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CONSEJO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA -CONCYT-
SECRETARIA NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA -SENACYT-
FONDO NACIONAL DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA -FONACYT-
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS Y FARMACIA
UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
INFORME FINAL
“EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD INHIBITORIA DE LA
ACETILCOLINESTERASA POR DIEZ ESPECIES MEDICINALES Y
AROMÁTICAS NATIVAS COMO POSIBLE FUENTE PARA EL
TRATAMIENTO DE AFECCIONES DE LA MEMORIA”
Proyecto FODECYT 39-2008
Armando Cáceres Estrada
Investigador Principal
GUATEMALA, JULIO DE 2011
ii
AGRADECIMIENTOS
La realización de este trabajo ha sido posible gracias al apoyo financiero dentro del
Fondo Nacional de Ciencia y Tecnología (FONACYT), otorgado por la Secretaría
Nacional de Ciencia y Tecnología (SENACYT) y el Consejo Nacional de Ciencia y
Tecnología (CONCYT).
ii
RESUMEN
Los síndromes neurodegenerativos son afecciones que producen un deterioro de la
memoria y conducta, generalmente en ancianos. Una de las patologías más frecuentes es
la Enfermedad de Alzheimer, la cual se encuentra asociada a la disminución de los
niveles del neurotransmisor acetilcolina, consecuencia de un aumento en acetilcolines-
terasa. Estudios en distintas partes del mundo han descrito algunos metabolitos
secundarios presentes en las plantas como una posible fuente para inhibir la actividad de
la enzima.
Se recopiló información de diez especies medicinales y aromáticas nativas como
posible fuente para el tratamiento de afecciones de la memoria (Chiranthodendron
pentadactylon Larr., Dorstenia contrajerva L., Lantana camara, Lippia graveolens HBK,
Petiveria alliacea L., Phlebodium pseudoaureum (Cav.) Lellinger, Salvia microphylla
HBK, Tagetes lucida Cav., Ternstroemia tepezapote Schlecht & Cham. y Valeriana
prionophylla Stand.). Con una metodología similar se apoyó un trabajo de evaluación
terminal consistente en un Seminario de Investigación de dos estudiantes de la Escuela de
Química Biológica, quienes procesaron y analizaron ocho especies con características
etnobotánicas similares (Brugmansia candida Pers., Cassia reticulata Wild., Chaptalia
nutans L., Erythrina berteroana Urban, Pimenta dioica L., Solanum nigrescens Mart. &
Gal., Vernonia deppeana Less. y Wiganda urens var. caracasana Ruiz & Pavón).
Cada especie colectada se determinó botánicamente y se depositaron muestras en el
Herbario CFEH del Laboratorio Farmaya. Se les realizó el análisis de control de calidad
según procedimientos estándar, determinándose sus parámetros básicos (% de humedad de la
materia seca, cenizas totales, % de rendimiento y % de humedad del extracto seco). Por
percolación se hicieron extracciones secuenciales con diclorometano y metanol y se
concentraron hasta sequedad. Se realizó el tamizaje fitoquímico de los extractos secos de las
especies vegetales, demostrándose la presencia de flavonoides y antocianinas, aceites
esenciales, alcaloides, cumarinas y taninos, pero sin un patró específico o sugestivo que
correlacione con la actividad encontrada.
La actividad IACE fue evaluada de forma cualitativa por medio de bioautografía por
TLC y para la evaluación cuantitativa se estableció un procedimiento de evaluación cinética
por medio de microcolorimetría. Los resultados de la bioautografía en TLC demostraron
actividad IACE en todas las especies del estudio, pero al cuantificar la actividad ninguno
inhibe el 50% de la actividad enzimática a una concentración de 1 mg/mL. Tres especies (L.
camara, T. lucida y V. prionophylla) con actividad intermedia fueron fraccionadas por una
partición líquido:líquido para conocer si al purificar las fracciones se obtenía una mejor
actividad. Se demostró que las particiones no aumentaron la actividad. También se encontró
una actividad mediana en los extractos de raíz de D. contrajerva var. houstoni, L. graveolens
y W. urens var. caracasana. Se sugiere continuar con los estudios de estas especies para
determinar si podría haber algún potencial de utilización.
Utilizando la información de las bases de datos electrónicas consultadas y los estudios
previos se recopiló abundante información general y específica, material que sirvió para
elaborar las monografías farmacopéicas de cada especie, la cual podrá ser consultada para
usos futuros.
iii
ABSTRACT
Neurodegenerative syndromes are conditions that result in deterioration of
memory and behavior, usually in the elderly. One of the most common diseases is
Alzheimer´s disease, which is associated with decreased levels of the neurotransmitter
acetylcholine, following an increase in acetylcholinesterase. Studies in different parts of
the world have described some secondary metabolites from plants sources thay might
inhibit the activity of the enzyme.
Information was collected from ten species of native medicinal and aromatic
plants as possible sources for the treatment of memory disorders (Chiranthodendron
pentadactylon Larr., Dorstenia contrajerva L., Lantana camara L., Lippia graveolens
HBK, Petiveria alliacea L., Phlebodium pseudoaureum (Cav.) Lellinger, Salvia
microphylla HBK, Tagetes lucida Cav., Ternstroemia tepezapote Schlecht & Cham. and
Valeriana prionophylla Stand.). With a similar methodology this project supported a
terminal evaluation work (Research Seminar) of two students from the School of
Biological Chemistry, who processed and analyzed eight species with similar
ethnobotanical characteristics (Brugmansia candida Pers, Cassia reticulata Wild.,
Chaptalia nutans L., Erythrina berteroana Urban, Pimenta dioica L., Solanum nigrescens
Mart. & Gal., Vernonia deppeana Less. and Wigand urens var. caracasana Ruiz &
Pavón).
Each collected species were botanically identified and voucher samples deposited
in the Herbarium CFEH from Farmaya Laboratory. Quality control analysis was done by
standard procedures, determining the basic parameters (% moisture of dry matter, total
ash, % yield and % moisture of dry extracts). Sequential extractions by percolation with
dichloromethane and methanol were done and concentrated to dryness. Phytochemical
screening was carried out in the dry extracts, demonstrating the presence of flavonoids
and anthocyanins, essential oils, alkaloids, coumarins and tannins, but no specific or
suggestive pattern ewas detected that might correlates with the activity found.
Acetylcholinesterase inhibiton was assessed qualitatively by bioautographic TLC
and quantitative by a kinetic evaluation procedure through microcolorimetry. The results
showed activity by bioautography in all species, but when quantified no activity >50%
was demostrated at a concentration of 1 mg/mL. Three species (L. camara, T. lucida and
V. prionophylla) with some activity were liquid:liquid partitioned to see if the purified
fractions were more active, but this partition did not increase the activity. Interesting
activity was also found in root extracts from D. contrajerva var. houstoni, L. graveolens
and W. urens var. caracasana. We suggest continuing with the studies of these species to
determine whether there might be some potential use in inhibition of acetylcholinesterase.
Using information from the electronic databases consulted and previous studies
we have gathered much general and specific information, material that was used to
develop pharmacopoeial monographs of each species, which might be consulted for
futher use.
iv
BIOGRAFIA ACADEMICA DEL INVESTIGADOR PRINCIPAL
Armando Cáceres Estrada es Químico Biólogo de la Facultad de CCQQ y
Farmacia, USAC, con estudios de Especialización en Inmunología en las Universidades
de Wisconsin, Lausanna, Brasilia y del Valle (Colombia) y entrenamiento en
Farmacognosia en la Facultad de Farmacia, USAC y Universidad Kitasato, Japón.
Desde 1972 es Profesor Titular de Inmunología e Inmunopatología, en la Facultad
de CCQQ y Farmacia y desde 2004 es Profesor en las Maestría en Plantas Medicinales
(Universidad de San Carlos) y Fitoterapia (Universidad de Barcelona). Ha sido
Coordinador del Laboratorio de Investigación de Productos Naturales (LIPRONAT) y es
Director de Investigaciones del Laboratorio de Productos Naturales Farmaya S.A.
Ha sido Director de Proyectos y Director Ejecutivo del Centro Mesoamericano de
Estudios sobre Tecnología Apropiada (CEMAT), Consultor sobre Desarrollo Rural, Salud
Ambiental y desarrollo del uso ecológico de plantas medicinales para diversas instancias
nacionales e internacionales, Director Nacional de la Comisión Nacional para
Aprovechamiento de las Plantas Medicinales (CONAPLAMED) y Coordinador de la Red
Iberoamericana de Productos Fitofarmacéuticos (RIPROFITO) del Programa
Iberoamericano de Ciencia y Tecnología para el Desarrollo (CYTED).
Ha sido asesor o evaluador de proyectos de etnobotánica, agrotecnología y fito-
terapia para organizaciones no gubernamentales y empresas fitoterápicas de Guatemala,
Honduras, Costa Rica, El Salvador, Nicaragua, Colombia, Perú, México y Bolivia.
Ha sido miembro de varias comisiones nacionales e internacionales para la
validación, producción, control y equiparación de la fitoterapia en los servicios de salud,
y miembro de ocho asociaciones científicas internacionales, del Consejo de Notables del
CONCYT y de la Academia de Ciencias Médicas, Físicas y Naturales.
Ha recibido subsidios de investigación nacionales [Consejo Nacional de Ciencia y
Tecnología (CONCYT), Dirección General de Investigación (DIGI) e Instituto de
Investigaciones Químicas y Biológicas (IIQB)] e internacionales [Organización Mundial
de la Salud (OMS), Sociedad Alemana de Cooperación Técnica (GTZ), Organización de
las Naciones Unidas para el Desarrollo Industrial (ONUDI), Centro Internacional de
Investigaciones para el Desarrollo (CIID), Agencia Japonesa de Cooperación
Internacional (JICA), Organización de los Estados Americanos (OEA) e Institutos
Nacionales de Salud (NIH)].
Ha recibido varios premios nacionales e internacionales, particularmente el Premio
José Capote Díaz 1989 (Federación Panamericana de Farmacia y Bioquímica), Premio
Centroamericano Nestlé de Pediatría 1992, Medalla de Ciencia y Tecnología 1998 y
Medalla Universitaria 2000.
Autor de más de 240 publicaciones y presentaciones en eventos científicos y varios
libros especializados sobre validación, producción, fitofarmacia y legislación de plantas
medicinales y organizador de más de 80 eventos científicos nacionales e internacionales y
de transferencia tecnológica al sector productivo sobre los temas de su especialidad.
v
OTROS AGRADECIMIENTOS
La realización de este trabajo ha sido posible gracias al apoyo logístico y material
del Laboratorio de Productos Naturales Farmaya, S.A.
El Investigador Principal desea agradecer la colaboración de las siguientes personas
que participaron en alguno de los aspectos de la investigación:
Investigadores Asociados
Lics. Sully Margot Cruz Velásquez, Ana Margarita Paz de Ramírez e Isabel
Cristina Gaitán Fernández
Auxiliares de Investigación
Lics. Dayrin Tatiana Ortíz López, Ana Carolina Valdez Gomar, José Leonel López
Chenal, Brs. Luis Eduardo Álvarez, Max Mérida, Lesbia Mengala Guerra Urizar y Sara
Ester Belloso Archila
Investigadores Colaboradores
Lics. Karla Josefina Lange Cruz de Kiesling y Lidia M. Girón.
Equipo de investigación:
Adelante: Isabel Gaitán, Ana Carolina Valdez, Dayrin Ortiz; atrás: Armando Cáceres,
Sully Cruz, Max Mérida, Margarita Paz; faltan: Leonel López, Luis Álvarez, Lesbia
Guerra y Sara Belloso.
vi
TABLA DE CONTENIDOS
Asbstract iv
Biografía académica del investigador principal v
Otros agradecimientos vi
Tabla de contenidos vii
Lista de ilustraciones (Fotografías) ix
Lista de cuadros x
Lista de gráficos xi
Lista de abreviaturas y dimensionales xii
PARTE I. INTRODUCCIÓN
I.1 Introducción 1
I.2 Planteamiento del problema 3
I.3 Objetivos e Hipótesis 4
I.3.1 Objetivo general 4
I.3.2 Objetivos específicos 4
I.3.3 Hipótesis 4
I.4 Metodología 5
I.4.1 Universo de trabajo 5
I.4.2 Variables 5
I.4.3 Indicadores 5
I.4.4 Estrategia metodológica 5
I.4.5 Métodos 6
I.4.6 Técnica estadística 11
I.4.7 Instrumentos 12
PARTE II. MARCO TEÓRICO
II.1 Neurotransmisor acetilcolina 14
II.2 Desórdenes neurodegenerativos y afecciones de la memoria 14
II.3 Enfermedad de Alzheimer (EA) 15
II.4 Enfermedad de Parkinson 18
II.5 Esclerosis lateral amiotrófica 18
II.6 Tratamientos alternativos de los sindromes neurodegenerativos 19
II.7 Estudios sobre la actividad IACE en Asia, Africa y Europa 20
II.8 Estudios en Sud América y Guatemala 24
II.9 Métodos de detección de la actividad IACE 25
II.9.1 Metodología cualitativa con Fast Blue B 25
II.9.2 Metodologia cuantitativa ó microcolorimétrica con Fast Blue B 25
II.9.3 Metodología cualitativa ó de Ellman 25
II.9.4 Metodología cuantitativa por el procedimiento de Ellman 25
II.10 Selección de las especies en estudio 26
PARTE III. RESULTADOS
III.1 Objetivo 1
III.1.1 Revisar la información existente en bases de datos y fuentes especializadas de
las especies en estudio y en la demostración de la actividad IACE 27
vii
III.2 Objetivo 2
III.2.1 Seleccionar y colectar diez (10) especies vegetales de un listado de 24 especies
usadas popularmente para el tratamiento de afecciones nerviosas, neurológicas
y de la memoria 29
III.3 Objetivo 3
III.3.1 Obtener extractos y aceites esenciales para determinar el rendimiento en cada
una de las diez (10) especies vegetales escogidas. 32
III.4 Objetivo 4
III.4.1 Determinar la actividad IACE de las diez (10) especies vegetales por métodos
de cromatografía en capa fina (TLC) y microcolorimétricos. 36
III.5 Objetivo 5
III.5.1 Demostrar los grupos químicos más importantes de las especies evaluadas
mediante ensayos macro, semimicro y TLC 43
III.6 Objetivo 6
III.6.1 Realizar una partición líquido-líquido del extracto activo y determinar la
actividad IACE, para orientar la separación y aislamiento de los componentes
activos 64
PARTE IV. CONCLUSIONES
IV.1 Conclusiones 67
IV.2 Recomendaciones 68
IV.3 Referencias 69
IV.4 Anexos 70
Anexo 1. Chiranthodendron pentadactylon Larr. 76
Anexo 2. Dorstenia contrajerva L. 79
Anexo 3. Lantana camara L. 82
Anexo 4. Lippia graveolens HBK 88
Anexo 5. Petiveria alliacea L. 92
Anexo 6. Phlebodium pseudoaureum (Cav.) Lellinger 101
Anexo 7. Salvia microphylla HBK 107
Anexo 8. Tagetes lucida Cav. 110
Anexo 9. Ternstroemia tepezapote Schlect. & Cham. 118
Anexo 10. Valeriana prionophylla Standl 121
Anexo 11. Resumen del seminario de investigacion de tesis: ―Actividad
inhibitoria de la acetilcolinesterasa por extractos de ocho especies vegetales
nativas de Guatemala usadas en el tratamiento de afecciones nerviosas 127
PARTE V. INFORME FINANCIERO
V.1 Informe financiero 130
viii
Lista de Ilustraciones (Fotografías)
1 Procesamiento y secado de las especies colectadas en Ecoparcela El Kakawatal,
Samayac, Suchitepéquez.
