cosas sobre cisteina npagfuncionalizadas

1

FUNCIONALIZACIN DE NANOPARTCULAS DE PLATA (AgNP) CON

L-CISTENA

YULY ANDREA PRADA VARGAS

UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA DE QUMICA

BUCARAMANGA

2012

2

FUNCIONALIZACIN DE NANOPARTCULAS DE PLATA (AgNP)

CON L-CISTENA

YULY ANDREA PRADA VARGAS

Trabajo de grado presentado como requisito

Para optar el ttulo de:

Qumica

DIRECTORES

ENRIQUE MEJA OSPINO, Qumico, Ph.D.,

RODRIGO GONZALO TORRES SAZ, Qumico, Ph.D.,

CO-DIRECTORA

JOHANNA ALEXANDRA GMEZ SANTOS, Qumica, M.Sc.,

UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA DE QUMICA

BUCARAMANGA

2012

4

ENTREGA DE TRABAJOS DE GRADO, TRABAJOS DE INVESTIGACION O TESIS Y AUTORIZACIN DE SU USO A

FAVOR DE LA UIS

Yo, YULY ANDREA PARDA VARGAS, mayor de edad, vecino de Bucaramanga, identificado con la Cdula de Ciudadana No. 1.098.622.374 de Bucaramanga, actuando en nombre propio, en mi calidad de autor del trabajo de grado, del trabajo de investigacin, o de la tesis denominada(o):

FUNCIONALIZACIN DE NANOPARTCULA DE PLATA (AgNP) CON L-CISTENA Hago entrega del ejemplar respectivo y de sus anexos de ser el caso, en formato digital o electrnico (CD o DVD) y autorizo a LA UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER, para que en los trminos establecidos en la Ley 23 de 1982, Ley 44 de 1993, decisin Andina 351 de 1993, Decreto 460 de 1995 y dems normas generales sobre la materia, utilice y use en todas sus formas, los derechos patrimoniales de reproduccin, comunicacin pblica, transformacin y distribucin (alquiler, prstamo pblico e importacin) que me corresponden como creador de la obra objeto del presente documento. PARGRAFO: La presente autorizacin se hace extensiva no slo a las facultades y derechos de uso sobre la obra en formato o soporte material, sino tambin para formato virtual, electrnico, digital, ptico, uso en red, Internet, extranet, intranet, etc., y en general para cualquier formato conocido o por conocer. EL AUTOR ESTUDIANTE, manifiesta que la obra objeto de la presente autorizacin es original y la realiz sin violar o usurpar derechos de autor de terceros, por lo tanto la obra es de su exclusiva autora y detenta la titularidad sobre la misma. PARGRAFO: En caso de presentarse cualquier reclamacin o accin por parte de un tercero en cuanto a los derechos de autor sobre la obra en cuestin, EL AUTOR / ESTUDIANTE, asumir toda la responsabilidad, y saldr en defensa de los derechos aqu autorizados; para todos los efectos la Universidad acta como un tercero de buena fe. Para constancia se firma el presente documento en dos (02) ejemplares del mismo valor y tenor, en Bucaramanga , a los (27) das del mes de Febrero de Dos Mil Doce 2012 . EL AUTOR / ESTUDIANTE:

(Firma) .

Nombre YULY ANDREA PRADA VARGAS

5

...Verde, come quando si va in bicicletta e il vento ti colpisce in faccia...blu come il mare...

6

AGRADECIMIENOS

Entrego mis agradecimientos ms sinceros a las personas que han motivado mi crecimiento personal, mi formacin acadmica y profesional.

A mis padres, Israel y Mariela, por su amor inagotable, su apoyo incondicional y por desear siempre para m y para mis hermanos las cosas ms grandes y hermosas.

A mis hermanos, Javier y Anglica, por su afecto y su presencia.

A mi abuela Teresa, por todas sus oraciones, por su comprensin Por creer siempre en m. Tambin a mi ta Gloria, por todo su cario y por motivar desde muy pequea mi crecimiento intelectual.

Ao Meu Cu Verde e Azul, pelas coisas maravilhosas Pela confiana e tudo seu amor. Abrigada, porque voc est presente em os momentos mais importantes.

A los directores de esta investigacin:

Doctor Enrique Meja Ospino, por todas sus enseanzas y conocimiento transmitido; por su apoyo y disposicin en la realizacin de este trabajo; por la admiracin que despierta al ser un gran ser humano y gran cientifico.

Doctor Rodrigo Torres Saez, por su buena energa y por todos sus aportes en esta investigacin; por ser una persona con grandes virtudes y una labor cientifica inmensamente grande.

A Johanna Gmez, por codirigir este trabajo; por guiarme en la busqueda de soluciones cuando la metodologa se tornaba rocosa y escarpada.

Al Laboratorio de Investigacin Rinaldi, Universidad de Puerto Rico, Recinto de Mayagez. Por los anlisis por Microscopa de Transmisin Electrnica.

A mis compaeras del Laboratorio de Espectroscopa Atmica y Molecular: Lelys Vargas y Lucia Novoa por sus aportes en la sntesis de nanopartculas.

7

TABLA DE CONTENIDO

Pg.

INTRODUCCIN.15

1. CONCEPTOS GENERALES ............................................................. 17

1.1 NANOPARTCULAS .................................................................... 17

1.2 MTODOS DE OBTENCIN DE NANOPARTCULA METLICAS ...................................................................................... 17

1.2.1 Reduccin qumica de una sal metlica ...................... 17 1.2.2 Sntesis por mtodos de descomposicin .................... 18 1.2.3 Sntesis por micelas ..................................................... 19 1.2.4 Sntesis electroqumica ................................................ 19

1.3 ESTABILIDAD DE NANOPARTCULAS ...................................... 20 1.4 RESONANCIA DEL PLASMN SUPERFICIAL ........................... 22 1.5 POTENCIAL ZETA DE NANOPARTCULAS ............................... 23 1.6 NANOPARTCULAS METLICAS CONJUGADAS ..................... 24 1.7 L-CISTENA ................................................................................. 25 1.8 TCNICAS DE CARACTERIZACIN .......................................... 26

1.8.1 Espectroscopa ultravioleta visible (UV-Vis) ............... 26 1.8.2 Microscopa de transmisin electrnica (TEM) ........... 26 1.8.3 Dispersin de luz dinmica (DLS) ............................... 27 1.8.4 Medida de potencial zeta () ........................................ 27 1.8.5 Espectroscopa infrarroja (IR)28

2. ESTADO DEL ARTE ......................................................................... 29

3. DESARROLLO EXPERIMENTAL ..................................................... 32

3.1 PREPARACIN DE AgNP ........................................................... 33 3.2 CARACTERIZACIN DE AgNP................................................... 34

3.2.1 Espectroscopa ultravioleta visible ................................ 34 3.2.2 Dispersin de luz dinmica ........................................... 34

8

3.3 FUNCIONALIZACIN DE AgNP CON L-CISTENA .................... 36 3.3.1 Estudio del efecto de la concentracin de L-cistena .... 36 3.3.2 Estudio del efecto de la relacin volumtrica ............... 37 3.3.3 Estudio del efecto del pH .............................................. 37 3.3.4 Estudio del tiempo de interaccin Ag-Cys ..................... 39

4. RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS .............................. 40

4.1 CARACTERIZACIN DE AgNP .............................................. 40 4.2 FUNCIONALIZACIN .............................................................. 43

4.2.1 Anlisis UV-Vis del efecto de la concentracin de L-cistena ................................................................. 43

4.2.2 Anlisis UV-Vis del efecto de la relacin volumtrica y el pH ........................................................ 43

4.2.3 Anlisis DLS del efecto de la relacin volumtrica y el pH ........................................................ 53

4.2.4 Anlisis UV-Vis del tiempo de interaccin ..................... 54 de agregados Ag-Cys

5. CONCLUSIONES .............................................................................. 57

RECOMENDACIONES ................................................................................................... 59

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS ........................................................................... 60

ANEXOS .............................................................................................................................. 64

9

LISTA DE FIGURA

Pg

Figura 1. Estabilizacin de NP metlicas. 21

Figura 2. Representacin del potencial zeta de una AgNP. 24

Figura 3. Esquema de metodologa implementada en la

funcionalizacin de AgNP con L-cistena. 32

Figura 4. A) Montaje de sntesis. B) Coloide de plata formado 33

Figura 5. A) Celda capilar para medicin de potencial zeta B) Celda para medicin de tamao de partcula. 35 Figura 6. Parmetros estudiados en la funcionalizacin Ag-Cys. 36

Figura 7. Espectro UV-Vis de Coloide de plata sintetizado 40

Figura 8. Microfotografa TEM de AgNP sintetizadas. 41

Figura 9. Potencial zeta del coloide de plata sintitezado. 41

Figura 10. Tamao de partcula del coloide de plata sintetizado. 42

Figura 11. Cambio de coloracin del coloide en la funcionalizacin con L-Cys 10mM en relacin 1:2 a diferentes valores de pH. 44 Figura 12. Espectro UV-Vis. Funcionalizacin AgNP con L-cys 10mM a pH 1.5 y diferentes relaciones volumtricas. 45 Figura 13. Espectro UV-Vis. Funcionalizacin AgNP con L-cys 10mM a pH 3.0 y diferentes relaciones volumtricas. 46 Figura 14. Espectro UV-Vis. Funcionalizacin AgNP con L-cys 10mM a pH 6.0 y diferentes relaciones volumtricas. 47 Figura 15. Espectro UV-Vis. Funcionalizacin AgNP con L-cys 10mM a pH 7,5 y diferentes relaciones volumtricas. 48

