cultivo de hongos medicinales cenicafe (2)

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    FEDERACIÓN NACIONAL DE CAFETEROS DE COLOMBIA

    COMITÉ NACIONAL

    Período: 1 de enero de 2003 a 31 de diciembre de 2006

    Ministro de Hacienda y Crédito Público

    Ministro de Agricultura y Desarrollo Rural

    Ministro de Comercio, Industria y Turismo

    Director del Departamento Nacional de Planeación

    Juan Camilo Restrepo Salazar 

    Mario Gómez Estrada

    César Eladio Campos Arana

    Danilo Cabal Cano

    Fabio Villegas Ramírez*

    Carlos Alberto Gómez Buendía

    Floresmiro Azuero Ramírez

    Carlos A. Martínez Martínez

    Javier Bohórquez Bohórquez

    Jaime García Parra

    * Renunció el 8 de marzo de 2005

    Gerente General

    GABRIEL SILVA LUJÁN

    Gerente Administrativo

    LUIS GENARO MUÑOZ ORTEGA

    Gerente Financiero

    CATALINA CRANE ARANGO 

    Gerente Comercial

    ROBERTO VÉLEZ VALLEJO

    Gerente Técnico

    ÉDGAR ECHEVERRI GÓMEZ

    Director Programa de Investigación Científca

    Director Centro Nacional de Investigaciones de Café

    GABRIEL CADENA GÓMEZ

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    UNA PUBLICACIÓN DE CENICAFÉ

    Editores: Héctor Fabio Ospina Ospina, I.A., MSc.  Sandra Milena Marín López, I.A.Diseño yDiagramación: María del Rosario Rodríguez L.Fotografía: Nelson Rodríguez V.  Carmenza Jaramillo L.

      Gonzalo Hoyos Salazar.

    Fotografía carátula: Fructificación de Shiitake sobresubproductos de café.

    Tomada por : Gonzalo Hoyos Salazar.

    Editado en Noviembre de 20053.500 Ejemplares

    Los trabajos suscritos por el personal técnico del Centro Nacional de Investiga-ciones de Café son parte de las investigaciones realizadas por la FederaciónNacional de Cafeteros de Colombia. Sin embargo, tanto en este caso como

    en el de personas no pertenecientes a este Centro, las ideas emitidas por losautores son de su exclusiva responsabilidad y no expresan necesariamente lasopiniones de la Entidad.

    Copyright © FNC - Cenicafé - 2005

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    FEDERACIÓN NACIONAL DE CAFETEROS DE COLOMBIA

    GERENCIA TÉCNICAPROGRAMA DE INVESTIGACIÓN CIENTÍFICA

    CENTRO NACIONAL DE INVESTIGACIONES DE CAFÉ

    "Pedro Uribe Mejía"

    Chinchiná - Caldas - Colombia

    1 Asistente de Investigación. Química Industrial. Centro Nacional de Investigaciones de Café, Cenicafé. Chinchiná,Caldas, Colombia.

    2Ingeniera Química. Investigadora en Proyectos Especiales, hasta diciembre de 2003. Centro Nacional de Investigacionesde Café, Cenicafé. Chinchiná, Caldas, Colombia.

    Cultivo de hongos medicinales

    Nelson Rodríguez Valencia1

    Carmenza Jaramillo López2

    en residuos agrícolas de la zona cafetera

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    en residuos agrícolas de la zona cafeteraCultivo de hongos medicinales

    CONTENIDOINTRODUCCIÓN

    CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LOS HONGOS MEDICINALES ESTUDIADOS.

    1. SHIITAKE (Lentinula edodes (Berk.) Pegler).1.1. Descripción de la especie.1.2. Técnicas para el cultivo.1.3. Manejo del cultivo.1.4. Tratamiento postcosecha.1.5. Valor nutritivo.1.6. Propiedades medicinales.1.7. El shiitake como control biológico.1.8. Mercado mundial.

    2. GANODERMA (Ganoderma lucidum (Wm. Curtis. Fries) Karsten).2.1. Descripción de la especie.2.2. Técnicas de cultivo de G. lucidum.2.3. Manejo del cultivo.2.4. Tratamiento postcosecha.2.5. Valor nutritivo de G. lucidum.2.6. Propiedades medicinales.2.7. Mercado mundial de hongos medicinales.

    3. USO DE RESIDUOS AGRÍCOLAS DE LA ZONA CAFETERA PARA EL CULTIVODE SHIITAKE Y GANODERMA.3.1. Producción de la semilla de los hongos.3.2. Preparación de los sustratos.3.3. Esterilización de los sustratos.3.4. Etapa de inoculación.3.5. Etapa de incubación.3.6. Etapa de fructificación y cosecha.3.7. Evaluación de la producción (29).3.8. Manejo postcosecha.

    3.9. Análisis bromatológico y de minerales de los hongos medicinales.4. TRATAMIENTO Y DISPOSICIÓN DE LOS RESIDUOS DEL CULTIVO

    5. MANEJO DE ENFERMEDADES Y PLAGAS

    6. PROBLEMAS EN EL CULTIVO Y SOLUCIONES

    7. CONCLUSIONES

    8. LITERATURA CITADA

    AGRADECIMIENTOS

    5

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    Mediante el cultivo de hongosse realiza la bioconversiónde materiales agrícolasen alimentos y medicinas,solucionando de esta manera,al menos parcialmente, tresde los problemas más gravesque afronta la población

    mundial : la escasez dealimentos, las enfermedades yla contaminación ambiental.

    En 1997 la producción mundialde hongos comestibles ymedicinales fue del ordende 6.158.000 toneladas (3),destacándose el cultivo de losgénerosAgaricus ( champiñón),

    Lentinula ( shiitake), Pleurotus( orellanas) y Auricularia(  orejade Judas).

    El alto contenido de proteínade los géneros cultivados,que oscila entre 15 y 30%en peso seco, sumado alas propiedades medicinalesdescubiertas en éstos, haninfluido en el incrementodel mercado internacional yen los precios de venta. Porejemplo, en Estados Unidos, elkilogramo de shiitake fresco alproductor tiene, en promedio,un precio de 6,30 dólares (41),y para el consumidor el preciooscila entre 7 y 16 dólares porkilogramo de producto fresco,dependiendo de la calidad y el

    tamaño del mismo (21).

    En 1994, el valor de laproducción mundial de hongosy productos medicinalesextraídos de ellos fue estimadoalrededor de los 14 millardosde dólares. Las propiedadesmed ic i na l e s han s i doreconocidas como el segundo

    atributo, en importancia, delos hongos comestibles en lospaíses orientales. En este añose estimaron ventas del ordende 3,6 millardos de dólares enmedicinas y tónicos extraídosde estos hongos (3).

    En Colombia, el cultivo delos hongos comestibles y

    medicinales tuvo sus iniciosalrededor de 1950, con laproducción del champiñón(Agar icus bisporus ) enBogotá, posteriormente elhongo shiitake (Lentinulaedodes ) comenzó a cultivarsea principios de la décadade los ochenta, con unaproducción en pequeñaescala y comercializada como

    medicamento, y en los añosnoventa se inició la etapaexperimental del cultivo dehongos del género Pleurotus(18).

    En el ámbito nacional, lasexperiencias en el cultivode hongos se han limitadopor el escaso consumo y la

    poca tradición que se tiene

    por este tipo de alimentos.De las ocho especies quese cultivan mundialmente aescala industrial, en nuestropaís sólo se han realizadoinvestigaciones de cultivocon Pleurotus, Lentinula yGanoderma  (Figura 1).

    En Cenicafé, las investiga-ciones relacionadas con elcultivo de hongos se iniciaronen 1990, con diferentes espe-cies del género Pleurotus ,con el propósito de encontraralternativas para el manejoecológico de la pulpa decafé, que fueran fácilmente

    aplicables por los productores,evitando que este subproductogenerara un impacto ambientaladverso (33).

    Entre los años 1998 y 2003se desarrollaron en Cenicafé,investigaciones relacionadascon el cultivo integral delos hongos medicinalesshiitake y ganoderma en

    los subproductos másabundantes generados enel proceso de cultivo delcafé, con el propósito degenerar alternativas atractivaspara los productores queles permitieran diversificarsu ingreso, en un períodocaracterizado por los bajosprecios del café en el mercado

    internacional.

    INTRODUCCIÓN

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    La gran for ta leza quepresenta la caf icu l turapara la producción de loshongos medicinales es quelos dos subproductos másabundantes generados en elcultivo, la pulpa y los tal los,

    con cantidades aproximadasa 2 toneladas/subproductopor hectárea por año (30),pueden emplearse comocomponentes de los sustratospara el cultivo de este tipo dehongos, permitiendo de esta

    manera, que los productoresp u e d a n d i v e r s i f i c a rsu ingreso mediante lacomercialización de loshongos o utilizarlos para subeneficio como alimento ocomo medicina.

    Figura 1. Hongos: Pleurotus   spp (a), Lentinula edodes  (b) y Ganoderma lucidum  (c), cuyas técnicas decultivo se han investigado en Colombia.

    Este hongo es consideradode “especialidad” en lagastronomía de Japón, Coreay China. Tradicionalmente, secultiva en troncos de árbolesen las regiones montañosasde Asia. Su nombre científicoes Lentinula edodes , pero esconocido comúnmente como“shiitake” u hongo japonés.

    CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LOS HONGOS MEDICINALESESTUDIADOS.

    Es cultivado extensivamenteen Japón y en otros paísesasiáticos por su agradablesabor y sus propiedadesmedicinales (8). Además, figuraentre los hongos más popularesentre los gastrónomos yocupa el segundo lugar enla producción mundial dehongos comestibles (4).

    1. SHIITAKE (Lentinula edodes (Berk.) Pegler).

    El shiitake es una especie capazde degradar la celulosa, lashemicelulosas y las ligninas(Figura 2). Al cultivarlo sobremateriales como paja, tusas demaíz y troncos de cáñamo esposible obtener rendimientosequivalentes o superiores alos encontrados en troncosnaturales (10).

    a.

    c.

    b.

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    1.1. Descripción de laespecie.