2 Determinación de porcentaje de humedad y cernido en tamiz estándar
3 Percolación, obtención del aceite esencial y concentración en rotavapor
4 Extractos (diclorometánico y metanólico) y aceites esenciales obtenidos
5 Ensayo en cromatografía de capa fina para actividad inhibitoria de la ACE
6 TLC de actividad IACE en extractos diclorometánicos y metanólicos
7 TLC de actividad IACE de extractos diclorometánicos y metanólicos (Seminario)
8 Ensayo de IACE por microcolorimetría
9 Prueba de antraquinonas en extractos diclorometánicos
10 Prueba de antraquinonas en extractos metanólicos
11 Prueba de esteroides o triterpenoides
12 Prueba de esteroides o triterpenoides: Carr Price en extractos diclorometánicos
13 Prueba de esteroides o triterpenoides: Carr Price en extractos metanólicos
14 Prueba de esteroides o triterpenoides: Lieberman Burchand en extractos
metanólicos
15 Prueba de cumarinas en extractos diclorometánicos y metanólicos
16 TLC de antraquinonas, cardenólidos y bufadienólidos de ambos extractos
diclorometánicos y metanólicos
17 Aceites volátiles por TLC en extractos diclorometánicos y metanólicos
18 TLC de principios amargos y sesquiterpenlactonas de extractos
19 Procedimiento de partición líquido:líquido y separación de fases
20 Actividad IACE en particiones de V. prionophylla, T. lucida y L. camara
ix
Lista de Cuadros
1 Plantas nativas detectadas por ser usadas para afecciones neurológicas y de la
memoria
2 Información contenida en cada una de las Monografías
3 Lista de monografías farmacopeicas elaboradas
4 Información general de cada especie colectada
5 Porcentaje de humedad del material vegetal de las especies del estudio
6 Aceites esenciales y extractos diclorometánicos y metanólicos obtenidos
7 Codificación de extractos diclorometánicos y metanólicos
8 Actividad inhibitoria de la ACE de los extractos diclorometánicos por TLC
9 IACE por extractos diclorometánico y metanólicos por microcolorimetría
10 Investigación de flavonoides y antocianinas en extractos diclorometánicos
11 Investigación de flavonoides y antocianinas en extractos metanólicos
12 Flavonoides y antocianinas por TLC de los extractos diclorometánicos
13 Flavonoides y antocianinas por TLC de los extractos metanólicos
14 Determinación de alcaloides por ensayo macro de los extractos metanólicos
15 Investigación de alcaloides en extractos diclorometánicos por TLC
16 Investigación de alcaloides en extractos metanólicos por TLC
17 Antraquinonas, cardiotónicos, esteroides y cumarinas de extractos
diclorometánicos
18 Antraquinonas, cardiotónicos, esteroides y cumarinas de extractos metanólicos
19 TLC para antraquinonas, cardenólidos y bufadienólidos de extractos
diclorometánicos
20 TLC para antraquinonas, cardenólidos y bufadienólidos de extractos metánolicos
21 Determinación de cumarinas por TLC en extractos diclorometánicos
22 Determinación de cumarinas por TLC en extractos metanólicos
23 Determinación de aceites volátiles por TLC en extractos diclorometánicos
24 Determinación de aceites volátiles por TLC en extractos metanólicos
25 TLC para principios amargos y sesquiterpenlactonas de extractos
diclorometánicos
26 TLC para principios amargos y sesquiterpenlactonas de extractos metanólicos
27 Evaluación de taninos en los extractos metanólicos
28 Porcentajes de rendimiento de las particiones de extractos promisorios
29 Porcentaje de IACE de las particiones de extractos con actividad preliminar
x
Lista de Gráficas
1 Velocidad de reacción de la eserina midiendo su comportamiento a distintas
concentraciones. Los datos están siendo analizados porque no han sido los
esperados, pero se está trabajando en estandarizar la técnica
2 IACE por eserina en diferentes concentraciones al tiempo 136 segundos
3 Porcentaje de inhibición de ACE de los extractos metanólicos
4 Porcentaje de inhibición de ACE de los extractos diclorometánicos
xi
Lista de abreviaturas
AC Acetilcolina
ACE Acetilcolinesterasa
ANOVA Análisis de varianza
ATCI Ioduro de acetilcolina
BCA Butirilcolinesterasa
TLC Cromatográfia en capa fina
CEMAT Centro Mesoamericano de Estudios sobre Tecnología Apropiada
CFEH CEMAT-Farmaya Ethnobotanical Herbarium
CI50 Concentración inhibitoria media (50%)
CONAP Consejo Nacional de Áreas Protegidas
CONCYT Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología
DE50 Dosis efectiva media (50%)
DL50 Dosis letal media (50%)
DIGI Dirección General de Investigación
DPPH 1,1-difenil-2-picrilhidrazilo
DTNB Ácido 5,5´-ditio-bis (2-nitrobenzóico)
EA Enfermedad de Alzhaimer
ESCOP European Cooperative of Phytotherapy (Cooperativa Europea Fitoterapia)
FDA Food and Drug Administration (Administración de Alimentos y Drogas)
FODECYT Fondo para el Desarrollo Científico y Tecnológico
FONACYT Fondo Nacional de Ciencia y Tecnología
GPS Global Positioning System
HPLC High performance liquid chromatography
HPTLC High performance thin leyer chromatography
IACE Inhibición de la acetilcolinesterasa
IBCE Inhibición de butiril colinesterasa
IP Intraperitoneal
IV Intravenoso
LIPRONAT Laboratorio de Investigación de Productos Naturales
NMP Número más probable
OMS Organización Mundial de la Salud
PEO Procedimiento estandarizado de operación
SENACYT Secretaría Nacional de Ciencia y Tecnología
SDAT Demencia senil de tipo Alzheimer
SDS Dodecil sulfato de sodio
TGO Transaminasa glutámico oxaloacética
TGP Transaminasa glutámico pirúvica
UFC Unidades formadoras de colonias
USAC Universidad de San Carlos de Guatemala
UV Ultra violeta
xii
Abreviatura de los nombre científicos de organismos usados en las Monografías
Bacterias
Bacillus subtilis
Campylobacter jejuni
Enterobacter aerogenes
Escherichia coli
Listeria monocytogenes
Mycobacterium smegmatis
Mycobacterium tuberculosis
Pseudomonas aeruginosa
Salmonella enteritidis
Salmonella typhi
Sarcina lutea
Shigella boydii
Shigella dysengariae
Shigella flexneri
Shigella sonnei
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus faecalis
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus pyogenes
Vibrio cholerae
Xanthomonas campestris
Hongos
Aspergillus flavus
Aspergillus fumigatus
Aspergillus niger
Candida albicans
Candida krusei
Candida parapsilosis
Candida stellatoidea
Cladospirum cucumerinum
Cryptococcus neoformans
Epidermophyton floccosum
Fonsecaea pedrosoi
Fusarium solani
Microsporum canis
Microsporum gypseum
Neurospora crassa
Sporothrix schenckii
Trichophyton mentagrophytes
Trichophyton rubrum
Parásitos
Fasciola hepatica
Giardia intestinalis
Leishmania brasiliensis
Leishmania mexicana
Meloidogyne incognita
Plasmodium falciparum
Trichomonas vaginalis
Insectos y crustáceos
Aedes aegypti
Anopheles albimanus
Artemia salina
Rhodnius neglictus
Dimensionales
µg microgramos
µL microlitros
cm centímetros
g gramos
kg kilogramos
L litro
M molar
Meq miliequivalentes
min minutos
mg miligramos
mL mililítros
mm milímetros
mM mini Molar
µM micro Molar
mmol milimoles
msnm metros sobre el nivel del mar
N normal
nm nanómetros
ppm partes por millón
rpm revoluciones por minuto
seg segundo
ton/ha tonelada/hectária
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PARTE I
I.1 INTRODUCCIÓN
La adquisición y mantenimiento de la memoria es una función multicausal
dependiente de factores individuales, colectivos, nutricionales, históricos, traumáticos y
ambientales, los que se ven fuertemente influenciados cuando los procesos son
acumulativos, degenerativos o simplemente por la edad de los individuos. Al conjunto de
síntomas y signos que se desarrollan con la pérdida progresiva de la memoria se les
clasifican como síndromes neurodegenerativos.
Los síndromes neurodegenerativos afectan severamente la memoria y conducta de
las personas ancianas, siendo la forma más frecuente y severa la EA. La EA se caracteriza
por una pérdida progresiva de la memoria y de otras capacidades mentales, a medida que
las neuronas mueren y diferentes zonas del cerebro se atrofian.
El principal factor asociado con la progresión de la enfermedad es la disminución
de los niveles de AC por el aumento en los niveles de ACE. El proceso se complica
conforme se reducen la síntesis de la AC, el aumento de su destrucción, los procesos
inflamatorios y la formación de placas β-amiloides.
La OMS estimó que en 2005 el 0,379% de las personas a nivel mundial tenían
demencia y que la prevalencia aumentaría a un 0,441% en 2015 y a un 0,556% en 2030.
Los tratamientos son escasos y la mayoría se vinculan con la inhibición de la ACE
para disminuir la destrucción de AC y garantizar mayores niveles en beneficio de la salud
cerebral.
Estudios realizados en los últimos años han demostrado que algunas especies
vegetales pueden presentar moléculas que tienen actividad IACE, e inclusive han servido
de base para el desarrollo de medicamentos que pueden usarse para prevenir o retrasar el
desarrollo de EA o bien disminuir la severidad de los síntomas (Howes & Houghton
2003; Akhondzadeh & Abbasi, 2006; Wilkinson, 2007), particularmente mediante la
droga galantamina aislada de varias especies de la familia Amaryllidacdeae (Marco &
Carreiras, 2006).
La biodiversidad es una secreta fuente de moléculas para el desarrollo de nuevos
productos para el bienestar humano. Estudios realizados en otras partes del mundo
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demuestran que la biodiversidad puede ser una fuente de moléculas para contrarestar los
síndromes degenerativos, principalmente en lo que respecta a su actividad IACE,
particularmente en Asia (Gupta & Gupta, 1997; Ingkaninan, Temkitthawon, Chuenchom,
Yuyaem & Thongnoi, 2003; Howes, Perry & Houghton, 2003; Oh, Houghton, Whang &
Cho, 2004; Orhan, Sener, Choudhary & Khalid, 2004; Kumar, 2006; Mukherjee, Kumar
& Houghton, 2007; Vinutha, Prashanth, Salma, Sreeja, Pratiti, Padmaja et al., 2007),
Europa (Iuvone, de Filippis, Esposito, D’Amico & Izzo, 2006; Houghton, Ren & Howes,
2006; Ferreira, Proença, Serralheiro & Araújo, 2006; Adsersen, Gauguin, Gudiksen &
Jager, 2006; Adams, Gmünder & Hamburger, 2007), y Africa (Eldeen, Elgorashi & van
Standen, 2005; Elufioye, Obuotor, Sennuga, Agdedahunsi & Adesanya, 2010).
En América Latina, son muy escasos los estudios de este tipo que se han realizado
para evaluar la diversidad regional, particularmente estudios en Argentina (Carpinella,
Andrione, Ruiz & Palacios, 2009), Brasil (Siqueira, Fochesatto, da Silva, Nunes,
Battastini, Netto & Elisabetsky, 2003; Figueiró, Ilha, Pochmann, Porciúncula, Xavier,
Achaval et al., 2010), Colombia (Mosquera, Niño, Correa & Hernández, 2004) y Panamá
(Calderón, Cubilla, Espinosa & Gupta, 2010).
Guatemala está enclavada en una zona de alta diversidad producto de su
localización geográfica, asi como ha sido poblada por culturas tradiconales que persisten
aún hoy en día, por lo que la investigación de estos recursos como fuentes potenciales de
nuevos productos que puedan comercializarse como novedosos es una innovadora opción
que podría apoyar el desarrollo industrial del país (Orellana, 1987; CONAP, 2003)
La presente investigación tuvo como objetivo evaluar la actividad IACE de los
extractos etanólicos y aceites esenciales de 10 especies vegetales medicinales y
aromáticas seleccionadas por ser nativas y usarse tradicionalmente para tratar afecciones
nerviosas, neurológicas o de la memoria. En los extractos positivos se hizo una partición
líquido-líquido para orientar estudios futuros de fraccionamiento bioguiado que permitan
aislar y elucidar la estructura responsable de la actividad. Estudios de laboratorio
preclínicos y clínicos demostrarán posteriormente si es posible desarrollar un producto
fitoterapéutico o nutricéutico para prevenir los síndromes neurodegenerativos, en
particular la EA.
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I.2 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
I.2.1 Antecedentes (Trabajo, experiencias en Guatemala)
II.2.1.1 Bioensayos oxidativos e inhibidores enzimáticos realizados en Guatemala
En el marco de cooperación internacional, materiales procesados en LIPRONAT/
Lab. de Bioensayos, se han investigado en las Universidades de Salerno, Italia y Granada,
España. En un primer estudio se encontró que el extracto de pericón (Tagetes lucida Cav.)
y sus flavonoles tienen actividad antioxidante superior al α-toxoferol (Aquino, Cáceres,
Morelli & Rastrelli, 2002); en cinco especies usadas en el Caribe guatemalteco para
enfermedades infecciosas, tres (Acalypha guatemalensis Pax. & Hoffm., Ocimum
micranthum Willd. y Smilax spinosa Mill.) presentan actividad significativa en tres
modelos de antioxidación y peroxidación lipídica (Navarro, Montilla, Cabo, Galisteo,
Cáceres, Morales & Berger, 2003); y en el tercero, el extracto etanólico de la raíz de
Valeriana prionophylla Standl. y sus lignanos, demostraron actividad antioxidante y
vasorelajante (Piccinelli, Arana, Caceres, di Villa Bianca, Sorrentino & Rastrelli, 2004).
En colaboración con la Universidad de Chicago, se estudiaron extractos de
vegetales procesados en LIPRONAT que fueron analizados por su actividad ligadora o
bloqueadora de estrógenos y serotonina por bioensayos citotóxicos automatizados
(Michel, Duarte, Bolton, Huang, Caceres, Veliz et al., 2007), habiéndose demostrado una
potente actividad estrogénica y serotonérgica en los extractos acuoso y etanólico de Piper
hispidum Swingle, habiéndose aislado como substancias activas avarios butenólidos
conocidos y nuevos (Michel, Chen, Zhang, Huang, Krunic, Orjala et al., 2010).
En 2004 un proyecto con fondos de DIGI evaluó cualitativamente la actividad
IACE por TLC de dos extractos de esponjas marinas del género Calyx del Caribe
Mesoamericano, donde se pudo sintetizar 5 compuestos orgánicos que presentaron una
leve inhibición de la actividad de la enzima (Cobar & Vásquez, 2004).
Durante 2008 el equipo estandarizó procedimientos macrométricos, micrométricos
y por TLC para evaluar la actividad antioxidante de especies vegetales nativas (proyecto
FODECYT 28-2007) y sirvieron de marco para fortalecer los vínculos entre el
LIPRONAT, el Depto.de Farmacognosia y el Laboratorio de Bioensayos. En esta
oportunidad se logró ampliar los procedimientos establecidos para la demostración in
vitro de actividad la IACE por métodos cualitativos y cuantitativos.
II.2.1.2 Marco conceptual: El mantenimiento de la memoria es una función multicausal,
siendo la forma más frecuente de afección la EA que afecta a la población anciana. El
principal factor asociado con la fisiopatología de esta enfermedad es la disminución de
los niveles de AC por un aumento en los niveles de ACE. Algunas especies vegetales
presentan actividad IACE, e inclusive han servido de base para el desarrollo de los
medicamentos que se usan actualmente para prevenir o retrasar el desarrollo de AE y
disminuir la severidad de los síntomas (Howes & Houghton 2003; Akhondzadeh &
Abbasi, 2006; Wilkinson, 2007).
II.2.1.3 Marco referencial: Estudios en Asia y Europa demuestran que varias especies
contienen moléculas con actividad IACE (Howes, Perry & Houghton, 2003; Iuvone, de
Filippis, Esposito, D’Amico & Izzo, 2006; Vinutha, Prashanth, Salma, Sreeja, Pratiti,
Padmaja et al., 2007; Adams, Gmünder & Hamburger, 2007).
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En Guatemala el único estudio previo es la evaluación cualitativa por TLC de la
actividad IACE de esponjas marinas, donde se realizaron distintos ensayos in vitro que
permitieron identificar la actividad antimicrobiana, citotóxica e inhibición enzimática
sobre ACE y BCE, determinando así su potencial como probables fármacos contra la
enfermedad de Alzheimer (Cóbar & Vásquez, 2004).
De unas 70 especies vegetales usadas como medicinales y aromáticas a las que se
les atribuyen propiedades para tratar afecciones nerviosas o neurológicas, tónicas o para
aumentar la memoria, se han escogido 24 especies nativas para seleccionar 10 que por
conveniencia fueron evaluadas en este proyecto, además de siete especies que fueron
estudiadas en un Seminario de Investigación de la Escuela de Química Biológica. Por
métodos cualitativos (TLC) y cuantitativos (macro y microcolorimétricos) se evaluó la
actividad IACE (Adsersen, Gaugin, Gudiksen & Jäger, 2006) de 17 especies. En los
extractos que se presentó alguna actividad IACE se realizó una partición líquido-líquido y
se repitieron las pruebas cualitativas y cuantitativas para evaluar la actividad IACE con el
fin de orientar en un futuro la separación y aislamiento de las substancias involucradas en
esta actividad.
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I.3 OBJETIVOS E HIPOTESIS
I.3.1 Objetivo general
Generar información química y biológica de especies nativas medicinales y
aromáticas usadas para el tratamiento de afecciones neurológicas o de pérdida de la
memoria con posible actividad IACE.
I.3.2 Objetivos específicos
I.3.2.1 Revisar la información existente en bases de datos y fuentes especializadas de las
especies en estudio y en la demostración de la actividad IACE.
I.3.2.2 Seleccionar y colectar diez (10) especies vegetales de un listado de veinticuatro
(24) especies usadas popularmente para el tratamiento de afecciones nerviosas,
neurológicas y de la memoria.
I.3.2.3 Obtener extractos y aceites para determinar el rendimiento en cada una de las
diez (10) especies vegetales escogidas.
I.3.2.4 Determinar la actividad IACE de las diez (10) especies vegetales por métodos de
cromatografía en capa fina (TLC) y microcolorimétricos.
I.3.2.5 Demostrar los grupos químicos más importantes de las especies evaluadas
mediante ensayos macro, semimicro y TLC.
I.3.2.6 Realizar una partición líquido-líquido del extracto activo y determinar la
actividad IACE, para orientar la separación y aislamiento de los componentes activos.
I.3.3 Hipótesis
Por lo menos uno de los extractos vegetales escogidos presentan actividad IACE.
I.4 METODOLOGÍA
I.4.1 Localización
El trabajo se desarrolló en ocho localidades del país, donde se llevó a cabo la colecta de
material biológico bajo manejo o silvestre y su localización se describe en el capítulo
correspondiente.
El material colectado fue lavado y oreado en el lugar de colecta, luego procesado
en el Laboratorio de Productos Naturales Farmaya (Av. Centroamérica 18-92 zona 1,
ciudad de Guatemala, 14°37'52.6''N y 090°31'19.2''O) y trasladado a los laboratorios de la
Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia de la USAC, en la Ciudad Universitaria zona
12; LIPRONAT, en el edificio T-10 cuyas coordenadas geográficas son: 14º35’05.5‖N,
090º33’16.0‖O y una altura de 1498 msnm y el Laboratorio de Bioensayos del
Departamento de Citohistología en el edificio T-11 cuyas coordenadas geográficas son
14º35’03.3‖N, 090º33’15.7‖O y una altura de 1508 msnm.
Los datos climatológicos son los siguientes: Temperatura promedio anual: 19.5°C;
temperatura máxima: 25.5°C; temperatura mínima 15.3°C; temperatura máxima absoluta:
31.5°C; temperatura mínima absoluta: 9.06°C; precipitación pluvial: 1,198.7 mm/año;
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humedad relativa: 78%; brillo solar por hora: 205.7; radiación solar: 1.3 cal/cm2/min;
presión atmosférica: 639.5 mm/Hg; velocidad del viento: 17.7 km/hora.
1.4.2 Universo de trabajo
Por criterios etnobotánicos se detectaron unas 70 especies usadas como medicinales
y aromáticas a las que popularmente se les atribuyen algunas propiedades para el
tratamiento de afecciones nerviosas o neurológicas, tónicas o para aumentar la memoria.
Con criterios sobre disponibilidad de material, de potencial de comercialización, y
basados en la propuesta sobre la investigación necesaria para valorizar las especies de la
flora subutilizada del país con potencial económico (CONAP, 2006), se escogieron 24
especies nativas, usadas popularmente para el tratamiento de afecciones nerviosas,
neurológicas o de la memoria, y que por su uso o referencia podrían tener una actividad
IACE.
I.4.3 Variables
I.4.3.1 Variable dependiente: La composición de metabolitos secundarios de las especies
evaluadas.
I.4.3.2 Variables independientes: La actividad IACE de los distintos extractos obtenidos,
evaluada por métodos analíticos de diferentes principios bioquímicos.
