cuestionario

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA

Unidad Xochimilco

División de Ciencias Biológicas y de la Salud

Tronco Común Divisional

Módulo: Procesos Celulares Fundamentales

EXAMEN DE LABORATORIO.

Por: Alberto Aráoz Vásquez

Matricula: 2152028961

Lic. En Medicina Veterinaria y Zootecnia

Docente:

Dr. Jorge Antonio Amézquita Landeros

Grupo: BB12A

CUESTIONARIO.

1. Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización.

R= medios físicos:

-Vapor saturado a presión: autoclave: es el medio más específico y efectivo de menor costo para esterilizar la mayoría de los objetos de uso hospitalario

-Calor seco: pupinel: este sistema elimina microorganismos por coagulación de las proteínas de estos. Su efectividad depende de la cantidad de calor, la cantidad de calor disponible y los niveles de perdida de calor, requiere largos periodos de exposición.

Medios químicos:

-Óxido de etileno: este es un producto químico con un alto poder desinfectante, su presencia está en forma líquida y se volatiza formando un compuesto gaseoso que elimina microorganismos por cualquier alquilación de la pared celular del microorganismo.

-Peróxido de hidrogeno: es un agente químico que se ha utilizado como desinfectante de alto nivel y esterilizante por inmersión, esteriliza a baja temperatura por medio de plasma de peróxido de hidrogeno

-Ácido paracetico: esterilizante de alto nivel, es esporicida, por lo tanto esteriliza en tiempos menores al glutaraldehido, hay dos formas por este agente: líquido y plasma.

2. Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuando es recomendable utilizar cada uno de estos.

R= Físicos: ventajas: más efectivo y de bajo costo, eleva la temperatura tiempo corto y no deja residuos tóxicos.

Desventajas: su efectividad depende de la cantidad de calor disponible, largos periodos.

Químicos: ventajas: alto poder desinfectante.

Desventajas: alto costo, largos periodos de esterilización y alto nivel de infraestructura.

3. Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección.

R=Antisépticos: alcoholes, tintura de yodo, povidona yodada, clorhexidina, triclosan.

Desinfectantes: glutaraldehido, hipoclorito de sodio1%

4. ¿Qué tipo de sustancias suele utilizarse continuamente para desinfectar superficies?

R= para las superficies muy comúnmente es usado el cloro y productos a base de cloro, incluidas los compuestos de hipocloruro, yodoforos, amonio, ácidos y álcalis fuerte, fenol, agentes gaseosos.

5. Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala que factores influyen en la creación de la zona estéril.

R=el mechero te ayuda a crear corrientes de aire caliente que arrastran partículas de polvo y microorganismos dispersos en el área que rodea tu área de trabajo, es decir el aire caliente que genera la flama arrastra hacia afuera toda partícula y microorganismo.

6. Menciona otros métodos usados en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estéril.

R= se pueden realizar limpiezas con agua jabonosa, se limpian con una compresa impregnada de alcohol al 70%

Limpieza de la cabina, desinfección de todo el material que se vaya a introducir a la cabina sumergiéndola en un baño de alcohol.

7. Explica los riesgos que puede correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir cada sesión.

R= los riesgos que se corren son primero que el material pueda caerse y por lo tanto romperse, también puede quedar sucio y contaminarse al hacerse una nueva técnica.

8. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo después de concluir cada sesión.

R= al no lavar los materiales de laboratorio corremos el riesgo que queden sucios y por lo tanto después se contaminen o se infecten o algún virus se quede ahí.

9. Realiza el diagrama del microscopio describe cada una de sus partes e indica su intención.

10. Explica que tipo de bacterias pueden aislarse en el agua.

R= se han encontrado bacterias como por ejemplo Vibrio, e-coli, pseudomonas.

11. Explica cuál es el objetivo de sembrar diluciones del agua.

R=su principal propósito es disminuir la concentración bacteriana de una muestra especifica.

12. Explica el fundamento del aislamiento por estría cruzada.

R= es la técnica más utilizada, para aislar los microorganismos en un placa de agar, se colocan muestras y se realiza un barrido con una asa inoculada hasta lograr separar colonias individuales de la cepa de interés.

13. Explica que tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.

R= este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos gram negativos de fácil desarrollo aerobios y anaerobios facultativos.

14. Explica que se le llama medio de cultivo bacteriológico.

R= son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y condiciones físicas optimas, permite el crecimiento de microorganismos.

15. Explica que es un medio de cultivo enriquecido.

R= son aquellos que además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores, indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por medio de adición de sangre u otros tipos biológicos.

16. Explica que es un medio de cultivo selectivo.

R= son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población poli microbiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica.

17. Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y gram negativas, resaltando las diferencias.

R= bacterias gram positivas: pared celular interna y una pared de peptiduglucano que es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para replicación y supervivencia de la batería, no tiene membrana externa, no tiene espacio peri plasmático.

Bacterias gram negativas: pose una pared celular más compleja , pared celular interna, pared de peptiduglucano, bicapa lípida externa, membrana externa, espacio peri plasmático.

18. ¿Cómo se diferencia las bacterias coliformes?

R= las bacterias del grupo coliformes totales que son capaces de fermentar lactosa a 44-45° se conocen como coliformes termo tolerantes.

19. ¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?

R= lo que indica es que el agua está contaminada y por lo tanto no puede ser consumida por el ser humano.

20. ¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?

R=su importancia se debe que al ser analizadas se pueden crear procesos y tratamientos para el agua y así lograr que el agua esté libre de e-coli.

21. ¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?

R= todas están y se considera que el Escheria coli es el índice de contaminación fecal más adecuado.

22. ¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias en la muestra de agua que colectaste?

R= puede contener parásitos en el agua y así desencadenar unan posible contaminación y un riesgo de una suma importancia de la salud humana.

23. ¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con materia fecal?

R= Shigellae dysenteriae, Salmonella, Fiebre tifoidea, Salmonella ssp, Vibrio, Escheria Colli.

24. ¿Qué significan las siglas IMViC?

I: Indol, M: rojo de metilo, V: V-P (Voges- Proskauer), iC: citrato de Simons

25. ¿Cuál es el objetivo de realizar las pruebas de identificación IMViC?

R= se utiliza en la biología para identificar bacterias. El resultado de test expresa mediante símbolos de positivo o negativo (+,-) según el resultado de cada prueba siguiendo siempre el orden establecido por las iniciales del método.

26. ¿Por qué razón no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para realizar la prueba de la oxidasa?

R= para las pruebas de oxidasa, se utiliza un reactivo llamado Kovacs, el cual está compuesto de alcohol osaomílico, p-dimetilamino- benzaldehído, y ácido clorhídrico. El ácido puede reaccionar con el metal y darles falsos positivos.

27. Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se origina a partir de una sola bacteria (UFC) y estas de dividen en un promedio de 30 minutos.

R= el número de bacterias resultante depende mucho del tipo de muestra pero lo aproximado es que se generen alrededor de unas 4 a 6 bacterias.


Unidad Xochimilco





Por: Alicia Maribel Curiel Rojo


Lic. en Estomatologia

Docente:


Grupo: BB12A

1.- Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización.

Garantizan la destrucción total de los microorganismos presentes en sustancias o materiales. De esta forma se asegura que los microorganismos detectados en alguna experimentación provengan de las muestras estudiadas y no de alguna contaminación del ambiente o de la persona.

Dentro de los métodos físicos se pueden encontrar:

Calor: Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la acción del calor, el cual provoca una desnaturalización de proteínas, fusión desorganización de las membranas en los microorganismos.

Radiaciones: se atribuye a la absorción por DNA, existen uniones covalentes entre residuos de primigenia pertenecientes a la misma cadena, se distorsiona el DNA y se inhibe la síntesis del DNA, por tanto también el crecimiento y respiración de los microorganismos. Su uso principal es para esterilizar el aire y superficies.

Dentro de los métodos químicos: Pueden ser Gaseosos (óxido de etileno) o no Gaseosos (Aldehídos, ácido peracético y peróxido de hidrógeno)

Los antisépticos son considerados venenos que al actuar sobre gérmenes, estos son destruidos. Algunos de ellos ejercen su acción nociva sobre todas las células y otros actúan sobre algunas especies bacterianas en específico. Es óptimo para la antisepsia de las manos del experimentador, mesas de trabajo, material, etc.

2.- Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuándo es recomendable utilizar cada uno de éstos.

Métodos físicos:

Ventajas: Rápido calentamiento y penetración, destrucción de bacterias en un periodo corto, no hay residuos tóxicos, además de que no es corrosivo.

Entre sus desventajas se encuentra que: En algunas ocasiones el material a esterilizar no soporta altas temperaturas y pueden sufrir algún daño o simplemente el material a esterilizar puede ser inflamable. En cuanto a las radiaciones, no penetran en sólidos y pobremente en líquidos.

Métodos químicos:

Ventajas: el ciclo de esterilización dura de 54-75 minutos, el material sometido a estos procesos no precisa de aireación.

Desventajas: se necesita un mayor tiempo, las sustancias son inflamables, tóxicas y de muy alto costo.

3.- Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección.

Los desinfectantes son productos químicos que matan a los microorganismos y se utilizan sobre objetos inanimados. Como: Glutaraldehído, hipoclorito de sodioLos antisépticos son sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los tejidos vivos. Como: Alcoholes, tintura de Yodo,

4.- ¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desinfectar superficies?

*Hipoclorito de sodio al 10%*Solución de benzal diluido 1:10

5.- Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala qué factores influyen en la creación de la zona estéril.

Ayudan a mantener un ambiente de esterilidad, a través del calor, cuando se trabaja con siembra de microorganismos.

Factores que influyen en la zona estéril: Una manipulación correcta de las muestras y del material, evitar contaminar a través de microorganismos propios del experimentador, aire externo, al igual que material no esterilizado previamente a su uso.

6.- Menciona otros métodos usados en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles.

Desinfectantes: son productos químicos que matan a los microorganismos y se utilizan sobre objetos inanimados

Antisépticos: sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los tejidos vivos

El calor es el método más utilizado para la esterilización y puede emplearse calor seco con hornos con una temperatura de 170°C por una hora o como calor húmedo con autoclaves con una temperatura de 121°C a 15 libras de presión por pulgada durante 20minutos.

7.- Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir la sesión.

Primero que nada se corre el riesgo de la ruptura de alguno de los materiales lo que puede causar algún accidente además de que es importante recoger el material y desinfectarlo para evitar la contaminación bacteriológica en especial si los materiales serán usados después.

8.- Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo después de concluir cada sesión.

De no limpiar la mesa se propaga la contaminación, hay que tratar de mantener el campo estéril. Además que hay que tener el mayor cuidado en la limpieza para el manejo de las muestras y evitar alteraciones en los resultados.

10.- Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.

Enterobacterias como Shigella, Salmonella, Yersina pestis y algunas pertenecientes a la flora oportunista como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Proteus mirabilis.

11.- Explica cuál es el objetico de sembrar diluciones de agua.

Las diluciones son recomendadas debido al alto contenido de bacterias ya que permiten trabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables así como el aislamiento adecuado de las colonias. Es importante no trabajar con una dilución tan grande ya que el número de bacterias sería tan bajo que podría impedir el detectar las colonias.


El objetivo es obtener, a partir de elevado número de bacterias, un número reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al incubar esta, cada una de las bacterias originara una colonia.

13. Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en agar macconkey.

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

Microorganismos ColoniasEscherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes

Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes

Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes

Enterococcus faecalis ATCC 29212 Diminutas, incoloras, opacas

14. Explica a qué se le llama medio de cultivo bacteriológico.

Un cultivo es un método para la multiplicación de microorganismos, tales como bacterias, hongos y parásitos, en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un método fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades en medicina humana y veterinaria.


El enriquecimiento es una técnica que utiliza un medio selectivo líquido para permitir el desarrollo de un microorganismo a partir de una muestra que contiene una gran variedad de microorganismos. Así, aquellos microorganismos para los que el ambiente sea más favorable crecerán más que los otros y finalmente serán predominantes

Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo. El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).


Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

17.- Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.

Bacteria Gram Positiva:

a) Su envoltura celular comprende:1. La membrana citoplasmática2. La pared celular.

http://es.wikipedia.org/wiki/Veterinaria

http://es.wikipedia.org/wiki/Medicina

http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria

http://es.wikipedia.org/wiki/Estudio

http://es.wikipedia.org/wiki/Test_estandarizado

http://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivo

http://es.wikipedia.org/wiki/Par%C3%A1sitos

http://es.wikipedia.org/wiki/Hongos

http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria

http://es.wikipedia.org/wiki/Microorganismo

b) La pared celular está compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano o mureína (polímero de N-acetil-2-D-glucosamina, unido en orientación ß-1,4 con N-acetil murámico), su grosor le confiere una gran resistencia, las protege de una ruptura osmótica en ambientes acuáticos, les confiere forma y es la responsable de retener el tinte azul oscuro o violeta durante la tinción de Gram.

c) Presentan sólo una membrana lipídica (membrana citoplasmática) y la capa gruesa de peptidoglicano.

Posee dos clases de ácidos teicoicos: ácido lipoteicoico (ácido teicoico unido a un lípido) y ácido teicoico. Son polisacáridos que se unen al ácido N-acetil murámico del peptidoglicano.

La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico.

Ciertas bacterias Gram-positivas, cuando se someten a un régimen de limitación de fosfato son incapaces de sintetizar ácidos teicoicos, pero en su lugar producen ácidos teicurónicos. Los teicurónicos consisten en polímeros aniónicos formados por la alternancia de ácidos urónicos (que tienen grupos -COOH libres) y aminozúcares como la N-acetil-galactosamina.

d) Pueden presentar una capa superficial cristalina denominada capa S o capa superficial (es la parte más externa de la envoltura celular bacteriana) unida a la capa de peptidoglicano.

e) No existe presencia de endotoxinas.

Bacteria Gram Negativa:

a) Conformada por 4 zonas: 1. La membrana citoplasmática. 2. El espacio periplasmático, ubicado entre la membrana citoplasmática y el peptidoglicano.3. Una fina capa de peptidoglicano. 4. Membrana externa que contiene fosfolípidos, el lipopolisacárido (LPS) y proteínas (proteínas de membrana 6 externa). Esta capa está estrechamente unida al peptidoglicano y se la considera un componente de la pared celular.

b) Su estructura didérmica, es decir, de doble membrana celular (una externa y la otra citoplasmática) está íntimamente ligada al color rosado tenue que presentan ante la tinción de Gram.

c) Presentan dos membranas lipídicas (membrana citoplasmática y membrana externa) entre la fina pared celular de peptidoglicano

Entre la membrana citoplasmática interna y la membrana externa que recubre la pared celular se localiza el espacio periplásmico, relleno de una sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas importantes para la nutrición en estas bacterias. Retienen la safranina.

La membrana externa contiene diversas proteínas; entre ellas, las porinas o canales proteicos que permiten el paso de ciertas sustancias, además de los lipopolisacáridos (LPS), formados por tres regiones: el polisacárido O (antígeno O), una estructura polisacárida central (KDO) y el lípido A (endotoxina).

d) Pueden presentar una capa S que se apoya directamente sobre la membrana externa.

e) Presencia de endotoxinas: el lipopolisacárido (LPS)

18.- ¿Cómo se definen a las bacterias coliformes?

Se definen como coliformes totales a aquellas bacterias entéricas en forma de bacilos cortos que se caracterizan por tener las siguientes propiedades bioquímicas:

Ser aerobias o anaerobias facultativas Ser bacilos Gram negativos; No ser esporógenas; (Si es Gram negativo NO esporula) Fermentan la lactosa a 35°C en menos 48 horas Con producción de ácido y gas

Incluye los géneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter. Durante mucho tiempo se consideraron evidencia de contaminación fecal, pero se ha demostrado que muchos de ellos pueden vivir e incluso crecer en el suelo, el agua y otros ambientes. Actualmente se consideran un excelente indicador de la eficiencia de los procesos de sanitización y desinfección, así como de calidad sanitaria en agua, vegetales y diversos productos procesados. Su determinación se basa generalmente en la capacidad de fermentar lactosa. Se pueden utilizar los métodos del número más probable (NMP ó MPN por sus siglas en inglés) que es un método estadístico en tres etapas y permite el hallazgo de cantidades muy bajas de coliformes. También se pueden detectar por cuenta en placa utilizando agar bilis-rojo violeta (ABRV ó RVBA por sus siglas en inglés) en el cual las colonias fermentadoras de lactosa causan el vire del indicador; pueden detectarse por filtración en membrana (Millipore) e incubación en medios adecuados, por métodos rápidos como Petrifilm y reacciones cromogénicas o fluorogénicas.

Coliformes fecales: dentro del grupo coliforme, los de origen fecal son capaces de fermentar la lactosa también a 44.5 °C; se consideran el indicador más adecuado de contaminación con heces de animales y humanos, por ejemplo en pescados y mariscos, carnes, leche, alimentos RTE, entre otros. La determinación se hace a partir de la segunda etapa (confirmativa) del método de NMP, cultivando en caldo lactosado con incubación a 44.5 °C. Generalmente se combinan las determinaciones, según se requiere.

Escherichia coli: se considera indicador de contaminación fecal reciente, humana o animal en productos como agua embotellada, leche y jugos, alimentos infantiles, y alimentos procesados, en general. Se caracteriza por ser coliforme termotolerante (fermenta lactosa a 44.5°C) que produce indol a partir de triptofano y produce β-glucuronidasa, características que se usan para su identificación en laboratorio, generalmente en la etapa final del NMP o de alguno de los otros métodos, incluyendo Petrifilm.

19.- ¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?

La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro de agua puede estar contaminado, ya sea con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposición. Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo.

20.- ¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?

La determinación de la calidad bacteriológica reviste gran importancia en el ámbito de la salud pública ya que permite garantizar la inocuidad (incapacidad para hacer daño) del agua destinada al consumo, evitando así epidemias gastrointestinales, y además de descubrir enfermedades que son comunes al hombre y animales.

21.- ¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?

No todas las bacterias coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminación. Dentro del grupo de los coliformes totales (que comprende la totalidad del grupo) existe un subgrupo que es el de los coliformes fecales (los de origen fecal).

Véase pregunta número 18.

22.- ¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias en la muestra de agua que colectaste?

Las complicaciones pueden ser que venga una epidemia de E.coli así como también de Salmonella y muy graves que no se puedan controlar.

23.- ¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con materia fecal?

* Enf. trasmitidas por el agua: Cólera, Fiebre Tifoidea y Paratifoidea, Disenterías, Poliomelitis, Hepatitis, Salmonelosis, Cryptosporidiosis, Gastroenteritis.

* Enf. con base en el agua: Ascariasis, Clonorquiasis, Dracunculosis, Paraginimiasis, Esquistosomiasis.

* Enf. vectoriales relacionadas con el agua: Dengue, Filariasis, Paludismo, Oncocercosis, Fiebre del Valle del Rift (FVR).

24.- ¿Qué significan las siglas IMViC?

I: Indol M: Rojo de metilo V: V-P (Voges-Proskauer) i C: Citrato de Simmons

25.- ¿Cuál es el objetivo de realizar las pruebas de identificación IMViC?

Las bacterias pertenecientes a la familia enterobacteriaceae, pueden identificarse a través de una serie de pruebas bioquímicas, que permiten determinar la presencia o ausencia de ciertas enzimas y a veces incluso permiten determinar la existencia de una secuencia metabólica. Con este fin se han desarrollado diversos esquemas de clasificación, uno de los más conocidos y utilizados corresponde al IMVIC que se desarrolló para clasificar especies de la familia antes mencionada y correspondientes al grupo de bacterias coliformes (bacterias aeróbicas o anaeróbicas facultativas, Gram (-), bacilares, no esporógenas que producen ácido y gas durante la fermentación de la lactosa).

26.- ¿Por qué razón no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para realizar la prueba de la oxidasa?

Ya que la prueba tiene como fundamento demostrara la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo, que es reducido por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana.

Los metales pueden interferir de manera oxidativa ya que las enzimas están íntimamente relacionadas a la cadena de transporte de electrones.

27. Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se origina a partir de una sola bacteria (UFC) y estas se dividen en un tiempo promedio de 30 minutos.

El número de bacterias totales según su fusión binaria


Unidad Xochimilco




Cuestionario de Laboratorio

Por: Aura Ramirez Vega

Matricula: 2152032321Lic. en Biologia

Docente:


Grupo: BB12A


METODOS QUÍMICOS: Provocan la pérdida de viabilidad de los microorganismos

-Óxido de etileno: Utilizado en estrerilización gaseosa. Destruye todos los microorganismos, incluso los virus. Sirve para esterilizar material termosensible.

-Aldehido: Agentes alquilantes que actúan sobre las proteínas provocando modificación irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimática, destruyen esporas.

-Gluteraldehidos: Solucion salina al 2% y sumergir el material de 20 a 30 mins y enjuagar 10mins.

-Folmaraldehidos: Pastillas para formaraldehido, se disponen en el fondo de una caja envueltas en gas o algodón y después expuesta al calor para una rápida esterilización. A una temperatura ambiente esterilizan en 36hrs.

MÉTODOS FÍSICOS: Dependen del tiempo y la temperatura. Desnaturalizan proteínas y desorganización de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos.

-Calor húmedo: Produce desnaturalización y coagulación de proteínas por 2 razones; el agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras viológicas son producidas por reacciones que eliminan agua y que el vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho mas elevado que el aire.