    Los hongos tienen sombrerosde 5 a 25 cm de diámetro,hemiesféricos, convexos yeventualmente, planos enla madurez. Al inicio de sudesarrollo los sombreros sonde color marrón oscuro hastacasi negros, y posteriormente

    se tornan de coloración marrónmás clara, debida a la edad oal secado del hongo. El bordedel sombrero es de parejo airregular, al principio onduladoy luego curvado, achatándosecon la madurez. Las laminillasson blancas y con la edadadquieren forma irregular oaserrada. El tallo es fibrosoy se encuentra normalmenteunido al centro del sombreroy de textura áspera (40).

    Es un hongo saprófito y sólocrece en tejidos necrosadosde árboles de madera duray hojas anchas. Sus esporasson blancas, de 5 a 6,5 µm x3 a 3,5 µm, de forma ovoide aoblongo-elipsoide. Los basidios

    soportan cuatro esporas.

    En agar nutritivo el micelio esblanco al principio y luego setorna marrón oscuro, tomandoapariencia algodonosa. Esnativo de Japón, Corea y China.Esta especie se encuentra enpeligro de extinción debidoa la deforestación de suhábitat natural. Existen cepasadaptadas a un amplio rangode temperaturas y a diferentes

    sustratos (40).

    1.2. Técnicas para el cultivo.

    Los pasos básicos en el cultivo deshiitake son: la obtención de unmedio de cultivo, la utilizaciónde cepas productivas y elmanejo apropiado de lascondiciones ambientales queintervienen en el crecimientoy el desarrollo de los cuerposfructíferos (25). En las últimasdécadas la tecnolog íadel cultivo de shiitake encondiciones controladas seha perfeccionado y se usansustratos a base de aserrinessuplementados y esterilizados

    mediante calor (40).

    Existen dos métodos decultivo:

    Cultivo en leño natural (34).Tradicionalmente el shiitakese cultiva en el Japón sobre elárbol Castanopsis cuspidata ;sin embargo, en EstadosUnidos la mayor producción seobtiene sobre leños de roble(Quercus spp.), chinkapin

    (Castanopsis spp.), roblecolor canela (Lithocarpus  spp.)y carpe (Carpinus  spp.).

    Los leños se cortan en troncosde 1 metro, en el otoño y seinoculan con la semilla de estehongo después de 15 a 30días. El diámetro que pareceser el más eficaz para el cultivoes de 7 a 15 cm. Cuando

    los leños tienen un diámetromayor de 25 cm deben cortaselongitudinalmente en dosmitades.

    La semilla se prepara enmadera o aserrín formandoaglomerados a manera decuñas de 2,5 cm de diámetro.En los leños se hacen agujeroscon taladro que correspondan

    al diámetro y la longitud de las

    Figura 2. Carpóforo deLentinula edodes  cultivadoen subproductos de café.

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    cuñas y espaciados cada 15cm. Finalmente, la semilla seintroduce en los agujeros conla ayuda de un martillo y se

    cubre con cera caliente paraprevenir el secado excesivo.El micelio empieza a crecerentre 6 y 18 meses después,dependiendo de la especiemaderable empleada, eltamaño del leño, la cepa, lahumedad y la temperatura delambiente.

    Después de la incubación, los

    leños se transfieren al sitio defructificación, en condicionesde menor temperatura ymayor humedad que lasáreas de incubación, dondese encuentra un ambienteóptimo para su crecimientoy desarrollo. La eficienciabiológica alcanzada bajoesta técnica está alrededordel 33%, con el mayor pico

    de producción después delsegundo y el tercer año. Luegoel sustrato conformado porlos leños se agota y finaliza laproducción del hongo.

    Cultivo en bloques sintéticos. Las técnicas de cultivo

    comercial del shiitake enaserrín suplementado fuerondesarrolladas hace 20 añosen Japón, Taiwán y la China.Los sustratos son una mezclade maderas duras picadasmezcladas con suplementoscomo el salvado de cereales(26).

    Los aserrines de maderay de cortezas confierenbuenas propiedades físicasa los sustratos. Un aserrín

    demasiado f ino puedecompactarse o una cortezademasiado gruesa afecta ala red micelial tornándolafrágil, por lo cual se aconsejautilizar aserrines o cortezasno fermentados. La mezclade 2/3 partes de corteza y1/3 de aserrín de maderaes apropiada como sustrato(10). Luego se adiciona aguapara conseguir una humedaddel sustrato entre el 55-68%,para finalmente empacarlo enbolsas de polipropileno, segúnla técnica de cultivo a seguir,bien sea la técnica asiática ola americana.

    En la técnica asiática seutilizan bolsas de polipropilenoalargadas, con una argollaen la parte superior y untapón de algodón, o bolsasalargadas con filtros hechoscon esparadrapo y adheridosen forma tal que permitanel intercambio gaseoso (26)(Figuras 3a).

    En la técnica americana seutilizan bolsas de polipropilenoresistentes al calor, con un

    parche hecho de plásticomicropórico, que permite lasalida de CO2 y la entradade aire (Figuras 3b y 3c).Después de llenar, las bolsasse esterilizan en una autoclavea 121°C. Posteriormente,los bloques se inoculan porla parte superior y se llevanal cuarto de incubación. Enlos métodos modernos enpocas semanas se producenentre dos y cuatro cosechas,dependiendo de la cantidadde sustrato que oscila entre 1y 3 kg (40).

    Figura 3. Tipo de bolsas utilizadas para el cultivo del

    shiitake. Técnica asiática (a); Técnica americana(b y c).

    a.

    b.

    c.

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    1.3. Manejo del cultivo.

    Durante la etapa de incubación

    la superficie del sustrato seobserva plana y blanca. Lacolonización ocurre en dossemanas, tiempo óptimo paraque se forme la red del micelioy se produzcan estructuras deóptima calidad (40).

    Entre 30 y 35 días después de lasiembra los bloques presentan

    apariencia irregular, debidoa la formación de agregadosmiceliales precursores de losprimordios. En los 30 díassiguientes, los aglomeradosse tornan de color marróny de consistencia blanda, yejercen presión en el plástico,momento en el cual losbloques deben trasladarse a lazona de fructificación, donde

    se les retira la bolsa de plásticoque los cubre. No obstante,en este momento ocurre unamasiva evaporación de agua

    desde la superficie, que exigeque el bloque se mantenga encondiciones de niebla, con el100% de humedad, hasta que

    se forme aproximadamenteuna docena de primordios(Figura 4) (8).

    Después de la primera cosecha,los bloques de sustrato debentrasladarse a un cuartoaparte para que pierdanhumedad durante una semana,manteniendo la temperatura

    del cuarto entre 20 y 21°C ybajando la humedad relativaa 30-50%. Posteriormente, losbloques se sumergen en agua a7-14°C de temperatura, durante48 horas; si la temperaturaes mayor de 15°C, debensumergirse durante 24 horas(8). Después de la inmersión,los bloques se llevan de nuevoa la zona de fructificación. Porlo menos una o dos veces pordía, los bloques se asperjan conagua a presión y una semanadespués comienza la segundacosecha.

    Para el cultivo en bolsas sedebe controlar la fructificacióndejando sólo de 10 a 12primordios; si hay más de

    doce en un bloque de 1 kgo si se desarrollan primordiosdebajo del plástico se afectala calidad y la rentabilidad,debido a la proliferación dehongos de menor tamaño, loque aumenta el costo de lacosecha (8). Al final del cultivo,los bloques tendrán entre ½y ¾ de su tamaño original

    y normalmente se verán decolor marrón oscuro. En estemomento puede reciclarseel sustrato para el cultivo delhongo Pleurotus  spp.

    1.4. Tratamientopostcosecha.

     La cosecha se realiza cuandoel borde del carpóforoestá enrollado o cuando elsombrero se extiende entreun 60 y un 70%, estado quese considera adecuado parala comercialización en el

    Figura 4. Aspecto de los bloques de sustrato durante laetapa de incubación y fructificación del cultivo

    de shiitake. A los 30 días (a), los 60 días (b) y los90 días (c).

    a.

    b.

    c.

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    mercado asiático, uno de losmayores consumidores de esteproducto. Los hongos puedencosecharse con la mano

    realizando una ligera torsióny presionando el tallo sobreel bloque de sustrato.

    La forma más común deconservar estos hongos esdeshidratándolos medianteliofilización, aire caliente a60°C o exponiéndolos alsol, según los recursos del

    productor (5).

    1.5. Valor nutritivo.

     El shiitake es fuente de proteína,potasio, zinc y polisacáridos,algunos de ellos conocidoscomo potenciadores delsistema inmunológico (14).

    El shiitake ha sido reconocidoen Japón y China como un

    alimento y una medicina pormiles de años. De acuerdocon los registros históricos, enel año 199 A.C. al emperador

     japonés Chuai le fue ofrecidoel shiitake por los Kyusuyu, unatribu nativa del Japón (12). Sucontenido de proteína varíaentre 2,22 y 2,60% en pesofresco (25,9% en peso seco),lípidos (principalmente elácido linoleico), carbohidratossolubles en agua (0,45-0,72g/100g de peso seco),

    minerales (especialmentecalcio) y vitaminas B2 y C(12).

    Los cuerpos fructíferos tienenaltas cantidades de ergosterol,provitamina que se convierteen vitamina D en presenciade luz solar. Algunos estudiosdemuestran que la exposiciónde los carpóforos a los rayossolares durante 3 horas/díaincrementa los contenidosde vitamina D2 hasta en

    cinco veces. El contenido deminerales depende de lossustratos de cultivo (12).

    Este hongo es el segundogénero comestible máscultivado en el mundo,considerado un productoexótico, más apetecido queel champiñón (A. bisporus ),con propiedades medicinalessustentadas en un gran númerode investigaciones (12). En lasTablas 1, 2 y 3 se presenta la

    información relacionada con elvalor nutritivo de los cuerposfructíferos del shiitake.

    1.6. Propiedadesmedicinales. 

    En la medicina oriental elshiitake es consideradoun alimento que activa lasangre. Es utilizado para tratarproblemas de salud tanto enniños como en adultos. En

    Tabla 1. Descripción nutricional de los cuerpos fructíferos del hongo shiitake.