I.4.4 Indicadores
I.4.4.1 Documentos publicados nacional e internacionalmente sobre la información
química y biológica de las especies analizadas
I.4.4.2 Colección de muestras botánicas georeferenciadas depositadas en herbario
CFEH del Laboratorio Farmaya
I.4.4.3 Seis aceites esenciales
I.4.4.4 Quince extractos diclorometánicos y quince metanolicos llevados a sequedad.
I.4.4.5 Doce particiones de extractos vegetales
I.4.4.6 Presencia de metabolitos secundarios por ensayos fitoquímicos
I.4.4.7 Determinación de la actividad IACE por métodos macro y micrométricos
I.4.4.9 Fichas técnica de las diez especies evaluadas
I.4.5 Estrategia metodológica
I.4.5.1 Recopilar información relevante y elaborar fichas técnicas de las especies
evaluadas para difundir la información obtenida y propiciar su desarrollo por
sectores académicos y empresariales.
I.4.5.2 Colectar material vegetal en su estado fenológico óptimo, identificarlo, secarlo y
almacenarlo adecuadamente para garantizar resultados confiables y
reproducibles.
I.4.5.2 Preparar extractos polares y apolares para identificar la presencia de metabolitos
secundarios por ensayos fitoquímicos para establecer la relación con la actividad
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IACE obtenida por métodos espectrofotométricos para cada especie evaluada.
I.4.5.3 Establecer procedimientos analíticos para determinar la actividad IACE en
especies evaluadas por métodos cromatográficos, macrométricos y
micrométricos.
I.4.5.4 Capacitar personal profesional en los procedimientos analíticos y bioensayos
para evaluar la actividad IACE y la composición fitoquímica responsable de esa
actividad.
I.4.6 Métodos
I.4.6.1 Universo de trabajo
Por criterios etnobotánicos se detectaron unas 70 especies usadas como medicinales
y aromáticas a las que popularmente se les atribuyen algunas propiedades para el
tratamiento de afecciones nerviosas o neurológicas, tónicas o para aumentar la memoria.
Con criterios sobre disponibilidad de material, de potencial de comercialización, y
basados en la propuesta sobre la investigación necesaria para valorizar las especies de la
flora subutilizada del país con potencial económico (CONAP, 2006), se escogieron 24
especies nativas, usadas popularmente para el tratamiento de afecciones nerviosas,
neurológicas o de la memoria, y que por su uso o referencia podrían tener una actividad
IACE.
I.4.6.2 Obtención de material vegetal (delimitación de la Población)
Se recopiló la información de cada especie para contar con los estudios biológicos,
químicos, fármacológicos y otras informaciones que se consideraron relevantes, para la
documentación de las especies a estudiar. El material provino de poblaciones cultivadas
en condiciones específicas, el cual fue determinado en el Herbario del Laboratorio
Farmaya.
El modelo de muestreo fue de tipo estratificado, preferencial y por conveniencia.
Los extratos (asociaciones vegetales homogéneas por cultivo) fueron definidos por
contactos previos y coordinación con los productores. Conforme a la naturaleza de la
parte estudiada para cada especie se obtuvieron muestra representativa de
aproximadamente 1 kg; 250 g fueron identificados y guardados como muestra de
referencia, y el resto sometidos a las pruebas de laboratorio fitoquímico y biológicas. Las
muestras fueron procesadas conforme a técnicas convencionales de secado y molienda. El
almacenamiento, embalaje y transporte se ralizó conforme a los principios aceptados de
buenas prácticas de cultivo y poscosecha.
I.4.6.3 Preparación de extractos crudos de cada especie:
De los materiales secos se pesaron 500 g y se colocaron en un percolador donde se
agregó disolvente apolar (diclorometano) durante 5 días con recambios diarios del
disolvente hasta que se extraiga la mayoría de metabolitos; el menstruo extraído se
concentró a presión reducida a una temperatura inferior a los 45°C en un rotavapor con
recuperación del disolvente. El proceso se repitió utilizando disolvente polar (metanol).
A cada extracto se le determinó el pocentaje de rendimiento a partir del material vegetal
seco.
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La determinación del porcentaje de rendimiento de aceites esenciales se realizó
mediante la extracción por hidrodestilación utilizando un equipo Neoclevenger, según la
Farmacopea Europea.
I.4.6.4 Caracterización química
Se hicieron mediante pruebas convencionales de tamizaje fitoquímico (escala semi-
micro con pruebas específicas para caracterizar flavonoides, taninos, aceites volátiles,
alcaloides, antraquinonas, glicocidos cardiotónicos, cumarinas, esteroides, triterpenoides,
principios amargos y sesquiterpenlactonas) y mediante TLC, usando para la visualización
y caracterización de los metabolitos reactivos cromógenos universales (vainillina-H2SO4
y anisaldehído) y específicos para grupos funcionales (que en general son los mismos que
para el tamizaje semimicro) (Wagner & Bladt, 1996).
I.4.6.4.1 Investigación de flavonoides y antocianinas (ensayos macro y semimicro): Se
extrajeron 3 g de material pulverizado con 10 mL de metanol al 80%, se filtró y
concentró. Se enfrió a temperatura ambiente y se trituró el residuo con 15 mL de éter de
petróleo hasta que la extracción fue incolora. Se disolvió el residuo en 30 mL de metanol
al 80%, se filtró y alicuotaron 5 tubos asi:
Tubo 1: 0.5 mL de H2SO4 concentrado.
Tubo 2: 3 a 5 gotas de FeCl3 al 10% (p/v).
Tubo 3: 0.5 mL de HCl y se calentó en baño de María por 5 min (leucoantocianinas).
Tubo 4: magnesio metálico y 0.5 mL de HCl concentrado.
Tubo 5: álcali a un extracto acuoso.
Tubo 6: agregar solución de ácido bórico en anhídrido acético. Tubo 7: testigo.
Se evaluaron las reacciones, cambios de color y/o formación de precipitado comparados
con el testigo. El desarrollo inmediato de color indico la presencia de flavonas y flavo-
noles (amarillo a rojo), flavanonoles (rojo a magenta), flavanonas (rojo, magenta, violeta,
azul), isoflavonas (amarillo); isoflavononas, chalconas y auronas no dan coloración.
TLC: Se extrajo 1 g de material pulverizado con 10 mL de metanol por 5 min en baño de
María a 60C; se filtró y aplicó sobre cromatoplacas de silicagel 60 F254. Como estándar
se utilizó la solución de flavonoides (quercetina, rutina, ácido clorogénico, hiperósido) al
0.05% en metanol (10 μL). Fase móvil: acetato de etilo-ácido fórmico-ácido acético-agua
(100:11:11:27), n-butanol-ácido acético-agua (40:10:50); acetato de etilo-ácido fórmico-
ácido acético-etilmetilcetona-agua (50:7:3:30:10). Detección: Sin tratamiento químico:
UV-254 nm fluorescencia, zonas azules o amarillas. UV-365 nm, dependiendo de la
estructura, fluorescen amarillo, azul o verde.
Reactivo de Productos Naturales (NP/PEG). Fluorescencia intensa en UV-365 nm.
Solución 1: solución metanólica al 1% de difenilboriloxietilamina (NP).
Solución 2: solución etanólica al 5% de polietilenglicol 4000 (PEG). Aplicar a la placa
vapores de amoniaco para intensificar el color de las manchas.
I.4.6.4.2 Investigación de alcaloides
Ensayos macro y semimicro: Se pesó 1 g de material vegetal. Se le agregó 2 gotas de
solución de hidróxido de amonio al 10% (p/v), luego añadir 25 mL de metanol a 60C.
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Filtrar con papel filtro Whatman 1 y acidificar el filtrado con ácido clorhídrico 2 N. La
solución resultante dividirla en 4 tubos y evaluar de la siguiente manera:
Tubo 1: 5 gotas del reactivo de Mayer (Color blanco a crema).
Tubo 2: 5 gotas del reactivo de Dragendorff (Color rojo a naranja).
Tubo 3: 5 gotas del reactivo de Wagner (Color marrón).
Tubo 4: testigo.
Estándar: soluciones al 1% de atropina y papaverina. Observar durante 2 horas la
existencia de precipitados, turbidez o precipitación de complejos en los tubos.
TLC: 1 g de material vegetal seco y molido, se agregó 1 mL de hidróxido de amonio al
10% (p/v) y se extrajo con 5 mL de metanol. Colocar en baño maría a 60C durante 5
min. Filtrar y concentrar. Aplicar en una placa de silica gel 60 F254, utilizando como
estándar una solución de atropina y papaverina al 1% en metanol (10 μL).
Fase móvil: tolueno-acetato de etilo-dietilamina (70:20:10); acetato de etilo-metanol-agua
(100:13.5:10), cloroformo-dietilamina (90:10); acetona-agua-amonio concentrado
(90:7:3)
Detección: Sin tratamiento químico: UV-254 nm fluorescencia, UV-365 nm algunos
fluorescen azul o amarillo.
Reactivo de Dragendorff: zonas cafés o naranjas en visible, los colores no son estables.
I.4.6.4.3 Investigación de antraquinonas
Prueba de Bornträger: Se pesaron 3 g de material vegetal pulverizado con 10 mL de
etanol al 80%, se filtraron y concentraron en baño de María (60C). El residuo se disovió
con 30 mL de agua destilada y se filtró se extrajo con 10 mL de benceno. A la fase
bencénica se le añadió 5 mL de solución de la prueba de amonio. Se observó los cambios
de color en la fase alcalina (color rojo, rosado: positivo).
Prueba de Bortränger modificado: 0.3 g de material vegetal pulverizado con 10 mL de
hidróxido de potasio alcohólico 0.5 N y 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3% se
calentaon durante 10 min en baño de María a 60C. Se añadieron 10 gotas de ácido
acético glacial para acidificar y se extrajo con 10 mL de benceno. A la capa bencénica se
adicionaron 5 mL de solución de prueba de amonio y se agitó. Se observaron los cambios
de color en fase alcalina (color rojo, rosado: positivo).
TLC: Se disolvieron 0.5 g de material seco pulverizado con 5 mL de metanol en baño de
María (60C) por 5 min. Se filtró y aplicó 10 μL en la cromatoplaca de silicagel 60 F254.
Estándar: Solución al 0.1% en metanol de antraquinonas (10 μL). (Aloína, flangulina
A/B, glucofrangulina A/B y sus agliconas, reina, aloe-emodina, extracto de sen)
Fase móvil: Acetato de etilo-metanol-agua (100:17:13), acetato de etilo-metanol-agua
(100:13.5:10).
Detección: Sin tratamiento químico: UV-254 nm fluorescencia, UV-365 nm fluorescencia
amarilla o rojo-café.
Antraquinonas: Zonas rojas en visible y fluorescencia roja en UV-365 nm.
Antronas y antranolas: Zona amarillas en visible y fluorescencia amarilla en UV-365 nm.
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I.4.6.4.4 Investigación de cumarinas
Ensayos macro y semimicro: A 5 mL de extracto vegetal metanólico se le agregó 1 mL de
agua destilada hirviendo. Con un capilar se aplicaron 2 manchas en papel filtro. A una
mancha se le agregó 1 gota de hidróxido de potasio 0.5N, y se observó bajo luz UV de
365 nm (fluorescencia azul o verde: positivo).
TLC: A 1 g de material vegetal se le adicionaron 10 mL de metanol y se calentó durante
30 min en baño de María. Se filtró y evaporó hasta 1 mL. Se aplicaron 20 μL en una
cromatoplaca de sílica gel 60 F254. Estándar: canela en metanol al 1%, umbeliferona,
ácido p-cumárico, cumarina).
Fase móvil: Tolueno-acetato de etilo (93:7); tolueno-éter (1:1 saturado con 10% de ácido
acético, 50 mL de tolueno y 50 mL de éter se mezclan durante 5 min con 50 mL de ácido
acético al 10%, se filtra, se descarta la fase de abajo, y se usa la mezcla de tolueno-éter).
Detección: Sin tratamiento químico UV-254 nm fluorescencia. UV-365 nm todas las
cumarinas muestras una intensa fluorescencia azul o verde-azul. Solución etanólica de
hidróxido de potasio al 5 o 10%. UV-365 nm fluorescencia azul o verde.
I.4.6.4.5 Investigación de cardenólicos y bufadienólicos
Lactonas insaturadas: Se extrajeron 10 g de material vegetal con 30 mL de metanol al
80%. Se colocaron tres manchas del extracto (0.1, 0.2, 0.3 mL) sobre un papel filtro. Se
dejó secar y se agregó unas gotas del reactivo Kedde. Interpretación: cambio de color
(mancha o anillo púrpura: positivo). Estándar: extracto de Digitalis purpurea en metanol
al 80%.
Presencia de azúcares 2-desoxigenadas: Se evaporaron 10 mL del extracto etanólico o
metanólico, se eliminarom los pigmentos coloreados con éter de petróleo. Se seca el
residuo y se agregaron 3 mL de reactivo Keller-Killiani. Se pasa a un tubo, se mezcla y se
deja resbalar 1-2 mL de ácido sulfúrico concentrado en la pared del tubo. Se observó la
formación de un anillo en la interfase (anillo púrpura: positivo).
TLC: A 1 g del material se agregaron 20 mL de etanol al 50%, el filtrado se trató con
ácido acético glacial. Se extrajeron 3 porciones de 15 mL de diclorometano y se filtraron
sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporaron. Se disolvió con 1 mL de diclorometano/
etanol (1:1) y se aplicaron 30-50 μL en la cromatoplaca de silicagel 60 F254. Estándar
digoxina 5 mg/2 mL de metanol (20 μL), lanatósido, A,B,C; oleandrin, k-estrofantina.
Fase móvil: Acetato de etilo-metanol-agua (100:13.5:10) acetato de etilo-metanol-agua
(81:11:8), acetato de etilo-metanol-etanol-agua (81:11:4:8).
Detección: Sin tratamiento químico: Fluorescencia por cardenólidos en UV-265 nm, la
mayor fluorescencia es debida a los bufadienólidos. Los glicósidos cardiácos no
fluorescen en UV-365 nm. Detección del anillo lactónico de los cardenólidos: reactivo de
Kedde, zonas rosa o azul violeta en vis, los bufadienólidos no reaccionan.
I.4.6.4.6 Investigación de esteroides o triterpenoides por reacciones de color
Liebermann Burchard: Se aplicaron unas gotas de ácido acético y 3 mL de anhídrido
acético-ácido sulfúrico (50:1) en la que las saponinas triterpenoidales dan color rosado o
púrpura.
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Resultados (verde, azul verdoso) posibles esteroides conteniendo 2 enlaces C=C
conjugados o formados por deshidratación con ácido sulfúrico.
Ácido tricloroacético: Se le añade a la muestra unos cristales de ácido tricloroacético.
Resultado: color naranja, rojo, rojo oscuro, triterpenos tetracíclicos y esteroides
desarrollan color a 60°C, triterpenos pentacíclicos a 110°C.
Carr-Price: 1 mg de muestra en cloroformo se le agrega 2 mL de tricloruro de antimonio
al 30% en cloroformo.
Resultado: Color azul, posibles derivados del colestano con dieno o trieno potencial en
anillos A y B.
I.4.6.4.7 Investigación de aceites volátiles (TLC):
Método A: Se extrajo 1 g de material vegetal pulverizado con 10 mL de diclorometano
agitando por 15 min. Se filtró y evaporó en baño de María (60C) a sequedad. Se disolvió
en 1 mL de tolueno y se aplicaron 20-50 µL en una cromatoplaca de silicagel 60 F254.
Método B: Se pesaron 10-50 g de material vegetal y se destilaron con arrastre de vapor
por 1 hora, recolectando el aceite en xileno. Se diluyó la solución de aceite en xileno con
tolueno 1:5 o si era muy concentrada 1:10 y se aplicaron 5 µL (1:10) en cromatoplaca de
silicagel 60 F254. Estándar: solución de tolueno 1:30 de mentol, timol, anisaldehído,
anetol, 1,8-cineol (3 µL). Fase móvil: tolueno-acetato de etilo (93:7). Detección:
anisaldehído-H2SO4, vanillina- H2SO4. Zonas azules verdes, rojas y cafés en visible.
I.4.6.4.8 Principios amargos
TLC: Se calentó 1 g de material vegetal con 10 mL de metanol en baño de María a 60C
por 10 min. Se aplicó en la cromatoplaca. Estándar: artemisina al 1% en metanol (20 μL).
Fase móvil: acetato de etilo-metanol-agua (77:15:8) y cloroformo-metanol (95:5).
Detección: Vainillina-ácido sulfúrico, anisaldehído-ácido sulfúrico. Zonas rojas-violetas,
cafés-rojas, azules-verdes. (Reactivo de Liebermann-Buchard: UV-365 nm: gris, café;
VIS: café oscuro, gris).
I.4.6.4.9 Investigación de taninos
Macro y semimicro: Se extrajeron 10 g de material pulverizado con 30 mL de metanol al
80%, se filtró y evaporó a sequedad. Se añadió 25 mL de agua caliente, se agitó y se dejó
enfriar. Se agregó 1 mL de solución de NaCl al 10% y se filtró. Se adicionaron 3 mL del
filtrado a 4 tubos de ensayo: Tubo 1: testigo. Tubo 2: 4-5 gotas de solución de gelatina al
1% (p/v). Tubo 3: 4-5 gotas de gelatina-sal (1% de gelatina y NaCl al 10%). Tubo 4: 3-4
gotas de solución de FeCl3 al 10% (p/v). Se observa la formación de precipitado y/o
cambio de coloración. Con FeCl3: grisáceo-negro: catecol; negro-azulado: pirogalol.