-Autoclave: Esterilizacion por el vapor de agua a presión. El mas utilizado es el Chamberland. Esterilizacion a una temperatura de 120 grados a 1atm durante 20 o 30mins.

-Tyndalizacion: Esterilizacion por acción discontinua del vapor de agua, se basa en el principio de Tyndal. Las bacterias que resisten 1 sesión pueden ser destruidas cuando la misma operación se repite con intervalos separados en varias sesiones.

-Filtracion: Se utilizan membranas filtrantes con poros de un tamaño determinado. Los filtros no retienen virus ni micoplasmas, estos están en el límite de separación según el diámetro del poro. Se usa para esterilizar, algunas pomadas, soluciones oftálmicas, intravenosas, etc.

2. Explica las ventajas y desventajas de los métodos esterilizantes e indica cuando es recomendable utilizarlos.

La elección de método va a depender de las caracterí

VENTAJAS DESVENTAJAS

CALOR HÚMEDO: Rápido, no deja residuos tóxicos, bajo deterioro material, económico.

CALOR SECO: No es corrosivo para metales e instrumentos, esteriliza substancias en polvo.

IONIZANTES RUV: Esterilizan superficies.

FILTRACION: Esteriliza aceites, pomadas y soluciones oftálmicas.

No se permite para emulciones con agua, es corrosivo sobre algunos metales.

Muy tardado al esterilizar, baja penetración del calor, radiación de acuerdo a su tiempo.

Escasamente penetrante.

ÓXIDO DE ETILENO: Esteriliza material termosensible, equipos electrónicos, etc.

ALDEHIDOS: Rápido y único esterilizante frío.

GAS PLASMA DE PERÓXIDO DE HIDRÓGENO: No deja residuos tóxicos, se convierte en agua y oxígeno al final del proceso, material sin aireación, dura entre 1hr, y 1hr 30mins.

No retienen virus ni microplasma.

Peligrosos por ser altamente flamables, explosivos y cancerígenos.

No se pueden esterilizar objetos con celulosa, algodón, líquidos, humedad, madera, etc.

Muy costoso.

3. Principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección.

DESINFECTANTES ESTERILIZANTES: Alcohol (60%-85% etanol o isopropanol en agua). Detergentes catiónicos (amonio cuaternario). Gas cloro, compuestos clorados (cloraminas, hipoclorito sódico, dióxido de cloro). Sulfato de cobre. Óxido de etileno(gas). Formaldehido. Glutaraldehido. Peróxido de hidrógeno. Compuestos yodóforos (yodo). Dicloruro de mercurio. Ozono. Ácido peracético. Compuesto fenólico.

ANTISÉPTICOS:Alcohol(60%-85% etanol o isopropanol en agua). Compuestos que contienen fenol. Detergentes catiónicos, especialmente compuestos de amonio cuaternario. Peróxido de hidrógeno, compuestos yodorosos que contienen yodo en solución, nitrato de plata.

4. ¿Qué tipo de substancias suelen utilizarse comúnmente para desinferctar superficies?

HIPOCLORITO DE SODIO AL 10%: Mezclarlo con 900ml de agua y envasarlo en frasco de plástico.

SOLUCION BENZAL DILUIDA 1:10: Diluir con agua y envasarla en frasco ambar y bien tapado. Desinfectantes como bacterisidas, fungisidas y virusidas.

5. Explica cual es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona esteril para el trabajo microbiológico y señala que factores influyen en la creación de zona esteril.

Crea corrientes de aire caliente que arrastran partículas de polvo y microorganismos dispersos en el aire (convección de masas de aire). Al mismo tiempo la temperatura que alcanza distruye cualquier organismo y además esteriliza el asa bacteriológica.

6. Menciona otros métodos usados en la industria en los laboratorios para crear zonas estériles.

DISCONTINUA: A 121oC durante 30 y 60mins y dejarla enfriar. Se inyecta vapor de agua.

CONTINUA: A mayor temperatura menos tiempo 14oC durante 30-120s. Se pueden 2 sistemas: Inyección a vapor e intercambiadores de calor.

ESTERILIZACION DEL MEDIO DE CULTIVO: Medio nutritivo que se prepara inicialmente, contiene células vegetativas y esporas que proceden de los constituyentes del medio, agua y recipientes.

ESTERILIZACION DEL AIRE DE FERMENTACION

AGITACION Y MEZCLADO: La agitación es la operación que crea o acelera el contacto entre 2 o varias fases.

7. Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, tubos y pipetas al concluir.

Se corre el riesgo de sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminación y de que se rompan y posiblemente nos cortemos.

8. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo al concluir.

Se puede provocar un foco de infección exponiendo las bacterias en el exterior.

9. Diagrama de un microscopio y describir cada una de sus partes e indica su función.

BRAZO: Sirve para trsladar el microscopio y es donde se sujetan las pinzas, el carro y el tubo.

BASE O PIE: Proporciona soporte al microscopio.

PLATINA: Aquí se coloca el portaobjetos con la muestra.

PINZAS: Sujeta la preparación

TORNILLO MACROMÉTRICO: Movimiento rápido hacia arriba y debajo del tubo o de la platina.

TORNILLO MICROMÉTRICO: Parte mecánica del movimiento giratorio que coloca en posición cualquiera de los objetos.

TUBO: Parte mecánica que proporciona sostén a los oculares y a los objetivos.

CREMALLERA: Permite el movimiento de los tornillos macro y micrométrico, sea de mayor o de menor amplitud.

OCULAR: Lentes que captan y amplian la imagen de los objetivos.

OBJETIVOS: Incrustados en el revolver, son pequeños cilindros que proporcionan el poder de resolución y cantidad total del aumento.

DIAFRAGMA: Se encuentra en el condensador, elimina el exceso de luminosidad para tener una buena iluminación del objeto a observar.

FUENTE DE LUZ: Algún tipo de luz, es un foco que da energía eléctrica hacia el sistema condensador.

10.Explica tipos de bacterias que se pueden aislar en el agua.Enterobacteriaceae como shigella, salmonella, yersina pestis y algunas pertenecientes a la flora oportunista como escherichia collo, klebsiella pneumonae y proteus mirabilis.

11.Explica cual es el objetivo de sembrar diluciones de agua.Son recomendadas debido al alto contenido de bacterias ya que permiten trabajar con un número apropiado de células asi como el aislamiento adecuado de las colonias. Es importante no trabajar con una dilución tan grande ya que el número apropiado de bacterias sería tan bajo que podría impedir el detectar las colonias.

12.Explica el fundamento del aislamiento por estría cruzada.El objetivo es obtener, a partir de un elevado número de bacterias, un número reducido de ellas distribuidas endividualmente sobre la superficie de la placa. Al incubar esta, cada una de las bacterias iriginaria una colonia.

13.Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en agar de MacConkey.

Se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram- de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

MICROORGANISMOS COLONIAS

Escherichia colli ATCC 25922

Klebsiella pneumonae ARCC 700603

Salmonella typhimunum ATCC 12022

Proteus microbilis ATCC 43071

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Rojas con halo turbio.

Rosadas mucosas.

Incoloras, transparentes.

Incoloras, transparentes.

Diminutas, incoloras, opacas.

14.Explica a que se le llama medio de cultivo bacteriológico.Substancias que pueden ser liquidas o sólidas que contienen los nutrientes nescesarios para que una bacteria pueda crecer y desarrollarse.

15.Explica que es un medio enriquecido.Estan compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos (sangre, suero, etc) Se utiliza para microorganismos de grandes exigencias nutricionales. Se utilizan comúnmente para la cosecha de diferentes tipos de microbios presentes en la muestra.

16.Explica que es un medio de cultivo selectivoSon aquellos que favorecen el crecimiento de un microorganismo en específico. Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana mixta.

17.Características de la pared celular de bacterias Gram+ y Gram- y sus diferencias.

GRAMMPOSITIVAS GRAMMNEGATIVAS DIFERENCIAS

Capa gruesa y rígida compuesta por varias capas de peptidoglicano.

Contiene ácidos teicoicos. Ácido lipoteicoico que está en la superficie en la capa de peptidoglucano unido a la membrana citoplásmica.

Ácido teicoico se encuentra en la superficie de la pared y se une a solo una capa del peptidoglicano

La carga negativa de los ácidos con la unión de cationes regulan el movimiento hacia el interior y exterior de la célula.

Baja posibilidad de ruptura de la pared gracias a los ácidos teicoicos.

Capa delgada de peptidoglicano

Contiene una membrana externa.

El peptidoglicano está unido a lipoproteínas de la membrana externa.

Contiene periplasma, una sustancia gelatinosa localizada entre la membrana externa y la membrana plasmática.

Periplasma con enzimas degradadoras de proteínas de transporte.

No contiene ácidos teicoicos.

Alta posibilidad de ruptura mecánica.

Membrana externa compuesta por lipopolisacaridos, lipoproteínas y fosfolípidos. Membrana externa con

permeabilidad media.

Presencia de periplasma en las grammnegativas.

Presencia de ácidos teicoicos en las grammpositivas.

Presencia de membrana externa en las grammnegativas.

Presencia de lipopolisacaridos, lipoproteínas y fosfolípidos en la membrana de las grammnegativas.

En cuanto a la tinción de gramm. Las bacterias grammpositivas gracias a su espesa capa de petidoglicano son capaces de retener el compuesto cristal violeta dentro de la pared celular.

Por el contrario las grammpositivas son incapaces de retener el compuesto debido a su delgada capa de peptidoglicano.

18.¿Cómo se definen las bacterias coliformes?Grupo de bacterias que comparten características bioquímicas en común y son útiles como microorganismo indicadores de sanidad de alimentos y agua. Entre los coliformes se encuentran las enterobacterias. Morfologia dacilar, pueden ser aerobias o anaerobias facultativas. No forman endosporas, son Gram-

fermentan lactosa produciento ácido y gas en 24 a 38hrs a 360C.

19.¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?La presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales orgánicos sin tratar que pueden tener un alto impacto en el medio ambiente. Indican la sanidad de alimentos y agua. Es un indicador de calidad.

20.¿Cuál es la importancia clínica de las B.Coliformes?Permite garantizar la inocuidad del agua destinada al consumo evitando epidemias gastrointestinales. Nos ayuda a encontrar bacterias patógenas y virus.

21.¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?No, también existen coliformes de vida libre.

22.¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias en la muestra de agua recolectada?

Pueden contener una amplia gama de parásitos, bacterias y virus causantes de enfermedad las cuales pueden variar desde condiciones leves como las infecciones agudas de oído y otras mas graves.

23.¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua conteminada con material fecal?

ENFERMEDAD AGENTE SINTOMAS

Shigelosis (disentería bacilar)

shigella Dolor abdominal, fiebre aguda, sangre, moco o pus en las heces, dolor rectal, diarrea acuosa,

vomito, nauseas.

Amebiasis Quistes de Entamoeba histolytica

Cólicos abdominales, pérdida de peso,

tenesmo, flatulencia excesiva.

Hepatitis A Orina oscura, fátiga, picazón, inapetencia,

fiebre baja, heces color arcilla o pálidas, ictericia.

Balantidiasis Balantidium coli (Mayormente asintomático) cuadros

diarreicos, fiebre, nausea, vomito

Criptosporidiosis Cryptosporidium Deshidratación, pérdida de peso, cólicos

Esquistosomiasis Schistosoma mansoni y Schistosoma intercalatum

Dolor abdominal y diarrea (que puede ser

sanguinolenta).

Giardiasis Giardia intestinalis (Mayormente asintomática) diarrea repentina pastosa o

líquida, amarilla, maloliente, con moco y

acompañada por cólicos, dolor abdominal,

náuseas, anorexia, flatulencia, meteorismo, aerogastria y pérdida de

peso.

Cólera Vibrio cholerae Vómito, diarrea, calambres,

deshidratación, shock

24.¿Qué significan las siglas IMViC?

Son siglas en inglés que representan las pruebas bioquímicas cualitativas a las que son sometidas las muestras para saber su origen bacteriológico, es decir, saber de qué bacteria se trata.

I: Indol M: Rojo de Metilo V: V-P(Voges-Proskauer) IC: Citrato de Simmons.25.¿Cual es el objetivo de realizar pruebas de identificacion IMViC?

Son cuatro pruebas bioquímicas cualitativas (indol, rojo de metilo, voges-prosikaver y citrato) que se emplean fundamentalmente para la identificación de las Enterobacterias (bacilos gran negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador), su nivel de patogeniesidad, su poder de reproducción, su virulencia, origen y medios en los que crece proliferantemente.

26.¿Por qué razón no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para realizar la prueba de oxidasa?

Porque es de metal. Para las pruebas de oxidasa se utiliza un reactivo llamado Kovacs, el cual está compuesto de alcohol isoamílico, p-dimetilaminobenzaldehído y ácido clorhídrico. El ácido puede reaccionar con el metal y dar falsos positivos.

27.Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24hrs de incubación, recuerda que la colonia se origina a partir de una sola bacteria (UFC) y estas se dividen en un tiempo promedio de 30mins.

(UFC) Unidades Formadoras de Colonias

Después de 24 h de incubación= 28,147,497,670 bacterias

30min= 2

60 min= 4

90 min= 8

120min= 16

1440 min = 2.814749767X1014


Unidad Xochimilco





Por: Claudia Libertad Larios Ayala


Lic. En Nutrición Humana

Docente:


Grupo: BB12A

CUESTIONARIO PRÁCTICA

MÉTODOS BÁSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS DEL AGUA.


Métodos físicos

Depende de factores como tiempo, exposición y temperatura. El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor húmedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalización de las proteínas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. El calor es considerado como el método de esterilización por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningún tipo de daño.

Métodos químicos

Algunas sustancias químicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque tienen la capacidad de promover una o más reacciones químicas capaces de dañar los componentes celulares de los microorganismos (proteínas, membranas, etc.)

2. Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuándo es recomendable utilizar cada uno de éstos.

La elección del método, va a depender de las características del elementos que se va a esterilizar, tiempo, costo, que tan peligrosos son, consecuencias secundaria, entre otros factores.

Método Métodos Físicos

Calor húmedo Ventajas Desventajas

Rápido, no deja residuos tóxicos, bajo deterioro del material expuesto, económico No se permite para emulsiones con agua, es corrosivo sobre algunos metales

Calor seco No es corrosivo para metales e instrumentos, permite esterilización de sustancias en polvo Mayor tiempo de esterilización. Baja penetración del calor. Radiaciones de acuerdo al tiempo de radiación.

Ionizantes RUV Esterilizan superficies Escasamente penetrantes

Filtración Esteriliza aceites, pomadas, soluciones oftálmicas No retienen virus ni micro plasma.


Desinfectantes y esterilizantes: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Detergentes catiónicos (compuestos de amonio cuaternario) Gas cloro. Compuestos clorados (cloraminas, hipoclorito sódico, dióxido de cloro) Sulfato de cobre. Óxido de etileno (gas). Formaldehído. Glutaraldehído. Peróxido de hidrógeno. Compuestos yodóforos que contienen yodo en solución. Dicloruro de mercurio. Ozono. Ácido peracético. Compuestos fenólicos.

Antisépticos: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Compuestos que contienen fenol (hexaclorofeno, triclosan, cloroxilenol, clorhexidina). Detergentes catiónicos, especialmente compuestos de amonio cuaternario (cloruro de benzalconio). Peróxido de hidrógeno (solución al 3%). compuestos yodorosos que contienen yodo en solución. Nitrato de Plata.

4. ¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desinfectar superficies?

Compuesto fenólico clorado, cloroxilenol:, es eficaz sobre un amplio espectro de bacterias grampositivas, es menos eficaz sobre estafilococos y bacterias gramnegativos.

El glutaral: es un desinfectante bactericida muy activo sobre las bacterias grampositivas y gramnegativos, es activo sobre el bacilo de la tuberculosis, hongos y virus como el VIH y de la hepatitis B.

Cloroxilenol: es un desinfectante y antiséptico.}

Etanol: desinfectante representativo.

Glutarol: desinfección de instrumentos.

Polvidona yodada: antiséptico, desinfección de la piel.


Trabajar cerca del mechero (radio de 20 centímetros aproximadamente) crea corriente de aire cálido que impide la entrada a esta zona de bacterias contaminantes esto creando un inoculo más puro del microorganismo a trabajar.

6. Menciona otros métodos usados en la industria y en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles.

Método Métodos Químicos

Ventajas Desventajas

Óxido de Etileno Esteriliza material que es termo sensible, como equipos electrónicos, et. Peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, además de ser cancerígeno

Aldehídos Método rápido y único esterilizante frío. No se puede esterilizar objetos con celulosa, algodón, líquidos, humedad, madera, etc.

Gas-Plasma de

Peróxido de

Hidrógeno No deja ningún residuo tóxico, se convierte en agua y oxígeno al final del proceso, material sin aireación, dura aproximadamente entre una hora y hora y media. Muy costoso.

Uso de bata, guantes y cubre bocas con la finalidad de evitar contaminación. Lavado del área de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido 1:10. El uso del mechero.

7. Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir la sesión.

Se corre el riesgo de sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminación.


Se puede provocar un foco de infección.

9. Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e indica su función.

PARTE FUNCION

BRAZO Es la parte de donde se debe sujetar, las pinzas el carro el tubo del microscopio y el revólver. Además sirve para trasladar el microscopio de un lugar a otro

BASE O PIE Es una pieza que proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del microscopio

PLATINA Es una pieza metálica, cuadrada, que tiene en su centro una abertura circular por la que pasará la luz del sistema de iluminación. Aquí se coloca el portaobjetos con la muestra a observar

PINZAS DE SUJECION Parte mecánica que sirve para sujetar la preparación. La mayoría de los microscopios modernos tienen las pinzas adosadas a un carro con dos tornillos, que permiten un avance longitudinal y transversal de la preparación.

TORNILLO MACROMETRICO Permite hacer un movimiento rápido hacia arriba o hacia abajo del tubo o la platina, y se utiliza para localizar la imagen a observar.

TORNILLO MICROMETRICO Parte mecánica de movimiento giratorio que nos permite colocar en posición cualquiera de los objetivos que se encuentran en él

TUBO Parte mecánica que proporciona sostén a los oculares y objetivos.

CREMALLERA Permite que el movimiento de los tornillos macro y micrométrico sea de mayor o de menor amplitud.

OCULAR Se localiza en la parte superior del tubo ocular y son las lentes que Capta y amplia la imagen formada en los objetivos. Los primeros microscopios eran monoculares, es decir, poseían una sola lente. Los microscopios actuales poseen dos oculares, uno para cada ojo y se les llama binoculares.

OBJETIVOS Se encuentran incrustados en el revólver Son unos pequeños cilindros colocados en el revólver que proporciona el poder de resolución del microscopio y determinan la cantidad total de aumento.

DIAFRAGMA Existe un diafragma en el condensador, que elimina el exceso de luminosidad para tener una buena iluminación del objeto a observar

FUENTE DE LUZ Para observar la muestra microscópica es necesario que ésta se ilumine con algún tipo de luz y nuestros microscopios cuentan con un foco que da energía eléctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador

10. Explica qué tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.

Las enterobacteriaceae, escherichia, shigella, edwarsiella, salmonella, citrobarter, klebsiella,

11. Explica cuál es el objetivo de sembrar diluciones de agua.

Trabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables, así como un aislamiento adecuado de colonias. Disminuir la concentración bacteriana de una muestra.


La técnica de estría cruzada es un procedimiento semicuantitativo.

Es una técnica que se utiliza para obtener a partir de un elevado número de bacterias, un número reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la

http://www.google.com.mx/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=&url=http://www.ecured.cu/Microscopio_%C3%B3ptico&psig=AFQjCNEhMqKxNIQeZ0BfXr1pypqwjimGZA&ust=1447982610612236

superficie de la placa. Al incubar ésta, cada una de las bacterias originará una colonia.

13. Explica qué tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.

El agar MacConkey es un medio diferencial para la selección y recuperación de Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas y de algunas gramnegativos exigentes. Contiene lactosa como única fuente de carbono. Identificando con un color rojo las bacterias fermentadoras de lactosa.

14. Explica a que se llama medio de cultivo bacteriológico.

Cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos pueden ser solidos o líquidos que contienen los nutrientes necesarios para que una bacteria pueda crecer y desarrollarse, un medio de cultivo debe ser esterilizado antes de cultivar.

15. Explica qué es un medio enriquecido.

Aquellos medios que han sido complementados con líquidos corporales, vitaminas específicas, aminoácidos, proteínas y otros nutrientes claramente definidos como tales. Se utilizan para favorecer el crecimiento de ciertas especies bacterianas al mismo tiempo que inhibe el desarrollo de microorganismos no deseados.

16. Explica qué es un medio de cultivo selectivo.

Son aquellos que favorecen el crecimiento específico de un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana mixta.

17. Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y gramnegativos, resaltando sus diferencias.

BACTERIAS GRAM POSITIVAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano.

*Peptidoglucano: es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para replicación y supervivencia de la bacteria. Poseen una pared celular más compleja: -pared celular interna -pared de peptidoglucano - bicapa lipídica externa

No tiene membrana externa Membrana externa: forma un saco rígido alrededor de la bacteria, mantiene estructura y es barrera impermeable a macromoléculas, ofrece protección en condiciones adversas

No tiene espacio peri plasmático Espacio peri plasmático: espacio entre la superficie externa de la membrana citoplasmática y la interna de la membrana externa.

La red de mureína está muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas La red de mureína presenta una sola capa.

