pueden ser disociadas por accin mecnica, asociada a un tratamiento previo con tripsina. Se usan tambin pequeos fragmentos de tejido cortados con instrumentos afilados. Una vez aisladas las clulas pueden ser cultivadas en suspensin o colocadas en un soporte de vidrio, al que se adhieren espontneamente. En este ltimo caso se forma una pelcula de una sola capa de clulas sobre el soporte, que puede ser un cubreobjetos CLULAS Y TEJIDOS VIVOS

Otras tcnicas histolgicasMicroscopa fluorescente-Los compuestos fluorescentes contenidos en los cortes histolgicos podrn ser identificados si son excitados con luz ultravioletaEsta estructura aparecer brillante, las que no invisiblesSe requiere: 1. una fuente de luz ultravioleta 2.- filtros para proteger ojoVitamina A, B2 y porfirinasNaranja de acridina, Fluorescena, lisaminaUnin antgeno-anticuerpo

CORTE POR CONGELACIN Piezas ya fijadas se procede a su endurecimiento mediante congelacin (corte por congelacin), Un microtomo de congelacin (cuchilla que se desliza sobre una platina, conectada a una botella de gas carbnico, que asciende en cada corte) Las micras indicadas previamente 5, 10, 15, 20 etc. Dando salida al gas carbnico se produce una disminucin de la temperatura congelando la pieza.

Corte por congelacin y criostato

CORTE POR CONGELACIN Un criostato (micrtomo introducido en una cmara frigorfica especial, donde la congelacin se produce mediante el enfriamiento de la cmara y la platina por la forzada circulacin de gas fren).Una temperatura excesivamente baja produce un endurecimiento excesivo de la pieza, y la cuchilla bota sobre ella sin cortar, la temperatura se aumenta pasando el dedo sobre la pieza.

CORTE POR CONGELACINEn el criostato, gracias al antiroll, el corte queda extendido sobre la cuchilla y se extrae colocando el portaobjetos sobre la cuchilla, sin tocarla. El corte se adhiere al porta por efecto de la diferencia de temperaturas.Una vez colocados los cortes sobre el porta, LIOFILIZACINLuego se puede proceder a la tincin.

TECNICA HISTOLOGICAPROBLEMAS DE INTERPRETACION al visualizar los cortes con el MicroscopioA.- ARTEFACTOS:Cambios estructurales inducidos por las tcnicas histolgicas.B.- CONCEPTUALES

TECNICA HISTOLOGICAPROBLEMAS DE INTERPRETACIONA.- ARTEFACTOS:DE FIJACION Precipitacin de las protenas.

DE DESHIDRATACION Y ACLARAMIENTO Espacios opticamente vacos

DE LOS CORTES cortes de diferente grosor

DEL MONTAJE pliegues

DEGENERACION POSTMORTEN

TECNICA HISTOLOGICAPROBLEMAS DE INTERPRETACIONB.- CONCEPTUALESLas clulas de los distintos tejidos son de diferentes tamaos

TECNICA HISTOLOGICAPROBLEMAS DE INTERPRETACIONB.- CONCEPTUALES

PROBLEMAS DE INTERPRETACIONB.- CONCEPTUALESImagen en 3DImagen en 2D

PROBLEMAS DE INTERPRETACIONB.- CONCEPTUALES:

Histologa: IntroduccinDel francs tissu que significa textura = Bichat(1771 - 1802) describi ms de 20 tejidos. Mayer (1919) = Histologa microscpica del cuerpo humano

Histologa: IntroduccinSin embargo los tejidos a travs del microscopio diferente textura y otras diferencias. Tcnicas microscpicas: existencia de 4 tejidos bsicos No se puede estudiar la anatoma microscpica de los rganos sin conocimiento previo de cuantos tejidos estn compuestos

Histologa: DefinicinLas clulas que desempean las mismas funciones bsicas y que tienen adems la misma morfologa se agrupan para formar los tejidos.Cigote=> embrinPosteriormente estas clulas sufren un proceso llamado diferenciacin celular, mediante el cual las clulas pasan a ser especialistas.

Histologa: IntroduccinDiferenciacin: clulas cambian de forma y de organizacin segn la funcin =>muchos tipos celulares que van a formar los diferentes tejidos del organismo animal. Sin embargo estas clulas as diferenciadas proceden de un mismo genoma, durante el desarrollo embrionario se manifiestan mecanismos de expresin gnica diferencial que dirige este proceso y como producto final un adulto tiene muchos tipos celulares de morfologa diferente como una neurona, o como una clula sangunea

Histologa: IntroduccinEn el embrin joven:el ectodermo, que cubre el embrin.el endodermo, dentro del embrin.el mesodermo, entre el ectodermo y el endodermo.Estas capas originan cuatro tejidos bsicos: el epitelio ,el conectivo. el muscular y el nervioso

Primer periodo: Periodo PremicroscpicoAndrs Vesalio (1514-1564); fundador de la Anatoma Cientfica, fue condenado a muerte.Bichat (1717 1780); por este anatomista e investigador francs, a finales del sigloXVIII. Examinando con lupa ciertas estructuras, le llam la atencin el parecido con la trama de una tela o tejido: De all sali este nombre: tiss , en francs.