I.4.6.4.10 Evaluación de la actividad IACE
TLC: Metodología cualitativa con Fast Blue B
La ACE (de anguila eléctrica, EC3.1.1.1, Sigma C 2888; 1000 U) o BCE (de suero
equino, EC 3.1.1.8, Merck 102606, 500 U) se disolvió en 150 mL de amortiguador Tris-
HCl al 0.05M de pH 7.8. Se agregó albúmina de suero bovino (150 mg) con el fin de
estabilizar la enzima durante el bioensayo. La disolución madre se conserva a 4°C. Para
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lavarlas, se introdujeron las placas en un disolvente adecuado (acetona o isopropanol) y
luego se secaron cuidadosamente. Se activaron las placas de TLC por 5 min a 100°C. Se
asperjaron con la enzima (ACE), se secaron las placas y se incubaron a 37°C por 20 min
Se asperjaron con acetato 1-naftilo (250 mg) en EtOH (100 mL) y sal de azul permanente
B (400 mg) en agua destilada (160 mL). Esta última disolución se hizo inmediatamente
antes de usarla, para evitar a descomposición. Placa recién asperjada con solución de fast
blue B – acetato de 1-naftilo
Microcolorimetría: Se evaluó la IACE de los extractos a una concentración de 1 mg/mL,
al agregar en placas de microtitulación 25 µL de 15 mM ATCI, 125 µL de 3 mM DTNB,
50 µL de Tris-HCl pH 8 con 0.1% albumina de suero bovino y 25 µL de diluciones de
cada extracto. Se midió 8 veces la absorción a 405 nm cada 17 seg y posteriormete se
agregó 25 µL de ACE a cada pozo. Se midió 8 veces la absorción a 405 nm cada 17 seg.
Interpretación: al presentarse la positividad se calcularon los índices de reacción de la
actividad de cada extracto y se realizó la caracterización química.
I.4.7 Técnica estadística
I.4.7.1 Diseño de análisis
I.4.7.1.1 Tipo de estudio: Experimental de una fase
I.4.7.1.2 Diseño estadístico factorial de dos factores: parámetro de determinación de
IACE y especie vegetal en estudio.
I.4.7.1.3 Factores:
Parámetro de determinación: Determinación de flavonoides y antocianinas (a1),
determinación de alcaloides (a2), determinación de antraquinonas (a3), determinación de
cumarinas (a4), Investigación de cardenólicos y bufadienólicos (a5), Investigación de
esteroides o triterpenoides (a6), determinación de aceites volátiles (a7), determinación de
principios amargo (a8), Investigación de taninos, (a9) TLC IACE (a10) y microcolo-
rimetría IACE (a11)
Especies vegetales en estudio: C. pentadactylon (b1); D. contrajerva (b2); L.
camara (b3); L. graveolens (b4); P. alliacea (b5); P. pseudoaureum (b6); S. microphylla
(b7); T. lucida (b8); T. tepezapote (b9) y V. prionophylla (b10).
Se realizaron 110 tratamientos (13 niveles del primer factor por 10 niveles del
segundo factor) que se establecieron por la combinación de los dos factores mencionados.
Cada uno de los extractos obtenidos fue determinado en cada parámetro cinco veces
para los parámetros antes mencionados. Estos últimos fueron tabulados y expresados de
la siguiente forma:
- Deteriminación de IACE por TLC por presencia de bandas.
- Cuantificación de IACE por CI50.
- Determinación de flavonoides y antocianinas por cambio de color (técnica mácro) y
presencia de bandas (TLC)
- Determinación de alcaloides por cambio de color (técnica macro) y presencia de
bandas (TLC)
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- Determinación de antraquinonas por cambio de color (técnica macro) y presencia de
bandas (TLC)
- Determinación de cumarinas por cambio de color (técnica macro) y presencia de
bandas (TLC)
- Investigación de cardenólicos y bufadienólicos por cambio de color (técnica macro) y
presencia de bandas (TLC)
- Investigación de esteroides o triterpenoides por cambios de color
- Determinación de aceites volátiles por presencia de bandas (TLC)
- Determinación de principios amargo por presencia de bandas (TLC)
- Investigación de taninos por cambios de color.
I.4.7.2 Análisis estadístico
Se realizó mediante estadística descriptiva, en la caracterización fitoquímica se
observó presencia o ausencia de los metabolitos y el número de bandas en cada uno de los
extractos y en la evaluación de la actividad IACE se describiró el extracto como activo o
inactivo comparándolos con patrones específicos para cada una de las pruebas.
Para registrar las observaciones se utilizaron cuadernos foliados por páginas, en los
cuales se llevó el registro cronológico de las actividades realizadas y los resultados
obtenidos. Los resultados fueron tabulados en un sistema columnar, ordenados de acuerdo
a conveniencia y procesados electrónicamente. Los resultados fueron organizados,
resumidos y presentados mediante estadística descriptiva y serán analizados e
interpretados de acuerdo a la técnica ensayada. Los resultados experimentales se
compararán estadísticamente con los estándares por pruebas de ANOVA, Dunett y ―t‖ de
Student.
I.4.8 Instrumentos
I.4.8.1 Equipo:
Las instituciones participantes aportaron el siguiente equipo:
I.4.8.1.1 El LIPRONAT está equipado para realizar secado (horno de convección),
molienda, extracción (percoladores, neocleavenger, Soxhlet), concentración (rotavapores
Buchi, liofilizador Labconco, enfriadores, desecadores, hornos) y análisis (potenciómetro,
balanzas analíticas y de humedad, asperjadores, refractómetro, espectrofotómetro UV-Vis
y computadora).
I.4.8.1.2 El Laboratorio de Bioensayos del Departamento de Citohistología de la Escuela
de Química Biológica está equipado para determinar actividad antioxidante por ensayos
micrométricos (microcolorímetro fotómetro de microplacas, incubadora, y balanzas
analíticas).
I.4.8.1.3 El Laboratorio de Productos Naturales Farmaya aportó el material de su Centro
de Información especializado, los contactos de su red de proveedores rurales, secadores
solares y de convección, herbario, incubadoras, rotavapores, autoclave, balanza de
humedad, mufla para cenizas y campana microbiológica, además de la materia vegetal
utilizada para obtener los extractos.
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I.4.8.2 Materiales:
Para la mayoría de procedimientos que se desarrollaron en el proyecto cada una de
las instituciones participantes tenía la cristalería (vasos de precipitar, pipetas, matraces,
refrigerantes), los materiales (guantes, puntas plásticas descartables, microplacas) y los
reactivos (disolventes, estándares, medios de cultivo) necesarios que fueron repuestos o
complementados con el material adquirido con los fondos del proyecto.
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PARTE II. MARCO TEORICO
II.1 Neurotransmisor acetilcolina (AC)
La AC fue descubierta en 1867 como un compuesto sintético, detectado en el tejido
humano en 1906 en los extractos de las glándulas suprarrenales. La AC una vez liberada
tiene una vida media muy corta por la presencia de ACE, una enzima que hidroliza la
parte éster de la molécula, conduciendo a la pérdida de actividad (Houghton et al., 2006).
La AC fue el primer neurotransmisor caracterizado tanto en el sistema nervioso
periférico como en el sistema nervioso central de los mamíferos. Este neurotransmisor
participa en la regulación de funciones como lo son los fenómenos de activación cortical,
el paso de sueño a vigilia y los procesos de memoria y asociación (Guyton, 2001).
La AC es un típico transmisor de molécula pequeña que obedece a los principios de
la síntesis y liberación de sustancias. Se sintetiza en la terminal presináptica a partir de
acetil coenzima A y la colina; reacción que es catalizada por la enzima colina
acetiltransferasa. Una vez formada se transporta en vesículas, las cuales liberan el
neurotranmisor en la hendidura sináptica durante sinapsis neuronal (transmisión de la
señal), la AC es rápidamente degradada en acetato y colina por la enzima ACE. Su
función, al igual que otros neurotransmisores, es mediar en la actividad sináptica del
sistema nervioso (Guyton, 2001).
La AC como función colinérgica es necesaria para la memoria a corto plazo y su
disminución está asociada con el aumento de ACE, motivo por el cual los tratamientos se
centran en fármacos que aumentan los niveles de ACE, disminuyendo la ACE,
mecanismos presentes en la actividad de algunas moléculas contenidas en distintos
materiales vegetales (Akhondzadeh & Abassi, 2006).
II.2 Desórdenes neurodegenerativos y afecciones de la memoria
El mantenimiento de la memoria es una función multicausal. La neurodegeneración
es el término generalizado para definir la pérdida progresiva de la estructura o función de
las neuronas, incluyendo la muerte de las mismas. Es un proceso que aparece con la edad
y que se caracteriza por desórdenes neurológicos que se manifiestan por daño en las
neuronas y un severo y crónico deterioro de la memoria y del movimiento (Rubinsztein,
2006).
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Muchas enfermedades neurodegenerativas como las enfermedades de Parkinson,
Huntington y Alzheimer se producen como resultado de procesos oxidativos. El
descubrimiento de similitudes en las fisiopatologías de estas enfermedades ofrece la
esperanza de avances terapéuticos, ya que se podrían mejorar muchas de estas
enfermedades de una forma simultánea. Entre las características fisiopatológicas de estas
enfermedades neurodegenerativas se encuentran el ensamble de proteínas atípicas y la
muerte celular inducida por el estrés oxidativo. La neurodegeneración por lo general es un
proceso que aparece con la edad y que se caracteriza por desórdenes neurológicos que se
manifiestan por daño de las neuronas, así como el deterioro severo y crónico de la
memoria y el movimiento (Rubinsztein, 2006).
II.3 Enfermedad de Alzheimer (EA)
Inicialmente conocida como demencia, la EA fue descrita a principios del siglo
pasado como una enfermedad de pérdida progresiva de la memoria, alucinaciones, des-
orientación espacio temporal y trastornos de la conducta y el lenguaje, describiéndose
desde un principio los cambios anatomo-patológicos caracterizados por las placas seniles,
los ovillos neurofibrilares y los cambios arteroescleróticos cerebrales.
También llamada demencia senil de tipo Alzheimer (SDAT), es la forma más
común de demencia. Es una enfermedad hasta el momento incurable y terminal. Fue
descrita por primera vez por el psiquiatra y neuropatólogo alemán Alois Alzheimer en
1906 (Brookmeyer, Gray & Kawas, 1998). La EA se caracteriza por la pérdida de
memoria suficiente para interferir con el funcionamiento social y ocupacional. Esta
patología es clasificada como la forma más común de demencia, ya que existe una
pérdida insidiosa de la memoria, asociada a la disminución funcional, y perturbaciones en
la conducta de los individuos. Se conocen datos que indican que los pacientes pueden
vivir por más de una década después de que son diagnosticados con esta enfermedad,
siendo esta la causa principal de incapacidad en los ancianos (Akhondzadeh & Abassi,
2006).
En los últimos 20 años la enfermedad de Alzheimer pasó de ser el paradigma del
envejecimiento normal (aunque prematuro y acelerado) del cerebro, para convertirse en
una enfermedad auténtica, nosológicamente bien definida y con un origen genético
definido. Esta enfermedad afecta hoy a más de 20 millones de personas, tiene enormes
consecuencias sobre la economía de los países y constituye uno de los temas de
investigación más activos en el área de salud (Cacabelos, 2001).
Cada vez es más abrumadora la evidencia epidemiológica de que los factores de
riesgo vascular (diabetes, hipertensión arterial, dislipemias, dietas ricas en grasas,
tabaquis-mo, etc.), y otros como la intoxicación crónica leve por metales como el cobre,
favorecen también el desarrollo de EA en las personas genéticamente predispuestas.
Muchos de esos factores son controlables mediante la dieta, el mantenimiento de un peso
corporal adecuado y algunos productos nutricéuticos y medicamentos, lo que incrementa
su importancia epidemiológica. La incidencia de la EA tiene un rango de aumento anual
del 1 al 4%, principalmente en edades que van de los 65 a los 70 años, y cifras que se
acercan al 6% para aquellos sobre la edad de 85 años (Akhondzadeh & Abassi, 2006).
Afecta a una gran proporción de la población anciana, en los Estados Unidos su
prevalencia es del 47% en mayores de 85 años, con gastos de atención médica superiores
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a los $ 70 billones; para Guatemala no se tienen datos concretos, pero se estima que
afecta a un 10% de los mayores de 75 años. No se tienen procedimientos diagnósticos
precisos, por lo que puede ser mal diagnosticada por la mayoría de médicos generales,
además de tener una presentación insidiosa. Las deposiciones extracelulares cerebrales de
β-amiloide como placas seniles y los ovillos neurofibrilares interneuronales parecen
desempeñar un papel crucial en el desarrollo de la enfermedad, aunado al efecto de
factores asociados con la edad, deficiencias nutricionales, trauma de la cabeza,
hipoglicemia, estrés, oxidantes e inflamatorios celulares, metales pesados y defectos en la
reparación del daño neuronal (Carr, Goate & Morris, 1997).
Una revisión meta-analítica de 55 estudios publicados entre 1990 y 2003
demuestran que un 41% de los paciente con EA manifiestan psicosis, lo que se agrava en
los pacientes con formas más severas de desarreglos cognoscitivos, particularmente en la
población afroamericana (Ropacki & Jeste, 2005).
Factores asociados con la edad como deficiencias nutricionales, traumas de la
cabeza, hipoglicemia, hipertensión, estrés, dislipidemias, metales pesados (como el
aluminio) y defectos en la reparación neuronal, dan lugar a la formación de las
deposiciones extracelulares de β-amiloide como placas seniles y ovillos neurofibrilares
interneuronales, estos parecen ser los responsables de la pérdida de la viabilidad neuronal
dando lugar al aparecimiento de Alzheimer (Carr et al., 1997).
El hallazgo más importante asociado con la pérdida de la memoria es la
disminución del neurotransmisor AC que se encuentra en vertebrados y artrópodos y es
uno de los compuestos principales por el cual el impulso eléctrico es transmitido de
neurona a neurona o de neurona a músculos ya sea voluntario o involuntario.
El neurotransmisor AC fue descubierto en 1867 como un compuesto sintético y
detectado en el tejido humano en 1906 en los extractos de las glándulas suprarrenales. La
AC una vez liberada tiene una vida media muy corta por la presencia de grandes
cantidades de ACE, una enzima que hidroliza la parte éster de la molécula del
neurotransmisor, conduciendo así a la pérdida de actividad de éste (Houghton, 2006).
La AC como función colinérgica es necesaria para la memoria a corto plazo y su
disminución está asociada con el aumento de ACE, motivo por el cual los tratamientos se
centran en fármacos que aumentan los niveles de acetilcolina, disminuyendo la
acetilcolinesterasa, mecanismos presentes en la actividad de algunas moléculas
contenidas en distintos materiales vegetales (Akhondzadeh & Abassi, 2006).
En general se diagnostica en personas mayores de 65 años, aunque de forma menos
frecuente puede presentarse en edades más tempranas (Berchtold & Cotman, 1998). Se
estima que alrededor de 26.6 millones de personas en todo el mundo padecían esta
enfermedad para el año 2006, y se cree que estos valores podrían cuadruplicarse en el
2050 (Brookmeyer, Gray & Kawas, 1998).
La enfermedad puede describirse en diferentes estadíos:
Pre demencia: Los primeros síntomas se confunden frecuentemente con síntomas
relacionados al envejecimiento o el estrés. Las pruebas neuropsicológicas pueden revelar
problemas cognitivos leves incluso hasta ocho años antes de que el paciente presente el
cuadro clínico clásico de la enfermedad. Los primeros síntomas pueden afectar la mayoría
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de actividades de la vida diaria. El déficit más evidente es la pérdida de la memoria a
corto plazo, así como la incapacidad para adquirir nueva información. También pueden
presentarse problemas sutiles en la atención, planificación, flexibilidad, pensamiento
abstracto o impedimentos en la memoria semántica (memoria de significados, las
relaciones y el concepto) (Brookmeyer et al., 1998).
Demencia moderada: los pacientes pueden realizar tareas con cierta independencia
(como usar el baño), pero requieren asistencia en la realización de tareas más complejas
(como ir al banco, pagar cuentas, etc.). Paulatinamente llega la pérdida de aptitudes como
las de reconocer objetos y personas. Además, pueden manifestarse cambios de conducta
como arranques violentos. Los problemas del lenguaje son cada vez más evidentes debido
a la inhabilidad para recordar el vocabulario y las capacidades para leer y escribir
empeoran progresivamente. Las secuencias motoras complejas se vuelven menos
coordinadas. Durante esta fase, la memoria a largo plazo, que hasta ese momento
permanecía intacta, se deteriora (Brookmeyer et al., 1998).
Demencia avanzada: La enfermedad trae deterioro de masa muscular perdiéndose la
movilidad, incapacidad de alimentarse a sí mismo e incontinencia El lenguaje se torna
severamente desorganizado llegándose a perder completamente (Brookmeyer et al.,
1998).
Entre los mecanismos involucrados en la EA existe evidencia de la relación entre la
formación de placas -amiloides, el estrés oxidativo y la neurotoxicidad que conforman
la fisiopatología de la enfermedad. La formación de la placa amiloide y su proteína
precursora se ve inducida por el sistema 12 generador de ROS catalizado por metales
(hemoglobina, hemina o Fe2+, en combinación con H2O2) (Hensley, Carney, Mattson,
Aksenova, Harris, Wu et al.,1994).
Otro mecanismo involucrado es el aumento de la enzima ACE (enzima humana que
se encuentra en los tejidos nerviosos cuya función principal es hidrolizar al
neurotransmisor AC), la cual inhibe la trasmisión sináptica del impulso nervioso (Soreq
& Seimand, 2001).
Los medicamentos utilizados como la galantamina y fitoestigmina tienen acción
inhibitoria sobre la acetilcolinesterasa, sin embargo pueden presentar hepatotoxicidad por
su uso a largo plazo. Además muchas de estas drogas no previenen ni revierten el daño
producido. Por tanto, hay una constante búsqueda de nuevas drogas que produzcan con
menor toxicidad y sean más eficaces en el tratamiento (Soreq & Seimand, 2001). Los
síndromes neurodegenerativos son procesos patológicos del sistema nervioso central que
aparecen con el paso del tiempo y que se caracterizan por desórdenes neurológicos que
repercuten dañando las células cerebrales, deteriorando así la memoria y el movimiento.
Entre ellas se destacan especialmente las enfermedades de Alzheimer.
En una revisión de los mecanismos moleculares, celulares y en modelos animales
se demuestra que es la formación de péptidos β-amiloides de 4-k Da el factor más
importante en la progresión de la EA, indicando que varios tratamientos herbarios tienen
potencial de aplicación en el tratamiento de EA a través de propiedades multifuncionales,
como pro-colinérgicos, antioxidantes, antiamiloide y antiinflamatorias (Anekonda &
Redy, 2005).
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II.4 Enfermedad de Parkinson
Enfermedad degenerativa del sistema nervioso central producida por la pérdida de
neuronas en la materia gris y la disfunción de los circuitos neuronales relacionados con el
control de los movimientos corporales (Schapira, Man, Cooper, Krige, Jenner & Marsden,
1992). Los síntomas más típicos de la enfermedad son la bradicinesia (lentitud de los
movimientos voluntarios), acinesia (ausencia de movimiento), la rigidez muscular y el
temblor, si bien suelen coexistir otros síntomas tanto sensitivos como vegetativos,
cognitivos y afectivos. Es un trastorno propio de personas de edad avanzada, aunque
existen formas de inicio juvenil (Schapira et al., 1992).