Figura 16. Espectro UV-Vis. Funcionalizacin AgNP con L-cys 10mM a pH 8.6 y diferentes relaciones volumtricas. 49

10

Figura 17. Espectro UV-Vis. Funcionalizacin AgNP con L-cys 10mM a pH 11.0 y diferentes relaciones volumtricas. 50

Figura 18. Espectro UV-Vis. Funcionalizacin AgNP con L-cys 10mM a pH 1.5 en relacin volumtrica 1:2. 54

Figura 19. Espectro UV-Vis. Funcionalizacin AgNP con L-cys 10mM a pH 3.0 en relacin volumtrica 1:2. 55 Figura 20. Espectro UV-Vis. Funcionalizacin AgNP con L-cys 10mM a pH 11.0 en relacin volumtrica 1:2. 56

Figura 21. Esquema forma inica de la L-cistena en funcin del pH. 64

Figura 22. Espectro UV-Vis funcionalizacin Ag-Cys con L-Cys [0,5mM] a diferentes relaciones volumtricas. 65 Figura 23. Espectro UV-Vis funcionalizacin Ag-Cys con L-Cys [1mM] a diferentes relaciones volumtricas. 66 Figura 24. Espectro UV-Vis funcionalizacin Ag-Cys con L-Cys [3mM] a diferentes relaciones volumtricas. 67 Figura 25. Espectro UV-Vis funcionalizacin Ag-Cys con L-Cys [5mM] a diferentes relaciones volumtricas. 68 Figura 26. Espectro UV-Vis funcionalizacin Ag-Cys con L-Cys [10mM] a diferentes relaciones volumtricas. 69

11

LISTA DE TABLAS

Pg

Tabla 1. Condiciones de medida de tamao de partcula y potencial zeta. 35 Tabla 2. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cys [10mM] a pH 1,5 y diferentes relaciones volumtricas. 45 Tabla 3. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cys [10mM] a pH 3,0 y diferentes relaciones volumtricas. 46 Tabla 4. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cys [10mM] a pH 6,0 y diferentes relaciones volumtricas. 47 Tabla 5. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cys [10mM] a pH 7,5 y diferentes relaciones volumtricas. 48 Tabla 6. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cys [10mM] a pH 8,6 y diferentes relaciones volumtricas. 49 Tabla 7. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cys [10mM] a pH 11,0 y diferentes relaciones volumtricas. 50 Tabla 8. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cys [0,5mM] en diferentes relaciones volumtricas a pH neutro. 66 Tabla 9. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cys [1mM] en diferentes relaciones volumtricas a pH neutro. 67 Tabla 10. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cys [3mM] en diferentes relaciones volumtricas a pH neutro. 68

Tabla 11. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cys [5mM] en diferentes relaciones volumtricas a pH neutro. 69

Tabla 12. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cys [10mM] en diferentes relaciones volumtricas a pH neutro. 70

Tabla 13. Anlisis por DLS y potencial zeta Ag-Cys 10mM pH 1,5. 71

12





Tabla 18. Anlisis por DLS y potencial zeta. Ag-Cys 10mM pH 11,0. 73

13

RESUMEN

TTULO: FUNCIONALIZACIN DE NANOPARTCULAS DE PLATA (AgNP) CON L-CISTENA*

AUTORA: YULY ANDREA PRADA VARGAS**

PALABRAS CLAVES: NANOPARTCULAS DE PLATA, FUNCIONALIZACIN, L-CISTENA, ENSAMBLE DE NANOPARTCULAS

El presente trabajo se inici con la preparacin de AgNP por reduccin qumica de nitrato de plata usando como reductor el borohidruro de sodio, por medio de esta sntesis se obtuvo un sistema coloidal con distribucin estrecha de tamaos, alrededor de 13 nm de dimetro hidrodinmico , de forma aproximadamente esfrica y termodinmicamente estables.

Las AgNP fueron funcionalizadas con L-cistena, un aminocido apolar de cadena corta con actividad ptica. Para realizar la conjugacin efectiva de las AgNP con este aminocido fue necesario el estudio de las condiciones experimentales requeridas en dicho proceso, como el pH y la concentracin molar del aminocido, la relacin volumtrica y el tiempo de interaccin. Tanto las AgNP preparadas como los agregados, Ag-Cys, producto de la funcionalizacin fueron estudiados y caracterizados mediante tcnicas microscpicas y espectroscpicas como: Microscopia de Transmisin Electrnica (TEM), tcnica que permiti conocer la forma, tamao y textura de las NP preparadas; Dispersin de Dinmica de la Luz (DLS) por medio de la cual se medi el tamao de las nanopartculas y adicionalmente se realizaron medidas del potencial zeta de los sistemas formados. La Espectroscopa Ultravioleta Visible (Uv-Vis) fue empleada ya que es una tcnica til para conocer la longitud de resonancia plasmnica de las AgNP y observar los efectos batocrmicos producto de las interacciones Ag-Cys. De los estudios de estabilidad en el tiempo, se verific la baja estabilidad de estos nuevos sistemas debido a la perturbacin que sufre el sistema al adicionarse otros iones provenientes del ajuste de pH y de la misma funcionalizacin.

__________________________

*Trabajo de grado

** Facultad de Ciencias. Escuela de Qumica. Directores: Enrique Meja Ospino, Ph.D.,

Rodrigo Torres Saz, Ph.D., Codirectora Johanna Alexandra Gmez, M.Sc.

14

SUMMARY

TITLE: Functionalization of silver nanoparticles (AgNP) with L-cysteine*

AUTHOR: YULY ANDREA PRADA VARGAS**

KEYWORDS: Silver nanoparticles, Functionalization, L-cysteine, Nanoparticles assembly This work began with the preparation of AgNP by chemical reduction of silver nitrate used as a reducing agent sodium borohydride. By means of this synthesis was obtained a colloidal system with narrow size distribution around 13 nm hydrodynamic diameter of approximately spherical shape and thermodynamically stable. The AgNP were functionalized with L-cysteine, an apolar amino acid short chain optical activity. Effective to perform the conjugation of AgNP with this amino acid was necessary to study the experimental conditions required in this process, such as pH and the molar concentration of amino acid, the volumetric ratio and the interaction time. Both AgNP prepared as aggregates, Ag-Cys, resulting from the functionalization were studied and characterized by microscopic and spectroscopic techniques such as transmission electron microscopy (TEM) technique yielded information on the shape, size and texture of NP prepared; Dynamic scattering of Light (DLS) through which mediated the size of the nanoparticles and further measurements were made of the zeta potential of the systems formed. The Ultraviolet Visible Spectroscopy (UV-Vis) was used because it is a useful technique to know the length of the plasmon resonance and observe the effects AgNP bathochromic product of interactions Ag-Cys. Studies of stability over time, we verified the low stability of these new systems due to the disruption that the system suffers from other ions by adding the adjustment of pH and the same functionalization. ________________________

* Degree work

** Faculty of Science. School of Chemistry. Directors: Enrique Mejia Ospino, Ph.D., Rodrigo

Torres Saez, Ph.D., Codirector: Johanna Alexandra Gmez, M.Sc.

15

INTRODUCCIN

La nanotecnologa es un campo de investigacin que se ha desarrollado

desde la primera mitad del siglo XX, gracias a la invencin de materiales

nanoscpicos, fabricados a partir de metales como: oro, plata, cobre, zinc,

platino, hierro, y tambin de compuestos orgnicos como derivados

aromticos y polmeros. Es sorprendente observar como estos agregados

metlicos no pueden ser tratados como el material macroscpico de la

misma composicin, debido a que en las nanopartculas, los electrones de

valencia se disponen en estados discretos, como consecuencia de este

confinamiento, los electrones ocupan un nmero finito de estados

energticos cuantizados; de esta manera, se pueden obtener nanopartculas

de un mismo metal con propiedades pticas, electromagnticas, qumicas, y

catalticas diferentes, ya que stas cualidades varan de acuerdo con su

tamao y morfologa, dando lugar a una amplia gama de aplicaciones en

campos como la espectroscopia, la bioqumica, la fisicoqumica, las ciencias

ambientales, la ciencia de nuevos materiales y la medicina; es por sta razn

que las nanopartculas tienen el papel ms importante en la innovacin

nanotecnolgica.

Esa dependencia de las nanopartculas, de su tamao y forma, ha llevado a

la ciencia a indagar e investigar en los mtodos de obtencin, que incluyen:

la sntesis qumica, la sntesis electroqumica, reduccin de compuestos

organometlicos, mtodos de descomposicin y la sntesis por

microemulsin, todos estos procedimientos encaminados al obtencin de NP

con caractersticas especificas1,2. Por otra parte, las NP se han convertido,

en una fuente de soluciones a problemas que han aquejado a la comunidad

cientfica.

1 A. ROUCOUX et al., Chem. Rev. (2002), Vol. 102, p. 3757-3778 2 S. GNTER., Nanoparticles: From theory to application (2004), Wiley.

16

Las nanopartculas de plata (AgNP) especialmente, poseen alta actividad

antimicrobiana por lo cual son utilizadas en tratamientos mdicos para

combatir bacterias causantes de enfermedades y clulas infectadas con

virus3, 4; su capacidad de difusin y tamao disminuido, permiten el paso

facilitado a travs de la membrana celular, por lo cual tambin son utilizadas

como transportadores de frmacos y molculas biolgicamente activas al

interior de las clulas, un sitio que para molculas de gran peso molecular y

mayor volumen es inaccesible5.