La penicilina mata a las grampositivas, ya que bloquea la formación de enlaces peptídicos entre las diferentes cadenas del peptidoglucano La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la capa de lipopolisacáridos situada en la parte externa de la pared celular.

No contiene LPS Contiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa células B, liberación de IL, FNT, IL 6 por macrófagos.

En la tinción de Gram, retienen la tinción azul Quedan decoloradas.

Conservan el complejo yodo colorante, Pierden el complejo yodo colorante

Son esporulantes y no esporulantes, como Streptococcus, Cisteria, Frankia.

Pueden ser anaerobios o aerobios.

18. ¿Cómo se definen a las bacterias coliformes?

Los coliformes son un grupo de bacterias que comparten características bioquímicas en común y son útiles como microorganismos indicadores de sanidad de alimentos y agua. Entre los coliformes se encuentran las enterobacterias. Poseen morfología bacilar, pueden ser aerobias o anaerobias facultativas. No forman endosporas, son gramnegativos, fermentan la lactosa produciendo ácido y gas en 24 a 38 horas a 36 ºC.


Indican la presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales orgánicos sin tratar, que pueden tener un alto impacto en el ambiente. Indican la sanidad de alimentos y agua. Es un indicador de calidad de los alimentos.


La determinación de la calidad bacteriológica reviste gran importancia en el ámbito de la salud pública ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al consumo evitando así epidemias gastrointestinales.


No, también existen coliformes de vida libre.


Las bacterias coliformes fecales pueden tener efectos graves en la salud pública. Los volúmenes de agua con altos niveles de esta bacteria pueden contener una amplia gama de parásitos, bacterias y virus causantes de enfermedades, las cuales pueden variar desde condiciones leves como las infecciones agudas del oído, hasta otras más graves que amenazan la vida tales como la fiebre tifoidea y la hepatitis. Los gusanos parásitos y los patógenos bacterianos tales como Salmonella, también se encuentran comúnmente en el agua que da positivo en la prueba que busca altos niveles de bacterias coliformes fecales.


Salmonelosis, Fiebre paratifoidea, shiguelosis, Cólera


IMVIC es una prueba utilizada en biología para la identificación bacterias. Se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato.

Indol (I): consiste en cultivar el microorganismo en el estudio del caldo rico en triptófano.

Rojo de Metilo (M): es un indicador de PH

Vogues-Proskavet (VI): producto final de la glucolisis.

Citrato (C): sirve para determinar si un organismo puede crecer utilizando citrato.


Se emplean fundamentalmente para la identificación de las Enterobacterias (bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador).

26. Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se orgina a partir de una sola bacteria (UFC) y éstas se dividen en un tiempo promedio de 30


Unidad Xochimilco




Tema: CUESTIONARIO

MÉTODOS BÁSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE

ENTEROBACTERIAS DEL AGUA.

Por: Thania Sarahi Álvarez Román.


Lic. En Estomatología.

Docente:


Grupo: BB12A

CUESTIONARIO

MÉTODOS BÁSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE

ENTEROBACTERIAS DEL AGUA.

1. Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de

esterilización.

Métodos físicos

Depende de factores como tiempo, exposición y temperatura. El calor se puede aplicar

como agente esterilizante de dos formas: el calor húmedo el cual destruye a los

microorganismos por desnaturalización de las proteínas y el calor seco que destruye a

los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. El calor es considerado

como el método de esterilización por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar

soporte altas temperaturas sin sufrir ningún tipo de daño.

Métodos químicos

Algunas sustancias químicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque

tienen la capacidad de promover una o más reacciones químicas capaces de dañar los

componentes celulares de los microorganismos (proteínas, membranas, etc.)

2. Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica

cuándo es recomendable utilizar cada uno de éstos.

La elección del método, va a depender de las características del elementos que se va a

esterilizar, tiempo, costo, que tan peligrosos son, consecuencias secundaria, entre otros

factores.



Rápido, no deja residuos

tóxicos, bajo deterioro del

material expuesto,

económico

No se permite para

emulsiones con agua, es

corrosivo sobre algunos

metales

Calor seco No es corrosivo para

metales e instrumentos,

permite esterilización de

sustancias en polvo

Mayor tiempo de

esterilización. Baja

penetración del calor.

Radiaciones de acuerdo al

tiempo de radiación.


Filtración Esteriliza aceites, pomadas,

soluciones oftálmicas

No retienen virus ni

microplasma.



Óxido de

Etileno

Esteriliza material que es

termosensible, como

equipos electrónicos, et.

Peligroso por ser altmente

inflamable y explosivo,

adem+ás de ser cancerígeno

Aldehidos Método rápido y único

esterilizante frío.

No se puede estrilizar objetos

con celulosa, algodón,

líquidos, humedad, madera,

etc.

Gas-Plasma de

Peróxido de

Hidrógeno

No deja ningún residuo

tóxico, se convierte en agua

y oxígeno al final del

proceso, material sin

aireación, dura

aproximadamente entre una

hora y hora y media.

Muy costoso.

3. Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la

desinfección.

Desinfectantes y esterilizantes: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua).

Detergentes catiónicos (compuestos de amonio cuaternario) Gas cloro. Compuestos

clorados (cloraminas, hipoclorito sódico, dióxido de cloro) Sulfato de cobre. Óxido de

etileno (gas). Formaldehído. Glutaraldehído. Peróxido de hidrógeno. Compuestos

yodóforos que contienen yodo en solución. Dicloruro de mercurio. Ozono. Ácido

peracético. Compuestos fenólicos.

Antisépticos: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Compuestos que contienen

fenol (hexaclorofeno, triclosan, cloroxilenol, clorhexidina). Detergentes catiónicos,

especiamente compuestos de amonio cuaternario (cloruro de benzalconio). Peróxido de

hidrógeno (solución al 3%). compuestos yodorosos que contienen yodo en solución.

Nitrato de Plata.

4. ¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desifenctar

superficies?

Los desinfectantes como lo son bacterisidas, fungisidas y virusidas

5. Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para

el trabajo microbiológico y señala que factores influyen en la creación de la zona

estéril.

Trabajar cerca del mechero (radio de 20 centímetros aproximadamente) crea corriente de

aire cálido que impide la entrada a esta zona de bacterias contaminantes esto creando un

inoculo más puro del microorganismo a trabajar.

6. Menciona otros métodos usados en la industria y en la industria y en los

laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles.

Uso de bata, guantes y cubrebocas con la finalidad de evitar contaminación. Lavado del

area de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido 1:10. El uso del mechero.

7. Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y las

pipetas después de concluir la sesión.

Se corre el riesgo de sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminacion.

8. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo

después de concluir cada sesión.


9. Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e indica

su función.

PARTE FUNCION

BRAZO Es la parte de donde se debe sujetar,

las pinzas el carro el tubo del

microscopio y el revólver. Además

sirve para trasladar el microscopio de

un lugar a otro

BASE O PIE Es una pieza que proporciona

estabilidad y sirve de soporte a todas

las partes del microscopio

PLATINA Es una pieza metálica, cuadrada, que

tiene en su centro una abertura

circular por la que pasará la luz del

sistema de iluminación. Aquí se

coloca el portaobjetos con la muestra

a observar

PINZAS DE SUJECION Parte mecánica que sirve para

sujetar la preparación. La mayoría de

los microscopios modernos tienen las

pinzas adosadas a un carro con dos

tornillos, que permiten un avance

longitudinal y transversal de la

preparación.

TORNILLO MACROMETRICO Permite hacer un movimiento rápido

hacia arriba o hacia abajo del tubo o

la platina, y se utiliza para localizar la

imagen a observar.

TORNILLO MICROMETRICO Parte mecánica de movimiento

giratorio que nos permite colocar en

posición cualquiera de los objetivos

que se encuentran en él

TUBO Parte mecánica que proporciona

sostén a los oculares y objetivos.

CREMALLERA Permite que el movimiento de los

tornillos macro y micrométrico sea de

mayor o de menor amplitud.

OCULAR Se localiza en la parte superior del

tubo ocular y son las lentes que Capta

y amplia la imagen formada en los

objetivos. Los primeros microscopios

eran monoculares, es decir, poseían

una sola lente. Los microscopios

actuales poseen dos oculares, uno

para cada ojo y se les llama

binoculares.

OBJETIVOS Se encuentran incrustados en el

revólver Son unos pequeños cilindros

colocados en el revólver que

proporciona el poder de resolución del

microscopio y determinan la cantidad

total de aumento.

DIAFRAGMA Existe un diafragma en el

condensador, que elimina el exceso

de luminosidad para tener una buena

iluminación del objeto a observar

FUENTE DE LUZ Para observar la muestra

microscópica es necesario que ésta

se ilumine con algún tipo de luz y

nuestros microscopios cuentan con un

foco que da energía eléctrica que

dirige sus rayos luminosos hacia el

sistema condensador


Las enterobacteriaceae

11. Explica cual es el objetivo de sembrar diluciones de agua.

Trabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables, así como un

aislamiento adecuado de colonias.



Es una técnica que se utiliza para obtener a partir de un elevado número de bacterias, un

número reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al

incubar ésta, cada una de las bacterias originará una colonia.


El agar MacConkey es un medio diferencial para la selección y recuperación de

Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entéricos relacionados. Contiene sales

biliares y cristal violeta que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas y de algunas

gramnegativas exigentes. Contiene lactosa como única fuente de carbono. Identificando

con un color rojo las bacterias fermentadoras de lactosa.


Cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos,


Aquellos medios que han sido complementados con líquidos corporales, vitaminas

específicas, aminoácidos, proteínas y otros nutrientes claramente definidos como tales.

Se utilizan para favorecer el crecimiento de ciertas especies bacterianas al mismo tiempo

que inhibe el desarrollo de microorganismos no deseados.


Son aquellos que favorecen el crecimiento específico de un microorganismo particular (o

grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a

partir de una población microbiana mixta.

17. Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y

gramnegativas, resaltando sus diferencias.


Poseen una pared celular interna y una

pared de peptidoglucano.

*Peptidoglucano: es un exoesqueleto que

da consistencia y forma esencial para

replicación y supervivencia de la bacteria.

Poseen una pared celular más compleja:

-pared celular interna

-pared de peptidoglucano

- bicapa lipídica externa

No tiene membrana externa Membrana externa: forma un saco rígido

alrededor de la bacteria, mantiene

estructura y es barrera impermeable a

macromoléculas, ofrece protección en

condiciones adversas

No tiene espacio periplasmático

Espacio periplasmático: espacio entre la

superficie externa de la membrana

citoplasmática y la interna de la

membrana externa.

La red de mureína está muy desarrollada y

llega a tener hasta 40 capas

La red de mureína presenta una sola capa

La penicilina mata a las gram positivas, ya

que bloquea la formación de enlaces

peptídicos entre las diferentes cadenas del

peptidoglucano

La penicilina no mata a las Gram

negativas, a causa de la capa de

lipopolisacáridos situada en la parte

externa de la pared celular.

No contiene LPS

Contiene LPS: estimulador de respuestas

inmunes: activa células B, liberación de

IL, FNT, IL 6 por macrófagos.

En la tinción de Gram, retienen la tinción

azul

Quedan decoloradas.

Conservan el complejo yodocolorante Pierden el complejo yodocolorante

Son esporulantes y no esporulantes, como

Streptococcus, Cisteria, Frankia.

Pueden ser anaerobios o aerobios

Poseen otros componentes: ácidos

teicoicos y lipoteicoicos, y polisacáridos

complejos.

Poseen proteínas con concentraciones

elevadas.


Los coliformes son un grupo de bacterias que comparten características bioquímicas en

común y son útiles como microorganismos indicadores de sanidad de alimentos y agua.

Entre los coliformes se encuentran las enterobacterias. Poseen morfología bacilar,

pueden ser aerobias o anaerobias facultativas. No forman endosporas, son

gramnegativas, fermentan la lactosa produciendo ácido y gas en 24 a 38 horas a 36 ºC.


Indican la presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales orgánicos sin tratar,

que pueden tener un alto impacto en el ambiente. Indican la sanidad de alimentos y agua.

Es un indicador de calidad de los alimentos.


La determinación de la calidad bacteriológica reviste gran importancia en el ámbito de

la salud pública ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al consumo

evitando así epidemias gastrointestinales.



22. ¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias en la

muestra de agua que colectaste?

Las bacterias coliformes fecales pueden tener efectos graves en la salud pública. Los

volúmenes de agua con altos niveles de esta bacteria pueden contener una amplia gama

de parásitos, bacterias y virus causantes de enfermedades, las cuales pueden variar

desde condiciones leves como las infecciones agudas del oído, hasta otras más graves

que amenazan la vida tales como la fiebre tifoidea y la hepatitis. Los gusanos parásitos y

los patógenos bacterianos tales como Salmonella, también se encuentran comúnmente

en el agua que da positivo en la prueba que busca altos niveles de bacterias coliformes

fecales.

23. ¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua

contaminada con materia fecal?

Salmonelosis, Fiebre paratifoidea, shiguelosis, Colera


IMVIC es una prueba utilizada en biología para la identificación bacterias. Se compone de

cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato.


Se emplean fundamentalmente para la identificación de las Enterobacterias (bacilos Gram

negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador).

26. ¿Por qué razón no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para realizar la

prueba de oxidasa?

Pueden alterar el resultado dando falsos positivos

27. Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de

incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se orgina a partir de una

sola bacteria (UFC) y éstas se dividen en un tiempo promedio de 30 minutos.

24hrs=281 474 976 710 656

https://es.wikipedia.org/wiki/Rojo_de_metilo

https://es.wikipedia.org/wiki/Indol


Unidad Xochimilco




Cuestionario de Laboratorio.

Por: Carlos Martínez MartínezMatricula: 2152026921

Lic. en Medicina Veterinaria y Zootecnia

Docente:


Grupo: BB12A

Métodos básicos para el aislamiento e identificación de enterobacterias del agua.

Cuestionario de Laboratorio.


Depende de factores como tiempo, exposición y temperatura. El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: El calor húmedo el cual destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. El calor es considerado como el método de esterilización por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir algún daño.

2. Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuándo es recomendable utilizar cada una de estas.

Métodos físicos:

-Ventajas

No es corrosivo para metales e instrumentos. Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas y sustancias

viscosas no volátiles.

-Desventajas Requiere de mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo

debido a la baja penetración del calor.

Métodos químicos:

-Ventajas

No deja ningún residuo tóxico. Se convierte en agua y oxígeno al final del proceso. El material no precisa aeración. El ciclo de esterilización dura entre 54 y 75 min.

-Desventajas No se pueden esterilizar objetos que contengan celulosa. Algodón, líquidos,

humedad o instrumental con lúmenes largos y estrechos.

Es el método de esterilización más caro.3. Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la

desinfección.

Desinfectantes: Cloro y compuestos clorados, aldehídos, óxido de etileno, compuestos fenólicos, ácidos y colorantes.

Antisépticos: Alcoholes, Iodo, agentes catiónicos y anfóteros.


Hipoclorito de sodio o solución benzal.

5. Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala qué factores influyen en la creación de la zona estéril.

Crea corrientes de aire caliente que arrastran partículas de polvo y microorganismos dispersos en el aire que rodea el área de trabajo, es decir el aire caliente que genera la flama arrastra hacia fuera toda partícula y microorganismos. (convención de masas de aire).

6. Menciona métodos usados en la industria y en laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles.

El uso de bata, guantes y cubrebocas con la finalidad de evitar contaminación. Lavar con hipoclorito de sodio al 10% la mesa de trabajo.


Se corre el riesgo de sufrir intoxicaciones o accidentes de contaminación así como romperse dicho material de vidrio y cortarse.

8. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo.Se puede provocar un foco de infección.

9. Realiza el diagrama de un microscopio y describe cada una de las partes y su función.

Brazo: Es la parte donde se debe sujetar.

Base o pie: Proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del microoscopio.

Platina: Tiene en su centro una cobertura circular por la que pasará la luz.

Macrométrico: Permite hacer un movimiento rápido hacia arriba o hacia abajo del tubo para localizar la imagen a observar.

Micrométrico: Permite colocar en posición cualquiera de los objetivos que se encuentran en él.

Tubo: Proporciona sostén a los oculares y los objetivos.

Ocular: Lentes que captan y amplian la imagen formada para los objetivos.

Objetivos: Pequeños cilindros colocados en el revolver quue proporciona poder de resolución del microscopio.

Fuente de luz: Foco de energía eléctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condesador.

10. Explica qué tipo de bacterias pueden aislarse en el agua.

Enterobacterias como Shigella, Salmnoella, Yersina pestis.

11.Explica cuál es el objetivo de sembrar diluciones del agua.

Trabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables, así como aislamiento adecuado de colonias.

12.Explica el fundamento del aislamiento por estría cruzada.

El objetivo es obtener a partir de un número elevado de bacterias, uno más reducido de ellas, distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al incubar ésta, cada una de las bacterias originará una colonia.

13.Explica qué tipos de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.

En un medio diferencial para la selección y recuperación de enterobacterias y bacilos gram negativas entéricas relacionadas.

14.Explica a qué se le llama medio de cultivo bacteriológico.

Sustancias que pueden ser líquidas o sólidas que contienen los nutrientes necesarios para que una bacteria pueda crecer y desarrollarse.

15.Explica a qué se llama medio de cultivo enriquecido.

Están compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos. Ej. sangre, suero, líquidos etcétera. Se utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.


Son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones físicas del medio añadiendo o suprimiendo componentes químicos específicos con el fin de inhibir el crecimiento de especies químicos cuyo crecimiento no interesa.

17.Describe las características de la pared celular de las bacterias gram+ y gram-, resaltando sus diferencias.

Gram-positivas:

Se tiñen de azul oscuro o violeta. Membrana citoplasmática. Capa gruesa de peptidoglicano. Ácidos teicóicos y lipoteicóicos, que sirven como agentes quelantes y en

ciertos tipos de adherencia. Polisacáridos de la cápsula.

Gram-negativas:

Se tiñen de un color rosado oscuro. Pobre membrana celular (externa y citoplasmática)

Membrana externa.

Tanto las bacterias gram+ como las gram- pueden presentar una capa superficial cristalina denominada capa S; en las gram- la capa S está unida directamente a la membrana externa. Mientras que en las gram+, la capa S está unida a la capa peptidoglicano.

18.¿Cómo se definen a las bacterias coliformes?

Coliforme signifca con forma de coli, refiriéndose a la bacteria del grupo, la Escheriachia Coli. Pero en sí consta de un grupo homogéneo de bacterias que se encuentran normalmente y en abundancia en el intenstino humano. Se utiliza cómo índice de contaminación de las aguas y por lo general están desprovistas de peligrosidad.

19.¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?

Su presencia se interpreta como una indicación de que los organismos patógenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua se halla exenta de organismos productores de enfermedades.

20.¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?

La determinación de la calidad bacteriológica resiste gran importancia en el ámbito de la salud pública ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al consumo evitando así epidemias gastrointestinales.

21.¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?

No, también están las coliformes totales que se encuentran en aguas contaminadas (aguas negras y otro tipo de desechos en descomposición).

22.¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de entero-bacterias en la muestra de agua que se colectó?

Cuando se tiene un nivel alto con presencia de entero-bacterias en el agua pueden contener todo tipo de microorganismos tales como parásitos, bacterias y

virus causantes de enfermedades como infecciones urinarias, pulmonía, septicemia o sobreinfecciones, en especial en inmunosuprimidos, en el uso de ciertos antibióticos, desnutrición, étc.

23.¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con materia fecal?

Fiebre tifoidea (Sallmonella typhi) Disentería bacilar (Shigella dysenteriae) Gastroenteritis infantil (Escherichia Coli) Peste (Yersinia pestis)

24.¿Qué significa las siglas IMViC?

Se emplea en biología para la identificación de bacterias. I = Indo, M = Rojo de Metilo, V = V-P (Voges –Proskquer) y iC = Citrato de Simons.

25.¿Cuál es el objeto de realizar las pruebas de IMViC?

Para la identificación de enterobacterias (bacilos gram-, anareobios facultativos con metabolismo fermentado).

26.¿Por qué razón no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para realizar las pruebas de oxidasa?

Porque se utiliza un reactivo llamado Kovacs, el cual está compuesto de alcohol y ácido clorhídrico. El ácido puede reaccionar con el metal y dar falsos-positivos.

27.Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 hrs. de incubación.

281, 474, 976, 710, 656 (apróx. 290, 000, 000,

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANAUnidad Xochimilco




Práctica: Métodos básicos para el aislamiento e identificación de enterobacterias en el agua

Por: Brenda Cruz HernándezMatricula: 2152029306

Médico Cirujano

Docente:Dr. Jorge Antonio Amézquita Landeros

Grupo: BB12A

Práctica: MÉTODOS BÁSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS EN EL AGUA

1) Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización.Métodos físicos: Dependen de factores como el tiempo, exposición y temperatura. El calor se puede aplicar como agente esterilizante de 2 formas: a) el calor húmedo, el cual destruye a los microorganismos por desnaturalización de las proteínas; y, b) el calor seco, que destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares.Métodos químicos: Algunas sustancias químicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque tienen la capacidad de promover una o más reacciones químicas capaces de dañar los componentes celulares de los microorganismos.

2) Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuando es recomendable utilizar cada uno de ellos.

MÉTODO VENTAJAS DESVENTAJAS

Calor húmedo Rápido, no deja residuos tóxicos, bajo deterioro del material expuesto, económico.