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    en residuos agrícolas de la zona cafeteraCultivo de hongos medicinales

    Japón, se utiliza para tratarenfermedades del corazón,úlceras, presión sanguínea,problemas de visión, alergias,hemorroides y neuralgias,entre otras (14).

    Dos extractos se obtienen delshiitake con fines terapéuticos:el Extracto Micelial (LEM) y

    el Lentinan. Actualmente,

    estas sustancias se utilizanen tratamientos médicoscontra tumores en animales yhumanos, mediante ingestiónoral o por vía intravenosa (12).El Lentinan es un constituyentede la pared celular y se extraetanto del micelio como delos cuerpos reproductores.Es un polisacárido de alto

    peso molecular en triple

    estructura de hélice, quecontiene solamente moléculasde glucosa (12).

    Hobbs (12), presenta unarevisión sobre estudios clínicosrealizados en pacientes a loscuales se les suministró elhongo para el tratamientode diferentes enfermedades

    y ana l i za los e fec tos

    Tabla 2. Análisis bromatológico del shiitake fresco.

    Tabla 3. Aminoácidos esenciales del shiitake.

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    en residuos agrícolas de la zona cafeteraCultivo de hongos medicinales

    antitumorales, antivirales,i n m u n o r e g u l a t o r i o s ,h e p a t o p r o t e c t o r e s ,cardiovasculares , y su

    utilización en el tratamientode infecciones bacterianas, enla prevención del cáncer y enel tratamiento del SIDA.

    1.7. El shiitake como controlbiológico de patógenos 

    El uso excesivo de pesticidasen la agricultura para el controlde insectos y enfermedadestiene efectos nocivos sobreel suelo, el agua, el medioambiente y la salud humana,por este motivo es necesariodesarrollar programas decontrol biológico mediante lautilización de microorganismoscomo hongos, bacterias yvirus.

    En este campo, el lixiviadomicelial de shiitake puede seruna alternativa para el controlde bacterias fitopatógenas,debido a sus propiedadescomo antibiótico. En unes tud io rea l i zado porPacumbaba et al .(23), se

    utilizaron diferentes cepasde bacterias para evaluar enel laboratorio el efecto dellixiviado micelial de shiitake

    como control biológico delas mismas. Experimentaroncon Ralstonia solanacearumque produce marchitamientoen tomate, Curtobacteriumf l a c c u m f a c i e n s    p vflaccumfaciens   causante demarchitamiento en fríjol y soya,Pseudomonas syringae   pvglycinea, P. syringae  pv. tabaci,

    Xanthomonas campestris   pvglycines, X. campestris   pvcampestris, Erwinia amylovora,Bacillus cereus, Escherichiacoli, Listeria monocytogenes,Salmonella typhimurium yStaphylococcus aureus . Seobservó que el lixiviadomicelial de shiitake inhibe elcrecimiento de estas bacterias,y que cuando es aplicado alsuelo previene los síntomasde marchitamiento en tomatey fríjol, en condiciones delaboratorio. Sin embargo,faltan estudios de campo paradeterminar si los resultadosobtenidos in v it ro   sonreproducibles, y así poderrealizar las recomendacionespara la utilización del lixiviado

    como controlador biológicode bacterias fitopatógenas.

    1.8. Mercado mundial.

    La producción mundial dehongos comestibles cultivadosha crecido consistentementedurante las cuatro décadaspasadas, pero la produccióny el consumo se concentranprincipalmente en Asia, dondeen 1994 representaba todavía

    el 69,3% de la producciónmundial (24).

    Una comparación de lasespecies de hongos cultivadosen los últimos años demuestraque el abastecimiento estáaumentando, especialmenteel cultivo del hongo Lentinulaedodes . Se espera que estatendencia en la produccióncontinúe debido, tanto a losavances en el conocimientobásico de la biología de loshongos como a la tecnologíapráctica asociada con su cultivo.El consumo en la China estáaumentando en forma rápiday fuerte, lo que ofrece nuevasoportunidades en el mercadointernacional de los hongos.

    2. GANODERMA (Ganoderma lucidum  (Wm. Curtis. Fries)

    Es un hongo que recibe muchosnombres: los japoneses lollaman Reishi o Mannetake,mientras que los chinos ycoreanos, Ling Chi o Ling Zi,que en español significa, elhongo de la inmortalidad o

    el poliporo panacea, siendocasi reverenciado en susrespectivos países (40).

    G. lucidum   es uno de losrepresentantes poliporales másconocido por sus propiedades

    medicinales. Esta especie tienela forma de un riñón, es detextura leñosa, de 5 a 20 cmde diámetro y presenta unasuperficie brillante cuandoestá humedecido (Figura 5)(40). El cultivo artificial de

    .

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    en residuos agrícolas de la zona cafeteraCultivo de hongos medicinales

    este hongo se logró con éxitoen el año 1970 y a partir de1980 se desarrolló de manerarápida, particularmente en la

    China (3).

    2.1. Descripción de laespecie.

    Existen varias especies delgénero Ganoderma. Las másimportantes comercialmente

    son: G. curtisii, G. oregonense,G. tsugae y G. lucidum. Estaúltima, es la de mayor interésy crece sobre robles y otrasmaderas duras, mientras queG. tsugae  y G. oregonense crecen principalmente sobreconíferas. En el suroeste deNorteamérica,G. tsugae crecesobre abetos blancos (40).

    El sombrero del hongo puedeser rojo pálido y algunasveces muestra tonalidadescercanas al negro; tieneporos blanquecinos en laparte inferior que al contactose tornan de color marrón.Las áreas de crecimientonuevo son blancas y seoscurecen de amarillo marrón

    a marrón-rojizo cuando elhongo llega a la madurez decosecha, éstas se observanfrecuentemente en zonasconcéntricas como patrónde crecimiento. Las esporasson de color marrón-rojizo,elipsoidales, con un extremoromo, de 9 a 12 µm x 5 a 6 µm.Las esporas se dispersan desdela parte inferior del hongo,

    recolectándose en la superficiede los sombreros. El pie esde color blanco a amarillo, yeventualmente se oscurece amarrón o negro, y está unido

    en el centro o de manera lateralal sombrero; es usualmentesinuoso y puede tener entre 5y 10 cm de longitud (40).

    2.2. Técnicas de cultivo deG. lucidum.

    Para el cultivo desarrollado encondiciones de laboratorio,Stamets (40), reporta un ciclorápido para el cual se usa unamezcla 50:50 de aserrín demadera dura, con virutas demadera, que puede contenerun 5% de salvado de arrozo sorgo, y así incrementar elrendimiento. La mezcla delaserrín y las virutas de aliso/

    Figura 5.  Carpóforo de Ganoderma lucidum  cultivado en subproductos de café.

    roble, se sumerge en 15 L deagua enriquecidos con 50 mlde melaza, durante tres o cuatrodías y luego se deposita enbolsas de 5 kg de capacidad,pero sólo se colocan dentrode ellas 3 kg de sustratohúmedo compactado..Luego,las bolsas se esterilizan enautoclave durante 2 horasa 15 psi y, finalmente, seincuban y se disponen para lafructificación.

    Para obtener un crecimiento

    óptimo de G. luc idum deben tenerse en cuentalas condiciones de cultivodescritas en la Tabla 4.

    En su ciclo de cosecha seobtienen dos recolecciones,durante un período de tiempocomprendido entre los 90 ylos 120 días después de lainoculación (8).

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    Existen dos métodos de cultivo,

    que son:

    Cultivo en leños (15). El cultivopuede hacerse en leños largoso en leños cortos. El cultivo deLing zhi en los leños largos esmuy laborioso y la cosechase obtiene después de unaño de inoculado el hongo.Por otro lado, el cultivo

    sobre leños cortos demorasolamente de 4 a 5 meses parala incubación del micelio y elcuerpo fructífero puede sercosechado en el mismo año.El cultivo en leño corto es elmás utilizado.

    Ganoderma lucidum, es unhongo saprófito. Para sucultivo se utiliza madera secade robles del género Quercus:

    Quercus acutissima, Quercus

    aliena y Quercus serrata. Parasembrar el hongo es necesariosecar los leños hasta un40% de humedad, condiciónque se logra después de40 a 60 días con secado yventilación adecuados. Lainoculación debe realizarseen un sitio limpio, libre decontaminantes. En las etapas

    de incubación y fructificacióndeben controlarse las variablesmedioambientales del lugardonde se desarrol la elproceso.

    Son factores esenciales parael crecimiento de los hongosla temperatura, la humedady el oxígeno. En particular, laformación de los primordios

    requiere una temperatura de

    30°C y una humedad relativa

    del 95%. La luz y otros factoresmedioambientales puedenmanipularse dependiendo delestadio de crecimiento delhongo, así:

    - Incubación: el crecimientomicelial ocurre entre los10 y los 38°C, con unatemperatura de incubación

    óptima entre 25 y 32°C. Elcontenido de humedad en elsustrato de aserrín debe serde 65-70% y el del leño del40%. Los valores óptimos depH deben estar entre 4,2 y5,3. Durante el crecimientomicelial no se necesitailuminación.

    - F r u c t i f i c a c i ó n : l a sfructificaciones de Ling zhi,

    Tabla 4. Condiciones de cultivo para obtener los óptimos de crecimiento y producción deG. lucidum.

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    se desarrollan entre 20 y34°C, con el óptimo detemperatura entre 27 y32°C. Si la temperatura estáfuera del rango de formaciónpuede abortar el cuerpofructífero; en particular, sila temperatura es inferior a20°C se producen cuerposfructíferos con sombrerosdeformes.

    La humedad relativa en elcuarto de crecimiento debe

    mantenerse por encima del90% durante la inducción delos primordios, entre el 70 y el80% para la formación de lossombreros, y entre 30 y 40%en el estadio final del desarrollodel cuerpo fructífero. La luzrequerida durante la formacióny el desarrollo del cuerpo

    fructífero debe estar entre 50y 450 lux. Después de formadoel sombrero debe ventilarsecompletamente el cuarto.