Las nanopartculas son comnmente usadas en la identificacin de otros

analitos por tcnicas espectroscpicas, debido a la intensificacin de las

seales que se obtienen al darse la interaccin. De este modo, se da paso a

otro campo de exploracin bastante importante para la ciencia: la

funcionalizacin de las NP metlicas con molculas orgnicas; en especial,

aquellas con grupos funcionales como alcoholes, steres, aminas, cidos,

tioles y tiosteres, y ms importante an, la conjugacin de NP con polmeros

y molculas biolgicas como: protenas, pptidos, aminocido y cidos

nuclecos; conduciendo a la existencia de millones de acoplamientos y la

aparicin de nuevos materiales con propiedades nicas, que se traduce en

la investigacin constante y exhaustiva alrededor de este campo6,7.

3 C. BAKER et al., Journal of Nanoscience and Nanotechnology. (2005), Vol. 5(2), p. 244-249 4 J.S. KIM et al., Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine. (2007), Vol. 3(1), p. 95101 5 S. JAISWALA et al., Journal of Antimicrobial Agents. (2010), Vol. 36 (3), p. 280-283. 6 XIA OMING DOU et al., Society for Applied Spectroscopy. (1999), Vol. 53(11), p. 1440-1441. 7 S.K. BASIRUDDIN et al., J. Phys. Chem. C. (2010), Vol. 114, p. 11009-11017.

17

1. CONCEPTOS GENERALES

1.1 NANOPARTCULAS De acuerdo con la definicin utilizada por la IUPAC (International Union of

Pure and Applied Chemistry) 8 , una nanopartcula es una partcula cuyo

tamao se mide en nanmetros, a menudo restringida a las partculas de

tamao nano, es decir, con un dimetro entre 1 a 100 nm. Las

nanopartculas pueden formar sistemas coloidales al estar dispersas en un

solvente.

1.2 MTODOS DE OBTENCIN DE NANOPARTCULAS MTALICAS Existen varios mtodos para la preparacin de nanopartculas; en el caso de

NP metlicas se pueden citar:

1.2.1 Reduccin qumica de una sal metlica: Uno de los mtodos ms antiguos y ms empleado para la preparacin de las nanopartculas, es la

reduccin qumica de sales metlicas en presencia de agentes estabilizantes

en ausencia de stos. El mecanismo de formacin de nanopartculas se

basa primordialmente, en la reduccin de la sal metlica al tomo cero

valente y seguidamente, estos tomos actan como centros de nucleacin

dando lugar a la formacin de clusters cuyo crecimiento continuar a

medida que se sigan agregando los tomos, formndose as partculas de

mayor tamao y diversas formas9.

Las ventajas del mtodo de reduccin qumica son su reproducibilidad y la

posibilidad de obtener coloides monodispersos con una distribucin estrecha

en el tamao de la partcula; logrando manipular desde la sntesis misma la 8 J.H. DUFFUS et al. IUPAC: Glossary Of Terms Used In Toxicology, 2a Edicin. Pure appl. Chem. (2007) Vol. 79 (7), p. 11531344 9 . SIFONTES et al., Quim Nova (2010), Vol. 33(6), p. 1266-1269.

18

morfologa de las NP. Adems es un procedimiento de bajo costo y de fcil

ejecucin.

Los agentes reductores usados con mayor frecuencia van desde los cidos

orgnicos, alcoholes, polialcoholes, aldehdos, azcares hasta agentes

inorgnicos; donde la efectividad de la sntesis depende en gran medida en

el poder reductor de estos10.

1.1.2 Sntesis por mtodos de descomposicin: Estos mtodos se basan en la descomposicin de precursores metlicos, generalmente complejos

metlicos con grupos carbonilos que se encuentran disueltos en un solvente

orgnico. El mtodo sonoqumico inicia con la formacin, seguida del

crecimiento y colapso de burbujas dentro de un lquido; el colapso de estas

burbujas calienta el medio hasta alcanzar temperaturas muy altas, dando

lugar a que los componentes organometlicos se descompongan

rpidamente, liberando tomos metlicos que en presencia de agentes

estabilizantes se aglomeran y forman partculas nanomtricas11.

La sntesis sonoqumica tiene como dificultad la produccin de

nanopartculas amorfas y polidispersas.

Otro proceso es, la descomposicin fotoqumica la cual consiste en la

reduccin de sales y complejos metlicos por accin de la radiacin de luz

ultravioleta visible, este mtodo puede combinarse con la adicin de

estabilizantes como polmeros o agentes formadores de micelas, ya que en

ausencia de estos se forman NP altamente inestables12.

Por ltimo, se encuentra un mtodo de descomposicin basado en el

calentamiento progresivo de xidos metlicos a altas temperaturas en

presencia de solventes orgnicos y surfactantes, por el cual se originan NP

con una amplia dispersin de tamaos. Para favorecer la monodispersin 10 P.C. LEE AND D. MEISEL., J. Phys. Chem. (1982), Vol. 86, p. 3391-3395 11 S. KENNETH et al., J. Am. Chem. Soc. (1996), Vol. 118, p. 11960-11961 12 TAPAN K., JACS Comunication, (2004)

19

es necesario modular el tiempo de exposicin y la temperatura, pero tambin

la concentracin, la proporcin entre reaccionantes y en algunos casos la

adicin de semillas ms pequeas de NP13.

1.2.3 Sntesis por micelas: Es una tcnica que tambin se conoce como microemulsiones que consiste en la utilizacin de gotas de agua sostenidas

en una fase orgnica, donde por accin de un agente surfactante, se forma

una especie de reactor micelar, dentro del cual se lleva a cabo la reduccin

de sales metlicas previamente disueltas. Este mtodo tiene la ventaja que

el crecimiento de la nanopartcula est dado por la disponibilidad de la sal

precursora dentro de la gota, que a su vez se encuentra limitada por el

volumen de la micela, este parmetro puede ser controlado mediante la

relacin agua-surfactante de la mezcla. La microemulsin resulta ser un

mtodo novedoso que ha permitido la obtencin de nanopartculas

monodispersas y con estructuras conocidas como ncleo-coraza. Sin

embargo es un mtodo muy costoso, ya que antes de dar inicio a la sntesis

de la NP, es necesario un procedimiento de fraccionamiento de las micelas

formadas, para escoger los tamaos adecuados de stas14.

1.2.4 Sntesis electroqumica: Este proceso consiste en la preparacin de agregados metlicos en donde la fuente es una lmina de metal. Esta

lmina se dispone en una celda electroqumica como nodo; en el nodo se

generan los cationes metlicos que se mueven hacia el ctodo formndose

tomos cero valentes, que se agregan sobre el ctodo o se precipitan,

generando NP metlicas que se dispersan en la solucin electroltica; el

control de la densidad de corriente hace posible la versatilidad de tamaos

13 S. MARTNEZ et al., Aci. (2011), Vol. 2(2), p. 47-57 14 S. BUENDIA ACEVES., Tesis para obtener el grado de Maestro en Ciencia en Ingeniera Qumica. Instituto Politcnico Nacional, Mxico. 2009

20

que pueden obtenerse mediante esta tcnica. Los primeros en implementar

esta sntesis fueron Reetz et al,.

1.3 ESTABILIDAD DE NANOPARTCULAS La estabilidad de las NP en suspensin, depende del carcter liofbico del

coloide, es decir, en su mayora las NP obtenidas son termodinmicamente

inestables lo cual lleva a la separacin de las fases por coagulacin y

agregacin de las nanopartculas. Sin embargo la velocidad de separacin

de las fases presentes en la suspensin puede ser tanto rpida como

infinitamente lenta. sta tendencia de los sistemas coloidales ha sido

descrita en la teora clsica llamada DLVO por las iniciales de sus

descubridores (Derjaguin, Landau, Verweert y Overbeek)15; la cual plantea

que la estabilidad de los coloides depende de la energa potencial total,

UDLVO, que est dada en primer lugar, por las fuerzas de repulsin

electrosttica, en segundo lugar por las fuerzas atractivas de Van der Waals

y finalmente por la energa potencial derivada del solvente, que est

relacionada estrechamente con su constante dielctrica, sin embargo sta

ltima contribucin es depreciable para la mayora de sistemas; sta teora

predice sustancialmente la estabilidad de los coloides cuando se trata de NP

en sistemas estabilizados por cargas electrostticas. Sin embargo, no toma

en consideracin el efecto mayormente significativo de la estabilizacin

estrica, que tiene lugar cuando en el medio de sntesis se incorporan

agentes polimricos y surfactantes de alto peso molecular, que se extienden

desde la superficie de la nanopartcula creando una envoltura alrededor de

ella, hasta una distancia donde la fuerza atractiva de Van der Waals ya no es

lo suficientemente grande, y por tanto suprime la atraccin entre partculas,

15 I. LEVINE. Fisicoqumica: Qumica de superficies. Vol. 2a Edicin, editorial McGraw-Hill. Madrid (1996), p. 379405

21

de este modo, se hace posible la estabilizacin del coloide dejando de lado

las fuerzas de repulsin electrosttica16,17.

Estos dos tipos de estabilizacin son ilustrados a continuacin en la figura 1.