No se permite para emulsiones con agua, es corrosivo sobre algunos materiales

Calor seco No es corrosivo para metales e instrumentos, permite esterilización de materiales en polvo.

Mayor tiempo de esterilización, baja penetración del calor.

Filtración Esteriliza aceites, pomadas, soluciones oftálmicas.

No retiene virus ni microplasma.

Aldehídos Método rápido y único No se pueden

esterilizante frío. esterilizar objetos con celulosa, algodón, líquidos, etc.

3) Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección.Desinfectantes y esterilizantes: Alcohol, detergentes catiónicos, compuestos clorados (cloraminas, ácido paracético, compuestos fenólicos, etc.).Antisépticos: Alcohol, compuestos que tienen fenol (hexaclorofeno, triclosan, cloroxinol), detergentes catiónicos, compuestos de amonio cuaternario, peróxido de hidrógeno.

4) ¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desinfectar superficies?Desinfectantes como bactericidas, fungicidas y virucidas.

5) Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la sustancia estéril para el trabajo microbiológico y señala qué factores influyen en la creación de la zona estérilTrabajar cerca del mechero crea corriente de aire caliente que impide la entrada bacterias a ésta zona, creando un inóculo más puro del microorganismo a trabajar.

6) Menciona otros métodos usados en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estérilesUso de bata y cubre bocas con la finalidad de evitar contaminación; lavado del área de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido 1:10.

7) Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir la sesión.Se corre el riesgo de sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminación

8) Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo después de concluir la sesión.Se puede provocar un foco de infección

9) Realiza el diafragma de un microscopio, describe cada una de sus partes e indica su función.a) Brazo: Es la parte de donde se debe ajustar las pinzas, al tubo del microscopio y el revólver.b) Base o pie: Proporciona estabilidad y soporte a todas las partes del microscopio.c) Platina: Pieza metálica cuadrada que tiene en su centro una abertura circular por la que pasará la luz; aquí se coloca el portaobjetos.d) Pinzas de sujeción: Sirve para sujetar la preparación.e) Tornillo macrométrico: Permite hacer un movimiento hacia arriba-abajo del tubo o platina, se utiliza para localizar la imagen.f) Tornillo micrométrico: Permite colocar en posición cualquiera de los

objetos que se encuentran en él.g) Tubo: Parte mecánica que proporciona sostén a los oculares y objetivos.h) Cremallera: Permite que el movimiento de los tornillos macrométrico y micrométrico sea de mayor o menor amplitud.i) Ocular: Son los lentes que captan y amplían la imagen formada en los objetivos.j) Objetivos: Pequeños cilindros colocados en el revólver, que proporcionan el poder de resolución y determinan la cantidad del aumento.k) Diafragma: Elimina el exceso de luminosidad para tener buena iluminación del objeto.l) Fuente de luz: Foco que da energía eléctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador.

10)Explica qué tipos de bacterias pueden aislarse en el aguaEntre las especies que se han aislado de aguas se pueden mencionar a las pertenecientes a los géneros pseudomonas, flavobacterium, gallionella, enterebacteriaceae, aeromonas, Vibrio, achromobacter, alcaligenes, bordatella, neisseria, moraxella y acinetobacter.

11)Explica cuál es el objetivo de sembrar diluciones del aguaTrabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables, así como un aislamiento adecuado de colonias.

12)Explica el fundamento de aislamiento por estría cruzadaLa técnica de estría cruzada es un procedimiento semicuantitativo, se utiliza para obtener a partir de un número elevado de bacterias, un número reducido de ellas, distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa.

13)Explica qué tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkeyEn el agar MacConkey es un medio diferencial para la selección y recuperación de enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entéricos relacionados.

14)Explica a qué se le llama medio de cultivo bacteriológicoMezcla de nutrientes que en condiciones adecuadas permiten el crecimiento de las bacterias.

15)Explica qué es un medio de cultivo enriquecidoAquellos medios que han sido complementarios con líquidos corporales, vitaminas específicas, aminoácidos, proteínas y otros nutrientes. Se utilizan para favorecer el crecimiento de ciertas especies bacterianas al mismo tiempo que inhibe el desarrollo de organismos no deseados.

16)Explica qué es un medio de cultivo selectivoFavorecen el crecimiento específico de un microorganismo en particular

17)Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferenciasa) Grampositivas: Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano, no tiene membrana externa, no tiene espacio periplásmico,

no contiene LPS, en la tinción de Gram retienen la tinción azul.b) Gramnegativas: Poseen una pared celular más compleja, pared celular interna, pared de peptidoglucano y bicapa lipídica externa, contiene espacio periplásmico, contiene LPS, quedan decoloradas.

18)¿Cómo se definen las paredes coliformes?Grupo de bacterias que comparten características bioquímicas en común y son útiles como microorganismos indicadores de sanidad de alimentos y agua.

19)¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?La presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales inorgánicos sin tratar, que pueden tener un alto impacto en el ambiente.

20)¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?Determinación de la calidad bacteriológica, reviste una gran importancia en el ámbito de la salud pública ya que garantiza la inocuidad del agua destinada al consumo

21)¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?No, existen muchos coliformes de vida libre

22)¿Qué implicaciones epidemiológicas tiene la presencia de enterobacterias en la muestra de agua que recolectaste?Pueden variar desde condiciones leves como las infecciones agudas del oído, hasta otras más graves que amenazan la vida, tales como la fiebre tifoidea y la hepatitis.

23)¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con materia fecal?Salmonelosis, fiebre paratifoidea, shiguelosis, cólera

24)¿Qué significan las siglas IMVIC? Prueba utilizada en biología para la identificación de bacterias. Se compone de 4 temas: indol, rojo de metilo, Voges-Proskaver y citrato.

25)¿Cuál es el objetivo de realizar las pruebas de identificación IMCIV?Fundamentalmente, para la identificación de enterobacterias.

26)Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de bacterias se origina a partir de una sola bacteria (UFC) y éstas se dividen en un tiempo promedio de 30 minutos.28147497610636

Universidad Autónoma Metropolitana.

Unidad Xochimilco.

Tronco Divisional: Ciencias Biológicas y de la Salud.

Módulo II: Procesos Celulares Fundamentales.

Alumno: Irving Quiroz MartínezMatricula: 2152029879

Lic. Médico Cirujano


Grupo: BB12A

CUESTIONARIO.

1. EXPLICA EL FUNDAMENTO DE LOS DIFERENTES MÉTODOS FÍSICOS Y QUÍMICOS DE ESTERILIZACIÓN.

Método Medio OpcionesFísicos Calor

húmedo

Calor seco

Autoclave a vapor saturado

Pupinel

Químicos Líquidos Inmersión en glutotaldehido al 2%

Inmersión en peróxido de hidrógeno al 6%

Inmersión an ácido paracético 0,2 al 30 %

Gas Gas de óxido de etileno

Gas de formaldehido

Vapor de peróxido de hidrógeno

Plasma Plasma de peróxido de hidrógeno

Plasma de ácido peracético

Todos estos métodos de esterilización responden a mínimo uno de los siguientes modos de acción.

a. Daño al DNA. Las lesiones del DNA, aniquilan a la célula, principalmente al inferir con la multiplicación del DNA, puesto que los enlaces entre las bases nitrogenadas, se ven cruzadas y combinadas entre sí.

b. Desnaturalización de proteínas. Las proteínas existen en un estado de plegamiento tridimensional que depende de enlaces disulfuro covalentes intermoleculares y de varios enlaces no covalentes como puentes iónicos, hidrófobos y de hidrógeno. Al impulsar una energía que cambie o modifique estos enlaces, la proteína pierde su estructura y por lo tanto su función.

c. Desorganización de la membrana o pared celular. La membrana celular actúa como barrera selectiva, las sustancias que se concentran en la superficie celular modifican las propiedades físicas y químicas de la membrana, evitando sus funciones normales, por lo tanto las sustancias

destruyen o evitan su síntesis normal, provocando su lisis debido a la presión osmótica.

d. Sustracción de los grupos sulfhidrilo libres. La célula contiene numerosas proteínas enzimáticas que contienen sulfhidrilo (cisteína o como ejemplo primordial la coenzima A); por lo tanto, los oxidantes y metales pesados dañan extensamente a la célula, al formar enlaces con estos grupos libres y reducidos.

e. Antagonismo químico. El antagonista se combina con una enzima por afinidad química por un sitio esencial en esa enzima, desplazando al sustrato normal impidiendo la reacción adecuada. Se pueden describir bajo dos títulos, los antagonistas de los procesos que liberan energía (venenos de las enzimas respiratorias, cianuro y dióxido de carbono) y antagonistas de los procesos biosintéticos.

2. EXPLICA LAS VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MÉTODOS DE LA PREGUNTA ANTERIOR E INDICA CUANDO ES RECOMENDABLE UTILIZAR CADA UNO DE ESTOS.

a. Daño al DNA: Los rayos por la luz UV son poco penetrantes mientras que los rayos gamma y haces de electrones de alta energía son muy eficaces pero poco usados en la esterilización rutinaria. Son utilizadas para esterilizar materiales farmacéuticos, médicos y dentales, un uso práctico y común es la lámpara germicida de rayos UV.

b. Desnaturalización de proteínas. Método de esterilización muy eficaz, mata las formas vegetativas de los patógenos bacterianos, fúngicos y muchos virus en 10 minutos; menos eficaz sobre las endoesporas. Para la ebullición, vapor fluyente o llama azul el uso preferente se recomienda en platos, palanganas, jarras e instrumental diverso, para una autoclave a una Atm de presión (121°C) por 15 minutos se recomienda para medios de cultivo, soluciones, ropa de cama, utensilios, uniformes, instrumental quirúrgico, para el método de pasteurización (tratamiento térmico a 72°C 15 segundos) se recomienda su uso en leche, nata y algunas bebidas alcohólicas y por último el flameado (destruye) se recomienda en asas de siembra.

c. Desorganización de la membrana o pared celular. Método de esterilización eficaz y accesible, su desventaja causante del derrame de contenido intracelular (mientras este sea viable por el medio), como endoesporas u otros por la acción de la lisis celular, además que las bacterias con capsúla o glucalix se ven prácticamente inmunes.

d. Sustracción de los grupos sulfhidrilo libres. Método de esterilización eficaz y accesible, poco eficaz en las bacterias ácido alcohol resistentes.

e. Antagonismo químico. Interrumpe el metabolismo de la célula, provocando su muy segura muerte, a menos que se trate de una bacteria

con capacidad de formar esporas, usado en la industria de la conservación de alimentos.

3. INDICA LOS PRINCIPALES AGENTES DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS UTILIZADOS EN LA DESINFECCIÓN.

Desinfectantes: Sustancias de amplio espectro desactivador de microorganismos utilizados para reducir el número de microorganismos viables o carga biológica, en un producto o superficie hasta obtener una concentración aceptable, el proceso de destrucción de las formas vegetativas de los patógenos, pero no necesariamente de las endoesporas o virus. Entender entre estos los alcoholes (etanol, isopropanol), aldehídos (glutaraldehído, formaldehído), biguanidas (clorhexidina), compuestos de amonio cuaternario (cetrimida, cloruro de benzalconio), fenoles y cresoles (fenol, cresol), peroxígenos (peróxido de hidrógeno, ozono, ácido peracético), sustancias liberadoras de halógenos (compuestos clorados, compuestos de yodo).

Antisépticos: Producto que destruye o inhibe el desarrollo de los microorganismos en un tejido vivo, por ejemplo la piel. Entender entre estos los alcoholes (etanol, isopropanol), biguanidas (clorhexidina), bisfenoles (triclosán), compuestos de amonio cuaternario (cetrimida, cloruro de benzalconio), sustancias liberadoras de halógenos (compuestos clorados, compuestos de yodo).

4. ¿QUÉ TIPO DE SUSTANCIAS SUELEN UTILIZARSE COMUNMENTE PARA DESINFECTAR SUPERFICIES?

Se sabe que de los microbianos, los productos biocidas son de mayor uso en la desinfección de superficies pues son de un espectro de acción muy grande y de fácil adquisición, aunque tiene sus limitaciones con los virus y las esporas, su nivel de eficiencia es del 80%, de mayor uso popular son los alcoholes (etanol, isopropanol), compuestos de amonio cuaternario (cetrimida, cloruro de benzalconio), sustancias liberadoras de halógenos (compuestos clorados, compuestos de yodo).

5. EXPLICA CUÁL ES EL OBJETIVO DE UTILIZAR EL MECHERO PARA PREPARAR LA ZONA ESTÉRIL PARA EL TRABAJO MICROBIOLÓGICO Y SEÑALA QUE FACTORES INFLUYEN EN LA CREACIÓN DE LA ZONA ESTÉRIL.

Calor, probablemente el método de esterilización más usado no sólo debido a su nivel de eficiencia del 100% por eliminar los organismos viables de una superficie o producto, incluidas las esporas bacterianas, también por lo económico y fácil que

resulta utilizarlo, el método de usar el mechero es llamado también “flameado” método de esterilización muy eficaz puesto que brinda un área limitada a 20cm de temperatura variable, lo cual afecta en la composición de la membrana proteica de la bacteria, así mismo como una limitación de oxígeno. Cuando se expone a la llama directamente, cambia al método a uno llamado “incineración”, donde se destruye por completo el medio de cultivo y con ello todos los microorganismos alojados en él.

6. MENCIONA OTROS MÉTODOS USADOS EN LA INDUSTRIA Y EN LOS LABORATORIOS DE INVESTIGACIÓN PARA CREAR ZONAS DE TRABAJO ESTÉRILES.

Existen diferentes métodos de esterilización que las industrias usan para sus áreas de trabajo, tenemos que se dividen en dos tipos, físicos y químicos.

Los físicos a su vez se dividen en: Calor húmedo, calor seco, radiaciones y mecánicos.

Los químicos solo se dividen en gases.

Físicos:

a) Calor húmedo: Ebullición, Tindalización, Pasteurización y vapor a presión.b) Calor Seco: Flameado, incineración y horno Pasteur.c) Radiaciones: Radiaciones ionizantes, rayos gamma, rayos X y rayos

ultravioleta.d) Mecánicos: Filtración y sedimentación.

Químicos:

Gases: Óxido de etileno y otros.

Desinfectantes de medios inanimados.

Cubiertas de mesa e instrumental

Lisol a 5% o algún otro compuesto fenólico, Formaldehído a 1-10%, Glutaraldehído acuoso a 2%, Bicloruro de mercurio a 0.1%, Compuestos de amonio cuaternario a 0.1%

Deyecciones, vendajes, cómodos

Hipoclorito de sodio a 1%, Lisol a 5% o algún otro compuesto fenólico

Aire Neblina de propilenglicol o aerosol, Vapor de formaldehído

Instrumentos sensibles al calor Gas óxido de etileno (alquilación de los ácidos nucleicos. El gas residual se debe eliminar por aeración)

7. EXPLICA LOS RIESGOS QUE PUEDES CORRER SI NO RECOGES EL FRASCO, LOS TUBOS Y LAS PIPETAS DESPUÉS DE CONCLUIR LA SESIÓN.

El dejar el material utilizado en la práctica principalmente el que estuvo en contacto directo con el medio de infección en la zona de trabajo, puede implicar un foco de infección y una zona de riesgo patológico para los que se encuentran compartiendo este mismo espacio.

8. EXPLICA LOS RIESGOS QUE PUEDES CORRER SI NO LAVAS Y DESINFECTAS LA MESA DE TRABAJO DESPUÉS DE CONCLUIR CADA SESIÓN.

El desplazar los materiales que ya no se están utilizando en ese momento, y/o flamearlos no representa ninguna garantía de eliminación de los agentes patógenos lo que representa un riesgo de infección, es necesario su correcta esterilización y lavado para asegurar la eliminación de cualquier agente que pudiera encontrarse en el instrumental y así evitar un cultivo accidental en medios no controlado.

9. REALIZA EL DIAGRAMA DE UN MICROSCOPIO, DESCRIBE CADA UNA DE SUS PARTES E INDICA SU FUNCIÓN.

Las PARTES del Microscopio son:

A) OCULAR: Es la lente situada cerca del ojo del observador. Su función: Capta y amplía la imagen formada en los objetivos.

B) OBJETIVO: Es la lente situada cerca de la preparación. Función: Amplía la imagen de ésta, lo que significa que es muy importante este elemento del microscopio, es un elemento vital que permite ver a través de los oculares

C) CONDENSADOR: Es la lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.Función: Concentra más o menos el haz luminoso sobre la preparación mediante su acercamiento o alejamiento de la Platina, al accionar un tornillo similar al macrométrico.

D) DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

Función: Permite regular la cantidad de luz proveniente del Espejo mediante un mecanismo de apertura y cierre similar al de la pupila del ojo humano.

E) BRAZO es una pieza metálica de forma curvada que gira sobre el PIE. Función: Sostiene por su extremo superior al Tubo Óptico y en el inferior lleva varias piezas importantes como la Platina, el Condensador y el Diafragma.

F) FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.G) TUBO: Es una cámara oscura unida al brazo mediante una cremallera.H) REVÓLVER: Es un sistema que agarra los objetivos y que rota para utilizar un

objetivo u otro.I) TORNILLO MACRO y MICROMÉTRICO: Son tornillos de enfoque, mueven la

platina hacia arriba y hacia abajo. El macrométrico lo hace de forma rápida y el micrométrico de forma lenta. Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura.

J) PLATINA: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la preparación, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminación situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento. Función: Permite mover la preparación de delante hacia atrás o de izquierda a derecha y viceversa.

K) BRAZO: Soporte vertical del microscopio y lugar de agarre para su transportación.

10.EXPLICA QUÉ TIPOS DE BACTERIAS PUEDEN AISLARSE EN EL AGUA.

Entre las especies que se han aislado de aguas, podemos mencionar a las pertenecientes a los géneros:

A. Pseudomonas. G. Alcaligenes.

B. Flavobacterium. H. Bordetella.

C. Gallionella. I. Neisseria.

D. Enterobacteriaceae. J. Moraxella.

E. Aeromonas. K. Acinetobacter.

F. Vibrio, Achromobacter.

11.EXPLICA CUÁL ES EL OBJETIVO DE SEMBRAR DILUCIONES DEL AGUA.

Cuando se trabaja con muestras con alto contenido de bacterias es recomendable realizar disoluciones, esto nos permite trabajar con un número apropiado de microorganismos para realizar cuentas viables, así como un aislamiento adecuado de colonias, un número elevado de bacterias impide que se lleve a cabo un conteo, con la suspensión se efectúan disoluciones seriadas y se siembran en placa muestras de cada dilución en particular, si solamente crecen unas cuantas muestras de una disolución particular, se presume que algunos de esos cultivos partieron de células únicas. Un carácter indeseable de este método es que solamente puede ser utilizado para aislar el tipo de microorganismo predominante en una población mixta.

12.EXPLICA EL FUNDAMENTO DEL AISLAMIENTO POR ESTRÍA CRUZADA.

El objetivo del aislamiento por estría cruzada es obtener a partir de un número de elevado de bacterias un número reducido de ellas distribuidas individualmente por toda la placa y así mediante la incubación lograr que cada batería forme una nueva colonia.Las células que crecen sobre o dentro de medios sólidos, se encuentran inmóviles; por consiguiente, si unas cuantas células se colocan en o sobre un medio en forma de gel, cada célula crecerá dando una colonia aislada.

13.EXPLICA QUÉ TIPO DE BACTERIAS PUEDEN AISLARSE EN AGAR MACCONKEY.

El agar MacConkey es un medio diferencial para la selección y recuperación de Enterobacteriaceae que son bacterias grammnegativas. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben el crecimiento de bacterias grammpositivas y de algunas grammnegativas exigentes. Contiene rojo neutro como indicador. Su principal aislamiento e identificación son de bacilos entéricos fermentadores y no fermentadores de lactosa.

14.EXPLICA A QUÉ SE LE LLAMA MEDIO DE CULTIVO BACTERIOLÓGICO.

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de microorganismos.

15.EXPLICA QUÉ ES UN MEDIO DE CULTIVO ENRIQUECIDO.

Un medio de cultivo enriquecido es aquel que cuenta con las características necesarias, como nutrientes y condiciones ambientales para favorecer el crecimiento de ciertas especies bacterianas exigentes e inhibir las no deseadas, ya que en ocasiones las bacterias no pueden detectarse porque se encuentran en pequeñas cantidades.

16.EXPLICA QUÉ ES UN MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO.

Un medio selectivo es aquel que cumple con la función de suprimir el crecimiento de bacterias no deseadas y hace creer a un tipo selectivo de bacterias contenidas en una población polimicrobiana.

17.DESCRIBE LAS CARACTERÍSTICAS DE LA PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS GRAMPOSITIVAS Y GRAMNEGATIVAS, RESALTANDO SUS DIFERENCIAS.

GRAMMPOSITIVAS GRAMMNEGATIVAS DIFERENCIAS

Capa gruesa y rígida compuesta por varias capas de peptidoglicano.

Contiene ácidos teicoicos. Ácido lipoteicoico que está en la superficie en la capa de peptidoglucano unido a la membrana citoplásmica.

Ácido teicoico se encuentra en la superficie de la pared y se une a solo una capa del peptidoglicano

La carga negativa de los ácidos con la unión de cationes regulan el movimiento hacia el interior y exterior de la célula.

Baja posibilidad de ruptura de la pared gracias a los ácidos teicoicos.

Capa delgada de peptidoglicano

Contiene una membrana externa.