    Cultivo en leños sintéticos.Para el cultivo de Ganodermalucidum, se emplea el tipode bolsas de polipropilenodescritas para shiitake, sea parala producción de ganodermapor la metodología asiática(bloque en forma de leño)o la americana (bloques

    cuadrados).

    2.3. Manejo del cultivo.

    La etapa de incubación tomaentre 14 y 21 días a 24°C,y las primeras estructuras,

    aparecen después de 30 ó 40días de inoculado el sustrato.Para el día 50 los tallos seencuentran ramificados, tienen

    una longitud aproximada de10 cm y emergen del sustrato(Figura 6a). En este momentodeben abrirse las bolsaspara favorecer la formacióndel sombrero y disminuirla concentración de CO

    (~ 350 ppm), de lo contrarioéste no crece. El repentinocambio en la concentración

    de CO2 estimula el crecimientodel sombrero o píleo. Lossombreros se orientan haciala luz y una indicación delcrecimiento es la apariciónde una banda blanquecinaen el borde (Figura 6b).El tiempo de cosecha estáusualmente indicado por laausencia de este margen yla producción de esporas,de color marrón óxido, quetienden a acumularse en lossombreros (Figura 6c) (8).

    Figura 6.  Aspecto del desarrollo de un cultivo deG. lucidum. (a) 50 días después de lainoculación, (b) 80 días después, (c) 110 días

    después de la inoculación.

    a.

    b.

    c.

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    Para obtener carpóforos deG. lucidum  de estipe cortoy forma de riñón se requiereque una vez el tallo tengauna longitud de unos 5 cm,exponerlo a un ambiente conalta humedad, ventilación yluminosidad.

    Estos hongos contienenusualmente un 80% de agua,10% menos que otros hongoscarnosos. Los rendimientosobtenidos en una primeracosecha pueden alcanzar un15% de eficiencia biológicaentre los 30 y los 60 díasdespués de la emergencia deltallo, para el cultivo rápido. Lasegunda cosecha representaentre un 25 a un 50% de laanterior.

    2.4 Tratamientopostcosecha.

    Después de la cosecha nodeben almacenarse los hongosen lugares húmedos, calurososy sucios. Éstos pueden secarseal sol o en estufas a 60°C,durante 2 ó 3 días, disponiendolos cuerpos fructíferos con laparte inferior del carpóforohacia abajo. El sobresecadodeteriora la calidad delproducto, debido a que la parteinferior de la superficie porosase oscurece o se contaminacon mohos (6).

    2.5. Valor nutritivo deG. lucidum. 

    El carpóforo de ganodermacontiene carbohidratos(azúcares reductores ypolisacáridos), aminoácidos,una pequeña cantidad deproteína e iones inorgánicos,esteroides, triterpenos, lípidos,alcaloides, aceites volátiles,riboflavina y ácido ascórbico.Ana l i zando lo s i ones

    inorgánicos, específicamentelos del sombrero, se encuentraque contiene Mg, Ca, Zn, Mn,Fe, Cu y Ge. De igual forma,contiene ergosterol y proteasaácida (12).

    En extracciones de carpóforosdeG. lucidum en agua calientese encontró el 51% de los

    polisacáridos y el 5% dela proteína presentes en elcuerpo reproductor. El miceliocontiene esteroles, lactones,alcaloides, polisacáridos ytriterpenos (12).

    En el mercado de Orientetradicionalmente se vendeseco, sin embargo se encuentra

    también en forma de píldoras,cápsulas y té (6).

    Aunque este hongo esrelativamente duro, puedeusarse en algunos platosespecialmente sopas, o puedeprepararse en infusión (té),

    con el hongo fresco, entrozos pequeños, en aguahirviendo durante 5 minutos ydejándolo en reposo durante30 minutos(12). Las cepasamarillas generalmente sonmás amargas que las rojas ylas negras. El sabor amargose debe a su contenido deterpenoides (8).

    2.6. Propiedadesmedicinales.

    Los extractos de esta setaposeen efectos antivirales,debido al germanio orgánico,componente act ivo deGanoderma lucidum.  Estecomponente aumenta en un50% la habilidad de la sangrepara absorber el oxígeno,favorece el equilibrio delmetabolismo y previenela degeneración del tejidocelular. Además, G. lucidum reduce el porcentaje delcolesterol y el excedentede grasa contenidos enla sangre, disminuye elnivel de azúcar, restauralas funciones naturales delpáncreas, estabi l iza lasparedes celulares de losglóbulos rojos, reduce laaglutinación de las plaquetassanguíneas , mejora lasfunciones del córtex y delas glándulas suprarrenales(19).

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    También tiene propiedadeshipertensivas e hipotensivas(homeostasis), dadas porun peptido-glucano; estos

    compuestos t ienen unaactividad antitrombosis, yaque son inhibidores de laagregación plaquetaria (20). Seconocen otros estudios dondese demuestra la actividadantitumoral de las esporas deganoderma contra el hepatomay sarcoma 180 (17).

    Existen dos clases principalesde compuestos presentes enganoderma con actividadesfarmacológicas, éstos son lostriterpenos y los polisacáridos.Los primeros, disminuyenla presión sanguínea yson benéficos como anti-i n f l amator ios y comoantivirales. Los polisacáridostienen efectos estimulantesen las células sanguíneasque conllevan a la liberaciónde citoquinos y linfoquinos,lo que explica los efectosantitumoral, hipoglicémicoe inmunopotenc iador .Actualmente, en diferentesinvestigaciones se estáexaminando el modo de acciónespecífico de los diferentes

    compuestos aislados de loscuerpos reproductores (12).

    Hobbs (12), hace una revisiónsobre los estudios clínicos

    realizados en pacientes alos cuales se les suministróel hongo para el tratamientode diferentes enfermedades.

    En su libro analiza losefectos analgésicos, anti-alérgicos, anti-inflamatorios,antibacteriales, antioxidantes,antitumorales, antivirales,i n m u n o r e g u l a t o r i o s ,hepatoprotectores, al igual lautilización del hongo para eltratamiento de la bronquitis,de la presión sanguínea, así

    como su acción cardiotónica,expectorante y su empleo enel tratamiento del SIDA.

    Este hongo se consume porvía oral, en forma de infusióno mezclado en el café (Figura7). En el mercado internacionalse consiguen sobres de café

    instantáneo con extracto deganoderma.

    2.7. Mercado mundial de

    hongos medicinales.

    El mercado mundial de loshongos medicinales se haestimado en 3,9 millardosde dólares en 1995 (delos cuales 1,6 millardoscorrespondieron a productosderivados de G. lucidum),

    cifras relacionadas con laproducción y consumo delos hongos en el continenteAsiático; no obstante, en losmercados de Europa y EstadosUnidos, la demanda de éstosha aumentado debido a suspropiedades medicinales yalimenticias (24).

    Figura 7. Ganoderma lucidum puede consumirse eninfusión con café caliente.

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    La metodología para el cultivode los hongos shiitake yganoderma, difiere de lautilizada para los hongos delgénero Pleurotus, conocidoscomo orellanas. La diferenciaradica en que las especiesdel género Pleurotus  tienenla habilidad de crecer sobreun amplio rango de sustratos,con relaciones C/N que vandesde 50 hasta 500 (44), loque no sucede con los hongosmedicinales evaluados eneste estudio. Por tanto, paralos hongos medicinales esnecesario utilizar tratamientostérmicos en la fase deadecuación del sustrato conel fin de romper estructuras

    y eliminar microorganismoscompetidores, y en la etapa deprefructificación para estimularla formación de primordios.

    El cultivo de los hongosmedicinales comprende lassiguientes etapas:

    -Preparación de la semilla desiembra.

    -Formulación y preparación delos sustratos.

    - E s te r i l i zac ión de l o ssustratos.

    -Etapa de inoculación.-Etapa de incubación.-Choque térmico de lossustratos ya incubados.

    -Etapa de fructificación ycosecha.

    -Manejo postcosecha.

    3.1. Producción de la semillade los hongos.

    Para la preparación dela semilla de los hongosmedicinales se utiliza la mismametodología empleada para laproducción de semilla de loshongos comestibles del géneroPleurotus spp.

    La producción de la semillade los hongos medicinaleses una actividad de sumocuidado y en su proceso secorre el riesgo de perder elmaterial por el establecimientode hongos competidores,por tanto, se recomienda a

    los pequeños productorescomprarla en laboratorioscomerciales que certifiquensu calidad y sanidad; pero,si los productores deseanelaborarla es necesario quesigan de forma detalladalos procedimientos que sedescriben a continuación,teniendo un especial cuidadoen todo lo relacionado con lasprácticas de higiene.

    La semilla inicial  se obtienea partir de cultivos purosde los hongos, los cualesse encuentran en su fasemicelial sobre diferentestipos de agar nutritivo ycrioprotectores almacenadosen nitrógeno líquido a -196°C,

    para preservar su potencial

    genético. A partir de éstos,se obtienen los cultivos detrabajo que consisten en tubosde ensayo con agar nutritivosobre el cual se establece elhongo en su fase micelial ycuya conservación se realizarefrigerándolos a 4°C. Luego esnecesario transferirlos cada 3meses a otros tubos de ensayo

    con agar nutritivo fresco, quegarantice la supervivenciadel hongo. A esta forma deconservación se le denominatransferencia seriada y almaterial biológico obtenidose le denomina “cepa”(Figura8); ésta es la forma en la quelos laboratorios especializadoscomercializan el hongo para

    que los productores inicienla producción de la semillacomercial.

    Una vez se adquiere la cepa,el primer paso es refrigerarlay cada 3 meses transferirlaa tubos de ensayo con agarnutritivo fresco. Para ellose utilizan tubos de ensayobien lavados y desinfestados,los cuales se llenan hasta lamitad de su volumen conel medio de cultivo caliente(preparado de acuerdo conlas recomendaciones delfabricante), se tapan y luego seesterilizan a 121°C, utilizandouna autoclave pequeña.Después de retirar los tubos delautoclave, éstos deben dejarse

    en una posición inclinada

    3. USO DE RESIDUOS AGRÍCOLAS DE LA ZONA CAFETERA PARA EL CULTIVODE SHIITAKE Y GANODERMA.

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    para aumentar la superficie

    de contacto agar – micelio, yfinalmente, se hace la siembracon el micelio contenido enel tubo inicial. Se recomiendaque el traspaso del micelio nosea superior a 6 repiques (unaño y medio como máximo).Una vez cumplido este tiempoes necesario volver a iniciarel cultivo con el materialcrioconservado o aislado a

    partir de un carpóforo sano yde excelente calidad.