Figura 1. Estabilizacin de NP metlicas. (a) Estabilizacin por fuerzas electrostticas. (b) Estabilizacin estrica.

Muchos investigadores han reportado el uso de estos agentes estabilizantes

adicionados en la sntesis de NP, ente los mas reportados se encuentran: el

polivinil alcohol (PVA), polietilienglicol (PEG), duodecilsulfoxido de sodio

(SDS) y bromuro de celtiltrimetilamonio (CTAB), entre otros. La naturaleza

qumica de estos agentes puede ser catinica, aninica y no-inica, la cual

vara de acuerdo a la carga superficial en las nanopartculas metlicas y con

la finalidad de la sntesis18.

16 J. ISRAELACHVILI., Intermolecular and Surface Forces. 2 Ed. San Diego (CA): Academic Press. (1992) 17 SOMASUNDARAN et al., In Concentrated Dispersions ACS Symposium Series; American Chemical Society: Washington, DC. (2004) 18 O. V. DEMENTEVA et al., Colloid Journal. (2008), Vol. 70(5), p. 561573

(a) (b)

22

1.4 RESONANCIA DEL PLASMN SUPERFICIAL El color visible que se percibe de las suspensiones coloidales, depende del

tamao de las nanopartculas, y es debido a lo que se conoce como

plasmn de superficie, definido por Aroca19 como los cuantos, producto de

las oscilaciones de cargas superficiales, producidas por un campo elctrico

externo. El fenmeno del plasmn se observa tanto en pelculas ultra

delgadas como en nanopartculas y se relaciona estrechamente con la

cantidad de superficie. El primero en hacer una descripcin terica del

plasmn de superficie en las nanopartculas fue Mie20, quien predijo para las

NP, la absorcin y dispersin en la longitud visible, como suma de las

oscilaciones magnticas y elctricas.

Las observaciones espectroscpicas de NP se correlacionan, en general,

con la teora de Mie, haciendo algunos ajustes relativos a la dispersin de

tamaos y el ndice de refraccin del solvente. Por ejemplo, la dispersin en

el tamao de las partculas reales (en oposicin a las calculadas) produce un

ensanchamiento en la banda de absorcin al visible.

El mximo de absorcin del plasmn para las AgNP en el desarrollo

experimental se ubica en un rango entre 380-400 nm para tamaos entre 1-

50 nm esta longitud de onda corresponde al color violeta, y es la luz que las

NP absorben. La luz que se transmite hace que el coloide se vea de un color

amarillo muy llamativo. Cuando las AgNP se agregan, ese mximo de

absorbancia se desplaza hacia longitudes de onda ms largas, es decir tiene

lugar un comportamiento batocrmico; es por esta razn que el plasmn de

superficie es de vital importancia para la caracterizacin de nanopartculas

por anlisis en el ultravioleta visible.

19 R.F. AROCA R.F., John Wiley & Sons. (2006), p. 35-71 20 G. MIE., Ann. Phys. (1908), Vol. 25(3), p. 377445

23

1.5 POTENCIAL ZETA DE NANOPARTCULAS Las nanopartculas de plata con tamaos entre 1-100 nm, son las que han

recibido mayor atencin debido al amplio rango de aplicaciones, ya que el

rea superficial del plasmn aumenta en la medida en que disminuye el

tamao. Las nanopartculas pueden tomar mltiples formas, sin embargo las

preparaciones ms comunes son la que conllevan a formas esfricas, ya que

resulta ms fcil la prediccin de su comportamiento frente a los fenmenos

de luz mediante la teora clsica propuesta por Mie, como se ha comentado

anteriormente.

En general las partculas dispersas en un sistema acuoso adquieren una

carga superficial. En el caso de las AgNP sta medida, conocida como

potencial zeta, se encuentra dada por los tomos de plata no reducidos que

se ubican superficialmente en la nanopartcula, y por la adsorcin de los

iones negativos que circundan en la fase dispersante. sta carga intrnseca

de la partcula ms los iones fijos adsorbidos conforman lo que se conoce

como la doble capa elctrica. El espesor de sta doble capa es, lo que se

conoce en la teora clsica como la longitud de Debye, las cargas que

quedan por dentro de esta longitud no ejercen fuerza efectiva, por eso se

habla de apantallamiento. Las cargas superficiales modifican la distribucin

de los iones presentes, lo que da origen a una zona alrededor de la partcula

que es elctricamente diferente al medio de la suspensin. Esta zona a su

vez se divide en dos partes: una capa interior atrada fuertemente a la

partcula producto de los tomos Ag+, y que se mueve junto con la partcula,

llamada capa de Stern, y una regin exterior, que se hace difusa a medida

que aumenta la distancia desde la superficie formada por los iones negativos

absorbidos, el lmite de sta es lo que se conoce como plano de

deslizamiento o plano de corte hidrodinmico y corresponde al final de la

doble capa elctrica (Figura 2). El potencial zeta () se mide en Milivoltios

(mV) y su magnitud se correlaciona con la estabilidad coloidal; las partculas

con un alto potencial zeta, ya sea positivo o negativo, se repelern unas con

24

otras. Los valores reportados para AgNP en medio acuoso varan entre < -

30 mV > +30 mV, lo cuales son considerados ptimos21,22.

Figura 2. Representacin del potencial zeta de una AgNP. Se observa la zona interior de iones Ag+ fuertemente atrados y la zona exterior difusa de

iones negativos absorbidos. [Tomado de A. Guerrero., Santiago de Chile,

2008]

1.6 NANOPARTCULAS METLICAS CONJUGADAS Para otorgar funcionalidad o estabilidad a las NP, stas pueden conjugarse

con diversos compuestos orgnicos. El tamao significativamente pequeo

de estos agregados les confiere propiedades de difusin y de movilidad de

gran inters en varios campos de investigacin. Para el caso de las AgNP,

se ha promovido la investigacin y la bsqueda de aplicaciones biomdicas

21 I. OLMEDO., Memoria para optar al ttulo de Qumico-Farmacutico. Universidad de Chile. Santiago, Chile (2007) 22 Malvern Instruments. Zeta Potential Theory Zetasizer Nano Series User Manual. Worcestershire, Inglaterra. (2004)

25

ya que, poseen actividad antibacteriana. En tales experimentos sobresale la

conjugacin de molculas orgnicas con grupos funcionales caractersticos

como lo son los aminocidos, tioles, tiosteres, cidos nucleicos, alcoholes y

otras molculas con actividad biolgica23.

Se ha descrito que las nanopartculas metlicas, al ser sometidas a un

campo magntico oscilante, pueden absorber energa de forma eficaz,

disipando dicha energa solo al medio local, es decir, slo a lo que est

directamente unido a la nanopartculas. Partiendo de esto, los conjugados

de nanopartculas han sido usados en tratamientos de enfermedades

causadas por bacterias y para combatir virus destruyendo las clulas

directamente afectadas24.

1.7 L-CISTEINA La L-cistena es una aminocido de cadena corta, no cargado a pH neutro, el

cual posee una cadena lateral apolar debido a la presencia de un grupo

sulfhdrilo (-SH). El sulfhdrilo altamente nuclefilo es quien le confiere las

propiedades qumicas y reaccionantes a la cistena. Este aminocido no

esencial (que los organismos vivos pueden sintetizarlo) es muy importante

en los procesos metablicos que tienen lugar en nuestro organismo ya que

forma una de las estructuras ms importantes, como lo es el glutation, un

tripptido constituido por glicina, cido glutmico y cistena, este pptido es el

encargado de ayudar en las tareas de desintoxicacin del hgado, siendo

principalmente el grupo SH proveniente de la cistena el encargado de

atrapar los radicales libres, metales pesados y dems productos secundarios

originados en procesos hormonales y metablicos para facilitar su

eliminacin. La cistena por s misma, en su forma modificada N-

acetilcistena (NAC) o formando estructuras peptdicas, tiene propiedades

23 Q.A. PANKHURST et al. J Phys D: Appl Phys. (2003), Vol. 36(13), p. 167-181 24 H. WEI et al. Nanotechnolgy. (2007), Vol. 18, p. 175610

26

antioxidantes y cumple un papel muy importante en la prevencin de

enfermedades cardacas dado que evita la oxidacin del colesterol12.

1.8 TCNICAS DE CARACTERIZACIN Dadas las propiedades pticas y electrnicas de las NP y el comportamiento

del plasmn superficial, las NP y sus conjugados pueden ser estudiados

haciendo uso de tcnicas espectroscpicas y microscpicas; de ellas, las

que se mencionan a continuacin fueron consideradas y utilizadas en el

desarrollo del presente trabajo.

1.8.1 Espectroscopa ultravioleta visible (UV-Vis): La espectroscopa UV- Vis, permite tener un espectro de la regin electromagntica comprendida

entre longitudes de onda de 350 a 800 nm, dando lugar a las transiciones

que involucran a los electrones de valencia. Esta regin espectral, es la

nica detectable por el ojo humano, en el cual las soluciones coloreadas

absorben selectivamente, como producto de las transiciones electrnicas de

ms baja energa25.

1.8.2 Microscopa de transmisin electrnica (TEM): Este anlisis se realiza en un microscopio, que utiliza un haz de electrones para visualizar un

objeto; la imagen es producto de la interaccin, los electrones

termoinizados de bajas longitudes de onda atraviesan los tomos del

material; la pantalla que conforma este equipo est recubierta de pintura de

fluoruros, que se ilumina al ser bombardeada por los electrones, creando la

imagen en el rango de longitudes de onda del espectro visible. La tcnica de

TEM brinda informacin interna y ultraestructural de las nanopartculas26.