La fisiopatología de la enfermedad incluye el proceso agresión específica y cambios
asociados al envejecimiento.
Los mecanismos se deben a que las neuronas pierden la sustancia gris, el cual es un
proceso de estrés oxidativo. El daño resultante de una sobreproducción de ROS, donde se
excede la capacidad antioxidante del cerebro, se puede deber a un aumento del depósito
de hierro en la sustancia negra, disminución de la ferritina y el glutatión y defectos en la
función de la cadena respiratoria (Schapira et al., 1992).
II.5 Esclerosis lateral amiotrófica
Es una esclerosis degenerativa, también conocida como enfermedad de neurona
motora (MND) o enfermedad de Lou Gehrig. Se caracteriza por una degeneración de las
neuronas motoras de la corteza cerebral, médula espinal y el cerebro. Un 10% de los
casos son de origen genético como consecuencia de un gen autosómico dominante, que
produce una mutación del gen superoxido dismutasa (Barber, Mead & Shaw, 2006).
La debilidad muscular implica dificultad para caminar y la dificultad de
coordinación en alguna de las extremidades (las manos, especialmente). La extensión de
ese debilitamiento y de la parálisis del tronco termina por provocar problemas para
masticar, tragar y respirar. Progresivamente, aparecen movimientos musculares
anormales como fasciculaciones, espasmos, sacudidas, calambres, debilidad, pérdida de
masa muscular o de peso corporal. No se ven afectadas las facultades intelectuales,
órganos de los sentidos, esfínteres o función sexual (Barber et al., 2006).
Existen algunos mecanismos propuestos por medio de los cuales actúan ciertos
fármacos utilizados en el tratamiento de esta patología, dentro de los cuales se encuentra
(Aggarwal & Cudkowicz, 2008):
- Agentes antiexitotócicos (riluzole, gabapentin, topiramato)
- Antioxidantes (vit E, glutatión, N-acetilcisteína, coenzima Q10, selegilino,
topiramato).
- Inmunomoduladores (gangliosido, interferon beta-1A, ciclofosfamida)
- Reguladores de calcio (verapamil, nimodipina)
- Metabolismo energético (monohidrato de creatina, coenzima Q10, Ltreonina)
- Factores tróficos (factor neutrofílico ciliar, factor derivado del cerebro, hormona
liberadora de tirotropina)
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- Anti-apoptótico (omigapil, minociclina, pentoxifilina)
- Antiinflamatorio (celecoxib, minociclina, pentoxifillina)
- Parasimpatomimético (3,4-diaminopiridina, fitostigmina).
II.6 Tratamiento de los síndromes neurodegenerativos
El tratamiento farmacológico se basa en el uso de IACE (donepezil, rivastigmina y
galantamina), que han demostrado efecto en los síntomas cognoscitivos, funcionales y de
comportamiento de la EA. De los principales tratamientos sustitutivos para reponer
sistemas de neurotransmisión deficitarios y que constituyen la primera generación de
fármacos antidemencia, están los IACE, como tacrina, tetrahidroaminoacridina (THA),
que tienen actividad a dosis de 40-160 mg/día, la cual fue aprobada por la FDA en 1993
(Gracon, Knapp, Berghoff, Pierce, De Jong, Lobbestael et al., 1998).
La integración de varios ensayos clínicos realizados en distintas partes del mundo
con IACE como tacrina, donepezilo y rivastigmina para evaluar su eficacia como
potenciadores cognitivos después de 24 a 30 semanas de tratamiento, concluyó que se
producía una mejoría global en los pacientes tratados basándose en los siguientes
parámetros: disminución del ritmo de deterioro cognitivo, mantenimiento de la
competencia para actividades de la vida diaria durante largos periodos de tiempo, mejoría
de la calidad de vida del paciente y su familia, disminución de la sobrecarga familiar,
disminución de costos en atención comunitaria y retraso en la admisión en centros para
atención crónica (Giacobini, 1999; Sramek & Cutler, 1999; Mayeux & Sano, 1999).
Algunos de los nuevos tratamientos incluyen la memantina, un bloqueador de canal
de sodio, así como nuevos enfoques que están más ligados a la patogénesis de la
enfermedad y por consiguiente potenciales modificadores de la enfermedad, como vacuna
contra péptido β-amiloide, inhibidores de secretasa, drogas que disminuyen los niveles de
colesterol, quelantes de metales y agentes antiinflamatorios (Scarpini, Scheltens &
Feldman, 2003).
El diagnóstico temprano de EA y su intervención terapéutica con drogas que
disminuyen el progreso de la enfermedad parecieran ser el elemento más importante en
un tratamiento efectivo, aunque por el momento no se conocen estos tratamientos. Las
drogas IACE se usan para el tratamiento sintomático de EA. Evidencia reciente de
estudios preclínicos indican que estos agentes pueden atenuar el daño neuronal y la
muerte por daño citotóxico, influyendo en la patogénesis de la enfermedad (Francis,
Nordberg & Arnold, 2005).
La revisión de las plantas usadas para el tratamiento de AE demostró que existen
varias especies con potencial, evidenciándose diversas propiedades multifuncionales
(procolinérgica, antioxidante, antiamiloide y antiinflamatoria), particularmente la
demostración por procesos in vitro e in vivo de la inhibición de formación del péptido β-
amiloide y la inhibición de la progresión de la EA (Anekonda & Reddy, 2005).
Ante los recientes avances en la última década en la concepción multifactorial y el
tratamiento integral de EA, es evidente que algunos alimentos y condimentos pueden ser
útiles en la prevención y manejo de la enfermedad por tener múltiples efectos fármaco-
lógicos, aunque es de recordar que existe un complejo fenómeno de biodisponibilidad,
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pudiendo las moléculas tener actividad in vitro, pero no es garantía que estas pasen la
barrera hemato-cerebral (Zhang, 2007).
El tratamiento de EA ha progresado enormemente en los últimos 10 años, desde el
uso de medicamentos psicotrópicos para sedación hasta el uso racional de tratamientos
para reemplazo de los neurotransmisores, particularmente los IACE, como denopezil,
rivastigmina, galantamina y memantina, mejorando tanto aspecto del conocimiento como
otras actividades de la actividad diaria (Wilkinson, 2007).
Algunos de los medicamentos naturales que mejor se han estudiado para el
tratamiento de afecciones nerviosas y de la memoria son los alcaloides aislados de
Huperzia serrata Thunb., una especie que es utilizada en China para el tratamiento de
esquizofrenia, miastenia gravis y envenenamiento por organofosforados, y que
últimamente a dado resultados clínicos satisfactorios en el tratamiento de la memoria
(Ma, Tan, Zhu, Gang & Xiao, 2007).
II.7. Estudios sobre la actividad IACE en Asia, Africa y Europa
En las primeras investigaciones de especies vegetales con posible actividad IACE
se estudiaron más de 100 especies usadas medicinalmente en la India, demostrando
actividad en 67 de ellas siendo las más importantes las especies de las familias
Euphorbiaceae, Leguminosae y Solanaceae, y siendo la que mayor actividad inhibitoria
demostró, la producida por las hojas de Physalis minima Linn. (Gupta & Gupta, 1997).
Existen evidencias que algunos metabolitos secundarios presentes en extractos
vegetales pueden inducir mecanismos neuroprotectores y que también evitan el estrés
oxidativo (Auroma, Bahorun & Jen, 2003).
Una revisión de la plantas usadas tradicionalmente en las medicinas ayurveda,
china, europea y japonesa para mejorar la memoria y la función cognositiva, demuestra
que por lo menos 20 especies contienen moléculas importantes para el tratamiento de EA
y otros desórdenes cognositivos, sobresaliendo Celastrus paniculatus Willd., Centella
asiatica L., Clitoria ternatea L., G. biloba, H. serrata, Lycoris radiata Herb. y Salvia
miltiorrhiza Bunge (Howes & Houghton 2003), y otras con importante aceite esencial,
como especies del género Salvia y Lippia (Howes et al., 2003).
En Europe se realizaron algunos ensayos clínicos del uso de aceites esenciales de
Lavandula angustifolia Mill. y Melissa officinalis L. en el tratamiento de demencia,
demostrándose un impacto significativo en los problemas de conducta de estos pacientes,
aunque su evidencia no es suficiente para el uso indiscriminado de estos agentes
farmacológicos (Holmes & Ballard, 2004).
En Tailandia, extractos metanólicos de 32 especies usadas en la medicina
tradicional para rejuvenecer y como remedios neurotónicos fueron evaluadas por su
actividad IACE por un método colorimétrico, encontrándose que a dosis de 0.1 mg/mL,
dos especies (Stephania suberosa Forman. y Tabernaemontana divaricata (L.) R.Br. ex
Roem. & Schult.) mostraron inhibición del 65-90%, y otras cuatro (Butea superba Roxb.,
Piper interruptum Opiz., Piper nigrum L. y Cassia fistula L.) inhibieron la actividad en
50-65% (Ingkaninan et al., 2003).
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En la flora oriental se ha demostrado una amplia gama de estructuras responsables
de la actividad inhibitoria de la ACE, como los monoterpenoides, curcuminas, alcaloides,
flavonoides, magnolol, tanshinonas, coptisinas y palminas, todos estos aislados de
distintas especies (Howes et al., 2003).
En Corea se estudiaron siete hierbas usadas tradicionalmente para mejorar la
memoria y capacidad cognoscitiva en ancianos, donde se encontró por los extractos
metanólicos del rizoma de Acorus calamus L. y Epimedium koreanum Nakai presentan
una inhibición significativa de la colinesterasa a dosis de 200 µg/mL medida por métodos
colorimétricos (Oh et al., 2004).
El extracto acuoso de Camellia sinensis L. (te verde y te negro) ha demostrado
actividad IACE (CI50: 0.03 mg/mL) e IBCE (CI50: 0.05 mg/mL), así como prevención en
la formación de β-amiloidosis, lo que sugiere una acción sinérgica para evitar los
síntomas, así como una acción que podría retardar la progresión de la enfermedad
(Okello, Savelev & Perry, 2004). Otra planta interesante de la flora india es la corteza de
la Thespesia populnea Soland ex. Correa que ha demostrado mejorar ls memoria y es una
candidata para el manejo de EA (Vasudevan & Parle, 2006).
En un estudio de 21 especies de plantas medicinales usadas en Turquía evaluadas
por actividad IACE e IBCE se demostró que ninguna tuvo actividad importante a dosis de
10 μg/mL, pero si demostraron actividad del 93-95% a una dosis de 1 mg/mL; las
especies con mayor actividad fueron Buxus sempervirens L., Corydalis solida (L.) Swartz
y Rhododendron luteum Sweet (Orhan et al., 2004). Varios extractos orgánicos y el aceite
esencial de Rosmarinus officinalis L. demostraron actividad IACE y IBCE medida por
métodos microcolorimétricos por el método de Ellman (Orhan, Aslan, Kartal, Sener &
Baser, 2008), así como dos especies de Lamianeas (Salvia triloba L. y Teucrium polium
L.) (Orhan & Aslan, 2009). Recientemente el mismo grupo demostró que de 33 extractos
metanólicos del género Scutellaria, mostraron escasa actividad anti ACE y BCE, pero
Scutellaria brevibracteata mostró una importante actividad antioxidante y anti-tirosinasa
(Senol, Orhan, Yilmax, Cicek & Sener, 2010)
La evaluación de siete especies vegetales usadas en Líbano para el tratamiento de
desórdenes neurológicos, como problemas de la memoria, epilepsia y estados depresivos,
demostró que ninguna presenta una actividad IACE o de transporte del sistema de
serotonina importante, encontrándose una actividad moderada en los extractos en acetato
de etilo de Artemisia herba-alba Asso, Salvia triloba L.f. y Lavandula officinalis Chaix.
(Salah & Jäger, 2005).
En un estudio de 10 árboles nativos de Sudáfrica usados en la medicina tradicional,
se encontró que varios extractos tienen diferentes actividades biológicas, particularmente
en el extracto etanólico de la corteza de Combretum krausii Hochst., se encontró
actividad IACE con una CI50 de 0.04 mg/mL (Eldeen et al., 2005). En tres órganos de 24
especies usadas como medicina en Nigeria, se demostró por métodos espectrofoto-
métricos y bioautográficos la actividad inhibitoria de ACE y BCE en la corteza de la raíz
de Spondias mombin L., e interesante actividad IACE en la corteza de Alchornea laxiflora
(Benth.) Pax & K.Hoffm., la corteza de la raíz de Calophyllum inophyllum L. y las hojas
de Calophyllum jagus L. y Morinda lucida Benth. (Elufioye et al., 2009).
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Extractos acuosos y etanólicos de 11 especies utilizadas en la medicina tradicional
danesa para mejorar la memoria, fueron evaluados por su actividad IACE por un método
microcolorimetrico, encontrándose actividad en un método de dosis-dependiente en
especies del género Corydalis y una inhibición moderada en Lavandula angustifolia
Mill., Ruta graveolens L., Rosmarinus officinalis L., Petroselinum crispum Mill. y
Mentha spicata L. (Adsersen et al., 2006).
Uno de los principales hallazgos asociados con la EA es la disminución del
neurotransmisor AC. Existen evidencias que ciertos componentes bioactivos presentes en
extractos de plantas, pueden inducir mecanismos de neuroprotección, inmunomodulación
o bien evitar el estrés oxidativo (Auroma et al., 2003). Esta disminución de AC se asocia
con la elevación de ACE, motivo por el cual el tratamiento se ha centrado en drogas que
aumentan los niveles de AC en el cerebro para compensar la pérdida de funciones
colinérgicas, ya sea ésta por precursores de AC, agonistas muscarínicos o nicotínicos e
IACE, mecanismos que pueden presentarse en al menos unas 10 drogas vegetales y sus
substancias activas (Akhondzadeh & Abbasi, 2006).
En la medicina ayurveda, existen preparaciones para mejorar los desórdenes
cognositivos, como Brahmi rasayana, una preparación que contiene especies como
Bacopa monnieri (L.) Pennell, Eugenia caryophyllata Thunb., Elettaria cardamomum
(L.) Maton; Cinnamomum zeylamicum J. Presl. y Piper nigrum L. (Joshi & Parle, 2006).
En 66 extractos de 37 especies medicinales de la India, por el método micrométrico de
IACE, se demostró que seis especies (Embelia ribes Burm. f., Ficus religiosa L.,
Nardostachys jatamansi DC, Semecarpus anacardium L., Tinospora cordifolia Miers y
Withania somnífera Dunal.) tienen actividad inhibitoria a dosis de 16-73 µg/mL,
sustentando algunas de las atribuciones tradicionales para mejorar la memoria (Vinutha et
al., 2007). El extracto hiodroalcohólico de seis especies usadas en la medicina tradicional
para mejorar las funciones de memoria, cuatro (C. asiatica, N. jatamansai, Myristica
fragrans Houtt. y Evalvulus alsinoides L.) inhibieron el 50% de la actividad de ACE en
concentraciones de 100-150 µg/mL, aunque el control de fisostigmina tuvo una CI50 de
0.076±0.0042 µg/mL (Mukherjee et al., 2007).
El extracto estandarizado de la hierba culinaria Salvia officinalis L. y su principal
sustancia activa (ácido rosmarínico) demostraron inhibir la toxicidad de células de
feocromocitoma en las que se indujo toxicidad por péptido β-amiloide de EA y confirman
su efecto neuroprotector (Iuvone et al., 2006). El aceite esencial de Thymus vulgaris L. y
varios de sus componentes han demostrado actividad IACE, en orden decrecientes de
actividad estos fueron timohidroquinona > carvacrol > timoquinona > aceite esencial total
> timol > linalool (Jukic, Politeo, Maksimovic, Milos & Milos, 2007).
Por fraccionamiento bioguiado del extracto etanólico de Rhodiola rosea se aisló a la
hidroquinona como la sustancia responsable de la IACE (Wang, Zhou, Gao, Wang &
Yao, 2007). Otra molécula interesante en el manejo de la EA por su actividad IACE e
IBCE son las plastoquinonas y el ácido sargaquinóico aisladas de organismos marinos
como Sargassum sagamianum (Choi, Ryo, Park, Kim, Shin, Roh et al., 2007).
Una revisión muy completa de las especies vegetales usadas para el tratamiento
tradicional de desórdenes cognositivos, demostró que por lo menos 150 especies en varias
preparaciones tienen alguna actividad demostrada por pruebas in vitro o in vivo o clínicas.
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Se demuestra que existe una gran diversidad de las familias vegetales a las que se les
atribuyen estas propiedades, siendo más importante el uso tradicional en Asia y Europa
(Adams et al., 2007).
El aceite esencial, extracto etanólicos y la decocción de 10 especies vegetales de
Portugal fueron analizados por su actividad IACE, encontrando que los aceites esenciales
o extractos acuosos o etanólicos de Hypericum undulatum Shoubs. ex Willd, Lavandula
pedunculata (Miller) Cav., M. officinalis L., Mentha suaveolens Ehrh., Laurus nobilis L.,
y Sanguisorba minor Scop. (Ferreira et al., 2006). Posteriormente, el mismo equipo
investigó cinco especies usadas como condimento, encontrando que Rosmarinus
officinalis L. presenta una potente actividad IACE, siendo el aceite esencial la fracción
más activa (Mata, Proença, Ferreira, Serralheiro, Nogueira & Araújo, 2008), así como
especies del género Hypericum, con CI50 entre 0.62-1.79 mg/mL para ACE y actividad
antioxidante por DPPH (Hernandez, Falé, Araújo & Serralheiro, 2010)
En un estudio con 26 plantas usadas en la medicina tradicional china para el
tratamiento de afecciones nerviosas realizado en Hong Kong, se analizaron extractos
metanólicos y acuosos por un método microcolorimétrico, demostrándose un importante
porcentaje de inhibición, en seis extractos acuosos y tres metanólicos a una dosis de 50
μg/mL, siendo las principales especies con actividad las raíces de S. miltiorrhizae y
Paeoniae albiflora Pall. (Lin, Ho, Lau, Wong, Shaw & Wan, 2008).