    La siembra del micelio debehacerse en una cámara de flujolaminar o en su defecto, en uncuarto cerrado, completamentelimpio y desinfestado, juntoa mecheros de alcohol.Para la desinfestación de las

    áreas de trabajo se utiliza elhipoclorito de sodio con unaconcentración del 10%, a partirde límpido comercial y clorurode benzalconio al 5%. En lugarde límpido también puedeutilizarse alcohol de 70° (alcoholantiséptico comercial).

    A partir de las cepas conservadas

    en los tubos de ensayo semultiplica el micelio en botellasplanas, como las que se utilizanpara la producción artesanaldel hongo entomopatógenoBeauveria bassiana.

    Por botella se adicionan60 ml del medio nutritivo(extracto de malta agar),que se prepara según las

    indicaciones de la etiquetadel producto. Posteriormente,se tapan las botellas con untapón de algodón y luego seesterilizan a 121°C en unaautoclave. Paso seguido,éstas se enfrían en posiciónhorizontal y se siembran,teniendo las precauciones

    indicadas anteriormente, con

    el micelio contenido en cadauno de los tubos de ensayo(un tubo contiene el miceliosuficiente para sembrar 10botellas planas). Por último, lasbotellas se incuban en un lugarcerrado, oscuro y desinfestado(Figura 9).

    Diariamente, debe evaluarseel crecimiento micelial en

    los tubos de ensayo y enlas botellas. También, sedebe retirar y esterilizar elmaterial contaminado para sudisposición final, para evitarla contaminación cruzada yel riesgo de enfermedadesrespirator ias debidas alas esporas de los hongoscontaminantes.

    Figura 8.  Cepas de Lentinula edodes conservadas por transferenciaseriada.

      Figura 9.  Multiplicación micelial de

    Lentinula edodes en botellasplanas.

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    Cuando el micelio muestre uncrecimiento mayor del 90%sobre los medios de cultivo,deben refrigerarse los tuboso las botellas por un tiempono mayor de 3 meses, paraemplearlos en la preparaciónde la semilla primaria.

    El micelio contenido en lasbotellas planas se multiplicaen granos de cereal (trigo,millo, sorgo, cebada, centeno,maíz o arroz) o sobre aserrines

    de madera, para conformarla semilla madre o semillaprimaria, la cual es usada parapreparar la semilla de siembrao inóculo secundario, tambiénllamada semilla comercial.

    Esta semilla se prepara enfrascos de vidrio esterilizadosde boca ancha y con tapametálica la cual se perforaen su parte central, con unabroca, y se sella con algodónpara permitir el intercambiogaseoso. Los frascos se llenanhasta ¾ partes con cerealhidratado, con humedad entreel 40 y el 45% o con un sustratoa base de aserrín de maderadura con una humedad entreel 60 y el 65%.

    Cuando se utilizan cereales,para que éstos alcancen lahumedad necesaria para laobtención de la semilla madredebe lavarse el grano comercialcon agua de grifo hastaretirarle el material flotante, ydespués escurrirlo. Al cereallimpio se le adicionan 0,5 Lde agua/kg de grano inicial, yse coloca en un recipiente al

    fuego hasta eliminar el aguatotalmente.

    Cuando la semilla madre se

    prepara sobre aserrines demadera es necesario conocerla humedad inicial de losmateriales que forman partedel sustrato. Una formulaciónapropiada debe contener, enbase seca, entre un 75 y un80% de aserrín de maderadura (roble, eucalipto, tallode cafeto) con un tamaño de

    partícula inferior a 0,5 cm,salvado de trigo entre el 18 y el25%, azúcar (1%), carbonatode calcio (1%) y la cantidad deagua que permita obtener unahumedad del sustrato entre60 y 65%.

    Después de llenar los frascos,éstos se envuelven en papel yse esterilizan en una autoclave.Una vez esterilizado el sustrato,se enfrían los frascos enmesones desinfestados yse inoculan con el micelio

    desarrollado en las botellasplanas, las cuales debenretirarse desde el día anteriordel refrigerador.

    El agar con el micelio sedivide en ocho trozos y cadauno se corta en otros dieztrozos, con una asa estéril, ypor frasco se adicionan dieztrozos sobre el sustrato. Esteproceso debe hacerse en unacámara de flujo laminar o juntoa varios mecheros para evitar la

    contaminación del sustrato. Elcuarto para la incubación de losfrascos debe estar desinfestado,seco y oscuro.

    El crecimiento micelial en lasemilla madre debe evaluarsediariamente (Figura 10). Asímismo, es necesario retirarel material contaminadoque puede llevarse a loslombricul t ivos para sutratamiento y de esta maneraevitar la contaminacióncruzada.

    Figura 10. Semilla primaria de Lentinula edodes sobre aserrín

    de madera.

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    El paso siguiente es prepararla semilla de siembra, la cualse utiliza para la inoculaciónde los sustratos. Para laproducción de 1 kilogramode semilla se recomiendautilizar bolsas de polipropilenotermorresistentes de 20 cmde ancho x 50 cm de largo y0,20 cm de espesor. Dentro delas bolsas se adiciona 1 kg decereal hidratado y en el extremosuperior de éstas se les colocaun anillo de PVC de ¾” de

    diámetro y 0,5 cm de longitud,que sirve para sostener untapón de algodón y de estaforma permitir el intercambiogaseoso, necesario para eldesarrollo micelial.

    Una vez esterilizado el material,las bolsas se enfrían y seinoculan con la semilla madre auna tasa del 10% (100 gramosde semilla madre para cadabolsa de semilla de siembra).La inoculación debe hacerseen cámara de flujo laminaro junto a mecheros. Cuandoel crecimiento de la masa

    micelial llegue al 95 ó al 100%,deben refrigerarse las bolsas yutilizarse máximo en los 15 díassiguientes (Figura 11).

    3.2. Preparación de lossustratos.

    El primer paso en la preparaciónde los sustratos consiste endeterminar la cantidad de cadauna de las materias primas

    que formarán parte de losmismos; esto se conoce conel nombre de “formulación”.Por tanto, debe conocerse lacaracterización bromatológicade los mater ia les queconformarán los sustratos ylas necesidades nutricionalesde las cepas de los hongosque van a cultivarse.

    En la Tabla 5 se presenta lacaracterización bromatológicade los subproductos de algunoscultivos de la zona cafeteraque se han utilizado en lapreparación de sustratos para

    la producción de hongoscomestibles y medicinales.

    Con base en los resultados delos contenidos de carbono (C)y nitrógeno (N) de las materiasprimas se calcula la relaciónC/N, parámetro importantepara la formulación de lossustratos utilizados parael cultivo de los hongoscomestibles y medicinales.

    El porcentaje de carbono

    (%C) se calcula dividiendo elcontenido de materia orgánica(M.O.) entre 1,8, la cual sedetermina previamente conla siguiente fórmula:

    M.O = 100 - Porcentaje decenizas.

    De los subproductos generadosdurante los procesos de cultivo,beneficio e industrializacióndel café, los que presentan lasmenores relaciones C/N son: lapulpa y la borra, con valores de31 y 33, respectivamente.

    La pulpa de café (Figura 12),es el primer producto que seobtiene después del beneficiodel fruto de café y representa,

    en base húmeda, alrededordel 40% del peso del frutofresco (2).

    La borra de café (Figura 13), esel subproducto que se generadespués de la extracción de lossolubles presentes en el granotorrefacto.

    Figura 11. Semilla comercial de hongos medicinales.

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    Tabla 5.  Caracterización de las materias primas utilizadas en el cultivo de L. edodes  y

    G. lucidum

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    El aserrín del tronco del cafetopresenta una relación C/N de74, la cual es inferior a la quepresentan la mayoría de lasmaderas duras, debido a queel contenido de nitrógeno enel tallo del café es superior alencontrado en otros aserrines

    de madera.

    Los salvados de trigo y maíz seutilizan en las formulacionescomo suplemento paraequilibrar la relación C/N,por su alto contenido deN disponible y su facilidadde consecución en la zonacafetera; éstos presentanuna relación C/N de 21 y 34,

    respectivamente.

    La adición de compuestosde calcio al sustrato comoel sulfato (CaSO

    4) también

    conocido como yeso, y delcarbonato (CaCO

    3), tiene como

    finalidad el acondicionamientodel pH del medio y elsuministro de iones Ca++, los

    cuales desempeñan un papelimportante en la estimulacióndel crecimiento hifal.

    Royse y Sánchez (35),realizaron un estudio paradeterminar el porcentajeapropiado de compuestos decalcio que deben adicionarseal sustrato. Encontraron quecon cantidades de CaCO

    3  o

    CaSO4  superiores a 0,6% se

    estabiliza la producción, porlo que es importante adicionarcomo mínimo esta cantidada los sustratos. Cantidadesmayores de carbonato seutilizan cuando es necesarioacondicionar el valor del pHdel sustrato entre 4,5 y 5,5;

    rango apropiado para el cultivode los hongos (31).

    Teniendo en cuenta los valoresC/N de las materias primas, secalculan las formulaciones quepermitan tener los sustratospara el cultivo de las diferentescepas de los hongos L. edodes yG. lucidum, con relaciones C/Nentre 40 y 60, consideradas como

    apropiadas para su cultivo.

    Figura 12. Pulpa de café.

    Figura 13. Borra de café.

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    En la Tabla 6 se observan losporcentajes, en peso seco,de las materias primas queconformaron los sustratos

    evaluados para el cultivo delos hongos medicinales con elpropósito de encontrar el másproductivo para las diferentescepas utilizadas.

    En la Tabla 7 se establecen lascantidades de materias primasnecesarias en cada formulaciónpara obtener 100 kg de sustrato

    de siembra, teniendo en cuentala humedad promedio con quese consiguen los diferentessubproductos.