El peptidoglicano está unido a lipoproteínas de la membrana externa.

Contiene periplasma, una sustancia gelatinosa localizada entre la membrana externa y la membrana plasmática.

Periplasma con enzimas degradadoras de proteínas de transporte.

No contiene ácidos teicoicos. Alta posibilidad de ruptura

mecánica. Membrana externa compuesta

por lipopolisacaridos, lipoproteínas y fosfolípidos.

Membrana externa con permeabilidad media.

Presencia de periplasma en las grammnegativas.

Presencia de ácidos teicoicos en las grammpositivas.

Presencia de membrana externa en las grammnegativas.

Presencia de lipopolisacaridos, lipoproteínas y fosfolípidos en la membrana de las grammnegativas.

En cuanto a la tinción de gramm. Las bacterias grammpositivas gracias a su espesa capa de petidoglicano son capaces de retener el compuesto cristal violeta dentro de la pared celular.

Por el contrario las grammpositivas son incapaces de retener el compuesto debido a su delgada capa de peptidoglicano.

18.¿CÓMO SE DEFINEN A LAS BACTERIAS COLIFORMES?

Coliformes significa “en forma de coli” que hace referencia directamente a la bacteria principal del grupo llamado E.coli, mejor conocido como escherichia coli. Bacilos gram negativos, pili formes, bacterias homogéneas presentes en las aguas negras, pero se mueren con el tiempo en las aguas naturales. Su hábitat natural

son los mamíferos de sangre caliente y el suelo. Son utilizadas para medir el índice de contaminación del agua.

Ejemplo: Escherichia coli, Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter.

19.¿QUÉ INDICA LA PRESENCIA DE BACTERIAS COLIFORMES EN EL AGUA?

La presencia de E. coli, klebsiella, pneumoniae, proteus mirabilis y proteuses es un indicio de contaminación fecal reciente, el agua no ha pasado por un proceso correcto de potabilización y que en el estricto manejo es un foco de infección, por lo que tras su detección debería considerarse la toma de medidas adicionales, como la realización de muestreos adicionales y la investigación de las posibles fuentes de contaminación, como un tratamiento inadecuado o alteraciones de la integridad del sistema de distribución.

20.¿CUÁL ES LA IMPORTANCIA CLÍNICA DE LAS BACTERIAS COLIFORMES?

Estas bacterias son usadas como indicadores en pruebas de agua. La presencia de algunos tipos de bacterias coliformes en el agua señala la presencia de excrementos o desechos de alcantarillas. Los organismos que causan enfermedades usualmente vienen de los excrementos y desechos de alcantarillas. Algunos organismos patógenos que pueden estar presentes en el agua son: bacterias que causan diarrea y vómitos, protozoarios que causan disentería, virus que causan poleo y hepatitis y helmintos, tales como los gusanos redondos (lombrices) y los planos (tenia) que causan diarrea crónica.

21.¿TODAS LAS BACTERIAS COLIFORMES SON DE ORIGEN FECAL?

La mayoría provienen del intestino humano o de heces fecales de mamíferos de sangre caliente. La familia Enterobacterieriaceae está formada por aproximadamente 31 géneros y 139 especies y miles de serotipos. Algunos miembros de la familia siempre se asocian a enfermedades cuando se aíslan en el hombre y su origen casi siempre se asocia a la materia fecal, procesos de putrefacción o sitios muy poco higiénicos, por ejemplo shigella, salmonella,

yersinia pestis. Mientras que otros son miembros de la flora normal intestinal, que sólo producen infecciones oportunistas, por ejemplo: escherichia coli, klebsiella pneumoniae, proteus mirabilis. Especies de proteus, escherichia coli y varios miembros del grupo klebsiella enterobacter se aíslan de heridas traumáticas contaminadas con tierra o materia vegetal o de incisiones abdominales después de una cirugía.

22.¿QUÉ IMPLICACIONES EPIDEMIOLÓGICAS TIENE LA PRESENCIA DE ENTEROBACTERIAS EN LA MUESTRA DE AGUA QUE ENCONTRASTE?

El gua puede ser beneficiaria para la salud si es potable y dañina si está contaminada debido a la propagación rápida de enfermedades infecciosas. Como grupo, las Enterobacterias son las responsables de una tercera parte de los aislamientos en las bacteriemias, de dos tercios de los aislamientos en gastroenteritis, y de tres cuartas partes de los aislamientos en infecciones del tracto urinario. Habitualmente colonizan las diferentes mucosas, especialmente las del tracto gastrointestinal y urinario, por lo que las infecciones suceden a partir de estas localizaciones.

Las Enterobacterias son una familia heterogénea y amplia de bacilos gramnegativos que residen en el colon del hombre sin causar enfermedad aunque con frecuencia son causantes de un número considerable de infecciones, tanto en pacientes con inmunidad conservada como en inmunodeprimidos ya que en el paciente hospitalizado las enterobacterias colonizan el tubo digestivo, la orofaringe, el aparato genitourinario y la piel mientras que en el ambiente hospitalario pueden aislarse del agua, catéteres, sondas, sueros, antisépticos, equipos de respiración mecánica, etc., nichos ambientales con los que pueden entrar en contacto los pacientes hospitalizados y debido a su ubicuidad dentro y fuera del cuerpo a menudo causan infecciones oportunistas.

23.¿QUÉ ENFERMEDADES GASTROINTESTINALES PUEDEN TRANSMITIRSE EN EL AGUA CONTAMINADA CON MATERIAL FECAL?

ENFERMEDAD AGENTE SINTOMAS

Shigelosis (disentería bacilar)

shigella Dolor abdominal, fiebre aguda, sangre, moco o

pus en las heces, dolor rectal, diarrea acuosa,

vomito, nauseas.

Amebiasis Quistes de Entamoeba histolytica

Cólicos abdominales, pérdida de peso,

tenesmo, flatulencia excesiva.

Hepatitis A Orina oscura, fátiga, picazón, inapetencia,

fiebre baja, heces color arcilla o pálidas, ictericia.

Balantidiasis Balantidium coli (Mayormente asintomático) cuadros

diarreicos, fiebre, nausea, vomito

Criptosporidiosis Cryptosporidium Deshidratación, pérdida de peso, cólicos

Esquistosomiasis Schistosoma mansoni y Schistosoma intercalatum

Dolor abdominal y diarrea (que puede ser

sanguinolenta).

Giardiasis Giardia intestinalis (Mayormente asintomática) diarrea repentina pastosa o

líquida, amarilla, maloliente, con moco y

acompañada por cólicos, dolor abdominal,

náuseas, anorexia, flatulencia, meteorismo, aerogastria y pérdida de

peso.

Cólera Vibrio cholerae Vómito, diarrea, calambres,

deshidratación, shock

24.¿QUÉ SIGNIFICAN LAS SIGLAS IMViC?

Son siglas en inglés que representan las pruebas bioquímicas cualitativas a las que son sometidas las muestras para saber su origen bacteriológico, es decir, saber de qué bacteria se trata.

I: Indol M: Rojo de Metilo V: V-P(Voges-Proskauer) IC: Citrato de Simmons.

25.¿CUÁL ES EL OBJETIVO DE REALIZAR LAS PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN IMViC?

Son cuatro pruebas bioquímicas cualitativas (indol, rojo de metilo, voges-prosikaver y citrato) que se emplean fundamentalmente para la identificación de las Enterobacterias (bacilos gran negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador), su nivel de patogeniesidad, su poder de reproducción, su virulencia, origen y medios en los que crece proliferantemente.

26.¿POR QUÉ RAZÓN NO ES RECOMENDABLE UTILIZAR EL ASA BACTERIOLÓGICA PARA REALIZAR LA PRUBA DE OXIDASA?

Porque es de metal. Para las pruebas de oxidasa se utiliza un reactivo llamado Kovacs, el cual está compuesto de alcohol isoamílico, p-dimetilaminobenzaldehído y ácido clorhídrico. El ácido puede reaccionar con el metal y dar falsos positivos.

27.DETERMINA EL NÚMERO DE BACTERIAS QUE HAY EN UNA COLONIA DESPUÉS DE 24 HORAS DE INCUBACIÓN. RECUERDA QUE UNA COLONIA DE ENTEROBACTERIAS SE ORIGINA A PARTIR DE UNA SOLA BACTERIA (UFC) Y ÉSTAS SE DIVIDEN EN UN TIEMPO PROMEDIO DE 30 MINUTOS.

(UFC) Unidades Formadoras de Colonias

Después de 24 h de incubación= 28,147,497,670 bacterias

30min= 2

60 min= 4

90 min= 8

120min= 16

1440 min = 2.814749767X1014





Tema. Cuestionario sobre los métodos básicos para el aislamiento

e identificación de enterobacterias del agua

Por: Delfina García BetanzoMatricula: 2152025960

Médico Cirujano


Grupo: BB12A

Cuestionario Laboratorio

1.- Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización

Garantiza la destrucción total de microorganismos presentes en sustancias o

materiales. De esta forma se asegura que los microorganismos detectados en

alguna muestra provenga de la experimentación y no de alguna contaminación.

Físicos:

a) Calor: Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la acción

del calor, el cual provoca una desnaturalización de proteínas, fusión y

desorganización de membranas de los microorganismos.

b) Radiaciones: Se atribuye a la absorción por DNA, existen uniones covalentes

entre residuos de pirimidina perteneciente a la misma cadena, distorsiona el DNA

e inhibe su síntesis por tanto el crecimiento. Su uso principal es para esterilizar

aire y superficies.

Químicos:

a) Gaseosos: Los antisépticos son considerados venenos que destruyen

gérmenes, algunos ejercen su acción nociva sobre toda célula y otros sobre

algunas, son mas específicos. Óptimos para antisepsia y en mesas de trabajo;

como el óxido de etileno.

b) No gaseosos: Se encuentran los aldehídos, ácido peracético y peróxido de

hidrógeno.

2.- Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuándo es recomendable utilizar cada uno de éstos.

a) Físicos:

Ventajas: Son de rápido calentamiento y penetración, destruyen bacterias en un

periodo corto, no hay residuos tóxicos y no son corrosivos.

Desventajas: El material a veces no soporta altas temperaturas y pueden sufrir

daño o incluso puede ser inflamable. Las radiaciones no penetran sólidos y de

manera muy pobre a los líquidos.

3.- Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección

-Desinfectantes: Productos químicos que matan a los microorganismos y se

utilizan sobre objetos inanimados; como el glutaraldehído, hipoclorito de sodio.

-Antisépticos: Sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los

microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los

tejidos vivos; como los alcoholes, tintura de yodo.


Hipoclorito de sodio al 10%

Solución de Benzal diluida 1:10

5.- Explica cual es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala que factores influyen en la creación de la zona estéril.

Ayuda a mantener un ambiente de esterilidad, a través del calor, cuando se

trabaja con siembra de microorganismos. Los factores que influyen: una

manipulación correcta de la muestra y material ayudan a no contaminar, además

de evitar la contaminación por medio del aire externo o agentes provenientes del

mismo experimentador. De igual forma interviene aquel material que no es

previamente esterilizado para su uso.

6.- Menciona otros métodos usados en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles

El uso de desinfectantes, antisépticos y empleo de calor, tanto seco, como

húmedo, el uso de una estufa y de un autoclave.

También se pueden emplear rayos infrarrojos, filtración, el método de tindalización

(autoclave que se purga) y radiaciones ionizantes.

7.- Explica los riesgos que puedes correr si no recoges en frasco, los tubos y las pipetas después de concluir la sesión

Se corre el riesgo de la ruptura del material ¡Causa un accidente” Es importante

recoger el material y desinfectarlo para evitar la contaminación bacteriológica

8.- Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo después de concluir cada sesión

Se propaga la contaminación y genera una alteración en los resultados

9.- Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e indica su función.

10.- Explica que tipos de bacterias puedes aislarse en el agua

Enterobacterias, como: Shigella, Salmonella, E.Coli, klebsiellla pneumoniae, etc.

11.- Explica cuál es el objetivo de sembrar diluciones del agua

Se recomiendan debido al alto contenido de bacteria, ya que permite trabajar con

un número apropiado de células para realizar cuentas viables asi como el

aislamiento adecuado de las colonias

12.- Explica el fundamento de aislamiento por estría cruzada

El objetivo es obtener a partir de un número elevado de bacterias, un número

reducido de ellas, distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al

incubarla, cada una de las bacterias originará una colonia (UFC) Y además puede

estimarse la cantidad relativa de microorganismos en la muestra original.

13.- Explica que tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey

Se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram (-) de fácil desarrollo, aerobios y

anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no lactosa en

muestras clínicas, de agua y alimentos. Se pueden aislar en este tipo de agar,

todas aquellas bacterias que pertenecen a la familia de las enterobacterias.

14.- Explica a qué se le llama medio de cultivo bacteriológico

Al proceso de crecimiento de microorganismos mediante la toma de bacteria de un

sitio de invención (in vivo) por métodos de recolección de muestra y crecimiento

en un ambiente artificial (in Vitro)

15.- Explica qué es un medio de cultivo enriquecido

Contiene nutrientes específicos requeridos para el desarrollo de determinados

patógenos; el enriquecimiento se hace por adición de sangre y otros productos

biológicos que aportan factores nutritivos al medio de cultivo y por tanto a las

bacterias.

16.- Explica qué es un medio de cultivo selectivo

Son aquellos medios que son utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas

bacterias; facilitan nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana

específica.

17.- Describe las características de la pared celular de las bacterias Gram+ y Gram-, resaltando sus diferencias

a) Gram (+) Tienen una capa gruesa de peptidoglucanos, presentan una gran

resistencia debido a esta capa que posee ácidos lipoteicoicos y se tiñen de color

azul-púrpura.

b) Gram (-) Poseen una capa de peptidoglucanos sin embargo es mas delgada, su

membrana externa contiene lipopolisacáridos, fosfolípidos y proteínas. Este tipo de

bacterias se tiñen de color rojo.


Se definen como indicadores de contaminación fecal en el agua, que se

encuentran en el intestino del humano y animales homeotermos. Son bacterias

entéricas en forma de bacilos cortos, Gram (-), aerobios o anaerobios facultativos,

no es pirógenos, fermentan lactosa y producen ácido y gas.


Indican que el agua esta contaminada, con aguas negras o de otro tipo de

desechos en descomposición.


Permite garantizar la inocuidad (incapacidad para hacer daño) del agua destinada

al consumo, evitando así epidemias, enfermedades gastrointestinales y

enfermedades de tipo diarreicas muy fuertes, que inclusive pudieran ser mortales.


No, ya que las coliformes fecales, se encuentran en las coliformes totales.

22.- ¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias en la muestra de agua que recolectaste?

Una posible epidemia si es que esta agua se encuentra destinad apara el

consumo humano, epidemia de E. Coli, Salmonella, enfermedades diarreicas y

disentería.

23.- ¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con material fecal?

Transmitidas por el agua: Cólera, fiebre, tifoidea, paratifoidea, disenterías, polio,

hepatitis, salmonelosis.

Con base en el agua: Ascariasis, paragonimiasis.

Vectoriales relacionadas con el agua: Dengue, filariasis, paludismo


I= Indol

M= Rojo de metilo

V= Vogues-Proskawer

iC= Citrato de Simmons.


Las bacterias pertenecientes a la familia de enterobacterias pueden identificarse a

través de una serie de pruebas bioquímicas, que permiten notar la presencia o

ausencia de ciertas enzimas y la existencia de una secuencia metabólica. Por lo

tanto el IMViC sirve para clasificar especies de la familia de las enterobacterias y

dependiendo los resultados arrojados por dichas pruebas, saber de que bacteria

se trata.


Porque los metales pueden inferir de manera oxidativa, ya que las enzimas están

íntimamente relacionadas a la cadena de transporte de electrones. La prueba

tiene como objetivo demostrar la presencia de un sistema citocromooxidasa que

activa la oxidación del citocromo, el cual es reducido por el oxígeno molecular que

produce agua o peróxido de hidrógeno, según la especie bacteriana.

27.- Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de las 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se origina a partir de una sola bacteria (UFC) y éstas se dividen en un tiempo promedio de 30 minutos.

281,474,976,710,656 bacterias en 24 horas.


Unidad Xochimilco




CUESTIONARIO DE LABORATORIO


Alumna: Ventura Maqueda Diana

Docente:


Grupo: BB12A


Agentes fisicos: el calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas:

el calor humedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalizacion de las proteínas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares.

La radiación, la emisión y propagación de la energía puede ser utilizada como agente para la eliminación de microorganismos

Radiaciones ionizantes se pueden utilizar para esterilizar materiales platicos y la luz uv para áreas cerradas

Quimicos: capaces de dañar los componentes célulares (proteínas, membranas, etc)

Gaseosos-----> oxido de etileno

No gaseosos ---------> alheidos ej: glutaraldehido Ácido paracético y peroxido de hidrógeno



Calor Húmedo

VENTAJAS

Rápido calentamiento y penetración. Destrucción de bacterias y esporas en poco tiempo. No deja residuos tóxicos. Bajo deterioro del material expuesto. Económico.

DESVENTAJAS

No se permite para emulsiones con agua. Es corrosivo sobre algunos metales.

Calor Seco

VENTAJAS

No es corrosivo para metales e instrumentos. Permiten esterilización de sustancias en polvo y no acuosas y de viscosas no volátiles.

DESVENTAJAS

Mayor tiempo esterilización. Baja penetración del calor. Radiaciones de acuerdo al tiempo de radiación, tiempo exposición y dosis

QUIMICOS (Oxido de Etileno)

VENTAJAS

Esteriliza material termosensible, equipos electrónicos, bombas cardiorrespiratorias, metal etc.

DESVENTAJAS

Peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, ademas cancerígeno.

Aldehídos

VENTAJAS

Método rápido y único esterilizanrte frío.

DESVENTAJAS

No se pueden esterilizar algunos objetos con celulosa, algodón,, líquidos, humedad, madera, etc

Gas-Plasma de Peróxido de Hidrógeno

VENTAJAS

No deja ningún residuo toxico. Se convierte en agua y oxigeno al final del proceso. Material sin aireación. Ciclo dura entre 54 y 75 min.

DESVENTAJAS

Método mas costoso.


Desinfectantes y esterilizantes: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Detergentes catiónicos (compuestos de amonio cuaternario)

hipoclorito sódio 1%

cloroxilenol

Formaldehído.

Glutaraldehído.

Peróxido de hidrógeno.

Dicloruro de mercurio.

Antisépticos:

Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua).

Tintura de Yodo

Providona yodada

Clorhexidina

Triclosán

31. ¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desifenctar superficies?

bactericidas, fungicidas,fungistatica y virusidas


Al Trabajar cerca del mechero se crea una corriente de aire cálido que no permite que las bacterias entren a la zona de trabajo.


El uso de equipo para evitar contaminación (bata, guantes y cubrebocas) así como el

lavado del area de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido además del uso del mechero.


Se puede sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminacion.


Riesgo de contaminación (foco de infección.)


PARTE FUNCION



PLATINA Es una pieza metálica, cuadrada, que

tiene en su centro una abertura circular por la que pasará la luz del sistema de iluminación. Aquí se coloca el portaobjetos con la muestra a observar






OBJETIVOS Se encuentran incrustados en el revólver Son unos pequeños cilindros colocados en el revólver que proporciona el poder de resolución del microscopio y determinan la cantidad

total de aumento.






Trabajar con un número apropiado de células para realizar cuentas viables, así como un aislamiento adecuado de colonias.


Proceso semicuantitativo.Técnica que se utliza para obtener apartir de un elevado núero de bacterias un número reducido de ellas distribuidas individualmente, cada una originará una colonia.


El agar MacConkey es un medio diferencial para la selección y recuperación de Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas y de algunas

gramnegativas exigentes. Contiene lactosa como única fuente de carbono. Identificando con un color rojo las bacterias fermentadoras de lactosa.






Favorecen el crecimiento específico de un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana mixta.

44. Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.

BACTERIAS GRAM POSITIVAS

*Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano.

*No tiene membrana externa

* No tiene espacio periplasmático

* La red de mureína está muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas

* La penicilina mata a las gram positivas, ya que bloquea la formación de enlaces peptídicos entre las diferentes cadenas del peptidoglucano

* No contiene LPS

* En la tinción de Gram, retienen la tinción azul

* Conservan el complejo yodocolorante

* Son esporulantes y no esporulantes, como Streptococcus, Cisteria, Frankia.

* Poseen otros componentes: ácidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacáridos complejos.

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

° Poseen una pared celular más compleja:




° Membrana externa: forma un saco rígido alrededor de la bacteria, mantiene estructura y es barrera impermeable a macromoléculas, ofrece protección en condiciones adversas

° Espacio periplasmático: espacio entre la superficie externa de la membrana citoplasmática y la interna de la membrana externa.

° La red de mureína presenta una sola capa

° La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la capa de lipopolisacáridos situada en la parte externa de la pared celular.

° Contiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa células B, liberación de IL, FNT, IL 6 por macrófagos.

°En la tinción son rosas

°Pierden el complejo yodocolorante

° Pueden ser anaerobios o aerobios

° Poseen proteínas con concentraciones elevadas.


Son un grupo de bacterias que se comparten caracteristicas bioquimicas en comun y son utiles microorganismos indicadores de sanidad de alimentos y agua en el que se encuentran las enterobacterias


presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales orgánicos


Tiene gran importancia en el ámbito de la salud pública ya que permite saber la calidad del agua destinada al consumo humano evitando así epidemias gastrointestinales.