Entre las moléculas que han demostrado actividad IACE, destacan los
curcuminoides aislados de Curcuma longa L. estudiados en Pakistán, donde se demostró
actividad inhibitoria in vitro (CI50: 19.67 μΜ), ex vivo en una forma dosis-dependiente en
corteza frontal e hipocampo e in vivo en en amnesia inducida en ratas con escopolamina,
concluyéndose que la mezcla de curcuminoides es más efectivo que las moléculas
aisladas en forma individual (Ahmed & Gilani, 2009). Hasta el momento se han
desarrollado cuatro ensayos clínicos sobre curcuninoides y prevención de EA, pero no se
encontraron diferencias significativas con los pacientes tratados con placebo (Hamaguchi,
Ono & Yamada, 2009). Otras moléculas de origen natural con potencial aplicación en la
prevención de EA son resveratrol y catequinas del te verde, posiblemente por sus
propiedades antiamiloidogénicas, antioxidantes y antiinflamatorias (Kim, Lee, & Lee,
2010).
Otra especie común que ha demostrado interesante actividad es la semilla de
Trigonella foenum-graecum L., de la cual se evaluaron los extractos etanólicos crudos,
fracciones y trigonellina por el método microcolorimétrico de Ellman y bioautografía en
TLC; la fracción con acetato de etilo del extracto etanólico (CI50: 53±17 μg/mL) y la
fracción rica en alcaloides (CI50: 9.23±6.08 μg/mL) fueron las que tuvieron mayor
actividad IACE, trigonellina demostró una actividad intermedia (CI50: 233±0.12 μg/mL),
mientras que el estándar, galantamina, dio una alta actividad con una CI50 de 1.27±0.21
μg/mL. (Kumar, Mukherjee, Bhadra & Saha, 2009)
La mas reciente revisión sobre el tema de productos naturales en la prevención o
tratamiento de EA, indica que las drogas vegetales mas promisorias corresponde a
especies provenientes de la flora europea (como galantamina obtenida de varias
Amaryllidaceae, algunas plantas aromáticas como S. officinalis y Salvia lavandulifolia
Vahl., M. officinalis, vinpocetina de Vinca minor L.) y de la medicina tradicional china
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(como G. biloba, H. serrata, Panax ginseng L. y Polygala tenuifolia Willd.); así como
otras plantas que contribuyen a mejorar los estados de conducta o psicológicos, como
Cannabis sativa L., C. sinensis, C. longa, Hypericum perforatum L., Piper methysticum
G. Frost, Valeriana officinalis L. y Vitis vinífera L.) (Perry & Howes, 2010).
II.8 Estudios en Sud América y Guatemala
Los estudios realizados en el continente americano son escasos. En Colombia se
estudiaron extractos diclorometánicos y metanólicos de 40 especies vegetales nativas por
la técnica cromatográfica de Ellman, encontrado actividad importante en las especies
Witheringia coccoloboides (Damn.) Hunz., Solanum deflexiflorum Bitter y Solanum
leucocarpum Dunal (Mosquera et al., 2004).
Estudios colaborativos entre Perú y la República Popular China demostraron que
Lepidium meyenii Walp. mejoró significativamente la memoria y el aprendizaje de ratas
en las que se indujo desarreglos de memoria con escopolamina, así como la actividad
inhibitoria de ACE (Rubio, Dang, Gong, Liu, Chen & Gonzales, 2007).
A partir de hallazgos etnobotánicos en el Amazonas, se identificó Ptychopetalum
olacoides Bentham cuyo extracto hidroalcohólico demostró actividad IACE (Siqueira et
al., 2003); en un extracto estandarizado, se demostró importante actividad IACE en zonas
cerebrales (hipocampo y corteza cerebral), evaluada por el método colorimético de
Ellman (Figueiró et al., 2010). Los alcaloides indólicos de Tabernaemontana australis
(Müell. Arg) Miers demostraron actividad IACE en concentración similar a la droga de
referencia, fisostigmina y galantamina, evluada por TLC por el método de Ellman
(Andrade, Lima, Pinto, Rezende, Carvalho & Epifanio, 2005). Una fracción rica en
alcaloides de la corteza de Geissospermum vellosii Allem. demostró inhibición de ACE
de cerebro de rata y anguila eléctrica y BCE de suero de caballo en forma dosis-
dependiente con CI50 de 1.6-2-9 μg/mL, siendo geissospermina el alcaloide con mayor
actividad (Lima, Costa, Epifanio, Castro, Rocha & Pinto, 2009).
Los extractos acuosos de la raíz de Catharanthus roseus (L.) G. Don. inhibieron
fuertemente la ACE en un método in vitro, responsabilizándose de dicha actividad a
varios alcaloides, particularmente serpentina (CI50: 0.775 μM), así mismo, otros de los
alcaloides aislado tuvieron actividad por diferentes mecanismos en la neurotransmisión
colinérgica (Pereira, Ferreres, Oliveira, Gaspar, Faria, Valentão et al., 2010).
En 57 especies vegetales de la familia Amaryllidaceae y familias relacionadas
provenientes de Panamá se demostró que 8 (14%) mostraron una actividad IACE por
bioautografía en TLC a dosis de 100 μg/mL, de las cuales Crinum zeylanicum L. y Xyris
jupicai Rich mostraron además actividad antioxidante por DPPH (Calderón et al., 2010).
En un grupo de 73 especies nativas y naturalizadas en la Argentina, estudiadas por
métodos por TLC y un método cuantitativo en micreoplaca, se demostró que cinco
especies (Achyrocline tomentosa Rusby, Eupatorium viscidum Hook. & Arn, Ruprechtia
apetala Weed., Trichiocline reptans (Wedd.) Rob. y Zanthoxylum coco Hook. F. & Arn.)
presentaron inhibición de ACE superior al 80% en dosis menores a 1 mg/mL (Carpinella
et al., 2010).
Una revisión de la literatura a nivel global indica que en America Central se
conocen muy pocas especies vegetales que tengan uso tradicional y que se haya
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demostrado actividad in vivo e in vitro, tales como Brugmansia candida Pers., Lantana
camara L., Medicago sativa L., Tagetes lucida Cav y Theobroma cacao L., tienen un uso
tradicional y alguna actividad IACE que ya se encuentran en preparaciones
estandarizadas y de uso comercial (Adams et al., 2007).
En Guatemala, en la Facultad de CCQQ y Farmacia se realizó un proyecto que
evaluó cualitativamente la actividad IACE por medio de una bioautografía por TLC de
dos extractos de esponjas marinas del género Calyx procedentes del Caribe
Mesoamericano. En este proyecto se sintetizaron cinco compuestos orgánicos que
presentaron una leve actividad IACE (Cobar & Vásquez, 2004).
II.9 Métodos de detección de la actividad IACE
II.9.1 Metodología cualitativa con Fast Blue B
La actividad enzimática se detecta por medio de la conversión de acetato de naftilo
en α-naftol y la formación del producto coloreado purpura de diazonio con la sal de Fast
Blue B. Los inhibidores de la ACE producen manchas blancas en un fondo color púrpura
en las placas cromatográficas en las bioautografías. Los alcaloides galantamina y
fisostigmina, que son conocidos como inhibidores de la acetilcolinesterasa, se utilizaron
para determinar la sensibilidad de la prueba (Marston, Kissling & Hostettmann, 2002).
II.9.2 Metodologia cuantitativa ó microcolorimétrica con Fast Blue B
En una microplaca se enfrentan los inhibidores de ACE, un amortiguador con α-
naftol y la solución de parada que es el SDS al 5%, al agregar la sal de Fast Blue B se
forma un compuesto color púrpura llamado diazonio, que se estabiliza como una
coloración azul por acción del SDS, posteriormente se cuantifica la inhibición y actividad
de la enzima determinando la absorbancia a una longitud de onda de 600 nm (Peng &
Zhao, 2009).
II.9.3 Metodología cualitativa ó de Ellman
En una placa cromatográfica de silica gel 60F254. Se aplica la muestra y se coloca la
placa en una cámara de vidrio saturada previamente con acetato de etilo: ácido acético:
ácido fórmico: agua (100:11:11:26) y se desarrolla.
Se asperja con una mezcla del sustrato ATCI o DTNB en un amortiguador de Tris-
HCl a pH 8.
Se vuelve a asperjar con la enzima ACE disuelta en el amortiguador a 37°C y se
obtiene un fondo amarillo, donde el aparecimiento de manchas blancas indica la presencia
de la actividad IACE (Adsersen et al., 2006.)
II.9.4 Metodología cuantitativa por el procedimiento de Ellman
Para detectar el porcentaje de inhibición de la enzima se utiliza un lector de
microplacas ó microespectrofotómetro. La enzima ACE hidroliza el substrato ATCI
logrando como producto la tiocolina. Ésta reacciona con el DTNB para formar dos
productos, uno de ellos el 5 tio-2-nitrobenzoato que puede ser detectado a 405 nm por su
coloración amarilla (Adsersen et al., 2006.)
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II.10 Selección de las especies en estudio
En los últimos 30 años el Departamento de Citohistología en asociación con otras
instituciones ha realizado varias encuestas y revisiones de la literatura que han
conformado una base de datos de los usos etnomédicos de especies nativas,
particularmente enfocados a problemas infecciosos, inmunomoduladores y nerviosos.
Se realizó una revisión de la base de datos y de la literatura en búsqueda de especies
vegetales usadas popularmente para el tratamiento de afecciones nerviosas o
neurológicas, y como tónico o para mejorar la memoria. Una primera evaluación arrojó
una lista de 24 especies nativas con esos usos, la cual sirvió de Universo para el presente
proyecto del cual se eligieron 10 especies a conveniencia (Cuadro 1).
Cuadro 1. Plantas nativas detectadas por ser usadas para afecciones neurológicas y de la
memoria
Especie vegetal Nombre común Usos específicos Referencia
Ageratum conyzoides Mejorana Tónico Morton, 1977; Cáceres, 2006
Brugmansia candida Florifundia Problemas de memoria Adams et al., 2007
Cassia reticulata Barajo Te cordial, tónico Morton, 1977
Chaptalia nutans Valeriana Epilepsia Morton, 1981
Chiranthodendron pentadactylon Manita Epilepsia Morton, 1981
Dorstenia contrajerva Contrayerba Epilepsia, tónico Morton, 1981; Orellana, 1987
Erythrina berteroana Palo de pito Afecciones nerviosas IIN, 1978
Hyptis verticillata Hierba de zorra Estimulante orgánico Morton, 1977
Lantana camara Siete negritos Fortalecer la memoria Adams et al., 2007
Lippia graveolens Orégano mexicano Condimento, aroma Cáceres, 2006
Lycopodium dichotomus Licopodio Epilepsia Orellana, 1987
Petiveria alliacea Apacín Nerviosismo, histeria Morton, 1977; 1981
Phlebodium pseudoaureum Calahuala Epilepsia IIN, 1978
Pimenta dioica Pimienta Tónico Morton, 1977
Pluchea odorata Suquinay Parálisis Orellana, 1987
Salvia microphylla Mirto Medicinal, aromática Información etnobotánica
Solanum nigrescens Macuy Epilepsia Nicholas, 1999
Tagetes lucida I yá, pericón Epilepsia, neuralgias IIN, 1978; Orellana, 1987
Tecoma stans Timboco Tónico Morton, 1977
Ternstroemia tepesapote Tila Sedante, ansiolítico Información etnobotánica
Theobroma cacao Cacao Tónico, cordial Adams et al., 2007
Valeriana prionophylla Veleriana Epilepsia, ansiedad IIN, 1978; Nicholas, 1999
Vernonia deppeana Suquinay Tónico Orellana, 1987
Wiganda urens var. caracasana Chocon Afecciones nerviosas IIN, 1978
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PARTE III. RESULTADOS
III.1 OBJETIVO 1
Revisar la información existente en bases de datos y fuentes especializadas de las
especies en estudio y en la demostración de la actividad IACE.
III.1.1 Elaboración de procedimientos de operación estándar (POE)
Se elaboraron los siguientes POE:
Colecta y secado de materia vegetal
Herborización
Uso del equipo GPS
Extracción de aceites esenciales por neoclevenger
Extracción por percolación fraccionada (diclorometano y metanol) y
concentración en rotaevaporador
Partición líquido:líquido para fraccionar los extractos bioactivos
Evaluación de la actividad IACE por TLC de Verpoorte
Evaluación de la actividad IACE por TLC de Hostettmann
Evaluación de la actividad IACE por TLC por el método de Fast blue
Uso del espectrofotómetro
Ensayo en microplaca para detección de actividad IACE en extractos vegetales
etanólicos y aceites esenciales
Ensayo en microplaca para medir el porcentaje de actividad IBCE por aceites
esenciales.
Se realizó una revisión de artículos de revistas científicas con la descripción de los
métodos para determinar la actividad de IACE para así poder montar la técnica
microcolorimetrica y cromatográfica.
Se obtuvo información a través de Internet en revistas científicas, de varios centros
de documentación de la USAC y de la biblioteca del Laboratorio de Productos Naturales
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Farmaya para agrupar información actualizada de cada una de las especies vegetales
seleccionadas para el estudio. Según el modelo de la OMS que se indica en el Cuadro 2,
se prepararon monografías de las especies del proyecto (Cuadro 3), y que se incluyen en
el Anexo 1.
Cuadro 2. Información contenida en cada una de las Monografías
Denominación, sinónimos y
equivalencias
Denominación
Sinónimos
Nombres vernáculos
Partes usadas
Descripción botánica
Datos agrotecnológicos
Distribución y hábitat
Cultivo
Usos etnomédicos o tradicionales
Usos medicinales atribuidos
Formas de preparación
Combinación otros ingredientes
Usos etnoveterinarios
Otros usos populares
Droga vegetal
Denominación
Definición
Obtención
Descripción macroscópica
Descripción microscópica
Composición química
Monografía de control de calidad:
Identificación
Descripción macroscópica
Descripción microscópica
Características organolépticas
Ensayos
Características fisicoquímicas
Ficha técnica de seguridad y eficacia
Toxicología
Indicaciones terapéuticas
Dosis
Datos farmacológicos
Referencias
Cuadro 3. Lista de monografías farmacopeicas elaboradas
Nombre cientifico Nombre común Droga vegetal Páginas Referecias Foto
Chiranthodendron pentadactylon Manita Flor 3 14 si
Dorstenia contrajerva Contrahierba Hoja y raíz 3 14 si
Lantana camara Cinco negritos Hoja 6 20 si
Lippia graveolens Orégano Hoja 4 19 si
Petiveria alliacea Apacín Hoja 8 18 si
Phlebodium pseudoaureum Calahuala Fronda y Rizoma 6 29 si
Salvia microphylla Salvia Hoja y flor 3 8 si
Tagetes lucida Pericón Inflorescencia 8 41 si
Ternstroemia tepezapote Tila Flor 3 10 si
Valeriana prionophylla Valeriana Raíz 6 28 si
Fuente: FODECYT 39-2008
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III.2 OBJETIVO 2
Seleccionar y colectar diez (10) especies vegetales de un listado de 24 especies
usadas popularmente para el tratamiento de afecciones nerviosas, neurológicas y de la
memoria.
III.2.1 Especies del estudio
Las especies del proyecto fueron escogidas en base a su uso popular para afecciones
del sistema nervioso, así como a su disponibilidad en el momento de la colecta:
- Flor de Chiranthodendron pentadactylon (manita)
- Hoja y raíz de Dorstenia contrajerva var. houstoni (contrahierba)
- Raíz de Dorstenia contrajerva var. tenuifolia (contrahierba)
- Hoja de Lantana camara (cinco negritos)
- Hoja de Lippia graveolens (orégano)
- Hoja de Petiveria alliacea (apacín)
- Fronda y rizoma Phlebodium pseudoaureum (calahuala)
- Hoja y flor de Salvia microphylla (salvia)
- Inflorescencia de Tagetes lucida (pericón)
- Flor de Ternstroemia tepezapote (tila)
- Raíz de Valeriana prionophylla (valeriana)
Se recopiló la información de cada especie sobre nombre científico, parte usada,
sitio de colecta, coordenadas geográficas, altitud (msnm), hábitat, hábito, fecha de
obtención, peso total material (kg), muestras botánicas para herbario, No. de registro de
herbario, foto(s), aceite esencial (g), aceite esencial (% rendimiento), extracto en gramos
y porcentaje de rendimiento de los extractos diclorometánicos y metanólicos. En el
Cuadro 4 se muestra la información detallada de cada una de las especies.
Fotografía 1. Procesamiento y secado de las
especies colectadas en Ecoparcela El
Kakawatal, Samayac, Suchitepéquez.
Fuente: FODECYT 39-2008
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Cuadro 4. Información general de cada especie colectada
Nombre científico Chiranthodendron
pentadactylon Larr
Dorstenia
contrajerva var.
houstoni L.
Dorstenia
contrajerva var.
houstoni L.
Dorstenia
contrajerva var.
tenuifolia L
Lippia
graveolens HBK
Lantana camara
L.
Petiveria alliacea
L.
Parte usada Flor Hoja Raíz Raíz Hoja Hoja Hoja
Sitio de colecta
Carretera entre
Chimaltenango y
Tecpán
Ecoparcela El
Kakawatal,
Samayac,
Suchitepéquez
Ecoparcela El
Kakawatal,
Samayac,
Suchitepéquez
Ecoparcela El
Kakawatal,
Samayac,
Suchitepéquez
EcoparcelaEel
Kakawatal,
Samayac,
Suchitepéquez
Colonia Valle
Verde, Zona 15,
Guatemala
Ecoparcela El
Kakawatal,
Samayac,
Suchitepéquez
Coordenadas
geográficas
14º38’59.7‖N
090º51’43.8‖O
14º33’05.9‖N
091º27’58.7‖O
14º33’05.9‖N
091º27’58.7‖O
14º33’05.8‖N
091º27’57.8‖O
14º33’06.1‖N
091º28’01.02‖O
14°36’12.5‖N
090°29’53.7‖O
14º33’05.8‖N
091º27’59.6‖O
Altitud (msnm) 2,029 466 466 466 466 1,629 465
Hábitat
Crece a la orilla de la
carretera y en las
casas de las aldeas
Área de
policultivo
Área de
policultivo
Área de
policultivo
Área de
policultivo
Crece en zonas
tropicales y
regiones cálidas
Área de
policultivo
Hábito Árbol mediano y
muy ramificado
Hierba mediana de
tallo carnoso
Hierba mediana de
tallo carnoso
Hierba mediana
de tallo carnoso
Arbusto mediano,
leñoso en la base
y levemente
ramificado
Arbusto
ramificado, de
crecimiento rápido
Arbusto mediano,
tallo delgado y
poco ramificado
Peso material (kg) 1.0 0.94 0.70 0.62 1.4 0.4 1.0
Monografía
terminada Si Si Si Si Si Si Si
Muestras 3 3 3 3 3 3 4
No. Registro 1,088 1,082 1,082 1,123 1,083 1,166 1,076
Foto(s) Si Si Si Si Si Si Si
Fuente: FODECYT 39-2008
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Nombre científico Petiveria alliaceae L. Phlebodium pseudoaureum
(Cav.) Lellinger
Salvia microphylla
HBK Tagetes lucida Cav.