Segundo perodo: Perodo microscpico:R.Hooke (1665), perfeccion el microscopio, al observar una rebanada de corcho : celdas o clulas (del Lat.Cellula). Bauer (1862), dio la primera imagen de los ncleos de las clulas vegetales Purkinje, descubri el ncleo en las clulas de distintos tejidos en los animales, introduciendo (citoplasma) de las clulas, caracteriz la forma de las clulas nerviosas y la estructura de las glndulas. N. Gaidukov , propuso el mtodo de la microscopia de los objetos vivos en el campo visual oscuro. En los primeros decenios del siglo XX el esfuerzo de las investigaciones estuvieron dirigidas al estudio de la Citofisiologa: mitocondrias y el aparato reticular intracelular en los procesos de secrecin y al estudio del ncleo y de su importancia en la transmisin de la herencia.

Segundo perodo: Perodo microscpico:N. Gaidukov , propuso el mtodo de la microscopia de los objetos vivos en el campo visual oscuro. En los primeros decenios del siglo XX el esfuerzo de las investigaciones estuvieron dirigidas al estudio de la Citofisiologa: mitocondrias y el aparato reticular y al estudio del ncleo y de su importancia en la transmisin de la herencia.

Tercer perodo: Perodo de la microscopia electrnica.Se caracteriza por el hecho de que el desarrollo de la histologa y sus aportes a la sociedad tienen lugar en contacto estrecho con el desarrollo de los mtodos ms nuevos de las investigaciones histolgicas y, ante todo de los mtodos microscpicos electrnicos: microscopia electrnica de transmisin y exploracin as como histoqumica electrnica.Se llega a profundizar en la ultraestructura de las clulas, tejidos y rganos, estudindose de nuevo los organelos celulares y su biognesis, permitiendo hacer generalizaciones sobre el principio membranoso de la estructura de las clulas e introducir en Citologa el concepto sobre membrana biolgica.

Composicin y clasificacin de los tejidosComposicin:-Clulas: formas segn funcin-Compuestos intercelulares-Sustancia fundamental-Fludos: Sangre, lquido interticial, linfa

Componentes de un tejido

Composicin y clasificacin de los tejidosClasificacin:-Epitelial-Conectivo-Muscular-Nervioso

Tejido EpitelialEpi=sobreThele=peznOrigen: EctodermoMesodermoendodermo

Tejido EpitelialCaractersticas estructurales:-Abundantes clulas-Estrechamente unidas formando laminas-Escasa sustancia interticial-Presentan membrana basal: lmina basal, lmina reticular (50 80 nm)-Carecen de vasos sanguneos-Uniones estrechas-Superficies diferenciadas: apical, lateral y basal (polarizacin)

Tejido Epitelial

Tejido EpitelialCaractersticas fisiolgicas:-Proteccin: revisten, cubren y tapizan (Regulan evaporacin, entrada de microorganismos, evitan desgaste)-Receptores de rganos sensoriales-Absorcin-Secrecin-Excrecin

Tejido Epitelial: Piel

Tejido Epitelial: Glndula

Tejido Epitelial: ClasificacinClasificacin funcional:Epitelio glandular: Exocrino, endocrinoEpitelio de Revestimiento:Por la disposicin de las capas: simple estratificadoPor la forma de las clulasEpitelio sensorialPor la disposicin de las capas: simple estratificado

Tejido Epitelial: Clasificacin Clasificacin morfolgica:Epitelios simplesEpitelios estratificadosEpitelios en disposicin especial:-Simple: epitelio seudoestratificado-Estratificado: epitelio de transicin

Epitelios simples

Epitelios simples1. Epitelio simple planoSus clulas delgadas como placas se disponen en una sola hilera, se adhieren firmemente por sus bordes.CaractersticasSe encuentra en:-Capsula de Bowman, Asa de Henle, Laberinto del odo interno, mesotelio, endotelio, cara interna del tmpano y en la Rete testis

Epitelio simple: plano

Epitelio simple: Plano

Epitelio plano simple: vista superficial del mesotelio

Epitelios simples2. Epitelio Simple cbicoAparece como un mosaico de polgonos en una vista de frente.En una vista vertical son perfiles cuadrados o rectangulares.Caractersticas-Se encuentra en muchas glndulas; tiroides, la superficie libre del ovario, plexo coroideo, la cpsula del cristalino, el epitelio pigmentado de la retina.

Ovario: cortezaTiroides

Epitelio cbico simple: Tbulos contorneados

Epitelios simples3. Epitelio simple cilndricoEst constituido por una sola capa de clulas altas, que tambin asumen una forma hexagonal, cuando no estn especializadas.

Epitelio simple: cilndricoCaractersticas-La funcin principal es proteger las superficies hmedas del cuerpo., reviste:La superficie interna del tubo digestivo desde el cardias esofgico, la mucosa del endometrio y las trompasen los bronquios del pulmn, senos paranasalescordn central de la mdula espinal.En la superficie luminal de las clulas de absorcin hay un borde especial con un mayor ndice de refraccin llamado borde estriado.Al microscopio electrnico este borde estriado est constituido por microvellosidades.

Duodeno 10XDuodeno 40X

Epitelio simple. Cilndrico

Epitelios EstratificadosDos o mas capasNombreFuncionesAbsorcin escasa

Epitelios EstratificadosEpitelio cbico estratificado-Dos o mas capas de clulas cbicas -Proteccin -Corona radiata, conducto de la glndula sudorpara

Ovario: cbico estratificado

Glndula sudorpara

Epitelios EstratificadosEpitelio cilndrico estratificado-Caractersticas-Uretra peneana, conducto secretor de ciertas glndulas

Epitelios Estratificados: uretra

Epitelios EstratificadosEpitelio escamoso estratificado no queratinizado-Caractersticas-Clulas de diferente formasEstratos: basal, espinoso y escamosoNo queratinaBoca, esfago, ano, vagina, cornea del ojo y parte de la uretra femenina

Mucosa de vaginaEpitelios Estratificados

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