25 D.A. SKOOG and J.J. LEARY., "Anlisis Instrumental". Ed. McGraw-Hill. Madrid, 2008 26 A. NAIK., Fundamentos del microscopio electrnico y su aplicacin en la investigacin textil (2009)

27

1.8.3 Dispersin de luz dinmica (DLS): Es una tcnica ptica utilizada para medir el dimetro de las partculas en sistemas coloidales metlicos y

polimricos con partculas de tamao nanomtrico. Bsicamente, el

instrumental empleado consiste en: A) una fuente de luz lser

monocromtica que incide sobre la una solucin muy diluida a analizar; B) un

fotmetro posicionado a un dado ngulo de deteccin, r, medido con

respecto a la direccin de incidencia del lser sobre la muestra, y que colecta

la luz dispersada por las partculas; y C) un correlador digital que

conjuntamente con un software especfico, permiten obtener la funcin de

autocorrelacin de primer orden de la intensidad de luz dispersada a cada

ngulo22.

1.8.4 Medida de potencial zeta (): Es una medida de la estabilidad de una

suspensin e indica el potencial que se requiere para penetrar la capa de

iones circundantes alrededor de las partculas y as desestabilizarla. Por lo

tanto, el potencial zeta es la potencia electrosttica que existe entre la

separacin de las capas que rodean a la partcula. Las medidas de potencial

zeta son hechas usando la tcnica llamada microelectroforesis. Un

microscopio de alta calidad es usado para observar cmodamente las

partculas coloidales que se encuentran dentro de una cmara llamada celda

electrofortica. Dos electrodos colocados en los extremos de la cmara son

conectados a una fuente de poder crendose un campo elctrico que cruza

la celda. Las partculas cargadas presentes en el sistema coloidal migran

por efecto del campo elctrico, su movimiento y direccin estn relacionados

con su potencial zeta, el cual se calcula a partir de la movilidad

electrofortica27

27 T. VISHAL et al., Electrophoresis (2008),Vol 29, p.10921101

28

1.8.5 Espectroscopa infrarroja (IR): Es una tcnica que se emplea para realizar el anlisis del espectro vibracional de las molculas y de las formas

cristalinas de un compuesto. El rango espectral se encuentra entre 4000 a

600 cm-1. Los espectros de absorcin, emisin y reflexin en el infrarrojo son

resultado de distintos cambios energticos producidos por las molculas

desde unos estados vibracionales y rotacionales a otros. De este modo, se

presentan un conjunto de bandas caractersticas de la estructura del sistema

molecular, permitiendo la identificacin de grupos funcionales, interacciones,

conformaciones estereoqumicas y cristalinidad del analito 23,28.

28 L.A. CLEMENTI. Asociacion Argentina de Materiales. 2| Encuentro de Jvenes Investigadores en Ciencia y Tecnologa de Materiales Posadas Misiones, 16 - 17 Octubre 2008

29

2. ESTADO DEL ARTE

Las bondades de las NP, especficamente las nanopartculas de plata

(AgNP) son aprovechadas en aplicaciones biomdicas como lo propone el

autor C. Baker et al, quienes en su trabajo exploran en las propiedades

antimicrobianas de la AgNPs, al intentar combatir e inhibir el crecimiento de

microorganismos como las E. coli29; tres aos ms tarde aparece J.S. Kim y

su grupo de investigacin, quienes tambin dirigen su atencin hacia la

actividad antimicrobiana de las AgNP sobre cultivos de Levaduras, E. coli y

S. aureu; el resultado de este estudio tuvo por resultado efectos de inhibicin

en el crecimiento de levaduras y E.coli, a bajas concentraciones de AgNP

mientras que no produce efecto significativo en las S. aureu30. El alto poder

antibacterial de la AgNP hace necesario un uso moderado de stas, ya que

ataca tanto clulas malficas como benficas de acuerdo con las

investigaciones citas, es por esto que S. Jaiswa et al, plantea en su trabajo

encapsular las AgNP con -ciclodextrin, un compuesto no txico y soluble en

medio fisiolgico, el cual crea una envoltura alrededor de la AgNP para evitar

la interaccin con clulas sanas y bacterias benficas, el ingreso a travs de

la pared celular es facilitado por efectos de quimioabsorcin; ya en el interior

de la bacteria la capsula se rompe y se liberan la AgNP, arrojando resultados

positivos en la inhibicin del crecimiento de estos microorganismos31.

El estudio de las interacciones de NP con otras molculas es tema de

actualidad, y es lo que a un grupo grande de investigadores motiva

continuamente, prcticamente el desarrollo nanotecnolgico y creacin de

nuevos materiales ha ido siempre de la mano de la produccin intelectual y

29 C. BAKER., Journal of Nanoscience and Nanotechnology. (2005), Vol. 5(2), p. 244-249 30 J.S KIM et al., Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine. (2007), Vol. 3(1), p. 95101 31 S. JAISWALA et al.,Journal of Antimicrobial Agents. (2010), Vol. 36 (3), p. 280-283

30

cientfica de los estudiosos del tema. Es por esto, que es de gran

importancia citar autores como: X. Oming et al 32 , quienes centraron su

inters en las interacciones con molculas biolgicas como la glicina,

realizando un estudio el efecto del pH en la funcionalizacin con AuNP y

AgNP; ellos observaron que la glicina con valores de pH igual a 6.0 y 3.9

interaccionaba fuertemente con los coloides de oro, llevando a la formacin

de agregados que en los anlisis por ultravioleta visible fueron evidentes al

presentarse una segunda banda de absorbancia entre 800-830 nm; las

observaciones en cuanto al comportamiento del coloide de plata, mostraron

fuerte interaccin con la glicina a un valor de pH igual a 2.3.

De esta manera, las investigaciones realizadas sobre lo que se conoce como

ensamble es de gran inters para la comunidad cientfica, ya que

representa la clave hacia la funcionalidad y especificidad de las NP, como lo

menciona el investigador, S.K. Basiruddin, junto con R. Nikhin, en un trabajo desarrollado alrededor de este tema, en el cual se plantea que la conjugacin

de estos materiales con cientos de molculas diferentes ofrece la

oportunidad de indagar sobre millones de acoplamientos con una afinidad

establecida para cierto grupos de molculas como pptidos, anticuerpos,

oligonucletidos, vitaminas, etc.33. En este aspecto convergen gran cantidad

de trabajos como el desarrollado por A. Guerrero, quien investig acerca de

las estructuras de pptidos conjugados con NP metlicas con fines

teraputicos34 bajo la direccin y supervisin del investigador M. Kogan35, el

cual ha dedicado sus investigaciones a profundizar en las aplicaciones

biomdicas de NP metlicas, y disear, especialmente AuNP funcionalizadas

con protenas y polipptidos con fines mdicos.

32 X. OMING et al., Society for Applied Spectroscopy. (1999), Vol. 53(11), p. 1440-1441 33 S.K BASIRUDDIN et al., J. Phys. Chem. C. (2010) Vol. 114, p. 11009-11017 34A. GUERRERO., Memoria para optar al ttulo de Qumico-Farmacutico. Universidad de Santiago, Chile 2008. 35 M. KOGAN et al., Nano Lett. (2006), Vol. 6(1), p. 110115

31

La aparicin constante de publicaciones en lo concerniente a este tema, y en

especial dos investigaciones divulgadas el ao pasado, las cuales son

citadas a continuacin, han confirmado la vigencia que tiene la

funcionalizacin de NP de metales nobles. La primera de ellas, realizada por

Estevez-Hernadez et al, basado en el estudio de la conjugacin de AuNP con

benzoil-mercatoacetil-triglicina, que es un precursor de Thecnetium 99, un

frmaco que tiene efecto sobre la funcin tubular renal, el cual fue conjugado

con AuNP para obtener una imagen diagnostico de esta funcin renal; y por

otra parte, la conjugacin con metilester-L-cistena, un derivado de la L-

cistena, como modelo en el estudio del comportamiento del grupo tiol y su

absorcin sobre la superficie de AuNP; los anlisis por ultravioleta visible,

espectroscopia Raman y por espectroscopa infrarroja revelaron la existencia

de fuertes interacciones a determinados valores de pH36.

Y por ltimo, la investigacin realizada por A. Majzik et al, tambin en el

mismo ao, que consisti en la funcionalizacin de AuNP con L-cistena y

con fragmentos de pptidos -amiloides, asociados en algunos caso a la

enfermedad de Alzheimer37.

36 O. ESTEVEZ-HERNANDEZ et at., Journal of Colloid and Interface Science. (2010), Vol. 350, p. 161167 37 A. MAJZIK et al., Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. (2010), p. 235241

32

3. DESARROLLO EXPERIMENTAL

La metodologa seguida para la realizacin del presente trabajo de

investigacin se encuentra ilustrada en el siguiente esquema. (Figura 3).

Figura 3. Esquema de metodologa implementada en la Funcionalizacin de AgNP con L-cistena.