Ternstroemia
tepezapote
Schlect. &
Cham.
Valeriana
prionophylla
Stand.
Parte usada Rizoma Rizoma Fronda Hoja y flor Inflorescencia Flor Raíz
Sitio de colecta
Ecoparcela el
Kakawatal, Samayac,
Suchitepéquez
Biocultivos de Guatemala S.A.,
San José Pinula ICTA, Chimaltenango
Cuatro Caminos, San
Cristóbal, Totonicapán
Aldea San
Ignacio, San
Pedro Pinula,
Jalapa
Paraje
Sacolojabaj,
Aldea Patachaj,
San Cristóbal,
Totonicapán
Coordenadas
geográficas
14º33’05.8’’N
091º27’59.6’’W
14°34´23‖ N
90°20´21‖ W
14º38’15.3’’N
090º48’10.8’’W
14º55’16.3’’N
091º26’38.8’’W
14º45’46.8’’N
089º53’26.3’’W
14º56’04.7’’N
091º28’36.6’’W
Altitud (msnm) 465 1850 1,769 2,400 2,363 2,722
Hábitat Área de policultivo Área de cultivo
Área de cultivo
experimental de
plantas medicinales
Crece en bosques
abiertos de clima
húmedo frío
Bosque con
vegetación de
Pinus sp.,
Mimosaceae,
Alnus sp
Cultivo de
plantas
medicinales
Hábito
Arbusto mediano, tallo
delgado y poco
ramificado
Helecho semi-
epífito
Helecho
semi-epífito Arbusto pequeño
Arbusto perenne,
tamaño pequeño, no
ramificado
Árbol grande y
muy ramificado
Hierba perenne,
erecta y de hojas
basales
Peso material (kg) 0.86 0.5 0.1 0.42 1.0 1.36 1.2
Monografía lista Si Si Si Si Si Si Si
Muestras de Herbario 4 1 1 3 3 4 2
No. Registro 1,076 1,176 1,176 1,124 1,127 1,108 1,125
Fuente: FODECYT 39-2008
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III.3 OBJETIVO 3
Obtener extractos y aceites para determinar el rendimiento en cada una de las diez (10)
especies vegetales escogidas.
III.3.1 Porcentaje de humedad
Previo a la preparación de los extractos se determinó el porcentaje de humedad de
cada material vegetal colectado (Fotografía 2). Cada especie debió de encontrarse con un
porcentaje menor al 10% para poder procesar el material, de lo contrario se envió
nuevamente al horno de secado (Cuadro 5) y luego se procedió a su cernido en un tamiz
estándar usado para esos fines.
Fotografía 2. Determinación de porcentaje de humedad y cernido en tamiz estándar
Fuente: FODECYT 39-2008
Cuadro 5. Porcentaje de humedad del material vegetal de las especies del estudio
Nombre científico Parte utilizada % Humedad
T. lucida Hoja 7.39
C. pentadactylon Inflorescencia 9.45
P. alliacea Hoja 7.36
P. alliacea Raíz 7.70
V. prionophylla Raíz 5.85
T. tepezapote Inflorescencia 8.16
L. camara Hoja y flor 9.85
D. contrajerva var. houstoni Raíz 9.94
D. contrajerva var. houstoni Hoja 8.94
D. contrajerva var. tenuifolia Raíz 7.44
P. pseudoaureum Rizoma 7.68
P. pseudoaureum Fronda 9.37
S. microphylla Hoja y flor 6.06
L. graveolens Hoja 10.08
Fuente: FODECYT 39-2008
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Fotografía 3. Percolación, obtención del aceite esencial y concentración en rotavapor
Fuente: FODECYT 39-2008
Se extrajo el aceite esencial de cada una de las especie y se prepararon los extractos
en diclorometano y metanol de las diferentes especies por concentraciónj en rotavapor
(Fotografía 3). Las hojas y flores de S. microphylla presentaron el mayor rendimiento de
aceite esencial, así como en el extracto diclorometano; y el mayor rendimiento de extracto
metanólico se obtuvo a partir de la raíz de V. prionophylla (Cuadro 6).
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Cuadro 6. Aceites esenciales y extractos diclorometánicos y metanólicos obtenidos
Nombre científico Parte
usada
Aceite esencial Extracto
diclorometánico Extracto metanólico
Peso (g) % rendi-
miento Peso (g)
% rendi-
miento Peso (g)
% rendi-
miento
C. pentadactylon Flor No tiene No tiene 1.52±0.33 0.57±0.03 16.62±2.23 6.34±0.80
D. contrajerva var.
houstoni Hoja ND* ND* 6.61 3.30 12.57 6.28
D. contrajerva var.
houstoni Raíz ND* ND* 2.55±0.10 1.50±0.29 18.04 9.83
D. contrajerva var.
tenuifolia Raíz ND* ND* 1.04 1.04 10.17 10.17
L. graveolens Hoja 0.68 2.73 12.21 6.91 17.14 9.70
L.camara Hoja No tiene No tiene 7.92 3.96 11.90 5.95
P. alliacea Hoja 0.003±0.001 0.009±0.003 2.26±0.01 1.68±0.24 14.93±2.86 9.96±1.91
P. alliacea Raiz 0.011±0.004 0.029±0.011 1.18±0.08 0.37±0.01 15.21±0.46 4.82±0.35
P. pseudoaureum Rizoma No tiene No tiene 6.97 1.97 25.50 7.22
P. pseudoaureum Fronda No tiene No tiene 6.53 2.90 42.32 18.78
S. microphylla Hierba 0.32±0.03 0.81±0.09 15.71 7.85 38.07 19.03
T. lucida Hierba 0.14±0.02 0.4±0.07 5.78 3.86 21.58 14.39
T. tepezapote Flor 0.004±0.001 0.011±0.004 3.55±0.09 1.18±0.03 10.20±0.07 3.40±0.02
V. prionophylla Raíz 0.072±0.004 0.18±0.27 5.60 1.86 100.20 33.40
*ND No se determinó debido a que se contaba con muy poco materia vegetal Fuente: FODECYT 39-2008
Fotografía 4. Extractos (diclorometánico y metanólico) y aceites esenciales obtenidos
Fuente: FODECYT 39-2008
En la Cuadro 7 se muestra la codificación asignada a cada uno de los extractos
obtenidos según la especie (nombre científico y popular), la parte utilizada y el disolvente
empleado.
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Cuadro 7. Codificación de extractos diclorometánicos y metanólicos
Código Nombre científico Nombre común Parte utilizada Disolvente
1D Tagetes lucida Pericón Hojas y flores
Diclorometano
1M Metanol
2D Chiranthodendron pentadactylon Manita Inflorescencia
Hexano
2M Metanol
3D Petiveria alliaceae Apacín Hoja
Diclorometano
3M Metanol
4D Petiveria alliaceae Apacín Raíz
Diclorometano
4M Metanol
5D Valeriana prionophylla Valeriana Raíz
Diclorometano
5M Metanol
6D Ternstroemia tepezapote Tilo Inflorescencia
Diclorometano
6M Metanol
7D Lantana camara Siete negritos Hoja
Diclorometano
7M Metanol
8D Dorstenia contrajerva var. houstoni Contrahierba Raíz
Diclorometano
8M Metanol
9D Dorstenia contrajerva var. tenuifolia Contrahierba Raíz
Diclorometano
9M Metanol
10D Phlebodium pseudoaureum Calahuala Rizoma
Diclorometano
10M Metanol
11D Phlebodium pseudoaureum Calahuala Fronda
Diclorometano
11M Metanol
12D Salvia microphylla Mirto Hoja y flor
Diclorometano
12M Metanol
13D Dorstenia contrajerva var. houstoni Contrahierba Hoja
Diclorometano
13M Metanol
14D Lippia graveolens Orégano Hoja
Diclorometano
14M Metanol
Fuente: FODECYT 39-2008
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III.4 OBJETIVO 4
Determinar la actividad IACE de las diez (10) especies vegetales por métodos de
cromatografía en capa fina (TLC) y microcolorimétricos.
III.4.1 Métodos por cromatografía en capa fina (TLC)
Se determinó la actividad IACE mediante la técnica en TLC, donde se llevo a cabo
la metodología descrita según Hostettmann en 2002 (Fotografía 5).
Fotografía 5. Ensayo en cromatografía de capa fina para actividad IACE
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Fuente: FODECYT 39-2008
Se evaluó la actividad IACE utilizando como fase móvil cloroformo:metanol
(40:10), sin embargo en ninguno de los resultados se obtuvo una separación satisfactoria a
pesar de haber aumentado la cantidad de muestra aplicada y el tamaño de la placa, por lo
que se procedió a cambiar de fase móvil a tolueno:acetato de etilo:metanol (30:8:1)
(Cuadro 8). Los extractos con una mejor separación y actividad IACE fueron los de T.
lucida, L. camara y V. prionophylla (Fotografía 6).
Complementariamente se evaluaron los extractos diclorometánico y metanólico de
los estudiantes del Seminario (Fotografía 7).
TLC mostrando la actividad inhibitoria
de ACE (manchas blancas sobre fondo
púrpura)
Se observa que detecta
concentraciones de hasta 5µL de
galantamina 0.05mM y 5µL de
rivastigmina 22.45mM
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Fotografía 6. TLC de actividad IACE en extractos diclorometánicos y metanólicos
Inhibición observada como zonas blancas Señalización de áreas con actividad IACE
Fase móvil: tolueno:acetato de etilo:metanol (30:8:1). Izquierda a derecha 1D, 2D, 3D, 4D, 5D, 6D, 7D, 8D,
9D, 10D, 11D, 12D, 13D, 14D, 15D, (10µL) galantamina 0.05mM, rivastigmina 22mM, atropina 1% (5µL)
Fuente: FODECYT 39-2008
Cuadro 8. Actividad IACE de los extractos diclorometánicos y metanólicos por TLC
Extracto Actividad IACE Extracto Actividad IACE
1D Positivo 1M Positivo
2D Positivo 2M Positivo
3D Positivo 3M Positivo
4D Positivo 4M Positivo
5D Positivo 5M Positivo
6D Positivo 6M Positivo
7D Positivo 7M Positivo
8D Positivo 8M Positivo
9D Positivo 9M Positivo
10D Positivo 10M Negativo
11D Positivo 11M Positivo
12D Positivo 12M Positivo
13D Positivo 13M Positivo
14D Positivo 14M Positivo
Galantamina Control positivo Galantamina Control positivo
Rivastigmina Control positivo Rivastigmina Control positivo
Fase móvil Cloroformo:metanol (40:10) Fase móvil Cloroformo:metanol (40:10)
Positivo: manchas blancas sobre fondo purpura
Fuente: FODECYT 39-2008
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Fotografía 7. TLC de actividad IACE de extractos diclorometánicos y metanólicos (Seminario)
Fase Móvil: Tolueno:acetato de etilo:metanol (30:8:1). De izquierda a derecha B. arborea, W. uren var.
caracasana, C. nutans 1, S. nigrescens, V. deppeana, C. nutans 2 , E. berteroana, C. alata, P. dioica (se
aplicaron 10µL) galantamina 0.05mM, rivastigmina 22mM (se aplicaron 5µL).
Fuente: FODECYT 39-2008
III.4.2 Métodos microcolorimétricos
Es el método cuantitativo para detectar IACE por extractos vegetales. La actividad
de la ACE es medida en un lector de microplacas que pueda trabajar a una longitud de
onda de 405 nm. La enzima hidroliza el substrato (ACE) logrando como producto la
tiocolina. Ésta reacciona con el DTNB para formar dos productos, siendo uno de ellos el
que puede ser detectado a 405 nm por su coloración amarillenta. ACE
Acetilcolina H2O Acetato + Tiocolina
Tiocolina + DTNB 5-thio-2-nitrobenzoato (amarillo) + 2-nitrobenzoato-5-mercaptotiocolina
Por medio de la técnica microcolorimétrica se elaboró una curva de actividad para
medir las velocidades de reacción y los porcentajes de IACE, utilizando como estándar la
eserina, se prepararon los reactivos a diferentes concentraciones (iniciando de 2 mM hasta
0.015 mM), se evaluaron los tiempos a los cuales se tiene que trabajar cada muestra, la
forma de programación del espectrofotómetro y la evaluación del comportamiento de los
reactivos a utilizar para esta técnica (Fotografía 8).
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Dependiendo del comportamiento del estándar se evaluó la concentración a la cual
se deberá correr cada uno de los extractos de las especies vegetales y así realizar una
gráfica para comparar la actividad inhibitoria de cada una de ellas (Fotografía 8).
Fotografía 8. Ensayo de IACE por microcolorimetría
Fuente: FODECYT 39-2008
Con estos resultados se elaboró una curva de actividad para medir la velocidad de
reacción y los porcentajes de IACE, usando como estándar la eserina a distintas concen-
traciones (2, 1, 0.5,….0.01mM) (Gráfica 1). Se realizaron los ensayos para evaluar la
actividad de los extractos vegetales, tomando como el mejor tiempo de lectura los 136
seg, ya que la enzima presenta una actividad más reproducible a esta concentración.
Grafica 1. Velocidad de reacción de la eserina medida a distintas concentraciones.
Fuente: FODECYT 39-2008
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III.4.1.1 Validación de la metodología: El ensayo microcolorimétrico se estandarizó en
un intervalo de tiempo de 17 seg. Se hicieron 17 concentraciones del control positivo
(eserina) a partir de 2000µM, disminuyendo la concentración a la mitad (2000µM,
1000µM, 500µM…0.01µM). El límite de detección de la eserina fue en la concentración
15.6µM, y el CI50 se detectó en la concentración 250µM. El segundo 136 del ensayo fue
el punto donde se evidenció la mayor estabilidad de la reacción, siendo este intervalo de
tiempo en donde se analizaron los resultados obtenidos del blanco, control y muestras
(Grafica 2).
Gráfica 2. IACE por eserina en diferentes concentraciones al tiempo 136 seg
Fuente: FODECYT 39-2008
La evaluación cuantitativa de la IACE evidencia que ninguno de los extractos posee
actividad de por lo menos el 50%, sin embargo extractos como L. graveolens (14D) y D.
contrajerva var. houstoni (8D) en diclorometano pueden poseer actividad importante a
mayores dosis (Cuadro 9, Gráficas 3 y 4 ).
Cuadro 9. IACE por extractos diclorometánico y metanólicos por microcolorimetría
(1mg/ml)
Extracto % de Inhibición
extracto metanólico
Extracto % de Inhibición
extracto diclorometánico
1M 20±29.51 1D 20±10.83
2 M -49±15.95 2D 9±5.03
3 M -26±10.54 3D 16±5.90
4 M -6±7.09 4D 13±6.09
5 M 10±6.69 5D 25±15.67
6 M -24±34.32 6D 6±8.18
7 M 16±5.41 7D 10±9.13
8 M -8±14.83 8D 35±13.5
9 M 21±19.53 9D 28±5.14
10 M -38±10.63 10D -23±20.15
11 M 4±8.50 11D 11±3.77
12 M -29±7.17 12D 27±4.91
13 M -5±6.05 13D 29±9.36
14 M -19±95.63 14D 45±4.18
Fuente: FODECYT 39-2008
250 mM IACE
del 50%
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Grafica 3. Porcentaje de IACE de los extractos metanólicos
Fuente: FODECYT 39-2008
Grafica 4. Porcentaje de IACE de los extractos diclorometánicos
Fuente: FODECYT 39-2008
Los extractos que tuvieron mayor actividad en la dosis de 1 mg/mL, se repitieron
con 3 mg/mL tratando de dver si se lograma aumentar el % de IACE, encontrándose que
T. lucida era con el que lograba mayor actividad (52±29.16%), seguido de L. camara
(24±43.49%), V. prionophylla (20±8.63%) y P. pseudoaureum (13±42.08%).
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III.5 OBJETIVO 5
Demostrar los grupos químicos más importantes de las especies evaluadas mediante
ensayos macro, semimicro y TLC
III.5.1 Flavonoides y antocianinas
En el ensayo cualitativo para flavonoides y antocianinas por TLC, se presume la
presencia de estos compuestos en los extractos metanólicos de C. pentadactylon, V.
prionophylla, T. tepezapote, L. camara y frondas de P. pseudoaureum; y en el extracto
diclorometánico V. prionophylla.
III.5.1.1 Pruebas macro: De acuerdo con los resultados obtenidos, se determinó la
presencia de flavonoides en 15 de los extractos diclorometánicos y en 13 de los
metanólicos, sin embargo no se evidenciaron cambios con todos los reactivos utilizados
(Cuadros 10 y 11).