    El siguiente paso en lapreparación del sustrato, una

    vez establecida la formulacióny calculadas las cantidades dematerias primas necesarias,consiste en la adecuación del

    tamaño de la partícula de cadauno de los materiales.

    Es recomendable que el tamañode partícula de los sustratosesté entre 0,5 y 2 cm (29),debido a que con este tamañose han encontrado los mejoresrendimientos del cultivo.

    La pulpa de café tieneun tamaño de partículapromedio entre 1 y 2 cm,que es apropiado para laconformación del sustrato(27). Debe utilizarse fresca,con menos de dos días de

    obtenida o ensilada, tal comose indica en el Avance Técnico313 “Ensilaje de la pulpa decafé” (27), proveniente de un

    despulpado y un transporte sinagua (1), y prensada con el finde disminuir la humedad hastael 70% (Figuras 14 a y b). Laborra de café puede utilizarsecon el tamaño de partícula conel cual se genera.

    El tallo de café debe molersepara obtener un tamaño de

    partícula inferior a 0,5 cm, perosuperior a 0,1 cm, lo cual se lograen un desintegrador – picador,que también puede utilizarsepara adecuar el tamaño departícula de otros materialesfibrosos (Figura 15).

    Tabla 6. Formulaciones de sustratos evaluados para el cultivo de los hongos L. edodes y

    G. lucidum.

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    Royse y Sánchez (36),encontraron rendimientosmuy similares en la producción

    de L. edodes con sustratos que

    contenían aserrín de maderacon tamaños de partícula enel rango entre 0,85 y 4,0 mm;

    pero por debajo de 0,85 mm,

    el rendimiento del cultivodisminuyó.

    Tabla 7.Cantidades de materiales frescos necesarios para conformar 100 kilogramos de sustratode siembra con 62,5% de humedad en las diferentes formulaciones.

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    El siguiente paso en lapreparación de los sustratos,consiste en pesar las materiasprimas y posteriormente,mezclar los materiales sobreun piso de cemento o sobreun plástico si el piso es detierra.

    Primero, se extiende elsubproducto de la formulaciónque esté en mayor cantidad y acontinuación los que le siguenen peso, finalizando con el queestá en la menor cantidad (Figura16). La mezcla se realiza con unapala hasta que el material quede

    homogéneo. A continuación seadiciona, de manera uniforme,agua a la mezcla de materialesy se homogeneiza el material,teniendo en cuenta que lahumedad final del sustratodebe estar próxima a 62,5%(Figura 17).

    Figura 14.  Operación de prensado de

    la pulpa (a) aspecto de lapulpa prensada, humedadaproximada del 70% (b).

    Figura 15. Obtención (a), molienda (b) y aspecto del aserrínde tallos de café (c).

    a.

    b.

    c.

    a.

    b.

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    El sustrato preparado se empaca

    en bolsas de polipropileno bio-orientado, de calibre 2 y de 12cm de ancho x 30 cm de largo.Las bolsas se amarran con fibraplástica en los dos extremos,simulando la forma de leños,cuando se utiliza la técnicaasiática (Figura 18). El sustrato también puedeempaca r se en bo l sa s

    rectangulares de polipropilenoorientado, de 38 cm de largox 20 cm de ancho y calibre 2,para la producción de acuerdocon la técnica americana.Estas bolsas vienen con unfiltro micropórico de 3 x 3cm, localizado a 30 cm de labase y centrado, para permitirel intercambio de aire. En este

    tipo de bolsa se adicionan

    2 kg de sustrato que ocupaaproximadamente el 50%de la capacidad de la bolsa,quedando un “colchón”de aire para permitir elcrecimiento del micelio.Las bolsas se amarran en elextremo superior utilizandofibra plástica.

    Estas bolsas pueden elaborarse

    de forma artesanal utilizandoun sacabocados de 1” dediámetro que permita perforarel plástico de la bolsa a la alturaantes descrita. Luego se tapacon un trozo de “interlón”fijado a la bolsa con cinta deenmascarar o esparadrapodelgado (Figura 19).

    Figura 16. Disposición de los materiales delsustrato.

    Figura 17.   Sustrato listo para serembolsado.

    Figura 18. Empaque del sustrato en bolsas (técnica asiática).

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    Cuando se utiliza la técnicaasiática, luego de amarradaslas bolsas, se hacen dosperforaciones en cada cara,distribuidas uniformemente,para facilitar la inoculacióne incubación. Para ello, seutiliza un sacabocados No 10y los agujeros se tapan con

    esparadrapo (Figura 20).

    3.3 Esterilización de lossustratos.

    Una vez empacado el sustratoen las bolsas el siguiente pasoes la esterilización del material.El proceso tiene dos objetivos:eliminar microorganismoscompetidores que interfieran

    con el desarrollo de los hongos

    medicinales, y facilitar laabsorción de los nutrimentosdel sustrato por las hifas delhongo.

    La esteri l ización puederealizarse en autoclaves (Figura21), o en forma artesanalutilizando vapor a presión

    atmosférica (Figura 22).

    Figura 21. Esterilización de los sustratos en

    autoclave.

    Figura 19. Empaque del sustrato en bolsascon filtro (técnica americana).

    Figura 20.  Acondicionamiento delos bloques en la técnicaasiática.

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    El tiempo de esterilizacióndepende de la cantidad dematerial a esterilizar, de lanaturaleza y contenido dehumedad del sustrato, y dela presencia de aire en lasbolsas.

    En autoclaves pequeñas (de20 litros) pueden esterilizarse6 kg de sustrato, durante

    una hora a 121°C, mientrasque en autoclaves medianas,con capacidad de 144 litros,pueden esterilizarse 24 kg desustrato, durante tres horas a121°C. Es importante estibarlas bolsas, de tal maneraque el vapor pueda circularlibremente alrededor de lasmismas.

    Para la esterilización artesanalse utilizan ollas o recipientesmetálicos. Ollas metálicascomerciales con un diámetrode 64 cm y una altura de 59,5cm, de 190 litros, tienen unacapacidad máxima de cargade 60 kg de sustrato. A cadaolla es necesario adicionarle25 litros de agua e incorporarle

    una parri l la metálica de

    9 cm de altura y un diámetrode 47,5 cm, que soporte elmaterial y evite el contactodirecto de éste con el aguaque se adiciona para generarel vapor.

    Es conveniente poner entrelas bolsas y la parrilla unatela gruesa para evitar elcontacto entre el metal y el

    polipropileno de la bolsa,debido a que el calor generadopuede romper los bloques delsustrato (Figura 23).

    Las bolsas deben estibarseverticalmente y una vez

    acomodado el primer nivel,se coloca encima del mismouna segunda parrilla de 4,5cm de altura, con su respectivatela y sobre ésta se acomodael segundo nivel de bolsas(Figura 24). Paso seguido, sepone a la olla una tapa conun termómetro incorporadopara registrar la temperatura

    del vapor y se le adicionaun sobrepeso para reducirlas pérdidas de vapor. Unacinta de neumático alrededorde la tapa puede hacer máseficiente el proceso térmico(Figura 25).

    Figura 23. Detalle del sistema de esterilización artesanal.

    Figura 22.  Esterilización de los sustratosutilizando vapor a presiónatmosférica.

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    Una vez dispuesto el materialsobre una fuente de calor(estufa de gas o leña), laesterilización del sustratotoma cinco horas, contadasdesde el momento en el cualla temperatura registrada enel termómetro sea igual a latemperatura de ebullición delagua a las condiciones del sitiode trabajo, que para la zona

    cafetera varía entre 90 y 96°C,aproximadamente.

     3.4. Etapa de Inoculación

    Para realizar la siembra, serecomienda acondicionarun lugar fácil de limpiar,aislado y sin corrientes de

    aire (Figura 26). Tambiénes necesario colocar sobrela mesa de inoculación unplástico a manera de mantel,desinfestado previamente conalcohol al 70%. La semilla para la siembra debetener un color uniforme, pueslas vetas que se presentan enalgunas semillas son señal

    Figura 25. Termómetro para registrar latemperatura en sistemas apresión atmosférica.

    Figura 24.  Primer nivel de bolsas (a),segundo nivel de bolsas (b).

    a.

    b.

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    de contaminación. Además,ésta no debe tener más de15 días de elaborada y siestá conservada en nevera

    debe retirarse un día antesde la siembra, con el fin deque alcance la temperaturaambiente.

    Si el sustrato se esterilizó enautoclave se aconseja utilizarun recipiente desinfestado paratransportar el material hasta elcuarto de inoculación, y si fue

    esterilizado artesanalmente,puede llevarse el recipientehasta el cuarto de inoculaciónel día anterior a la siembra y

    dejarlo tapado. De esta forma,se enfría y se disminuyen losriesgos de contaminación pormicroorganismos presentes enel cuarto (Figura 27).

    El operador debe utilizardelantal, tapaboca, gorro yguantes de cirugía limpios y lasiembra se hace en presencia

    de un mechero de alcoholencendido.

    Los sustratos en forma de leño

    deben sembrarse utilizando uninoculador fabricado en aceroinoxidable, de 30 cm de largo,con una cámara dosificadorade 3 cm de alto y 2 cm dediámetro (Figura 28). Antes desu uso, éste debe esterilizarseempacado en una bolsa depolipropileno, junto con elsustrato.

    Figura 26. Aspecto del cuarto deinoculación

    Figura 27. Material esterilizado y listopara la siembra.

    Figura 28.  Inoculador utilizado para bloques

    en forma de leño.

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    Las bolsas rectangulares seinoculan con una cucharaesterilizada previamente. Seutiliza una tasa del 3,6% (36

    gramos de semilla comercialpor cada kilogramo de sustratoestéril). El inoculador descritopara sustratos en forma de leñotiene capacidad de dispensar4,5 gramos por aplicación,lo que implica realizar unadoble inoculación en cadauna de las perforaciones de labolsa que contiene el sustrato

    (Figura 29).

     Tasas de inoculación mayoresfacilitan el establecimientode los hongos de interés,pero resul tan costosascuando se compra la semillaen laboratorios particulares.Sin embargo, si el mismo

    productor elabora la semillaes aconsejable emplear tasasde inoculación entre el 5 y el7,5%.