Agregados producto dela

interaccin Ag-Cys

L-cistena

AgNP

Estudio de Parmetros: -Concentracin -pH -Relacin Volumtrica

Caracterizacin: UV-Vis DLS (Tamao y Potencial zeta) TEM

-Caracterizacin por: UV-Vis DLS y Potencial Zeta -Estudio del tiempo de interaccin

33

3.1 PREPARACIN DE AgNP Las AgNP fueron preparadas por reduccin qumica de una solucin 1mM de

AgNO3 usando como agente reductor, NaBH4, preparado en solucin

acuosa en una concentracin de 1mM. La solucin reductora se dispuso en

un erlenmeyer de 250 mL en un bao de hielo, registrando una temperatura

aproximada a 8C. Seguidamente se adicion la solucin de AgNO3 gota a

gota desde una bureta, como se ilustra en la figura 4. La relacin

volumtrica entre los reactivos fue de [Reductor]/[Oxidante] igual a 3 (J.A

Creighton et al., 1978). La reaccin se llevo a cabo bajo agitacin

magntica, con velocidad de agitacin aproximadamente de 1268 rpm.

Concluida la adicin del AgNO3, la agitacin fue suspendida. El coloide

formado se dej durante 30 minutos en el bao del hielo y fue diluido en una

relacin 1:1.

Figura 4. A) Montaje de sntesis. B) Coloide de plata formado.

A

B

34

Todas las soluciones requeridas en el desarrollo de este trabajo fueron

preparadas con agua desionizada tipo I, con resistividad elctrica de 18.2m,

procesada en un equipo MilliQ; suministrada por el Laboratorio de

Instrumentacin Qumica de la Universidad Industrial de Santander.

3.2 CARACTERIZACIN DE AgNP

3.2.1 Espectroscopa ultravioleta visible Se dispuso de 3 mL de coloide de plata formado, en una cubeta cuadrada de

poliestireno (Ref:DTS0012, por Malvern Instrument). El anlisis fue realizado

en un espectrofotmetro ultravioleta visible, marca SHIMADZU modelo UV-

2401 PC, con lmpara de deuterio y un fotomultiplicador R-928; operado en

un rango entre 300-900 nm con ancho de banda espectral de 1.0 slit. El

espectro UV-Vis de las AgNP permiti conocer la longitud de mxima

resonancia del plasmn y de esta manera tener indicios previos de la

morfologa y distribucin aproximada de tamaos de partcula presentes en

el coloide.

3.2.2. Dispersin dinmica de la luz TAMAO DE PARTCULA

Se colocaron 1.5 mL del coloide de plata obtenido, en una cubeta cuadrada

de poliestireno (Ref DTS0012, by Malvern Instrument) como se muestra en la

figura 5. Las medidas de tamao de partcula se realizaron en un equipo

Zetasizer Nano Series marca MALVERN INSTRUMENT. De acuerdo con los

parmetros establecidos en la tabla 1.

35

POTENCIAL ZETA

Se introdujo el coloide de plata preparado en una celda capilar para potencial

zeta (Ref: DTS1061 por Malvern Instrument), como se ilustra en la figura 5.

La medida fue tomada en un equipo Zetasizer Nano Series marca MALVERN

INSTRUMENT, bajo las condiciones presentadas en la tabla 1.

Tabla 1. Condiciones de medida de tamao de partcula y potencial zeta

Nmero de mediciones 1/1

Nmero de Corridas Mnimo 50; Mximo 100

Temperatura 25C

Dispersante Agua

ndice Refraccin Dispersante 1,333

Figura 5. A) Celda capilar para medicin de potencial zeta. B) Celda para medicin de tamao de partcula

A B

36

3.3 FUNCIONALIZACIN DE AgNP CON L-CISTENA La funcionalizacin se realiz de acuerdo al esquema presentado en la figura

6. Se estudiaron los parmetros: concentracin de aminocido, relacin

volumtrica Ag:Cys, pH del aminocido y finalmente tiempo de duracin de la

interaccin.

Figura 6. Parmetros estudiados en la funcionalizacin Ag-Cys

3.3.1 Estudio del efecto de la concentracin de L-cistena Se prepar una solucin de L-cistena de concentracin 10 mM, para lo cual

se pes en la balanza analtica la cantidad en gramos requerida del

aminocido y se adicion un volumen de agua determinado. De sta

Concentracin L-cistena Rango 0.1- 10mM

Relacin volumtrica AgNP a Cys

Relacin Ag-Cys 1:1 ; 1:2 ; 1:3 ; 1:5 ; 1:8

pH de L-cistena

Rango de pH entre 1.5 a 11.0

Tiempo de Interaccin

Rango tiempo entre 1-30 minutos

Agregados Ag-Cys

37

solucin de partida se obtuvieron por dilucin las siguientes concentraciones:

0,5 mM; 1mM; 3mM; 5mM.

A un volumen definido de cada solucin se adicion un volumen de AgNP en

una relacin volumtrica 1:1. Cada una de ellas, fue agitada en un agitador

magntico a una velocidad aproximada de 1078 rpm durante 10 minutos.

Cada uno de los agregados, Ag-Cy, fueron analizados por espectroscopa

ultravioleta visible con el fin de detectar algn cambio en la banda de

resonancia plasmnica del coloide por efecto de la presencia de L-cistena a

diferentes concentraciones.

3.3.2 Estudio del efecto de relacin volumtrica Se mantuvo fija la concentracin de aminocido en un valor de 10mM; la cual

mostr fuertes interacciones con el coloide, dando lugar a la aparicin de una

segunda banda de absorcin a mayores longitudes de onda en el espectro

UV-Vis.

Las relaciones volumtricas que se estudiaron fueron 1:1; 1:2; 1:3; 1:5 y 1:8.

A un volumen fijo de solucin de L-cistena se adicion otro volumen

establecido de AgNP que cumpliera con cada una de las relaciones

mencionadas. Los agregados formados, Ag-Cys, fueron analizados por UV-

Vis. Debe considerarse que en todos los ensayos se observ interaccin,

siendo la relacin 1:2 la escogida, ya que mostr un espectro con mayor

definicin en los picos, el espectro UV-Vis present claramente la longitud de

onda correspondiente a los agregados producto de la funcionalizacin.

3.3.3 Estudio del efecto del pH

Ya establecidas, la concentracin de aminocido y la relacin volumtrica

Ag:Cys. Se estudio el efecto del pH, para tal fin fueron preparadas

38

soluciones de L-cistena de concentracin 10mM a las que se ajusto el pH

con HCl concentrado y NaOH al 99% p/p. Los valores de pH estudiados

fueron (Seccin de anexos, figura A1. Formas inicas de la L-cistena en funcin del pH):

pH igual a 1,5; que es un valor inferior al pka1 de la L-cys, al cual el

grupo -carboxilo an se encontrar protonado.

pH igual a 3,0; que es un valor por encima del pKa1, a este valor el

grupo -carboxilo se encontrar desprotonado.

pH igual a 6,0; que es 0,5 unidades por encima del punto isoelctrico

del aminocido, el cual se encontrar con carga neta igual a cero.

Prevalecer la forma zwitteinica.

pH igual a 7,5; que es un valor cercano al pH fisiolgico en sangre.

pH igual a 8,6; valor por alrededor del pKa3, al que ocurre la

desprotonacin del grupo lateral sulfhdrilo.

Y finalmente un pH igual a 11,0; cercano al pKa2, al cual el grupo -

amino sufre la desprotonacin.

Estos ensayos se realizaron bajo agitacin magntica a una velocidad de

agitacin aproximada a 1078 rpm. La funcionalizacin se realiz durante 10

minutos a una temperatura de 18 C. Los agregados producto del

acoplamiento Ag-Cys fueron caracterizados por UV-Vis, as como por DLS

para medir el tamao de las partculas y conocer el valor de potencial zeta

para cada uno de los sistemas formados.

39

3.3.4 Estudio del tiempo de interaccin Ag-Cys Los agregados de Ag-Cys formados a los valores de pH establecidos

anteriormente, fueron analizados por ultravioleta visible. Se recolectaron

espectros UV-Vis durante un tiempo de 30 minutos para cada uno de los

ensayos, con el fin de establecer la susceptibilidad e inestabilidad de la

interaccin Ag-Cys en estos sistemas.

40

4. RESULTADOS Y ANALISIS RESULTADOS

4.1 CARACTERIZACIN DE AgNP El espectro UV-Vis obtenido del coloide de plata cuya coloracin

caracterstica fue amarillo intenso, es presentado en la figura 7. En l puede

observarse la longitud de onda de mxima absorbancia de plasmn a 396

nm caracterstica para partculas esfricas con una distribucin de tamaos

inferiores a 50 nm, la intensidad de la absorbancia fue de 1,46 unidades.

El pico presenta una forma bien definida, con alta simetra y una lnea base

bastante ceida al lmite inferior con denominacin cero, esto indica una

distribucin estrecha de tamaos de partculas. Para asegurar esto se

realizaron los anlisis correspondientes a TEM y DLS, las microfografas

corroboraron la presencia de partculas de morfologa esfrica (figura 8) con

una distribucin estrecha de tamaos inferiores a 20 nm. Los anlisis por

DLS mostraron radios hidrodinmicos comprendidos entre rAg = 1,6 nm

(6,7%) y rAg = 13,5 nm (93,7%).

Figura 7. Espectro UV-Vis de Coloide de plata sintetizado

41

Figura 8. Microfotografa TEM de AgNP sintetizadas

Figura 9. Potencial zeta del coloide de plata sintitezado

42

Figura 10. Tamao de partcula del coloide de plata sintetizado

Adicionalmente, el sistema coloidal registro un potencial zeta de -36 mV

como puede ser observado en la figura 9. Esta medida indica que la

suspensin es termodinmicamente estable, en un lapso de tiempo

considerable, ya que las fuerzas de repulsin electrostticas que deben

vencer las partculas para acercarse y aglomerarse son significativamente

altas, dentro de un rango especifico de < -30 mV y > 30 mV16.

