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EXÁMENES

BACTERIOLÓGICOS

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PASOS GENERALES PARA LAIDENTIFICACIÓN DE LAS

BACTERIAS

OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

AISLAMIENTO Y SIEMBRA EN MEDIOS DE CULTIVO A PARTIR DE LA MUESTRA BIOLÓGICA

INCUBACIÓN

MORFOLOGÍA COLONIAL YMICROSCOPICA

PRUEBAS BIOQUÍMICAS PRUEBAS SEROLOGICAS

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Procedimiento:

El paciente debe defecar en un recipiente limpio y

seco, sin mezclar con orina. Si es lactante, tomar del

pañal la muestra recién emitida)

Recipiente estéril: frasco de boca ancha con tapa.

Introduzca directamente en el frasco de boca ancha,

más o menos 1 a 2 grs. de la muestra;

La muestra debe enviarla al Laboratorio antes de una

hora de su obtención si esta temperatura ambiente.

IMPORTANTE :

Informar si está tomando antibióticos

Identificar la muestra con nombre y fecha

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AISLAMIENTO DE BACTERIAS ENMEDIOS DE CULTIVO

Medios de cultivopara el

aislamiento debacterias

No selectivoSelectivo

AGAR SIMPLE

EMB

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1.- La siembra y el aislamiento de bacterias serealiza a partir de la muestra biológica y se hace

junto al mechero para evitar contaminación

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2.- Con el asa esterilizada se toma el inóculo

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3.- Se deposita el inóculo en el medio de cultivo conmovimientos circulares en un área deaproximadamente un 1 cm. llamada “zona dedescarga”

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4.- Se tapa la caja de Petri y se esteriliza el asabacteriológica a la flama del mechero

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Una forma de separar a las bacterias para que

formen colonias, consiste en depositarinicialmente en el medio de cultivo a las bacterias

juntas en una zona de descarga

Después separarlas con una asa bacteriológica,realizando un arrastre con movimientos en zig zag

en cuatro cuadrantes, esterilizar el asa entre cadauno de ellos

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Quedan cuatro estríascruzadas

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Una vez que se hansembrado las bacterias enel medio de cultivo, esnecesario incubarlas a

37° C durante 24 horas paraque se reproduzcan yformen colonias, que sonacúmulos de una gran

cantidad de bacterias quepueden ser detectadas asimple vista

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CRECIMIENTO BACTERIANOSOBRE AGAR SIMPLE

CRECIMIENTO BACTERIANOSOBRE EMB

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El observar colonias diferentesen un mismo medio de cultivo,indica que se trata de bacteriasdiferentes

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CONSISTE EN DESCRIBIR LAS CARACTERÍSTICAS

MACROSCÓPICAS DE LA COLONIA Tamaño: puntiforme, pequeño, mediano, grande

Forma: circular, filamentosa, irregular, rizoide, fusiforme

Color: incoloras o de color

Elevación: plana, convexa, acojinada, abultada, ondulada Luz reflejada: brillante o mate

Luz transmitida: opaca, translúcida, transparente

Borde: entero, ondulado, lobulado, crenado, filamentoso

Superficie: rugosa o lisa

Consistencia: dura, cremosa, butirosa, mucosa

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La morfología colonial nos permiteseleccionar a las colonias sospechosas depatógenos en el caso de zonas colonizadas,

para continuar con ellas el proceso deidentificación

En caso de que la muestra biológicapertenezca a una zona estéril, es necesarioidentificar cualquier colonia que aparezca

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La morfología microscópica consiste endeterminar la forma, la agrupación y el Gram alque pertenecen que puede ser positivo o negativo

Este paso al igual que el de la morfología

colonial nos va orientando hacia la identificaciónde la bacteria

Para poder observar la morfología microscópicaes necesario observar a las bacterias al

microscopio, para lo cual es necesario hacer unfrotis y una tinción

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1- Poner una gota de agua en unportaobjetos limpio y seco

2- Esterilizar el asa bacteriológica

3- Con el asa bacteriológica fríatomar a las bacterias de la coloniaseleccionada tocándola levemente

4- Mezclar a las bacterias con el agua,

con movimientos circulares

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6- Dejar secar el frotis y fijarlo alcalor, pasándolo varias vecessobre la flama del mechero demanera rápida

7- Tocar con el dorso de la mano laparte de abajo del portaobjetos, paraconfirmar que no se ha calentadodemasiado, pues de ser así sealterará la morfología de las

bacterias

5- Esterilizar el asa bacteriológica conla flama del mechero

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La mayoría de las bacterias son incoloras,por lo que para poder observarlas con finesde identificación es necesario teñirlas. Una

de las técnicas más usadas para éstos fineses la técnica de Gram que nos permitedividirlas en dos grandes grupos:

Gram (+) Gram (-)

TINCIÓN DE GRAM

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1- Tren de tinción de Gram2- Poner el frotis bacteriano

sobre el puente de tinción

3- Cubrir el frotis con cristal violeta por el lapso de 1 4- Enjuagar con agua

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5- Cubrir el frotis con lugoldurante 1 minuto

6- Enjuagar con agua

7- Alcohol-acetona paso rápido 8- Enjuagar con agua

TINCIÓN DE GRAM

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9- Cubrir el frotis con safraninapor 1 minuto 10- Enjuagar con agua, dejar

secar el frotis teñido y observarloen el microscopio óptico

11- La morfología microscópicase observa con el objetivo deinmersión 100x

TINCIÓN DE GRAM

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Al teñir a las bacteriascon la técnica de Gramlas gram positivas se

tiñen de color moradoy las gram negativasde color rojo, debido aque existen diferencias

en la composiciónquímica de su paredcelular

Gram (+)