Pueden sucitarse enfermedades leves como las infecciones agudas del oído, hasta otras más graves como la fiebre tifoidea y la hepatitis.




es una prueba utilizada en biología para la identificación bacterias. Se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato.





53. Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se orgina a partir de una sola bacteria (UFC) y éstas se dividen en un tiempo promedio de 30 minutos.

24hrs=281 474 976 710 656





Cuestionario previo a la práctica en el laboratorio

Por: Lucero Edith González CruzMatricula: 2152025817

Médico Cirujano


Grupo: BB12A

Octubre 22 del 2015

1.- Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización


Métodos físicos:

- Calor: Provoca una desnaturalización de proteínas, fusión desorganización de las membranas en los microorganismos.

- Radiación: Se distorsiona el DNA inhibiendo su síntesis así como el crecimiento y respiración de los microorganismos. Su uso principal es para esterilizar el aire y superficies.

Métodos químicos:

- Gaseosos (óxido de etileno) - No Gaseosos (Aldehídos, ácido peracético y peróxido de hidrógeno)- Antisépticos (venenos que al actuar sobre gérmenes para su destrucción)

2.- Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuándo es recomendable utilizar cada uno de éstos

Métodos físicos:

- Ventajas: Rápido calentamiento y penetración, destrucción de bacterias en un periodo corto, no hay residuos tóxicos, además de que no es corrosivo.

- Desventajas: Algunas ocasiones el material a esterilizar no soporta altas temperaturas y pueden sufrir algún daño o simplemente el material a esterilizar es flamable. En cuanto a las radiaciones, no penetran en sólidos.

Métodos químicos:

- Ventajas: El ciclo de esterilización dura de 54-75 minutos, el material sometido a estos procesos no precisa de aireación.

- Desventajas: Se necesita un mayor tiempo, las sustancias son inflamables, tóxicas y de muy alto costo.

3.- Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección

- Desinfectantes: Productos químicos que matan a los microorganismos y se utilizan sobre objetos inanimados. Ej. Hipoclorito de Sodio.

- Antisépticos: Sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los tejidos vivos. Ej. Alcoholes y tintura de Yodo.


- Hipoclorito de sodio al 10%- Solución de benzol diluido 1:10

5.- Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala qué factores influyen en la creación de la zona estéril.



6.- Menciona otros métodos usados en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles

- Desinfectantes: Productos químicos que matan a los microorganismos y se utilizan sobre objetos inanimados

- Antisépticos: Sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los tejidos vivos

- Calor: Metodo más utilizado para la esterilizaciónCalor seco con hornos con una temperatura de 170°C por una hora Calor húmedo con autoclaves con una temperatura de 121°C a 15 libras de presión por pulgada durante 20minutos.

7.- Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir la sesión

Primero que nada se corre el riesgo de la ruptura de alguno de los materiales lo que puede causar algún accidente además de que es importante recoger el

material y desinfectarlo para evitar la contaminación bacteriológica en especial si los materiales serán usados después.

8.- Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo después de concluir cada sesión.

De no limpiar la mesa se propaga la contaminación, hay que tratar de mantener el campo estéril. Además que hay que tener el mayor cuidado en la limpieza para el manejo de las muestras y evitar alteraciones en los resultasdos.

9.- Realiza un diagrama se un microscopio, describe cada una de sus partes e indica su función

Imagen

10.- Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.

En el agua se pueden aislar Enterobacterias como Shigella, Salmonella, Yersina pestis y algunas pertenecientes a la flora oportunista como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Proteus mirabilis.

11.- Explica cuál es el objetico de sembrar diluciones de agua


12.- Explica el fundamento del aislamiento por estría cruzada


13.- Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

14.- Explica a qué se le llama medio de cultivo bacteriológico

Es un método para la multiplicación de microorganismos, tales como bacterias, hongos y parásitos, en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado.

15.- Explica que es un medio de cultivo enriquecido

Es una técnica que utiliza un medio selectivo líquido para permitir el desarrollo de un microorganismo a partir de una muestra que contiene una gran variedad de microorganismos para los que el ambiente sea más favorable crecerán más que los otros y finalmente serán predominantes.

16.- Explica que es un medio de cultivo selectivo

Medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica.

17.- Describe las características de la pared celular de las bacterias Gram positivas y Gram negativos, resaltando sus diferencias


- Su envoltura celular comprende:1. La membrana citoplasmática2. La pared celular.

- La pared celular está compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano o mureína (polímero de N-acetil-2-D-glucosamina, unido en orientación ß-1,4 con N-acetil murámico)

- Su grosor le confiere una gran resistencia, las protege de una ruptura osmótica en ambientes acuáticos, les confiere forma y es la responsable de retener el tinte azul oscuro o violeta durante la tinción de Gram.

- Presentan sólo una membrana lipídica y la capa gruesa de peptidoglicano.- Posee dos clases de ácidos teicoicos: ácido lipoteicoico (ácido teicoico

unido a un lípido) y ácido teicoico. Son polisacáridos que se unen al ácido N-acetil murámico del peptidoglicano.

- La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico.

- No existe presencia de endotoxinas.


- Conformada por 4 zonas: 1. La membrana citoplasmática. 2. El espacio periplasmático, ubicado entre la membrana citoplasmática y el peptidoglicano.3. Una fina capa de peptidoglicano.4. Membrana externa que contiene fosfolípidos, lipopolisacárido (LPS) y proteínas

- Pueden presentar una capa S que se apoya directamente sobre la membrana externa.



- Ser aerobias o anaerobias facultativas- Ser bacilos Gram negativos- No ser esporógenas; (Si es Gram negativo NO esporula)- Fermentan la lactosa a 35°C en menos 48 horas- Con producción de ácido y gas

Incluye los géneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter.


La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro de agua puede estar contaminado, ya sea con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposición. Generalmente este tipo de bacterias se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en el fondo sedimentoso.


La determinación de la calidad bacteriológica reviste gran importancia en el ámbito de la salud pública ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al consumo.


No, dentro del grupo de los coliformes totales (que comprende la totalidad del grupo) existe un subgrupo que es el de los coliformes fecales (solo los de origen fecal).

22.- ¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias en la muestra de agua que colectaste?

Las complicaciones pueden ser que venga una epidemia de E.coli así como también de Salmonella.

23.- ¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con materia fecal?

Cólera, Fiebre Tifoidea y Paratifoidea, Disenterías, Poliomelitis, Hepatitis, Salmonelosis, Cryptosporidiosis, Gastroenteritis, Ascariasis, Clonorquiasis, Dracunculosis, Paraginimiasis, Esquistosomiasis y Paludismo.


I: Indol M: Rojo de metilo V: V-P (Voges-Proskauer)

iC: Citrato de Simmons


Permiten determinar la presencia o ausencia de ciertas enzimas y a veces incluso permiten determinar la existencia de una secuencia metabólica.

El IMViC se desarrolló para clasificar especies de la familia antes mencionada y correspondiente al grupo de bacterias coliformes.





Unidad Xochimilco





MÉTODOS BÁSICOS PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS DEL AGUA)

Por: Eduardo Jerónimo HernándezMatricula: 2152033604

Lic. Médico Cirujano

Docente:


Grupo: BB12A


Métodos físicos

Depende de factores como tiempo, exposición y temperatura. El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor húmedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalización de las proteínas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. El calor es considerado como el método de esterilización por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningún tipo de daño.

Métodos químicos






Rápido, no deja residuos tóxicos, bajo deterioro del material expuesto, económico

No se permite para emulsiones con agua, es corrosivo sobre algunos metales

Calor seco No es corrosivo para metales e instrumentos, permite esterilización de sustancias en polvo

Mayor tiempo de esterilización. Baja penetración del calor. Radiaciones de acuerdo al tiempo de radiación.


Filtración Esteriliza aceites, pomadas, soluciones oftálmicas

No retienen virus ni microplasma.



Óxido de Etileno

Esteriliza material que es termosensible, como equipos electrónicos, et.

Peligroso por ser altmente inflamable y explosivo, adem+ás de ser cancerígeno

Aldehidos Método rápido y único esterilizante frío.

No se puede estrilizar objetos con celulosa, algodón, líquidos, humedad, madera, etc.


No deja ningún residuo tóxico, se convierte en agua y oxígeno al final del proceso, material sin aireación, dura aproximadamente entre una hora y hora y media.

Muy costoso.



Antisépticos: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Compuestos que contienen fenol (hexaclorofeno, triclosan, cloroxilenol, clorhexidina). Detergentes catiónicos, especiamente compuestos de amonio cuaternario (cloruro de benzalconio). Peróxido de

hidrógeno (solución al 3%). compuestos yodorosos que contienen yodo en solución. Nitrato de Plata.






Uso de bata, guantes y cubrebocas con la finalidad de evitar contaminación. Lavado del area de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido 1:10. El uso del mechero.






PARTE FUNCION









OCULAR Se localiza en la parte superior del tubo ocular y son las lentes que Capta y amplia la imagen formada en los objetivos. Los primeros microscopios eran monoculares, es decir, poseían una sola lente. Los microscopios actuales poseen dos oculares, uno

para cada ojo y se les llama binoculares.










Es una técnica que se utiliza para obtener a partir de un elevado número de bacterias, unnúmero reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al incubar ésta, cada una de las bacterias originará una colonia.


El agar MacConkey es un medio diferencial para la selección y recuperación de Enterobacteriaceae y bacilos gramnegativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas y de algunas gramnegativas exigentes. Contiene lactosa como única fuente de carbono. Identificando con un color rojo las bacterias fermentadoras de lactosa.










*Peptidoglucano: es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para replicación y supervivencia de la bacteria.





No tiene membrana externa Membrana externa: forma un saco rígido alrededor de la bacteria, mantiene estructura y es barrera impermeable a macromoléculas, ofrece protección en condiciones adversas


Espacio periplasmático: espacio entre la superficie externa de la membrana citoplasmática y la interna de la membrana externa.

La red de mureína está muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas


La penicilina mata a las gram positivas, ya que bloquea la formación de enlaces peptídicos entre las diferentes cadenas del peptidoglucano

La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la capa de lipopolisacáridos situada en la parte externa de la pared celular.

No contiene LPS

Contiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa células B, liberación de IL, FNT, IL 6 por macrófagos.

En la tinción de Gram, retienen la tinción azul

Quedan decoloradas.

Conservan el complejo yodocolorante Pierden el complejo yodocolorante



Poseen otros componentes: ácidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacáridos complejos.

Poseen proteínas con concentraciones elevadas.


Los coliformes son un grupo de bacterias que comparten características bioquímicas en común y son útiles como microorganismos indicadores de sanidad de alimentos y agua. Entre los coliformes se encuentran las enterobacterias. Poseen morfología bacilar, pueden ser aerobias o anaerobias facultativas. No forman endosporas, son gramnegativas, fermentan la lactosa produciendo ácido y gas en 24 a 38 horas a 36 ºC.










Las bacterias coliformes fecales pueden tener efectos graves en la salud pública. Los volúmenes de agua con altos niveles de esta bacteria pueden contener una amplia gama de parásitos, bacterias y virus causantes de enfermedades, las cuales pueden variar desde condiciones leves como las infecciones agudas del oído, hasta otras más graves que amenazan la vida tales como la fiebre tifoidea y la hepatitis. Los gusanos parásitos y los patógenos bacterianos tales como Salmonella, también se encuentran comúnmente en el agua que da positivo en la prueba que busca altos niveles de bacterias coliformes fecales.










24hrs=281 474 976 710 656


Unidad Xochimilco






Por: Dimas Guzmán Cristian.Matricula: 2152031146Lic. Médico cirujano.

Docente:


Grupo: BB12A

El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor húmedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalización de las proteínas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares.

El calor es considerado como el método de esterilización por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningún tipo de daño.




MÉTODOS FÍSICOS.

Calor húmedo.

Ventajas: Rápido, no deja residuos tóxicos, bajo deterioro del material expuesto, económico.

Desventajas: No se permite para emulsiones con agua, es corrosivo sobre algunos metales.

Calor seco.

Ventajas: No es corrosivo para metales e instrumentos, permite esterilización de sustancias en polvo.

Desventajas: Mayor tiempo de esterilización. Baja penetración del calor. Radiaciones de acuerdo al tiempo de radiación.

Ionizantes RUV.

Ventajas: Esterilizan superficies.

Desventajas: Escasamente penetrantes.

Filtración.

Ventajas: Esteriliza aceites, pomadas, soluciones oftálmicas.

Desventajas: No retienen virus ni microplasma.

MÉTODOS QUÍMICOS.

Óxido de Etileno.

Ventajas: Esteriliza material que es termo sensible, como equipos electrónicos, etc.

Desventajas: Peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, además de ser cancerígeno.

Aldehídos.

Ventajas: Método rápido y único esterilizante frío.

Desventajas: No se puede estrilizar objetos con celulosa, algodón, líquidos, humedad, madera, etc.

Gas-Plasma de Peróxido de Hidrógeno.

Ventajas: No deja ningún residuo tóxico, se convierte en agua y oxígeno al final del proceso, material sin aireación, dura aproximadamente entre una hora y hora y media.

Desventajas: Muy costoso.



Antisépticos: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Compuestos que contienen fenol (hexaclorofeno, triclosan, cloroxilenol, clorhexidina). Detergentes catiónicos, especiamente compuestos de amonio cuaternario (cloruro de benzalconio). Peróxido de hidrógeno (solución al 3%). compuestos yodorosos que contienen yodo en solución. Nitrato de Plata.






Uso de bata, guantes y cubrebocas con la finalidad de evitar contaminación. Lavado del area de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido 1:10. El uso del mechero.






PARTE FUNCION









OCULAR Se localiza en la parte superior del tubo ocular y son las lentes que Capta y amplia la imagen formada en los objetivos. Los primeros microscopios eran monoculares,

es decir, poseían una sola lente. Los microscopios actuales poseen dos oculares, uno para cada ojo y se les llama binoculares.










Es una técnica que se utiliza para obtener a partir de un elevado número de bacterias, unnúmero reducido de ellas distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa. Al incubar ésta, cada una de las bacterias originará una colonia.










Bacterias Gram positivas.

1. Poseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano. Peptidoglucano: es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para replicación y supervivencia de la bacteria.

2. No tiene membrana externa.3. No tiene espacio periplasmático4. La red de mureína está muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas.

5. La penicilina mata a las gram positivas, ya que bloquea la formación de enlaces peptídicos entre las diferentes cadenas del peptidoglucano.

6. No contiene LPS.7. En la tinción de Gram, retienen la tinción azul.8. Conservan el complejo yodocolorante.9. Son esporulantes y no esporulantes, como Streptococcus, Cisteria, Frankia.10. Poseen otros componentes: ácidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacáridos

complejos.

Bacterias Gram negativas.

1. Poseen una pared celular más compleja:Pared celular internaPared de peptidoglucano bicapa lipídica externa

2. Membrana externa: forma un saco rígido alrededor de la bacteria, mantiene estructura y es barrera impermeable a macromoléculas, ofrece protección en condiciones adversas.

3. Espacio periplasmático: espacio entre la superficie externa de la membrana citoplasmática y la interna de la membrana externa.

4. La red de mureína presenta una sola capa.5. La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la capa de

lipopolisacáridos situada en la parte externa de la pared celular.6. Contiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa células B, liberación de

IL, FNT, IL 6 por macrófagos.7. Quedan decoloradas.8. Pierden el complejo yodocolorante.9. Pueden ser anaerobios o aerobios.10. Poseen proteínas con concentraciones elevadas.


Los coliformes son un grupo de bacterias que comparten características bioquímicas en común y son útiles como microorganismos indicadores de sanidad de alimentos y agua. Entre los coliformes se encuentran las enterobacterias. Poseen morfología bacilar, pueden ser aerobias o anaerobias facultativas. No forman endosporas, son gramnegativas, fermentan la lactosa produciendo ácido y gas en 24 a 38 horas a 36 ºC.










Las bacterias coliformes fecales pueden tener efectos graves en la salud pública. Los volúmenes de agua con altos niveles de esta bacteria pueden contener una amplia gama de parásitos, bacterias y virus causantes de enfermedades, las cuales pueden variar desde condiciones leves como las infecciones agudas del oído, hasta otras más graves que amenazan la vida tales como la fiebre tifoidea y la hepatitis.










24hrs=281 474 976 710 656





Cuestionario Laboratorio

Por: Sofia Lizeth Valerio Orduña


Lic. Medicina Veterinaria y Zootecnia

Docente:


Grupo: BB12A

CUESTIONARIO.


R. Medios físicos:

-Vapor saturado a presión: autoclave: es el medio más específico y efectivo de menor costo para esterilizar la mayoría de los objetos de uso hospitalario

-Calor seco: pupinel: este sistema elimina microorganismos por coagulación de las proteínas de estos. Su efectividad depende de la cantidad de calor, la cantidad de calor disponible y los niveles de perdida de calor, requiere largos periodos de exposición.

Medios químicos:

-Óxido de etileno: este es un producto químico con un alto poder desinfectante, su presencia está en forma líquida y se volatiza formando un compuesto gaseoso que elimina microorganismos por cualquier alquilación de la pared celular del microorganismo.

-Peróxido de hidrogeno: es un agente químico que se ha utilizado como desinfectante de alto nivel y esterilizante por inmersión, esteriliza a baja temperatura por medio de plasma de peróxido de hidrogeno

-Ácido paracetico: esterilizante de alto nivel, es esporicida, por lo tanto esteriliza en tiempos menores al glutaraldehido, hay dos formas por este agente: líquido y plasma.

2. Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuando es recomendable utilizar cada uno de estos.

R. Físicos: ventajas: más efectivo y de bajo costo, eleva la temperatura tiempo corto y no deja residuos tóxicos.

Desventajas: su efectividad depende de la cantidad de calor disponible, largos periodos.

Químicos: ventajas: alto poder desinfectante.

Desventajas: alto costo, largos periodos de esterilización y alto nivel de infraestructura.


R. Antisépticos: alcoholes, tintura de yodo, povidona yodada, clorhexidina, triclosan.

Desinfectantes: glutaraldehido, hipoclorito de sodio1%

4. ¿Qué tipo de sustancias suele utilizarse continuamente para desinfectar superficies?

R. Para las superficies muy comúnmente es usado el cloro y productos a base de cloro, incluidas los compuestos de hipocloruro, yodoforos, amonio, ácidos, fenol y agentes gaseosos.


R. El mechero te ayuda a crear corrientes de aire caliente que arrastran partículas de polvo y microorganismos dispersos en el área que rodea tu área de trabajo, es decir el aire caliente que genera la flama arrastra hacia afuera toda partícula y microorganismo.

6. Menciona otros métodos usados en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estéril.

R. Se pueden realizar limpiezas con agua jabonosa, se limpian con una compresa impregnada de alcohol al 70%.

Limpieza de la cabina, desinfección de todo el material que se vaya a introducir a la cabina sumergiéndola en un baño de alcohol.

7. Explica los riesgos que puede correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir cada sesión.

R. Los riesgos que se corren son primero que el material pueda caerse y por lo tanto romperse, también puede quedar sucio y contaminarse al hacerse una nueva técnica.


R. Al no lavar los materiales de laboratorio corremos el riesgo que queden sucios y por lo tanto después se contaminen o se infecten o algún virus se quede ahí.

9. Realiza el diagrama del microscopio describe cada una de sus partes e indica su intención.

Ocular: Lente situada cerca del ojo del observador (por donde mira). Su misión es

ampliar la imagen del objetivo. Suelen tener dos oculares, por eso se llaman

binoculares, si solo tiene uno se llama monocular.

Tubo: El tubo óptico se puede acercar o alejar de la preparación (lo que se quiere

ver).

Tornillo macrométrico: Sirve para realizar un primer enfoque, permite hacer un

movimiento rápido hacia arriba o hacia abajo del tubo o la platina, y se utiliza para

localizar la imagen a observar.

Revólver: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los

objetivos. La esfera se suele llamar cabezal y contiene los sistemas de lentes

oculares (monoculares o binoculares (2 lentes)).

Brazo: Es una pieza metálica de forma curvada que puede girar; sostiene por su

extremo superior al Tubo Óptico y en el inferior lleva varias piezas importantes.

Platina: Lugar donde se deposita la preparación que se quiere observar. Tiene en

su centro una abertura circular por la que pasará la luz del sistema de iluminación.

Objetivo: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta

determinando la cantidad de aumentos con la que queremos observar.

Condensador: Lente que concentra los rayos luminosos que inciden sobre la

preparación. El condensador de la parte de abajo también se llama FOCO y es el

que dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Tornillos de enfoque: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que

consigue el enfoque correcto.

Base: Sujetador de todo el microscopio.

Espejo: Con una cara plana y otra cóncava, está montado sobre un eje giratorio

ubicado en la zona más inferior del brazo por debajo de la Platina.

10. Explica que tipo de bacterias pueden aislarse en el agua.

R. Se han encontrado bacterias como por ejemplo Vibrio, e-coli, pseudomonas.

11. Explica cuál es el objetivo de sembrar diluciones del agua.

R. Su principal propósito es disminuir la concentración bacteriana de una muestra específica.


R. Es la técnica más utilizada, para aislar los microorganismos en un placa de agar, se colocan muestras y se realiza un barrido con una asa inoculada hasta lograr separar colonias individuales de la cepa de interés.