    Para el caso de las bolsasrectangulares la inoculación serealiza por la parte superior dela bolsa utilizando una cuchara(Figura 30).

    En el presente trabajo seeva lua ron en l a s 14formulaciones de sustrato

    (Tabla 6) tres cepas de shiitake:dos cepas chinas (L13 y L54),donadas por el Dr. S. T. Chang(Investigador Chino); una cepacoreana (L4055), donadapor el Dr. Porfirio Martínez(Investigador Mexicano); y unacepa de Ganoderma lucidum,donada por el Dr. S. T. Chang.

    3.5. Etapa de Incubación

    Durante esta etapa debefacilitarse el crecimientomicelial del hongo sobre elsustrato. La incubación deberealizarse en un cuarto limpio ypreviamente desinfestado consolución de formol comercialal 0,3%. Posteriormente,al cuarto se le espolvoreacarbonato de calcio en el piso

    y en los anaqueles, para reducirlos riesgos de contaminaciónpor hongos e insectos.

    Es recomendable ubicar lasbolsas en estanterías metálicas,plásticas o de madera (Figura31).

    Figura 29.  Inoculación de bloques conforma de leño

    Figura 30. Inoculación de bloques con formarectangular.

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    Los cuartos utilizados parala incubación y fructificaciónde los hongos medicinalesson muy variados (Figura 32).Muchas de las construccionesexistentes en las fincas puedenadaptarse como áreas deincubación y fructificación,debido a que el clima dela zona cafetera permitela utilización de cuartosde cultivo sin aislamientostérmicos, siempre y cuandoel productor tenga presentelas necesidades físicas de lacepa con la cual va a trabajar(luminosidad, temperatura,humedad relativa y ventilación)y la oferta ambiental del sitioseleccionado.

    Dentro de las construccionessin aislamiento térmicose pueden ut i l izar lasdenominadas construccionespesadas, fabricadas en ladrilloo en placas de fibrocemento,con techos en fibrocemento.Estas construcciones debenutilizarse necesariamenteen climas con temperaturas

    medias superiores a los 27°C,donde también se requieren

    sistemas de ventilación forzada(ventiladores), para proveer alcultivo aire fresco durante laincubación y la fructificación.

    Un segundo tipo, son lasdenominadas construccioneslivianas, fabricadas en guadua,con paredes y techos de esterilla,plástico o telas impermeables.

    Cuando se utiliza plásticodeben seguirse las siguientesrecomendaciones:

    • En zonas cálidas, contemperaturas mediasmayores de 23°C, lossalones de incubacióny fructificación debenser de plástico blanco(para reflexión de la luz)

    y tener una capa de pastoseco sobre el techo pararegular la temperatura ensu interior.

    • En zonas frías con unatemperatura media entre12 y 18°C, los salonesde incubación puedenconstruirse con plásticonegro y los salones de

    fructificación en plásticotransparente.

    Los cuartos de construccioneslivianas deben tener ventilaciónnatural, que se logra conventanillas inferiores forradasen malla mosquitera quepermiten la entrada del airepero evitan el ingreso deinsectos, y un falso techo quepermite la salida del aire.

    El tamaño de los cuartos debeconservar una relación de 1m3

    de volumen de cuarto por cada34,7 kg de sustrato de cultivo.

    No se recomienda realizarla etapa de fructificaciónen los mismos cuartos deincubación, dado que no todoel material puesto a incubaralcanza las condiciones de

    fructificación al mismo tiempo.Por ello, es importante dividirla construcción en un áreapara la incubación y otrapara la fructificación; éstasáreas deben estar separadaspor paredes de material,esterilla o plástico (Figura33). No deben mezclarseen las áreas de incubación

    y fructificación hongos dediferentes géneros.

    Figura 31.  Bolsas inoculadas con hongosmedicinales en la etapa deincubación.

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    3.5.1.Incubación de shiitake.

    La duración de esta etapadepende de la cepa utilizada yoscila entre uno y cuatro meses.En esta etapa no se requiereluz; sin embargo, la exposicióna cuatro horas de luz al día, alfinal de la incubación estimulala formación de los primordios(5). Es aconsejable ubicar las bolsasen estanterías cubiertas con una

    cortina de plástico negro que

    se retira durante las horas en lasque es conveniente suministrarluz a los bloques. Todas lascepas de este hongo muestranun crecimiento micelial óptimoa una temperatura de 25°C,pero también crecen demanera adecuada entre 21 y27°C (5).

    La incubación de shiitakeconsta de cinco fases:

    crecimiento micelial, formación

    del abrigo micelial, formaciónde protuberancias de micelio,pardeamiento del abrigomicelial y ablandamiento delbloque pigmentado.

    Inmediatamente despuésde la inoculación, el micelioempieza a crecer en el sustratohasta colonizarlo (Figura34). Durante esta fase lasenzimas del micelio se activan

    Figura 32.  Cuartos utilizados enel cultivo de hongosmedicinales.

    Figura 33.  Separación de las áreas deincubación y fructificación.

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    rompiendo y transformandolas estructuras más complejasde l sust rato (ce lu losa ,hemicelulosa, lignina) enmoléculas más simples queson absorbidas por el hongocomo nutrimentos para sucrecimiento y propagación(5).

    Durante esta etapa debencontrolarse dos factoresprimordiales: la temperaturay el tiempo de incubación.

    El micel io no soportatemperaturas superiores a28°C (10). De igual forma, lasfluctuaciones de temperatura

    pueden causar problemas, si lasbolsas no están perfectamenteselladas por las costuras, yaque se generan corrientes deaire que pueden transportarlos contaminantes presentesen el ambiente, penetrandoa través de las costuras de labolsa (25).

    El shiitake soporta los altoscontenidos de CO

    2 inducidos

    por su propia actividad, sinembargo, para su desarrollo

    hace falta oxígeno suministradopor el aire externo. En la práctica,para bajar la temperatura debesuministrarse aire suficiente

    el cual además elimina el gascarbónico (10).

    En esta fase la humedad relativadel cuarto de incubación debemantenerse entre 80 y 85%,para evitar que el sustrato sereseque (10).

    La segunda fase de la etapade incubación correspondeal abrigo micelial y consisteen la formación de una capagruesa de micelio blanco sobre

    la superficie del sustrato (Figura35). Esta fase ocurre entre30 y 45 días después de lainoculación y se favorece porlas altas concentraciones deCO

    2 (5).

    Figura 34. Fase de crecimiento micelial del shiitake durantela etapa de incubación. (a) 8 días después de laincubación (ddi); (b) 15 ddi y (c) 30 ddi.

    Figura 35. Formación del abrigo micelial.

    a.

    b.

    c.

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    La tercera fase de la etapa deincubación corresponde a laformación de protuberanciasde varios tamaños sobre la

    superficie del abrigo micelial, enla mayoría de las cepas (Figura36). Los primordios aparecenen estas protuberancias; sinembargo, muchas se malograny no generan cuerposreproductores (5).

    El tiempo de formación de lasprotuberancias varía con la

    cepa, la naturaleza del sustrato

    y la temperatura de incubación.Para las cepas evaluadas eneste trabajo el tiempo fluctuóentre 15 y 30 días después de

    la formación del abrigo. Loscambios de temperatura y lasaltas concentraciones de CO

    2

    estimulan la formación de lasprotuberancias. No obstante,es necesario disminuir laconcentración de CO

    2 dentro

    del bloque cuando se observandemasiadas protuberancias,haciendo cortes en la bolsa.

    El CO2  afecta el tamaño de

    los hongos y la calidad de lacosecha. En ningún caso debeairearse el cuarto de incubación,por que se descompensaría

    la concentración de CO2  alinterior de las bolsas (5). La cuarta fase de la etapade incubación correspondeal pardeamiento del abrigomicelial (Figura 37). Despuésde la pigmentación del miceliodebe retirarse la bolsa quecubre el bloque. El tiempo de

    remoción de la bolsa es crucial,

    Figura 36. Formación de protuberancias en lasuperficie del sustrato.

    Figura 37. Pardeamiento del abrigomicelial.

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    debido a que los rendimientospueden afectarse si la bolsa seretira temprana o tardíamente.Así mismo, la humedad relativa

    del cuarto de incubación debemantenerse entre el 70 y el 80%para evitar la contaminación delos bloques después de retirarla bolsa. El aire aumenta elpardeamiento de los bloquespor la oxidación (5).

    La quinta fase de la etapa deincubación se inicia cuando los

    bloques se exponen al aire. Elmicelio cambia a café rojizoy eventualmente se formauna superficie dura, seca, caféoscura con funciones similaresa las de las cortezas de losárboles. El interior del sustratocomienza a ablandarse y sehumedece hasta alcanzarun 80%, humedad idealpara la formación de loscuerpos fructíferos (5). En estemomento debe estimularse laformación de primordios enlos bloques, por medio de unchoque térmico.

    De las tres cepas de shiitakeevaluadas, la cepa L54 tuvo elmenor tiempo de incubación(60 días en los mejores

    sustratos), seguida de L13(65 días) y finalmente, la cepaL4055 (120 días). Esta últimase caracterizó porque adquirióun muy bajo porcentaje depigmentación en el sustrato.

    Choque Térmico.  Con esteproceso se busca inducir laformación de primordios,disminuyendo la temperaturade los bloques en 5°C (30).

    Existen varias formas de realizarel choque térmico:

    1. Sumergiendo los bloques en

    agua a 12°C durante dos acuatro horas (5). Este es elmétodo más común, ya quepermite la disminución de latemperatura de los bloquesy a su vez, su hidratación. Enla práctica, esta temperaturase consigue adicionandotrozos de hielo al agua deinmersión.

    2.Nebulizando agua en losbloques (Watanabe citadopor Chen) (5).

    3.Haciendo f luctuar latempera tu ra de l o sbloques (5). Se consiguerefrigerando los bloques (6-8°C) o exponiéndolos a lastemperaturas nocturnas.

    En el presente trabajo seencontraron respuestassimilares en la inducciónde primordios, cuando se

    disminuyó la temperatura delos bloques por refrigeracióny exponiéndolos al airedurante la noche. Una vez

    realizado el choque térmicolos bloques se llevan al áreade fructificación.