Gram (-)

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Es un examen de laboratorio que permite

identificar por observación directa almicroscopio a algunos parásitos; protozoarios,helmintos, sus larvas o huevecillos

La muestra utilizada es materia fecal

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Procedimiento

El paciente debe defecar en un recipiente limpio y seco, sin

mezclar con orina. Si es lactante, tomar del pañal la muestra

recién emitida);

Coloque una porción del tamaño de una nuez en el frasco de

boca ancha

Las muestras deben obtenerse de 3 días seguidos hasta

completar las tres.

Si observa algún gusano, debe colocarlo en un frasco limpio con

agua de la llave y llevarlo al laboratorio con la muestra.

El estudio del gusano corresponde a una observación

macroscópica que debe hacerse adicionalmente.

Conservar las muestras en refrigerador a 4ºC.

IMPORTANTE: identificar la muestra con nombre del paciente y

fecha.

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Se requieren tres muestras de días consecutivos,aunque pueden ser de días salteados

Se piden de días consecutivos para poder facilitar

su entrega en el laboratorio

Examinar tres muestras de materia fecal delmismo paciente aumenta la probabilidad dedetectar a los parásitos intestinales

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Las muestras del CPS deben analizarse el mismodía que se tomaron, sobre todo si son diarreicas, sison formadas se le pide a las personas que juntenlas 3 muestras y las conserven en refrigeración oen un lugar seco y fresco; y una vez que las reúnanlas lleven al laboratorio

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La muestra debe ser depositada en un frasco deboca ancha limpio y seco, o bien en un copropac

COPROPAC

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Examen microscópico:La técnica de Faust es una técnica de

concentración por flotación para la detección deparásitos intestinales microscópicos, sus larvaso huevecillos

Examen macroscópico:Se revisan las características físicas de la muestrabuscando rasgos de sangre, moco o parásitos que se

pueden ver a simple vista

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HELMINTOS

En algunas

ocasiones al hacerel examenmacroscópico de lamuestra pueden

aparecerproglótidos deTaenia sp.

PROGLÓTIDOS DE Taenia sp .

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La técnica de Faust es una técnica que permiteaumentar la probabilidad de detectar a losparásitos intestinales al concentrarlos en una

película en la superficie del tubo de ensaye. Su fundamento es la flotación

La parte de la muestra de materia fecal que se

toma debe ser aquella donde se aprecie, moco osangre

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TÉCNICA DE FAUST

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1.-Tomar una porción de materia

fecal con una varilla de vidrio 2.-Hacer una suspensión de materiafecal con agua y vaciarla a un tubo deensayo de 13 X 100

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3.- Centrifugar durante 1minuto a 1500rpm 4.- Decantar y resuspender con

reactivo de Faust (sulfato de Zinc).Llenar el tubo aproximadamentehasta 1 cm abajo del borde con elreactivo de Faust

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5.- Centrifugar 1 minuto a

1500rpm

6.- Formar el menisco gota agota con reactivo de Faust

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7.- Dejar reposar el menisco almenos un minuto

MENISCO

8.- Tomar el meniscotocando con elcubreobjetos

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9.- Dejar caer el cubreobjetos sobreuna gota de lugol en un portaobjetos

10.- Se pueden observar dosmuestras en un portaobjetos

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11.- Observar al microscopiocon los objetivos de 10X y

40X

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QUISTE DE Entamoeba histolytica

QUISTE DE Entamoeba coli

QUISTES DE Giardia lamblia

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HUEVECILLO FÉRTIL DE Ascaris lumbricoides

HUEVECILLO DE UNCINARIA

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Los huevecillos de Taenia sp. y Enterobius

vermicularis pueden llegar a observarse en

un examen coproparasitoscópico, sinembargo ésto no es frecuente, por lo tanto elCPS no es la técnica de elección para sudiagnóstico

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Existen más protozoarios, parásitos ycomensales que pueden encontrarse en un

examen coproparasitoscópico, aquí se hanilustrado sólo algunos de los másfrecuentes en México

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Su objetivo es identificar el parásito en

cualquiera de sus estados a través detécnicas directas o indirectas

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*Directo: Es la observación del agenteetiológico y su caracterizaciónmorfológica.

Ejemplos:*Examen en fresco*Examen macroscópico*Examen microscópico

*Métodos de concentración*Métodos cuantitativos*Coloración rápida

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*Indirecto: Detección indirecta del parásito, ya seapor la respuesta humoral que desencadena el paciente opor la ruptura de los antígenos que el parásito libera.

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● Obtención de la muestra fecal

● Número de muestras

● Conservación y envío de muestras fecales

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Examenmacroscópic

o

Examenmicroscópico

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estudio microscópico + análisisbioquímicos

● pH

● Azúcares reductores

● Sangre oculta

● Prueba parahemoglobina humana

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Recuento en placa microscópica a partir de 2 mg de materiasfecales, se hace recorriendo toda la laminilla, el número total dehuevos x laminilla se multiplica por 500 para dar el resultado enh.p.g

Técnica de Kato-katz

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Tinción de Romanowsky Tinción de Giemsa

Tinción de TricromoFierro-Hematoxilina

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