13. Explica que tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.

R. Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos gram negativos de fácil desarrollo aerobios y anaerobios facultativos.

14. Explica que se le llama medio de cultivo bacteriológico.

R. Son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y condiciones físicas optimas, permite el crecimiento de microorganismos.


R. Son aquellos que además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores, indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por medio de adición de sangre u otros tipos biológicos.


R. Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población poli microbiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica.

17. Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y gram negativas, resaltando las diferencias.

R. Bacterias gram positivas: pared celular interna y una pared de peptiduglucano que es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para replicación y supervivencia de la batería, no tiene membrana externa, no tiene espacio peri plasmático.

Bacterias gram negativas: pose una pared celular más compleja , pared celular interna, pared de peptiduglucano, bicapa lípida externa, membrana externa, espacio peri plasmático.

18. ¿Cómo se diferencia las bacterias coliformes?

R. Las bacterias del grupo coliformes totales que son capaces de fermentar lactosa a 44-45° se conocen como coliformes termo tolerantes.


R. Lo que indica es que el agua está contaminada y por lo tanto no puede ser consumida por el ser humano.


R. Su importancia se debe que al ser analizadas se pueden crear procesos y tratamientos para el agua y así lograr que el agua esté libre de e-coli.


R. Todas están y se considera que el Escheria coli es el índice de contaminación fecal más adecuado.


R. Puede contener parásitos en el agua y así desencadenar unan posible contaminación y un riesgo de una suma importancia de la salud humana.


R. Shigellae dysenteriae, Salmonella, Fiebre tifoidea, Salmonella ssp, Vibrio, Escheria Colli.


R. I: Indol, M: rojo de metilo, V: V-P (Voges- Proskauer), iC: citrato de Simons


R. Se utiliza en la biología para identificar bacterias. El resultado de test expresa mediante símbolos de positivo o negativo (+,-) según el resultado de cada prueba siguiendo siempre el orden establecido por las iniciales del método.

26. ¿Por qué razón no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para realizar la prueba de la oxidasa?

R. Para las pruebas de oxidasa, se utiliza un reactivo llamado Kovacs, el cual está compuesto de alcohol osaomílico, p-dimetilamino- benzaldehído, y ácido clorhídrico. El ácido puede reaccionar con el metal y darles falsos positivos.

27. Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se origina a partir de una sola bacteria (UFC) y estas de dividen en un promedio de 30 minutos.

R. El número de bacterias resultante depende mucho del tipo de muestra pero lo aproximado es que se generen alrededor de unas 4 a 6 bacterias.


Unidad Xochimilco





Diana Alejandra Navarrete González2152033613

Lic. Agronomía

Docente:


Grupo: BB12A

1.-Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización.

Agentes fisicos: el calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas:

el calor humedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalizacion de las proteínas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares.

La radiación, la emisión y propagación de la energía puede ser utilizada como agente para la eliminación de microorganismos

Radiaciones ionizantes se pueden utilizar para esterilizar materiales platicos y la luz uv para áreas cerradas

Quimicos: capaces de dañar los componentes célulares (proteínas, membranas, etc)

Gaseosos-----> oxido de etileno

No gaseosos ---------> alheidos ej: glutaraldehido Ácido paracético y peroxido de hidrógeno

2.-Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuándo es recomendable utilizar cada uno de éstos.


Calor Húmedo

VENTAJAS

Rápido calentamiento y penetración.Destrucción de bacterias y esporas en poco tiempo. No deja residuos tóxicos. Bajo deterioro del material expuesto. Económico.

DESVENTAJAS

No se permite para emulsiones con agua.

Es corrosivo sobre algunos metales.

Calor Seco

VENTAJAS

No es corrosivo para metales e instrumentos. Permiten esterilización de sustancias en polvo y no acuosas y de viscosas no volátiles.

DESVENTAJAS

Mayor tiempo esterilización. Baja penetración del calor.Radiaciones de acuerdo al tiempo de radiación, tiempo exposición y dosis

QUIMICOS (Oxido de Etileno)

VENTAJAS

Esteriliza material termosensible, equipos electrónicos, bombas cardiorrespiratorias, metal etc.

DESVENTAJAS

Peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, ademas cancerígeno.

Aldehídos

VENTAJAS

Método rápido y único esterilizanrte frío.

DESVENTAJAS

No se pueden esterilizar algunos objetos con celulosa, algodón,, líquidos, humedad, madera, etc


VENTAJAS

No deja ningún residuo toxico.Se convierte en agua y oxigeno al final del proceso.Material sin aireación.Ciclo dura entre 54 y 75 min.

DESVENTAJAS

Método mas costoso.

3.- Indica los principales agentes desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección.

Desinfectantes y esterilizantes: Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua). Detergentes catiónicos (compuestos de amonio cuaternario)

hipoclorito sódio 1%

cloroxilenol

Formaldehído.

Glutaraldehído.

Peróxido de hidrógeno.

Dicloruro de mercurio.

Antisépticos:

Alcohol (60-85% etanol o isopropanol en agua).

Tintura de Yodo

Providona yodada

Clorhexidina

Triclosán

4.-¿Qué tipo de sustancias suelen utilizarse comúnmente para desifenctar superficies?

bactericidas, fungicidas,fungistatica y virusidas

5.-Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala que factores influyen en la creación de la zona estéril.

Al Trabajar cerca del mechero se crea una corriente de aire cálido que no permite que las bacterias entren a la zona de trabajo.

6.-Menciona otros métodos usados en la industria y en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo estériles.El uso de equipo para evitar contaminación (bata, guantes y cubrebocas) así como el

lavado del area de trabajo con hipoclorito de sodio al 10% o benzal diluido además del uso del mechero.

7.-Explica los riesgos que puedes correr si no recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir la sesión.

Se puede sufrir intoxicaciones y/o accidentes de contaminacion.

8.-Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo después de concluir cada sesión.

Riesgo de contaminación (foco de infección.)

9.-Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e indica su función.

PARTE FUNCION












10.-Explica qué tipos de bacterias pueden aislarse en el agua.


11.-Explica cual es el objetivo de sembrar diluciones de agua.


12.-Explica el fundamento del aislamiento por estría cruzada.

Proceso semicuantitativo.Técnica que se utliza para obtener apartir de un elevado núero de bacterias un número reducido de ellas distribuidas individualmente, cada una originará una colonia.

13.-Explica qué tipo de bacterias pueden aislarse en agar MacConkey.


14.-Explica a que se llama medio de cultivo bacteriológico.


15.-Explica qué es un medio enriquecido.


16.-Explica qué es un medio de cultivo selectivo.

Favorecen el crecimiento específico de un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana mixta.

17.-Describe las características de la pared celular de las bacterias grampositivas y gramnegativas, resaltando sus diferencias.

BACTERIAS GRAM POSITIVAS


No tiene membrana externa


La red de mureína está muy desarrollada y llega a tener hasta 40 capas

La penicilina mata a las gram positivas, ya que bloquea la formación de enlaces peptídicos entre las diferentes cadenas del peptidoglucano

No contiene LPS

En la tinción de Gram, retienen la tinción azul

Conservan el complejo yodocolorante


Poseen otros componentes: ácidos teicoicos y lipoteicoicos, y polisacáridos complejos.

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS


pared celular interna

pared de peptidoglucano

bicapa lipídica externa

Membrana externa: forma un saco rígido alrededor de la bacteria, mantiene estructura y es barrera impermeable a macromoléculas, ofrece protección en condiciones adversas

Espacio periplasmático: espacio entre la superficie externa de la membrana citoplasmática y la interna de la membrana externa.


La penicilina no mata a las Gram negativas, a causa de la capa de lipopolisacáridos situada en la parte externa de la pared celular.

Contiene LPS: estimulador de respuestas inmunes: activa células B, liberación de IL, FNT, IL 6 por macrófagos.

En la tinción son rosas

Pierden el complejo yodocolorante


Poseen proteínas con concentraciones elevadas.

18.-¿Cómo se definen a las bacterias coliformes?

Son un grupo de bacterias que se comparten caracteristicas bioquimicas en comun y son utiles microorganismos indicadores de sanidad de alimentos y agua en el que se encuentran las enterobacterias


presencia de una gran cantidad de heces y otros materiales orgánicos

20.-¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?

Tiene gran importancia en el ámbito de la salud pública ya que permite saber la calidad del agua destinada al consumo humano evitando así epidemias gastrointestinales.

21.-¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?


22.-¿Qué implicaciones epidemiológicas tienen la presencia de enterobacterias en la muestra de agua que colectaste?

Pueden sucitarse enfermedades leves como las infecciones agudas del oído, hasta otras más graves como la fiebre tifoidea y la hepatitis.

23.-¿Qué enfermedades gastrointestinales pueden transmitirse en el agua contaminada con materia fecal?


24.-¿Qué significan las siglas IMViC?

es una prueba utilizada en biología para la identificación bacterias. Se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato.

25.-¿Cuál es el objetivo de realizar las pruebas de identificación IMViC?


26.-Determina el número de bacterias que hay en una colonia después de 24 horas de incubación. Recuerda que una colonia de enterobacterias se orgina a partir de una sola bacteria (UFC) y éstas se dividen en un tiempo promedio de 30 minutos.

24hrs=281 474 976 710 656




Unidad Xochimilco





Por: Tania Gabriela Corrales Andrade


Lic. En Nutrición Humana

Docente:


Grupo: BB12A

CuestionarioMétodos básicos para el aislamiento e identificación de enterobacterias en el agua

1. Explica el fundamento de los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización

Esterilización es la eliminación completa de toda forma microbiana.

Los métodos de esterilización del material se pueden clasificar en físicos y químicos.Método Medio Opciones

Físicos Calor húmedo

Calor seco

Autoclave a vapor saturado

Pupinel

Químicos

Líquidos

Inmersión en glutotaldehido al 2% Inmersión en peróxido de hidrógeno al 6% Inmersión en ácido paracético 0,2 al 30 %

Gas Gas de óxido de etileno Gas de formaldehido Vapor de peróxido de hidrógeno

Plasma Plasma de peróxido de hidrógeno Plasma de ácido peracético

2. Explica las ventajas y desventajas de los métodos de la pregunta anterior e indica cuando es recomendable utilizar cada uno de ellos.

El calor húmedo proporcionado por autoclave a vapor es el método de esterilización más efectiva, económica y rápida disponible en la actualidad, por lo tanto, debe ser la primera opción si el material lo permite.

3. Indica los principales desinfectantes y antisépticos utilizados en la desinfección

Antisépticos

Son compuestos químicos con efecto antimicrobiano que se pueden aplicar en tejido vivo, localmente, de forma tópica en piel sana.

Al ser sustancias que se utilizan en tejidos vivos requieren de propiedades especiales.

ANTISÉPTICO DESINFECTANTEProducen muerte o inhibición celular, en las bacterias, por oxidación, hidrólisis e inactivación de enzimas, con perdida de constituyentes celulares.

Actúan como desnaturalizantes o precipitantes de proteínas, inhiben enzimas y causan muerte celular

Son más selectivos Son más potentes, más rápidos y termoestables que los antisépticos

Son los únicos de uso en tejidos vivos

Algunos son más tóxicos


La limpieza requiere de tres tiempos diferentes

Lavado con detergente.

Enjuague y secado.

Desinfección con productos de nivel intermedio/bajo

Lavar, desinfectar y secar el contenedor utilizado para preparar la solución de limpieza con detergente liquido, enjuagar con agua y desinfectar con el desinfectante de nivel intermedio/bajo en uso para minimizar el grado de contaminación bacteriana.

5. Explica cuál es el objetivo de utilizar el mechero para preparar la zona estéril para el trabajo microbiológico y señala que factores influyen en la creación de la zona estéril

El mechero te ayuda a crear corrientes de aire caliente que arrastran partículas de polvo y microorganismos dispersos en el aire que rodea a tu área de trabajo, es decir, el aire caliente que genera la flama arrastra hacia fuera toda partícula y microorganismo (convección de masas de aire)

Al mismo tiempo, la temperatura que alcanza la flama destruye cualquier organismo, además te sirve para esterilizar tu asa bacteriológica. un mechero Bunsen alcanza un radio de esterilidad de 20 a 30 cm dependiendo la intensidad y el color de la flama.

6. Menciona otros métodos usados en la industria y en los laboratorios de investigación para crear zonas de trabajo esteriles

a) Esterilización: Proceso que destruye toda forma de vida microbiana. Un objeto estéril (en sentido microbiológico) está libre de microorganismos vivos.

b) Desinfección: Es la destrucción, inactivación o remoción de aquellos microorganismos que pueden causar infección u ocasionar otros efectos indeseables; la desinfección no implica necesariamente esterilización.

c) Desinfectante: Agente usualmente químico, que mata las formas en crecimiento de los microorganismos, pero no necesariamente las esporas. El término se refiere a sustancias utilizadas sobre objetos inanimados.

d) Antiséptico: Sustancia que impide el crecimiento o la acción de los microorganismos, ya sea destruyéndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad. Se aplica sobre superficies corporales.

e) Sanitarizante : Agente que reduce la población microbiana a niveles seguros, según los requerimientos de salud pública. Se aplica en objetos inanimados de uso diario, por ejemplo utensilios y equipos para manipular alimentos, vasos, platos y otros objetos de uso similar.

f) Germicida: Agente que mata a los microorganismos, pero no necesariamente a sus esporas.

g) Bactericida: Agente que mata a las bacterias.

h) Bacteriostático: Agente que inhibe el crecimiento de las bacterias, mientras permanece en contacto con ellas.

i) Fungicida: Agente que mata los hongos.

j) Fungistático: Agente que inhibe el crecimiento de los hongos, mientras permanece en contacto con ellos.

k) Virucida: Agente que destruye los virus.

7. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y recoges el frasco, los tubos y las pipetas después de concluir la sesión

Si se recoge el material cuando no este contaminado puede provocar daños a futuros experimentos, se pueden romper y producir pequeños fragmentos de vidrios o incluso pueden tocar agentes provocándole alguna reacción.

8. Explica los riesgos que puedes correr si no lavas y desinfectas la mesa de trabajo después de concluir cada sesión

Se vierte solución de hipoclorito de sodio al 10% o benzxal en el frasco que contienen la muestra de agua que colocaste en los tubos que utilizaste la solución de hipoclorito de sodio al 10% debes cerrar el frasco muy bien.

9. Realiza el diagrama de un microscopio, describe cada una de sus partes e indica su función

10.Explica que tipos de bacterias pueden aislarse en el agua

Son los diferentes tipos de bacterias, virus, protozoos y otros organismos que transmiten enfermedades como el cólera, tifus, gastroenteritis diversas, hepatitis, etc. En los países en vías de desarrollo las enfermedades producidas por estos patógenos son uno de los motivos más importantes de muerte prematura, sobre todo de niños.

Normalmente estos microbios llegan al agua en las heces y otros restos orgánicos que producen las personas infectadas. Por esto, un buen índice para medir la salubridad de las aguas, en lo que se refiere a estos microorganismos, es el número de bacterias coliformes presentes en el agua. La OMS (Organización Mundial de la Salud) recomienda que en el agua para beber haya 0 colonias de coliformes por 100 ml de agua.

11.Explica cuál es el objetivo de sembrar diluciones del agua

el objetivo de hacer diluciones es simplemente disminuir la concentracion bacteriana de una muestra.

12.Explica el funcionamiento del aislamiento por estría cruzada

Es la técnica más utilizada para aislar a los microorganismos en una placa de agar.

Se coloca la muestra y se realiza un barrido con un asa de inoculación hasta lograr separar colonias individuales de la cepa de interés.

13.Explica que tipo de bacterias pueden aislarse en agar de MacConkey

En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.

Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares.

Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

14.Explica a qué se le llama medio de cultivo bacteriológico

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

15.Explica que es un medio de cultivo enriquecido

Es un medio de cultivo que contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, entre ellos algunos de los más exigentes. Se utilizan comúnmente para la cosecha de diferentes tipos de microbios que están presentes en la muestra.

Ciertos organismos no crecen en medios de cultivo ordinarios. Requieren ingredientes que promueven el crecimiento, como la sangre, glucosa, suero, huevo, entre otros. Los medios de enriquecimiento contienen ingredientes que aumentan las cualidades estimulantes del medio propiciando un crecimiento elevado.Otra característica de los medios de enriquecimiento es que pueden contener componentes químicos que inhiben ciertos tipos de microorganismos. De este tipo de Medios de cultivo se puede obtener un subcultivo de una colonia aislada.

16.Explica que es un medio de cultivo selectivo

es un medio de cultivo en el que sólo puede crecer un tipo de microorganismo (hongos, bacterias entéricas, protozoos.

Un ejemplo de medio selectivo sería usar un medio rico en un antibiótico, como la ampicilina, para permitir únicamente el crecimiento de las bacterias resistentes a éste.

17.Describe las características de la pared celular de las bacterias gram positivas y gram negativas, resaltando sus diferencias

BACTERIAS GRAM POSITIVAS BACTERIAS GRAM NEGATIVASPoseen una pared celular interna y una pared de peptidoglucano.*Peptidoglucano: es un exoesqueleto que da consistencia y forma esencial para replicación y supervivencia de la bacteria.

Poseen una pared celular más compleja:-pared celular interna-pared de peptidoglucano- bicapa lipídica externa

18.¿Cómo se definen las bacterias coliformes?

La denominación genérica coliformes designa a un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas características bioquímicas en común e importancia relevante como indicadores de contaminación del agua y los alimentos.

Coliforme significa con forma de coli, refiriéndose a la bacteria principal del grupo, la Escherichia coli, descubierta por el bacteriólogo alemán Theodor von Escherich en 1860.

19.¿Qué indica la presencia de bacterias coliformes en el agua?

Tradicionalmente se los ha considerado como indicadores de contaminación fecal en el control de calidad del agua destinada al consumo humano en razón de que, en los medios acuáticos, los coliformes son más resistentes que las bacterias patógenas intestinales y porque su origen es principalmente fecal. Por tanto, su ausencia indica que el agua es bacteriológicamente segura.

Asimismo, su número en el agua es directamente proporcional al grado de contaminación fecal; mientras más coliformes se aislan del agua, mayor es la gravedad de la descarga de heces.

20.¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias coliformes?

En la higiene de alimentos los coliformes no se consideran indicadores de contaminación fecal sino solamente indicadores de calidad.

Los coliformes totales se usan para evaluar la calidad de la leche pasteurizada, leche en polvo, helados, pastas frescas, fórmulas para lactantes, fideos y cereales para el desayuno.

Los coliformes fecales se usan para evaluar los mariscos frescos.

Por último, la E. coli se usa como indicador en quesos frescos, quesillos, cereales , masas con relleno, alimentos infantiles, cecinas cocidas y verduras frescas.

21.¿Todas las bacterias coliformes son de origen fecal?

No todos los coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminación. Se distinguen, por lo tanto, los coliformes totales —que

comprende la totalidad del grupo— y los coliformes fecales aquellos de origen intestinal.

Desde el punto de vista de la salud pública esta diferenciación es importante puesto que permite asegurar con alto grado de certeza que la contaminación que presenta el agua es de origen fecal.

22.¿Qué implicaciones epidemiológicas tiene la presencia de enterobacterias en la mezcla de agua que colectaste?

La fiebre tifoidea es causada por la Salmonela typhi, que forma parte de una gran familia entre las que se encuentran otro tipo de salmonellas responsables de infecciones generalizadas asi como de cuadros de diarreas pasajeras. Estas bacterias se encuentran ampliamente diseminadas en animales mamíferos, reptiles, aves e incluso insectos. Algunos como las salmonellas tiphi, paratiphi estan altamente ligadas al ser humano y no tienen otros huéspedes naturales.

23.¿Qué enfermedades gastrointestinales puedan transmitirse en el agua contaminada con material fecal?

La diarrea es ocasionada por una variedad de gérmenes, entre ellos los virus, las bacterias y los protozoos. Esta enfermedad hace que las personas pierdan líquido y electrolitos, lo cual puede provocar deshidratación y, en algunos casos, causar la muerte.

El cólera es una infección bacteriana aguda del intestino que causa numerosos episodios de diarrea, los cuales pueden derivar en deshidratación aguda y provocar la muerte si no se los trata de inmediato.

Los parásitos intestinales (también conocidos como helmintos) infectan a las personas que entran en contacto con suelos contaminados con heces de un ser humano infestado con los mismo, o a quienes consumen alimentos contaminados.

24.¿Qué significan las siglas IMVIC?

El IMVIC es una prueba utilizada en biología para la identificación bacterias. Se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato. El resultado de este test se expresa mediante símbolos de positivo o negativo (+ o -) según el resultado de cada prueba, siguiendo siempre el orden establecido por las

iniciales del método. Así por ejemplo, el IMViC de la bacteria Salmonella y Citrobacter es -+-+. Para E.coli es ++-- y para Klebsiella y Enterobacter es --++.

25.¿Cuál es el objetivo de realizar las pruebas de identificación IMVIC?

Poder identificar las bacterias por ejemplo, por el Indol que consiste en cultivar al microorganismo en estudio en un caldo rico en triptófano; después de 24-48 horas de crecimiento se adiciona al tubo sobre el caldo xilol, para conseguir separar el indol producido, y tras agitar se incorpora el reactivo de Kovacs (p-dimetil animo benzaldehido) un resultado positivo mostrará la formación de un anillo de color rojo sobre el caldo de cultivo, lo cual pondrá de manifiesto la presencia de Indol debido a la utilización del triptófano por el microorganismo (la molécula de tritófano se rompe y uno de esos productos es el Indol), un resultado negativo solo mostrara un anillo de color amarillo propio del reactivo de Kovacs.