    3 . 5 . 2 . I n c u b a c i ó n d eganoderma. Los bloques desustrato pueden acomodarsesobre las estanterías enposición horizontal o vertical.

    Las estanterías deben permitirel intercambio de aire (Figura38).

    Los factores ambientales comola humedad, la luz, el oxígenoy la temperatura son clavespara el desarrollo del hongo(7). El crecimiento micelialde ganoderma requiere unascondiciones ambientales muydiferentes a las que requiereel hongo para la emisióndel cuerpo reproductor. Esaconsejable que la incubaciónocurra en ausencia de luz

    Figura 38. Disposición de los bloques deganoderma.

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    para promover la formacióny acumulación de reservasalimentarias para el hongocomo el glicógeno y los lípidos(6).

    La duración de esta etapaestá limitada por la calidadde la cepa, la naturaleza delsustrato y las condicionesambientales. Ganoderma debeincubarse entre 20 y 30°C. Lahumedad relativa del cuartode incubación entre 60 y 70%.

    Para este hongo se alcanzantiempos de incubación dedos meses como mínimo(Figura 39). En esta etapa nose necesita luz ni se requierencambios de aire en el cuarto.

    Para la cepa de ganodermaempleada en la presenteinvestigación y para lasformulaciones de sustratosque generaron cuerposreproductores, el tiempo deincubación varió entre 30 y45 días.

    A partir de este momento, eltiempo en el cual adquiere latonalidad amarilla (indicativodel inicio de la etapa defructificación) fue variable

    para los diferentes sustratos(Figura 40).

    Una vez adquieran la tonalidadamaril la los bloques desustrato se llevan al cuarto

    de fructificación para iniciarla etapa de desarrollo delcuerpo fructífero. Los bloquesde sustrato no requieren dechoque térmico.

    3.6. Etapa de fructificacióny cosecha.

    3.6.1. Fructificación y cosechade shiitake. La formación delbasidiocarpio de shiitake

    comprende las siguientes fases:formación de los primordios(Figura 41), desarrollo delprimordio en un hongo joven(Figura 42), elongación delestipe y crecimiento del píleo

    Figura 39. Incubación de los bloques deganoderma.

    Figura 40. Bloques de ganoderma listos para

    iniciar fructificación.

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    (Figura 43), crecimiento delhongo y desarrollo de lacoloración parda (Figura 44), yapertura del sombrero (punto

    de cosecha, cuando el bordedel sombrero aún conservasu curvatura hacia el interior)(Figura 45).

    Las altas concentraciones deCO

    2  inhiben la formación

    de los primordios; portanto, es necesario retirar elpolipropileno que cubre el

    sustrato una vez se encuentrenlos bloques en el área defructificación (Figura 46), conel fin de exponerlos al aire.

    La temperatura del ambientedebe estar entre 13 y 20°C yla humedad relativa del cuartoentre 85 y 95%, para evitarla deshidratación del bloque(25).

    Después de la eliminación delas bolsas, los bloques debenhumedecerse abundantemente

    (Figura 47). En esta etapa tambiénes necesaria la luz, por tanto,los hongos deben iluminarse las24 horas; en la noche pueden

    utilizarse lámparas tipo “luz día”(alrededor de 100-200 lux).

    La temperatura afecta lavelocidad de desarrollo y elnúmero de hongos alcanzadosen cada flujo de cosecha;mientras que la luz es necesariapara el desarrollo del color delos sombreros.

    Figura 42. Hongo joven.

    Figura 41. Formación de los primordiosde shiitake.

    Figura 43. Alargamiento del pie.

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    Figura 45.  Hongos shiitake listospara ser cosechados.

    Figura 46. Bloques sin bolsa expuestos enel cuarto de fructificación.

    Figura 44.  Crecimiento del hongo

    shiitake.

    Figura 47. Riego de los bloques expuestos

    en el cuarto de fructificación.

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    El CO2 generado por la actividad

    del micelio puede inhibiro deformar los carpóforos,por tanto, debe ingresar aire

    nuevo en el cuarto a razónde 50 a 70 m3 de aire nuevo/hora/tonelada de sustrato,y la humedad relativa debealcanzar niveles entre 90 y98%. Es recomendable parauna buena distribución del aireutilizar un ducto fabricado conplástico tubular, que atravieseel cuarto por la parte central

    superior y que esté perforadoa lo largo del mismo.

    En cultivos pequeños donde elvolumen ocupado por las bolsassea menor al 5% del volumendel cuarto de incubación, unaventana permite el intercambionatural del aire. Esta debe

    estar cubierta por una mallamosquitera. El aire se renuevaabriendo la ventana dos o tresveces al día durante una hora

    cada vez.

    El estadio de prefructificacióndura alrededor de ocho a diezdías, y los primeros hongosaparecen entre los cuatro ycinco días siguientes. Para recolectar los hongos, esnecesario reducir la humedad

    relativa del cuarto al 60%,entre 6 y 12 horas antes de lacosecha, con el fin de favorecerla vida de anaquel de loshongos cosechados (5).

    La cosecha de los hongosse realiza manualmente,ejerciendo una fuerza de

    torsión en la base del estipe delhongo para desprenderlo delbloque. De esta forma se evitanposibles contaminaciones en

    el sustrato sobre el área dondecreció el cuerpo fructífero.

    Los bloques cosechados sedejan en reposo durante 8días en un sitio seco (Figura48), con una humedad relativaentre 30-50% y temperaturamedia de 21°C.

    Pos te r io rmente , a losbloques se les realiza unsegundo choque térmico,sumergiéndolos en aguadurante 24 horas paraest imular de nuevo laformación de primordios(Figura 49). Después, setras ladan al cuarto defructificación para promoverla segunda cosecha, que semaneja de forma idéntica ala primera (Figura 50).

    Figura 48.  Bloques en reposo parasegunda cosecha.

    Figura 49. Inmersión de los bloques en aguadurante 24 horas.

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    Una vez recolectada la segundacosecha se llevan los bloquesnuevamente a reposo duranteuna semana y se realiza un tercerchoque térmico, sumergiendolos bloques en agua durante24 a 48 horas y se continúacon el manejo del cultivo talcomo se hizo para la segundacosecha. El procedimiento serepite hasta obtener la cuartao quinta cosecha dependiendode la productividad de la cepay del sustrato. El material finalse dispone de acuerdo a lasrecomendaciones que se danen el Capítulo 4.

    La cosecha de las diferentescepas de L. edodes evaluadasen el trabajo, se realizó 5 díasdespués del choque térmico.No se observaron diferenciasen la formación de primordiossobre los bloques, cuando estosse sometieron a inmersióndurante 24 y 48 horas.

    Los bloques de sustrato de1 kilogramo absorben enpromedio de 250 mL de agua/bloque para las diferentescepas evaluadas y para las 14formulaciones de sustrato, encada choque térmico.

    3.6.2. Fructificación y cosechade ganoderma. La formaciónde los cuerpos fructíferosrequiere de temperaturas

    mayores de 20°C y unahumedad relativa cercanaal 95%. Las necesidades deoxígeno y de luz dependende las diferentes etapas decrecimiento del carpóforo. Éstese desarrolla a temperaturasentre 20 y 34°C, y de maneraóptima entre 27 y 32°C.Temperaturas menores a 20°C

    o superiores a 34°C puedendeformar los sombreros oinhibir el crecimiento (6).

    El cuarto de fructificacióndebe mantener una humedadrelativa entre 90 y 95%durante la inducción delos primordios (Figura 51),entre el 70 y 80% durante el

    crecimiento del estipe (Figura52), entre el 85 y 95% duranteel crecimiento del sombrero(Figura 53) y entre 50 y 60% enla etapa final de desarrollo delcuerpo reproductor (Figura54).

    Figura 51. Inducción de primordios de

    G. lucidum.

    Figura 50. Aspecto de los carpóforos deshiitake de segunda cosecha.

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    Figura 52. Crecimiento del estipe deG. lucidum.

    Figura 53. Crecimiento del sombrerode G. lucidum.

    Figura 54. Fase final de formación delcarpóforo de G. lucidum.

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    Durante la formación del cuerpofructífero es indispensablesuministrar luz, entre 50 y 450lux, con lámparas de luz-día

    o mediante ciclos día/noche;sin embargo, debe evitarse laluz directa sobre el cultivo.Intensidades de luz cercanasa 450 lux permiten obtenercuerpos reproductores conestipes cortos y crecimiento delsombrero en menor tiempo, encontraste, intensidades de luzen el rango bajo (cercano a 50

    lux) permiten la elongación delpie y se requiere un tiempomayor para la formación delsombrero (6).

    En la fase final de crecimientodel hongo debe contarse conmuy buena ventilación delcuarto, sobre todo si la hu-

    medad relativa del cuarto esalta, de tal manera que se dis-minuyan la humedad relativa al40%. En la Tabla 8 se presentan

    los requerimientos ambientalesde ganoderma durante la etapade fructificación.

    En general, el tiempo quetranscurre desde la siembrahasta la cosecha del cuerpofructífero para el hongoganoderma, está entre tres ycinco meses.

    3.7. Evaluación de laproducción.

    Para evaluar la producción delas diferentes cepas de hongosmedicinales sobre los diversos

    sustratos, se consideraron losparámetros de precocidad,eficiencia biológica media,rendimiento medio y pérdidas

    del proceso.

    La eficiencia biológica mediase define como la mediaaritmética de la relación entreel peso fresco de los hongoscosechados y el peso secodel sustrato de las bolsasproductivas, multiplicada porcien. Este parámetro es de

    gran importancia en el cultivode los hongos, debido a quepermite determinar el potencialbiológico de los sustratos paraproducir hongos, pues enmuchos casos las pérdidas decultivo se presentan por causasexternas al sustrato y al materialbiológico.

    Tabla 8. Parámetros ambientales adecuados para el crecimiento de G. lucidum durante laetapa de fructificación

     

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    La precocidad se define comoel tiempo que transcurre entrela inoculación de los sustratosy el momento en que aparecenlos primeros carpóforos. Estavariable determina la duraciónde los ciclos de cultivo.

    E