43

4.2 FUNCIONALIZACIN

4.2.1 Anlisis UV-Vis del efecto de concentracin Los resultados obtenidos han sido condensados en las figuras A2-A6 en la

seccin de anexos. Se incluyen los espectros UV-Vis para las concentraciones de L-cistena de 0.5mM, 1mM, 3mM, 5mM y 10mM

funcionalizadas con AgNP a diferentes relaciones volumtricas.

Los resultados obtenidos mostraron que existe interaccin en cada uno de

los ensayos realizados, en algunos caso se manifiesta como el

desplazamiento de la longitud de onda desde los 396 nm que fue la

registrada para el coloide de plata inicialmente, hacia longitudes de onda que

van hasta los 415 nm. Este efecto batocrmico indica el crecimiento y

agregacin de las nanopartculas bajo las condiciones trabajadas. En otros

casos puede apreciarse la aparicin de un hombro al lado derecho del pico,

tambin dirigido hacia longitudes de onda mayores.

Por observacin de los comportamientos presentados en los espectros UV-

Vis se escogi la concentracin de L-cistena 10mM, ya que se lograron

resultados ms evidentes de la interaccin, por los efectos batocrmicos

observados, lo cual coincide con lo reportado por otros autores31.

4.2.2 Anlisis UV-Vis del efecto de la relacin volumtrica y el pH En la fotografa mostrada en la figura 11 puede observarse los cambios de

coloracin registrados a estos valores de pH.

44

Figura 11. Cambio de coloracin del coloide en la funcionalizacin con L-Cys 10mM en relacin 1:2 a diferentes valores de pH

A continuacin se presentan los espectros UV-Vis de la funcionalizacin de

L-cys 10mM a los diferentes valores de pH estudiados, variando la relacin

volumtrica anteriormente descrita, tambin se muestra la informacin en

forma de tablas para las longitudes de onda con su respectiva absorbancia y

los valores de potencial zeta y tamao de partcula medido para cada uno de

los nuevos sistemas estos ltimos incluidos en la seccin de anexos. Los

anlisis por DLS y UV-Vis se realizaron simultneamente, despus de

transcurridos 10 minutos de agitacin magntica a una velocidad aproximada

de 1078 rpm para cada ensayo.

45

Figura 12. Espectro UV-Vis. Funcionalizacin AgNP con L-cys 10mM a pH 1,5 y diferentes relaciones volumtricas a pH aproximadamente neutro

Tabla 2. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cis [10mM] a pH 1,5 y diferentes relaciones volumtricas

ENSAYO 1(nm) Abs(uni) 2 (nm) Abs(uni) *AgNP 396 1,476 - -

Ag-Cys. Relacin 1:1 390 0,247 596 0,242

Ag-Cys. Relacin 1:2 323 0,111 607 0,111

Ag-Cys. Relacin 1:3 393 0,173 598 0,177

Ag-Cys. Relacin 1:5 401 0,117 582 0,126

Ag-Cys. Relacin 1:8 397 0,174 577 0,174

46

Figura 13. Espectro UV-Vis. Funcionalizacin AgNP con L-cys 10mM a pH 3,0 y diferentes relaciones volumtricas



Ag-Cys. Relacin 1:1 419 0,602 - -

Ag-Cys. Relacin 1:2 415 0,328 572 0,329

Ag-Cys. Relacin 1:3 405 0,235 565 0,212

Ag-Cys. Relacin 1:5 391 0,144 587 0,130

Ag-Cys. Relacin 1:8 394 0,118 574 0,102

47




Ag-Cys. Relacin 1:1 400 0,610 - -

Ag-Cys. Relacin 1:2 400 0,437 - -

Ag-Cys. Relacin 1:3 398 0,321 - -

Ag-Cys. Relacin 1:5 398 0,221 - -

Ag-Cys. Relacin 1:8 395 0,166 - -

48

Figura 15. Espectro UV-Vis. Funcionalizacin AgNP con L-cys 10mM a pH 7,5 y diferentes relaciones volumtricas.



Ag-Cys. Relacin 1:1 397 0,595 - -

Ag-Cys. Relacin 1:2 396 0,535 - -

Ag-Cys. Relacin 1:3 394 0,251 - -

Ag-Cys. Relacin 1:5 397 0,220 - -

Ag-Cys. Relacin 1:8 397 0,186 - -

49




Ag-Cys. Relacin 1:1 398 0,608 - -

Ag-Cys. Relacin 1:2 395 0,387 - -

Ag-Cys. Relacin 1:3 393 0,238 - -

Ag-Cys. Relacin 1:5 397 0,209 - -

Ag-Cys. Relacin 1:8 396 0,191 - -

50



ENSAYO 1(nm) Abs(uni) 2 (nm) Abs(uni) AgNP 396 1,476 - -

Ag-Cys. Relacin 1:1 399 0,131 563 0,130

Ag-Cys. Relacin 1:2 396 0,175 557 0,177

Ag-Cys. Relacin 1:3 396 0,120 553 0,107

Ag-Cys. Relacin 1:5 396 0,106 556 0,094

Ag-Cys. Relacin 1:8 394 0,094 554 0,080

Datos obtenidos para el coloide de plata sintetizado inicialmente.

51

Como puede observarse en los espectros UV-Vis registrados, el parmetro

ms influyente en la funcionalizacin es el pH del aminocido.

A un pH igual 1,5; valor por debajo del pka1 (1.9), es atribuida una carga

positiva (+1) al aminocido, producto del estado protonado del grupo -amino

(-NH+3); adicional a esto, el grupo -carboxilo se encuentra an en su forma

inica protonada. Dados estos parmetros, ha de esperarse que la

interaccin con estos dos grupo no sea favorecida significativamente, ya que

las AgNP con superficie electropositiva tendrn mayor afinidad por grupos

funcionales de naturaleza nucleoflica, de este modo ser mucho ms factible

la absorcin de las molculas de L-cistena a travs su grupo lateral libre

sulfhdrilo (-SH), que pese a no encontrarse an ionizado es un grupo

altamente donador de electrones. La funcionalizacin bajo este pH se

evidenci por un cambio de coloracin en la solucin, desde amarillo a

morado y finalmente permaneci con una coloracin rosada.

En el espectro UV-Vis (figura 12) se observa la disminucin en la

absorbancia correspondiente a la banda de resonancia plasmnica del

coloide de plata, y tambin se hace evidente la aparicin de una segunda

banda de absorcin entre 577-607 nm, de acuerdo con la relacin

volumtrica usada. ste comportamiento en el espectro, indica la presencia

de agregados Ag-Cys que bajo este valor de pH ha sido favorecida.

Por otra parte, s aumentamos un poco el pH a un valor igual a 3,0; por

encima del pKa1, el grupo -carboxilo se encontrar en su forma

desprotonada, otorgando al aminocido una carga neta igual a cero. El

anlisis UV-Vis mostr un comportamiento similar al alcanzado con un pH

igual a 1,5. Sin embargo a este valor de pH igual a 3,0 la interaccin de las

molculas del aminocido es favorecida para dos grupos funcionales, tanto

para el carboxilato (COO-) como por el sulfhdrilo (-SH). La funcionalizacin

a este valor de pH, dio como resultado una solucin de coloracin rosada

intensa que con el tiempo se fue debilitando y la aparicin de una segunda

52

banda de absorcin ubicada alrededor de 575-587 nm que se observa en el

espectro UV-Vis (figura 13).

Al evaluar un pH igual a 11,0; valor por encima de los tres pKa; el

aminocido tendr atribuida una carga neta (-2) producto de la

desprotonacin que sufren: el grupos -amino, -carboxilo y el sulfhdrilo.

Este comportamiento inico de las molculas de L-cistena favorece tres

posibles interacciones con las AgNP. Siendo la interaccin con el grupo -

amino la menos favorecida por el impedimento estrico causado por los

tomos de hidrogeno enlazados al nitrgeno, este ltimo, quien sera el

donador de electrones.

Los resultados obtenidos para los valores de pH iguales a 6,0 y 7,5, cercanos

a la neutralidad, mostraron interacciones muy dbiles, no se observ la

presencia de otras bandas de absorbancia diferentes a las del coloide, sin

embargo se dio lugar al ensanchamiento del pico y disminucin de la

abosrbancia de ste, lo cual puede indica el crecimiento de las

nanopartculas y la formacin de agregados. A los valores de pH

mencionados se presenta en gran medida el comportamiento zwitteinico del

aminocido, lo que dar lugar a fuertes interacciones intermoleculares de las

molculas de L-cistena en solucin.

Por tanto, la interaccin que pueda existir entre molculas de L-cys y AgNP

es dbil y favorecida en menor proporcin comparada con otros valores de

pH.

Al fijar el pH en 8,6; muy cercano al pKa3, al cual el grupo sulfhdrilo se

encuentra en su forma desprotonada, dando al aminocido una carga neta

(-1). El anlisis por ultravioleta visible mostr el ensanchamiento de los

picos, lo cual est relacionado como ya se ha mencionado al crecimiento y

agregacin de las NP. Sin embargo se observ que para las relaciones

volumtricas 1:2 y 1:3 aparece un hombro a lado derecho del pico, atribuido

a la interaccin Ag-Cys que puede tener lugar. Este pH en comparacin con

53

valores cidos, no mostr interacciones fuertes, posiblemente como

resultado de la abundancia de iones OH- que resultan ser ms lbiles en la

absorcin de iones negativos sobre la superficie de AgNP.