26.¿Por qué razón no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para realizar la prueba de la oxidasa?

La prueba de oxidasa es una prueba usada en microbiología para determinar si una bacteria produce alguna de las citocromo c oxidasas.1 La prueba hace uso de discos impregnados con el reactivo N,n,n,n-tetrametil-p-fenilendiamina (o TMFD) o N,N-Dimetil-p-fenilendiamina (o DMFD), el cual también es un indicador redox. El reactivo pasa de azul oscuro a granate al ser oxidado, y se vuelve transparente al ser reducido. Las bacterias oxidasa positiva poseen citocromo oxidasa o indofenol oxidasa (una hemoproteína).2 Ambas catalizan el transporte de electrones de compuestos donantes (NADH) a receptores de electrones (por lo general el oxígeno). En la prueba, el reactivo TMFD actúa como donante artificial de electrones para la enzima oxidasa.





CUESTIONARIO DE LABORATORIO

Por: Julia Maria Turcio Gil

Licenciatura: Medicina Veterinaria y Zootecnia.Clave: 2152027893


Grupo: BB12A

Cuestionario:

1.- Explica el fundamento de los diferente métodos físico-químicos de

esterilización

-La eliminación completa de toda forma de vida microbiana se puede conseguir a

través de métodos físicos químicos y gaseosos.

2.- explica la ventaja y desventaja de los métodos de esterilización.

Autoclave: es el método más efectivo y de menos costo para esterilizar la mayoría

de objetos de uso hospitalario.

Tiene la ventaja de producir un elevamiento de la temperatura de forma rápida,

con cortos tiempos de esterilización y no dejar residuos tóxicos en el material; la

presencia de material orgánico o suciedad interfiere con la acción del vapor por lo

que si el material se encuentra sucio antes de la esterilización no se puede

garantizar su esterilidad.

Peróxido de hidrógeno: esterilizante por inmersión, puede dejar residuos y

recientemente se ha utilizado a baja temperatura con plasma de peróxido.

Acido paracético: es esporicida desinfectante tiene 2 formas líquido y plasma.

Radiaciones ionizantes: pueden usarse rayos gamma o cobalto, es de alta

complejidad y debe realizarse bajo estrictas normas de seguridad además

requiere infraestructura y no es posible en centros hospitalarios.

3.-Tipo de sustancias utilizadas para desinfectar:

Cloro, yodo, alcohol, amoniaco, agua caliente (vapor).

4.-Explica cual es motivo para usar el mechero para preparar la zona estéril para

el trabajo microbiológico y factores que influyen en la creación de la zona estéril.

Esteriliza con calor una zona de aproximadamente 20cm de diámetro

aproximadamente, dependiendo de la llama.

5.- menciona otros métodos utilizados en la industria para preparar zonas

estériles:

Calor, radiación UV, mecánica (maquinas especializadas) y cloro.

6.- riesgos de no recoger el material:

Contagio o ingestión, intoxicación, cortes o heridas.

7.- riesgos de no lavar y desinfectar la zona de trabajo:

Infectarnos con las enterobacterias o contaminar las muestras.

8.- realiza un diagrama del microscopio:

9.-función de las partes del microscopio:

Ocular: lente situada cerca del ojo del observador su misión es ampliar la imagen

del objetivo.

Brazo: pieza metálica en forma curveada para sostén de los objetivos.

Revólver: contiene los objetivos permite girar y cambiar de objetivos.

Objetivos: lentes que amplían la imagen del porta y cubre objetos.

Platina: Lugar donde se deposita la preparación que se desea observar.

Condensador: lente que concentra los rayos luminosos que inciden sobre la

preparación.

Tornillos de enfoque: micro consigue el enfoque, macro acerca el enfoque.

Desplazamiento de la platina: permite subir o bajar la muestra.

Cabezal: contiene el revólver y los sistemas de lentes.

Base: sujeción de todo el microscopio.

10.-¿Qué tipo de bacterias pueden aislarse en el agua?:

Más del 80% de las bacterias descritas por el manual de Berguey pueden aislarse

en e agua.

11.- Objetivo de sembrar diluciones en agua:

Permite trabajar con un número consideraba de manera que es posible

organizarlas para su estudio logrando separa colonias y su crecimiento.

12.- Explica el fundamento por estría cruzada:

Se coloca la muestra y se realiza un barrido con una asa de inoculación hasta

lograr separar colonias individuales de la cepa se incuba a 35º por 24 horas.

13.- Explica el tipo de bacterias que pueden aislarse el agar Mc conkey

Se utiliza para el aislamiento de Gram negativas de fácil desarrollo anaerobios y

aerobios facultativos.

14.- ¿A qué se llama medio de cultivo bacteriológico?

Solución líquida o sólida que contiene todos los nutrientes necesarios para permitir

el crecimiento bacteriano también se les llama agares o caldos.

15.- ¿qué es un medio de cultivo enriquecido?

Son aquellos que además de las sustancias nutritivas normales incorporan una

serie de factores para microorganismos exigentes como sangre.

16.- Medios de cultivo selectivo:

Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias

contenidas en una población polimicrobiana un ejemplo es el caldo selenito que se

usa para el crecimiento de la salmonnella y frenar el resto de las enterobacterias.

17.- describe la pared celular de las gram positiva y gram negativas:

18.- ¿Cómo se definen las bacterias coliformes?

Bacilos cortos gramnegativos, anaerobios facultativos no esporulados que

fermentan la lactosa a 35ºC en menos de 48 horas con producción de ácidos y

gas.


la capacidad de éstas de fermentar lactosa y producir gas.


El indicio de E. coli es un indicio de contaminación por materia fecal reciente por lo

que el consumo de esa agua para la población no es apto.


No, existen coliformes totales que se encuentran en el intestino del hombre y de

los animales.

22.- ?Qué implicaciones epidemiológicas tiene la presencia de enterobacterias?

Algunas puedes causar fiebre, diarrea e incluso la muestre si no se controlan.

23.- ¿Qué enfermedades pueden trasmitirse en el agua contaminada con heces

fecales?

Anemia, hepatitis, polio, tifoidea, diarrea, giardiasis, dengue, cólera etcétera.

24.- ¿Qué significan las siglas IMVic?

Prueba itulizada para la identificación de bacterias Secompone de 4 pruebas Indol,

rojo de metilo, Vogues-Proscauer y citratos.

25.- ¿Cuál es el objetivo de realizar la pruebas de identificación?

Identificar enterobacterias.

26.- ¿Por qué no es recomendable utilizar el asa bacteriológica para realizar la

pureba de oxidasa?

para las pruebas de oxidasa de utiliza un reactivo llamado Koracs el cual está

compuesto de alcohol isoamílico, pdimetíl amino, benzaldehido y ácido clorhídrico,

el ácido puede reaccionar con el metal y dar falsos positivos.





Practica de Laboratorio.

Por: Loeza Coatzozon GriselMatricula: 2143026539

Lic. Agrónoma


Grupo: BB12A

1.- EXPLICA EL FUNDAMENTO DE LOS DIFERENTES MÉTODOS FÍSICOS Y QUÍMICOS DE ESTERILIZACIÓN:


Dentro de los métodos físicos se pueden encontrar:

Calor: Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la acción del calor, el cual provoca una desnaturalización de proteínas, fusión desorganización de las membranas en los microorganismos.

Radiaciones: se atribuye a la absorción por DNA, existen uniones covalentes entre residuos de primigenia pertenecientes a la misma cadena, se distorsiona el DNA y se inhibe la síntesis del DNA, por tanto también el crecimiento y respiración de los microorganismos. Su uso principal es para esterilizar el aire y superficies.

Dentro de los métodos químicos: Pueden ser Gaseosos (óxido de etileno) o no Gaseosos (Aldehídos, ácido peracético y peróxido de hidrógeno)

Los antisépticos son considerados venenos que al actuar sobre gérmenes, estos son destruidos. Algunos de ellos ejercen su acción nociva sobre todas las células y otros actúan sobre algunas especies bacterianas en específico. Es óptimo para la antisepsia de las manos del experimentador, mesas de trabajo, material, etc.

2.- EXPLICA LAS VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MÉTODOS DE LA PREGUNTA ANTERIOR E INDICA CUÁNDO ES RECOMENDABLE UTILIZAR CADA UNO DE ÉSTOS:

Métodos físicos:

Ventajas: Rápido calentamiento y penetración, destrucción de bacterias en un periodo corto, no hay residuos tóxicos, ademas de que no es corrosivo.

Entre sus desventajas se encuentra que: En algunas ocasiones el material a esterilizar no soporta altas temperaturas y pueden sufrir algún daño o simplemente el material a esterilizar puede ser inflamable. En cuanto a las radiaciones, no penetran en sólidos y pobremente en líquidos.

Métodos químicos:

Ventajas: el ciclo de esterilización dura de 54-75 minutos, el material sometido a estos procesos no precisa de aireación.

Desventajas: se necesita un mayor tiempo, las sustancias son inflamables, tóxicas y de muy alto costo.

3.- INDICA LOS PRINCIPALES AGENTES DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS UTILIZADOS EN LA DESINFECCIÓN:

Los desinfectantes son productos químicos que matan a los microorganismos y se utilizan sobre objetos inanimados. Como: Glutaraldehído, hipoclorito de sodioLos antisépticos son sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los tejidos vivos. Como: Alcoholes, tintura de Yodo,

4.- ¿QUÉ TIPO DE SUSTANCIAS SUELEN UTILIZARSE COMÚNMENTE PARA DESINFECTAR SUPERFICIES?

*Hipoclorito de sodio al 10%*Solución de benzal diluido 1:10

5.- EXPLICA CUÁL ES EL OBJETIVO DE UTILIZAR EL MECHERO PARA PREPARAR LA ZONA ESTÉRIL PARA EL TRABAJO MICROBIOLÓGICO Y SEÑALA QUÉ FACTORES INFLUYEN EN LA CREACIÓN DE LA ZONA ESTÉRIL:



6.- MENCIONA OTROS MÉTODOS USADOS EN LA INDUSTRIA Y EN LOS LABORATORIOS DE INVESTIGACIÓN PARA CREAR ZONAS DE TRABAJO ESTÉRILES:

Desinfectantes: son productos químicos que matan a los microorganismos y se utilizan sobre objetos inanimados

Antisépticos: sustancias químicas que matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos y no son lo suficientemente tóxicos para ser aplicados a los tejidos vivos

El calor es el método más utilizado para la esterilización y puede emplearse calor seco con hornos con una temperatura de 170°C por una hora o como calor

húmedo con autoclaves con una temperatura de 121°C a 15 libras de presión por pulgada durante 20minutos.

7.- EXPLICA LOS RIESGOS QUE PUEDES CORRER SI NO RECOGES EL FRASCO, LOS TUBOS Y LAS PIPETAS DESPUÉS DE CONCLUIR LA SESIÓN:

Primero que nada se corre el riesgo de la ruptura de alguno de los materiales lo que puede causar algún accidente además de que es importante recoger el material y desinfectarlo para evitar la contaminación bacteriológica en especial si los materiales serán usados después.

8.- EXPLICA LOS RIESGOS QUE PUEDES CORRER SI NO LAVAS Y DESINFECTAS LA MESA DE TRABAJO DESPUÉS DE CONCLUIR CADA SESIÓN:

De no limpiar la mesa se propaga la contaminación, hay que tratar de mantener el campo estéril. Además que hay que tener el mayor cuidado en la limpieza para el manejo de las muestras y evitar alteraciones en los resultados.

10.- EXPLICA QUE TIPOS DE BACTERIAS PUEDEN AISLARSE EN EL AGUA:

Enterobacterias como Shigella, Salmonella, Yersina pestis y algunas pertenecientes a la flora oportunista como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Proteus mirabilis

11.- EXPLICA CUÁL ES EL OBJETICO DE SEMBRAR DILUCIONES DE AGUA:


12. EXPLICA EL FUNDAMENTO DEL AISLAMIENTO POR ESTRÍA CRUZADA:


13. EXPLICA QUE TIPOS DE BACTERIAS PUEDEN AISLARSE EN ANGAR MACCONKEY:

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que

utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

Microorganismos ColoniasEscherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes

Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes

Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes

Enterococcus faecalis ATCC 29212 Diminutas, incoloras, opacas

14. EXPLICA A QUÉ SE LE LLAMA MEDIO DE CULTIVO BACTERIOLÓGICO:

Un cultivo es un método para la multiplicación de microorganismos, tales como bacterias, hongos y parásitos, en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un método fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades en medicina humana y veterinaria.

15. EXPLICA QUE ES UN MEDIO DE CULTIVO ENRIQUECIDO:

El enriquecimiento es una técnica que utiliza un medio selectivo líquido para permitir el desarrollo de un microorganismo a partir de una muestra que contiene una gran variedad de microorganismos. Así, aquellos microorganismos para los que el ambiente sea más favorable crecerán más que los otros y finalmente serán predominantes

Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos que aportan dichos factores. En ocasiones es posible añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo. El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate).

16. EXPLICA QUE ES UN MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO:

Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

17.- DESCRIBE LAS CARACTERÍSTICAS DE LA PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS GRAMPOSITIVAS Y GRAMNEGATIVAS, RESALTANDO SUS DIFERENCIAS:


d) Su envoltura celular comprende:1. La membrana citoplasmática2. La pared celular.

e) La pared celular está compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano o mureína (polímero de N-acetil-2-D-glucosamina, unido en orientación ß-1,4 con N-acetil murámico), su grosor le confiere una gran resistencia, las protege de una ruptura osmótica en ambientes acuáticos, les confiere forma y es la responsable de retener el tinte azul oscuro o violeta durante la tinción de Gram.

f) Presentan sólo una membrana lipídica (membrana citoplasmática) y la capa gruesa de peptidoglicano.

Posee dos clases de ácidos teicoicos: ácido lipoteicoico (ácido teicoico unido a un lípido) y ácido teicoico. Son polisacáridos que se unen al ácido N-acetil murámico del peptidoglicano.

La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico.

Ciertas bacterias Gram-positivas, cuando se someten a un régimen de limitación de fosfato son incapaces de sintetizar ácidos teicoicos, pero en su lugar producen ácidos teicurónicos. Los teicurónicos consisten en polímeros aniónicos formados por la alternancia de ácidos urónicos (que tienen grupos -COOH libres) y aminozúcares como la N-acetil-galactosamina.

f) Pueden presentar una capa superficial cristalina denominada capa S o capa superficial (es la parte más externa de la envoltura celular bacteriana) unida a la capa de péptidoglicano.

g) No existe presencia de endotoxinas.


f) Conformada por 4 zonas: 1. La membrana citoplasmática. 2. El espacio periplasmático, ubicado entre la membrana citoplasmática y el peptidoglicano.3. Una fina capa de peptidoglicano. 4. Membrana externa que contiene fosfolípidos, el lipopolisacárido (LPS) y proteínas (proteínas de membrana 6 externa). Esta capa está estrechamente unida al peptidoglicano y se la considera un componente de la pared celular.

g) Su estructura didérmica, es decir, de doble membrana celular (una externa y la otra citoplasmática) está íntimamente ligada al color rosado tenue que presentan ante la tinción de Gram.

h) Presentan dos membranas lipídicas (membrana citoplasmática y membrana externa) entre la fina pared celular de peptidoglicano

Entre la membrana citoplasmática interna y la membrana externa que recubre la pared celular se localiza el espacio periplásmico, relleno de una sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas importantes para la nutrición en estas bacterias. Retienen la safranina.

La membrana externa contiene diversas proteínas; entre ellas, las porinas o canales proteicos que permiten el paso de ciertas sustancias, además de los lipopolisacáridos (LPS), formados por tres regiones: el polisacárido O (antígeno O), una estructura polisacárida central (KDO) y el lípido A (endotoxina).

i) Pueden presentar una capa S que se apoya directamente sobre la membrana externa.

j) Presencia de endotoxinas: el lipopolisacárido (LPS)

18.- ¿CÓMO SE DEFINEN A LAS BACTERIAS COLIFORMES?


Ser aerobias o anaerobias facultativas Ser bacilos Gram negativos; No ser esporógenas; (Si es Gram negativo NO esporula) Fermentan la lactosa a 35°C en menos 48 horas Con producción de ácido y gas

Incluye los géneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter. Durante mucho tiempo se consideraron evidencia de contaminación fecal, pero se ha demostrado que muchos de ellos pueden vivir e incluso crecer en el suelo, el agua y otros ambientes. Actualmente se consideran un excelente indicador de la eficiencia de los procesos de sanitización y desinfección, así como de calidad sanitaria en agua, vegetales y diversos productos procesados. Su determinación se basa generalmente en la capacidad de fermentar lactosa. Se pueden utilizar los métodos del número más probable (NMP ó MPN por sus siglas en inglés) que es un método estadístico en tres etapas y permite el hallazgo de cantidades muy bajas de coliformes. También se pueden detectar por cuenta en placa utilizando agar bilis-rojo violeta (ABRV ó RVBA por sus siglas en inglés) en el cual las colonias fermentadoras de lactosa causan el vire del indicador; pueden detectarse por filtración en membrana (Millipore) e incubación en medios adecuados, por métodos rápidos como Petrifilm y reacciones cromogénicas o fluorogénicas.

Coliformes fecales: dentro del grupo coliforme, los de origen fecal son capaces de fermentar la lactosa también a 44.5 °C; se consideran el indicador más adecuado de contaminación con heces de animales y humanos, por ejemplo en pescados y mariscos, carnes, leche, alimentos RTE, entre otros. La determinación se hace a partir de la segunda etapa (confirmativa) del método de NMP, cultivando en caldo lactosado con incubación a 44.5 °C. Generalmente se combinan las determinaciones, según se requiere.

Escherichia coli: se considera indicador de contaminación fecal reciente, humana o animal en productos como agua embotellada, leche y jugos, alimentos infantiles, y alimentos procesados, en general. Se caracteriza por ser coliforme termotolerante (fermenta lactosa a 44.5°C) que produce indol a partir de triptofano y produce β-glucuronidasa, características que se usan para su identificación en laboratorio, generalmente en la etapa final del NMP o de alguno de los otros métodos, incluyendo Petrifilm.

19.- ¿QUÉ INDICA LA PRESENCIA DE BACTERIAS COLIFORMES EN EL AGUA?

La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro de agua puede estar contaminada, ya sea con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposición. Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo.

20.- ¿CUÁL ES LA IMPORTANCIA CLÍNICA DE LAS BACTERIAS COLIFORMES?

La determinación de la calidad bacteriológica reviste gran importancia en el ámbito de la salud pública ya que permite garantizar la inocuidad (incapacidad para hacer daño) del agua destinada al consumo, evitando así epidemias gastrointestinales, y además de descubrir enfermedades que son comunes al hombre y animales.

21.- ¿TODAS LAS BACTERIAS COLIFORMES SON DE ORIGEN FECAL?

No todas las bacterias coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo necesario desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de emplearlos como indicadores de contaminación. Dentro del grupo de los coliformes totales (que comprende la totalidad del grupo) existe un subgrupo que es el de los coliformes fecales (los de origen fecal).

Véase pregunta número 18.

22.- ¿QUÉ IMPLICACIONES EPIDEMIOLÓGICAS TIENEN LA PRESENCIA DE ENTEROBACTERIAS EN LA MUESTRA DE AGUA QUE COLECTASTE?

Las complicaciones pueden ser que venga una epidemia de E.coli así como también de Salmonella y muy graves que no se puedan controlar.

23.- ¿QUÉ ENFERMEDADES GASTROINTESTINALES PUEDEN TRANSMITIRSE EN EL AGUA CONTAMINADA CON MATERIA FECAL?

Enfermedades trasmitidas por el agua: Cólera, Fiebre Tifoidea y Paratifoidea, Disenterías, Poliomelitis, Hepatitis, Salmonelosis, Cryptosporidiosis, Gastroenteritis.

Enfermedades con base en el agua: Ascariasis, Clonorquiasis, Dracunculosis, Paraginimiasis, Esquistosomiasis.

Enfermedades vectoriales relacionadas con el agua: Dengue, Filariasis, Paludismo, Oncocercosis, Fiebre del Valle del Rift (FVR).

24.- ¿QUÉ SIGNIFICAN LAS SIGLAS IMVIC?

I: Indol M: Rojo de metilo V: V-P (Voges-Proskauer) i C: Citrato de Simmons

25.- ¿CUÁL ES EL OBJETIVO DE REALIZAR LAS PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN IMVIC?

Las bacterias pertenecientes a la familia enterobacteriaceae, pueden identificarse a través de una serie de pruebas bioquímicas, que permiten determinar la presencia o ausencia de ciertas enzimas y a veces incluso permiten determinar la

existencia de una secuencia metabólica. Con este fin se han desarrollado diversos esquemas de clasificación, uno de los más conocidos y utilizados corresponde al IMVIC que se desarrolló para clasificar especies de la familia antes mencionada y correspondientes al grupo de bacterias coliformes (bacterias aeróbicas o anaeróbicas facultativas, Gram (-), bacilares, no esporógenas que producen ácido y gas durante la fermentación de la lactosa).

26.- ¿POR QUÉ RAZÓN NO ES RECOMENDABLE UTILIZAR EL ASA BACTERIOLÓGICA PARA REALIZAR LA PRUEBA DE LA OXIDASA?



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