4.2.3 Anlisis DLS del efecto de la relacin volumtrica y el pH Los anlisis por DLS confirmaron la formacin de agregados, Ag-Cys, en los

cuales se observ el crecimiento elevado de las partculas, ya que el coloide

de plata de partida present dimetros de 1,6 nm en un 6,7% y 13,4 nm en

un 93,3%. Como producto de la funcionalizacin se alcanzaron dimetros

desde 210-300 nm para L-cys a pH 1,5; 180-685 nm para L-cys a pH 3,0;

266-414 nm para L-cys a pH 11,0. Los agregados presentes en los sistemas

a pH 6,0; 7,5 y 8,6 presentaron distribuciones de tamaos muy amplias y

polidispersin en las medidas, entre las cuales se observan dimetros an

alrededor de 6,5-169 nm para L-cys a pH 6,0; 1-300 nm para L-cys a pH 7,5;

2-212 nm para L-cys a pH 8,6. (Esta informacin se recopilo a manera de

tablas en la seccin de Anexos)

El efecto del pH fue altamente significativo sobre las fuerzas de repulsin

electrostticas, por las cuales se estabiliz el coloide de plata formado; la

presencia de iones H+ provenientes de la soluciones acidas del aminocido,

extraen y equilibran muchos de los iones OH- que en un principio fueron

absorbidos por la superficie de las AgNP, este efecto crea una

descompensacin y por ende la inestabilidad del coloide; por otra parte, la

presencia de ms iones OH-, aumenta la cantidad de iones absorbidos y por

tanto el potencial zeta del sistema tomar valores ms negativos. Este

comportamiento es observado en las mediciones de potencial zeta para cada

uno de los ensayos realizados, los cuales se presentan a manera de tablas

en la seccin de anexos.

54

4.2.4 Anlisis UV-Vis de la estabilidad en el tiempo de la interaccin Ag-Cys

El estudio cintico se inici 1 minuto despus de haber introducido la

muestra en el espectrofotmetro. La adquisicin de espectros se realiz

cada 5 minutos hasta alcanzar un tiempo total de 30 minutos, acumulando un

total de 7 espectros. Para estos ensayos se considero la relacin

volumtrica 1:2. Se escogi los valores de pH iguales a 1,5; 3,0 y 11,0

respectivamente.

Figura 18. Espectro UV-Vis. Funcionalizacin AgNP con L-cys 10mM a pH 1,5 en relacin volumtrica 1:2

55


56


En los anlisis UV-Vis se observ la fuerte tendencia en la disminucin de la

absorbancia para los ensayos realizados en un lapso de tiempo de 30

minutos. Esta disminucin es producto de la inestabilidad de las

interacciones electrostticas que tienen lugar en la funcionalizacin. La

presencia de otros iones circundantes, tanto negativos como positivos

generados en la sntesis de la AgNP, y los provenientes del proceso de

funcionalizacin y los ajustes de pH con cido y base, influyen drsticamente

sobre la estabilidad del sistema ya que modifican las fuerzas electrostticas

que all tienen lugar, beneficiando la agregacin y sedimentacin de las

partculas en un corto periodo de tiempo.

57

5. CONCLUSIONES

La efectividad de los procesos de funcionalizacin de nanopartculas de plata

con aminocidos est directamente relacionada con el control estricto que se

realice sobre los parmetros experimentales, como lo es, especialmente el

pH. Ya que bajo ciertos valores ser favorecida en gran medida o

medianamente, la interaccin entre la AgNP con alguno de los grupos

funcionales presentes en la molcula, no solo por la forma inica del

aminocido dependiente del pH, sino adems por el efecto significativo que

tiene este parmetro sobre los valores de potencial zeta del sistema. Las

nanopartculas de plata absorbieron satisfactoriamente los grupos

funcionales donadores de electrones como lo son la forma desprotonada del

grupo -carboxilo y el grupo sulfhdrilo, sin embargo puede existir clara

competencia entre ellos, o an ms, ambos grupos pueden estar siendo

absorbidos simultneamente, cuando el valor de pH del medio supera el

pKa1 (1,9). La experimentacin a valores de pH bsicos, tambin favoreci

el acoplamiento entre las molculas del aminocido y las NP.

Por medio de este trabajo se logr establecer un mnimo de concentracin

molar para la L-cistena, que bajo las condiciones trabajadas arroj

resultados ptimos para la funcionalizacin, sin embargo debe considerarse

que prcticamente para un rango entre 0,5-10mM se observ una respuesta

positiva frente a la conjugacin con AgNP, siendo la mayor concentracin

dentro de este rango, la que brindo apreciaciones ms significativa de los

fenmenos que tiene lugar en dicho proceso. En cuanto a la relacin

volumtrica se puede inferir que a medida que las se aumenta esta relacin,

las intensidades de absorbancia tanto para el coloide de plata, como para los

conjugados formados disminuyen. Este comportamiento se relaciona

directamente con el efecto que tienen la presencia de contra iones, H+

circundantes, para el caso de valores de pH cido, estos iones aumentan en

la medida en que es adicionada ms solucin de L-cistena, los cuales

58

equilibran los iones negativos presentes en lo que se conoce como la capa

difusa de iones absorbidos, reduciendo la distancia de sta, lo cual conlleva

finalmente a la reduccin de las fuerzas de repulsin electrostticas y por

ende la agregacin y sedimentacin.

Es imprescindible para estos estudio de funcionalizacin, hacer uso de las

tcnicas espectroscpicas como: ultravioleta visible, la cual permiti

profundizar acerca de los efectos significativos sobre la longitud de

absorbancia del plasmn que tiene lugar por cambios en de los parmetros

de funcionalizacin; UV-Vis es una tcnica rpida, no destructiva que fue

utilizada en este trabajo para realizar un seguimiento continuo en cada uno

de los experimentos realizados. El uso de tcnicas microscpicas como:

microscopia de transmisin electrnica y dispersin de luz dinmica, son de

gran utilidad en el momento de caracterizar sistemas coloidales, permitiendo

el anlisis profundo de la estructura, tamao y morfologa de las partculas

presentes en dichos sistemas. Adicionalmente, las medidas de potencial

zeta son una herramienta eficaz para predecir la estabilidad termodinmica

de las nanopartculas as como de los agregados funcionalizadas.

59

RECOMENDACIONES

Es necesario estandarizar un mtodo de sntesis de nanopartculas de

plata por reduccin con borohidruro de sodio, que permita ejercer el

control estricto sobre las variables del proceso de reduccin, para as

obtener con precisin NP con tamao y forma especificas.

Para investigaciones futuras en el campo de la funcionalizacin de

aminocidos, s se desea orientar el acoplamiento de las NP con un sitio

especfico de la molcula, especialmente, la interaccin con el grupo

sulfhdrilo, (SH), se recomienda usar derivados del aminocido que

tengan el grupo -carboxilo metilado; esto evita significativamente la

competencia de estos dos grupos donadores de electrones por ser

absorbidos sobre la superficie de las nanopartculas.

60

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64

ANEXOS

FORMA IINCA DE LA L-CISTENA EN FUNCIN DEL pH

SH CH2 CH

NH3

C

O

OH SH CH2 CH

NH3

C

O

O-

-S CH2 CH

NH3

C

O

O-

pH < pK1

pK1 = 1,9 (-COOH)

pK2 = 10,8 (NH2)

pK3 = 8,3 (-SH)

pH > pK1

+ +

pK3 < pH < pK2

+

-S CH2 CH

NH2

C

O

O-

pH > pK2

Carga Neta = +1 Carga Neta = 0

Carga Neta = -1 Carga Neta = -2

Figura 21. Esquema forma inica de la L-cistena en funcin del pH.

65

ESPECTROS UV-Vis PARA LA FUNCIONALIZACIN DE AgNP CON L-CISTENA DE DIFERENTE CONCENTRACIN MOLAR.

Figura 22. Espectro UV-Vis funcionalizacin Ag-Cys con L-Cys [0.5mM] en diferentes relaciones volumtricas

Tabla 8. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cys [0,5mM] en diferentes relaciones volumtricas a pH neutro

ENSAYO Mx, (nm) Abs, (unidades)

*AgNP 396 1,476

Ag-Cys. Relacin 1:1 408 0,550





*Datos obtenidos para el coloide de plata sintetizado inicialmente.

66

Figura 23. Espectro UV-Vis funcionalizacin Ag-Cys con L-Cys [1mM] en diferentes relaciones volumtricas

Tabla 9. Anlisis UV-Vis de funcionalizacin Ag-Cys con L-cys [1mM] en diferentes relaciones volumtricas a pH neutro


*AgNP 396 1,476






67

Figura 24. Espectro UV-Vis funcionalizacin Ag-Cys con L-Cys [3mM] en diferentes relaciones volumtricas a pH neutro



*AgNP 396 1,476






68

Figura 25. Espectro UV-Vis funcionalizacin Ag-Cys con L-Cys [5mM] en diferentes relaciones volumtricas a pH neutro



*AgNP 396 1,476






69

Figura 26. Espectro UV-Vis funcionalizacin Ag-Cys con L-Cys [10mM] en diferentes relaciones volumtricas a pH neutro.



*AgNP 396 1,476

cosas sobre cisteina npagfuncionalizadas

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