Cuadro 10. Investigación de flavonoides y antocianinas en extractos diclorometánicos
Extracto [H2SO4] FeCl3
10% HCl Mg+[HCl] NH4OH Tubo 61 Testigo
1D - - - - - -
Amarillo
claro,
traslúcido
2D - - - - - - Incolora,
traslúcida
5D Amarillo
oscuro -
Amarillo
oscuro - Rojizo -
Amarillo
traslúcido
6D - - Color claro Color claro Amarillo
claro -
Amarillo
claro,
traslúcido
7D Verde claro
traslúcido -
Amarillo-
verdoso tenue
Amarillo
pálido - -
Amarillo claro
traslúcido
8D Amarillo
tenue -
Amarillo
opaco con
turbidez
Color claro Café-
naranja -
Naranja claro,
traslúcido
9D Verde
movimiento -
Verde con
turbidez
Verde
movimiento Tabaco
Más clara
que el
testigo
Tequila
traslúcido
10D - - Ligeramente
turbio - - -
Transparente y
traslúcido
11D
Verde march,
más claro en
el fondo
-
Verde claro,
más claro en
el fondo
Verde tepoz
Tonalidad
más fuerte
que el
testigo
-
Amarillo
march,
traslúcido
12D - - - - - - Solución
naranja
13D - - - - - -
Solución
amarillo-
verdosa
14D - - - - - - Solución café
naranja
1 Solución de ácido bórico en anhídrido acético - Fuente: FODECYT 39-2008
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Cuadro 11. Investigación de flavonoides y antocianinas en extractos metanólicos
Extra
cto [H2SO4] FeCl3 10% HCl
Mg+
[HCl] NH4OH Tubo 61 Testigo
1M - + — —
Naranja
(fondo) y café
(superficie)
—
Amarillo
claro,
traslúcido
2M
Color más
intenso y
concentrado
en el fondo
+ Color claro Color
claro Verduzco —
Rojo-
ladrillo
3M
Amarillo
verdoso
traslúcido
Amarillo naranja Color más clara
que el control — - —
Amarillo,
translucido
4M -
Amarillo oscuro
(fondo) y amarillo
claro (superficie)
— — Amarillo claro —
Amarillo
claro,
traslúcido
5M
Amarillo
verdoso
oscuro
— Café — Rojizo — Amarillo
verdoso
6M Café rojizo + Poco de
turbidez
Color más
claro
Color más
oscuro — Café claro
7M Verdoso
traslúcido +
Amarillo
ligeramente
opaco
— Amarillo
opaco —
Amarillo
opaco
8M Amarillo claro —
Amarillo oscuro
con tonalidad
rojiza
Color más
claro Azabache —
Amarillo
giner
traslúcido
9M Más claro que
el testigo — —
Más claro
que el
testigo
Café
levemente
oscuro
—
Amarillo
plátano
traslúcido
10M - —
Naranja
(superficie) y
rosado (fondo)
Amarillo
manta Amarillo elote —
Amarillo
casiopea
11M Amarillo
polen +
Naranja chetori
+ rojo
Naranja
gárgola
Bronce
difuminado en
fondo
—
Amarillo
pálido
traslúcido
12M
Tonalidad
más clara que
el control
+
Tonalidad más
clara que el
control
Tonalidad
más clara
que el
control
Tonalidad
más oscura
que el control
(fondo) y
naranja
(superficie)
—
Solución
clara,
traslúcida,
color
amarillo
13M
Tonalidad
más clara que
el control
—
Tonalidad más
clara que el
control
— — —
Solución
traslúcida
amarilla
14M Café claro + Café — — — Solución
café naranja
Fuente: FODECYT 39-2008
III.5.1.2 TLC: En el ensayo cualitativo por TLC para evidenciar flavonoides y
antocianinas se determinó la presencia de estos compuestos en los extractos de raíz de P.
alliacea y de V. prionophylla; en los extractos metanólicos de las plantas analizadas se
encuentra en la mayoría de estos, con excepción de la raíz de V. prionophylla y en mayor
cantidad en los extractos de la hoja de T. lucida, inflorescencias de C. pentadactylon, hoja
y raíz de P. alliacea, inflorescencia de T. tepezapote, hoja de L. camara, fronda y rizoma
de P. pseudoaureum (Cuadros 12 y 13).
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Cuadro 12. Flavonoides y antocianinas por TLC de los extractos diclorometánicos
Estándar/Extracto Frente del
solvente (cm)
Distancia
recorrida (cm) Color Rf
Quercetina 6.9 6.4, 6.1 Verde amarillento, Naranja
fluorescente 0.93, 0.88
Rutina 6.9 5.2, 4.2, 3.2 Naranja, Naranja, Naranja
amarillento tenue 0.75, 0.61, 0.46
Ácido clorogénico 6.9 6.0, 3.8 Amarillo verdoso, Verde claro
intenso 0.87, 0.55
Hiperósido 6.9 5.6, 5.2, 4.6,
3.8, 3.1
Amarillo verdoso, Verde , Naranja
fluorescente, Verde intenso,
Amarillo verdoso
0.81, 0.75,
0.67, 0.55, 0.45
1D 6.9 — —
2D 6.9 6.2 Naranja tenue 0.90
3D 6.9 — ----
4D 6.9 6.4 Naranja amarillento 0.93
5D 6.9 6.5 Verde claro 0.94
6D 6.9 — ----
Quercetina 7.0 5.6, 5.0 Verde amarillento, Naranja
fluorescente 0.80, 0.71
Rutina 7.0 4.0, 1.4 Naranja, Naranja 0.57, 0.20
Hiperósido 7.0 5.8, 5.2, 4.3,
3.7, 2.8, 1.4, 1.2
Morado, Amarillo verdoso, Verde,
Naranja fluorescente, Verde intenso,
Verde, Naranja
0.83, 0.61,
0.40, 0.74,
0.53, 0.20, 0.17
Ácido Clorogénico 7.0 5.7 , 3.0 Amarillo verdoso, Verde claro
intenso 0.81, 0.43
7D 7.0 (-) — —
8D 7.0 (-) --- ---
9D 7.0 (-) --- ---
10D 7.0 (-) --- ---
11D 7.0 (-) --- ---
12D 7.0 (-) --- ---
13D 7.0 (-) --- ---
14D 7.0 (-)
Fuente: FODECYT 39-2008
Cuadro 13. Flavonoides y antocianinas por TLC de los extractos metanólicos
Estándar/Extracto Distancia recorrida por
Color Rf solvente (cm) muestras (cm)
Quercetina 7.0 6.0 Naranja 0.86
Rutina 7.0 0.4,3.1 Naranja, Naranja tenue 0.06, 0.44
Ácido clorogénico 7.0
0.4, 0.9, 2.1,
4.3, 4.8, 5.2,
5.8, 6.8
Amarillo, Amarillo, Amarillo, Verde,
Naranja, Verde tenue, Verde, Verde
0.06, 0.13, 0.30, 0.61,
0.69, 0.74, 0.83, 0.97
Hiperósido 7.0 3.6, 4.2, 4.8,
5.9 Verde, Verde, Naranja fuerte, Verde 0.51, 0.60, 0.69, 0.84
1M 7.0
2.7, 3.2, 3.6,
4.5, 5.2, 5.5,
6.1, 6.7
Naranja claro, Naranja rojizo, Amarillo
claro, Naranja intense, Amarillo, Verde,
Naranja rojizo, Amarillo verdoso
0.39, 0.46, 0.51, 0.64,
0.74, 0.79, 0.87, 0.96,
2M 7.0 2.7, 3.1, 3.7,
4.8, 5.1, 6.7
Celeste, Amarillo, Celeste, Naranja
tenue, Rojo tenue, Verde intense
0.39, 0.44, 0.53, 0.69,
0.73, 0.96
3M 7.0 2.1, 3.6, 4.2,
6.8
Naranja tenue, Naranja tenue,
Amarillo tenue, Rojo intenso 0.30, 0.51, 0.60, 0.97
4M 7.0 6.8 Amarillo 0.97
5M 7.0 ---- ----- ----
6M 7.0 2.0, 3.3, 4.3, Naranja, Rojo, Naranja, Amarillo, 0.29, 0.47, 0.61, 0.66,
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Estándar/Extracto Distancia recorrida por
Color Rf solvente (cm) muestras (cm)
4.6, 5.0, 5.5,
6.0, 6.8
Naranja, Amarillo, Naranja claro, Verde
intense
0.71, 0.79, 0.86, 0.97
7M 7.0 3.2, 3.8, 4.5,
5.1
Verde intenso, Naranja tenue, Naranja
tenue, Celeste intenso 0.46, 0.54, 0.64, 0.73
Quercetina 7.0 6.1, 6.4 Naranja intenso, Amarillo tenue 0.87, 0.91
Rutina 7.0 3.6 Naranja intenso 0.51
Ácido Clorogénico 7.0 4.3, 6.3 Verde intenso, Amarillo tenue 0.61, 0.90
Hiperósido 7.0 4.3, 5.2, 6.0 Naranja intenso, Amarillo, Amarillo
tenue 0.61, 0.74, 0.86
8M 7.0
4.9, 6.1, 6.3,
1.2, 2.7, 3.2,
4.3,
Celeste intenso, Celeste intenso,
Celeste, Celeste, Amarillo tenue,
Amarrillo tenue, Amarillo intenso
0.70, 0.87, 0.90, 0.17,
0.39, 0.46, 0.61
9M 7.0
5.0, 6.0, 6.3,
1.1, 2.7, 3.2,
4.4
Celeste intenso,
Celeste intenso, Celeste, Celeste,
Amarillo tenue, Amarillo tenue,
Amarillo intenso
0.71, 0.85, 0.90, 0.16,
0.38, 0.46, 0.63
10M 7.0 3.8, 5.3 Amarillo tenue, Amarillo tenue 0.54, 0.76
11M 7.0
5.3, 5.8, 6.2,
6.6, 2.2, 3.6,
4.0, 4.5
Naranja intenso, Naranja claro, Verde
claro, Celeste, Amarillo tenue, Naranja
intenso, Celeste, Verde claro
0.76, 0.83, 0.88, 0.94,
0.31, 0.51, 0.57, 0.64
12M 7.0 6.0, 6.6, 3.6,
4.6, 5.2
Naranja tenue, Verde claro, Naranja,
Verde claro, Amarillo
0.86, 0.94, 0.51, 0.66,
0.74
13M 7.0 3.3 Amarillo 0.77
14M 7.0 3.0, 3.5, 4.5,
5.1 Naranja, naranja, amarilla, naranja 0.43, 0.5, 0.64, 0.73
Fuente: FODECYT 39-2008
III.5.2 Alcaloides
III.5.2.1 Prueba macro: En el ensayo cualitativo para alcaloides se presume la presencia
de estos metabolitos en los extractos metanólicos P. alliacea, V. prionophylla, T.
tepezapote, L. camara y S. microphylla, que dieron positivo a esta prueba (Cuadro 14).
Cuadro 14. Determinación de alcaloides por ensayo macro de los extractos metanólicos
Estándar/Extracto Mayer Dragendorff Wagner
Papaverina + + +
Atropina + + +
1M + ++ +
2M — — —
3M + — +
3M + ++ +
4M — — —
5M + + +
6M + — +
7M + — +
7M + + +
8M + +++ ++
9M + +++ +++
10M — — —
11M ++ ++ +
12M + — +
13M ++ +++ +
14M — — —
Fuente: FODECYT 39-2008
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III.5.2.2 TLC: En el ensayo cualitativo por TLC para alcaloides se determinó la presencia
de estos metabolitos en la siguiente forma: en los extractos diclorometánicos en la hoja y
raíz de D. contrajerva var. houstoni y rizoma de P. pseudoaureum; en los extractos
metanólicos de P. alliacea y L. camara se presentaron cuatro bandas, mientras que los
extractos de raíz de D. contrajerva var. houstoni y var. tenuifolia y S. microphylla se
demostradon dos bandas (Cuadro 15 y 16).
Cuadro 15. Investigación de alcaloides en extractos diclorometánicos por TLC
Estándar/Extracto Color de la banda Distancia recorrida (cm) Rf
Papaverina naranja 3.8 0.57
Atropina naranja 1.7 0.25
1D naranja 4.8 0.72
2D — — —
3D — — —
4D — — —
5D café 5.7 0.85
6D — — —
7D — — —
8D café 4.4 0.65
naranja tenue 3.1 0.45
9D naranja 4.1 0.60
10D amarillo tenue 3.0 0.44
11D — — —
12D — — —
13D naranja tenue 3.5 0.51
14D
Fuente: FODECYT 39-2008
Cuadro 16. Investigación de alcaloides en extractos metanólicos por TLC
Estándar
Extracto
Frente de
solvente (cm)
Distancia
recorrida (cm) Color Rf
Papaverina 6.7 4.3 Naranja 0.64
Atropina 6.7 1.5 Naranja 0.22
3M 6.7 1.2, 2.6, 3.3, 4.2 Naranja, café, amarillo, café 0.18, 0.39, 0.49, 0.63
5M 6.7 4.7 Naranja oscuro 0.70
6M 6.7 6.1 Amarillo 0.91
7M 6.7 1.2, 2.6, 3.3, 4.0 Amarillo, amarillo, naranja tenue, naranja 0.18, 0.39, 0.49, 0.60
11M 6.7 2.6 Amarillo 0.39
12M 6.7 1.2, 2.6 Naranja tenue, amarillo 0.18, 0.39
Papaverina 6.8 3.3 Naranja 0.49
Atropina 6.8 1.3 Naranja 0.19
1M 6.8 4.6 Amarillo claro 0.68
2M 6.8 ---- ---- ----
4M 6.8 ---- ---- ----
8M 6.8 3.7, 4.7 Amarillo claro, café 0.54, 0.69
9M 6.8 3.4, 4.6 Amarillo claro, café 0.50, 0.68
10M 6.8 ---- ---- ----
13M 6.8 ---- ---- ----
14M 6.8 ---- ---- ----
Fuente: FODECYT 39-2008
Página 49 de 130
III.5.3 Antraquinonas, glicosidos cardiotónicos, esteroides y cumarinas
III.5.3.1 Prueba Macro: En la prueba para antraquinonas se evidenció la presencia en los
extractos diclorometánicos de la raíz de D. contrajerva var. houstoni, hoja de S.
microphylla y hoja de L. graveolendes y en los extractos metanólicos de fronda de P.
pseudoaureum fronda (Fotografía 9 y 10).
En la prueba de cardenólidos y bufadienólidos se detectó la presencia de estos
compuestos en el extracto diclorometánico de las hojas de L. graveolens.
De acuerdo con los resultados obtenidos para esteroides o triterpenoides se
evidenció la presencia de dichos metabolitos en todas las muestras evaluadas y las
cumarinas se evidenciaron en 7 muestras, las cuales presentaron una fluorescencia intensa
(Cuadros 17 y 18, Fotografías 11-15).
Fotografía 9. Prueba de antraquinonas en extractos diclorometánicos
Los extractos 8D, 12D, 14D, 15D, 11M fueron positivos ya que se observó un cambio de color a rojo-
rosado - Fuente: FODECYT 39-2008
Fotografía 10. Prueba de antraquinonas en extractos metanólicos
El extracto 11M fue positivo para antraquinosas ya que se observó un cambio de color a rojo-rosado
Fuente: FODECYT 39-2008
Página 50 de 130
Cuadro 17. Antraquinonas, cardiotónicos, esteroides y cumarinas de extractos
diclorometanicos
Muestra Antraquinonas Glicósidos
cardiotónicos
Esteroides o Triterpenoides Cumarinas
Prueba de
Bornträger
Lactonas
insaturadas
Lieberman
Burchard
Carr-Price Ensayo Macro
1D (-) (-) (+) azul-verdoso (+) verde azul (+) fluorescencia azul
2D (-) (-) (+) azul-verdoso (-) negro (-) fluorescencia naranja
3D (-) (-) (+) azul-verdoso (+) verde azul (-) leve fluorescencia
amarilla
4D (-) (-) (+) azul-verdoso (-) café (-) leve fluorescencia
amarilla
5D (-) (-) (+) azul-verdoso (-) verde oscuro (-) no muestra fluorescencia
6D (-) (-) (+) azul-verdoso (-) verde oscuro (+) fluorescencia azul
7D (-) (-) (+) azul-verdoso (+) verde azul (-) no muestra fluorescencia
8D (+) color rojizo-café (-) (+) morado oscuro (+) azul oscuro (-) fluorescencia amarilla
verdosa
10D (-) (-) (+) morado oscuro (-) café (-) no muestra fluorescencia
11D (-) (-) (+) verde oscuro (+) azul verdoso (-) no muestra fluorescencia
12D (+) color rojizo-café (-) (+) azul-verdoso (+) verde azul (-) no muestra fluorescencia
13D (-) (-) (+) azul-verdoso (+) verde azul (-) leve fluorescencia
amarilla
14D (+) color rojizo-café (+) anillo
púrpura
(+) azul-verdoso (-) verde oscuro (-) no muestra fluorescencia
Prueba
positiva
cambios de color a
rojo, rosado
mancha o
anillo púrpura
Verde-azul
(esteroides con
enlaces C=C
conjugados)
color azul,
(derivados de
colestano con
dieno o trieno)
fluorescencia azul o verde
Fuente: FODECYT 39-2008
Cuadro 18. Antraquinonas, cardiotónicos, esteroides y cumarinas de extractos metanólicos
Muestra Antraquinonas Glicósidos cardiotónicos Esteroides o Triterpenoides Cumarinas
Prueba de
Bornträger
Lactonas
insaturadas
Azúcares 2-
desoxigenadas
Lieberman
Burchard
Carr-Price Ensayo Macro
1M (-) (-) (-) (+) verde (-) café
amarillo
(-) leve fluorescencia
amarilla
2M (-) (-) (-) (-) café naranja (-) café (+) fluorescncia azul
3M (-) (-) (-) (+) verde (-) café
verdoso
(-) leve fluorescencia
amarilla
4M (-) (-) (-) (-) amarillo (-) naranja
claro
(-) fluorescencia
amarilla-verdoso
5M (-) (-) (-) (+) verde (-) café (-) No hay fluorescencia
6M (-) (-) (-) (-) café (-) café (-) fluorescencia amarilla
7M (-) (-) (-) (+) verde (-) verde
oscuro
(-) fluorescencia amarilla
8M (-) (-) (-) (+) verde-café (-) café (+) fluorescencia azul
9M (-) (-) (-) (+) verdoso (-) café
verdoso
(+) fluorescencia azul
10M (-) (-) (+) anillo
púrpura
(-) café naranja (-) naranja
claro
(-) fluorescencia amarilla
11M (+) color
naranja claro
(-) (-) (-) café (-) café
verdoso
(-) fluorescencia amarilla
12M (-) (-) (-) (+) verde (-) café
verdoso
(-) fluorescencia
amarilla-verdoso
13M (-) (-) (-) (+) verde (-) verde
oscuro
(-) fluorescencia amarilla
14M (-) (-) (-) (-) café (-) café
rojizo
(-) fluorescencia amarilla
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Prueba
positiva
cambios de
color a rojo,
rosado
mancha o
anillo
púrpura
anillo púrpura verde, azul-
verdoso,
posibles
esteroides con
enlaces C=C
conjugados o
formados por
deshidratación
color azul,
posibles
derivados de
colestano
con dieno o
trieno
fluorescencia azul o verde
Fuente: FODECYT 39-2008
Fotografía 11. Prueba de esteroides o triterpenoides
Extractos 1D-15D - Fuente: FODECYT 39-2008
Fotografía 12. Prueba de esteroides o triterpenoides: Carr Price en extractos
diclorometánicos
Los extractos 1D, 3D, 5D, 7D, 8D, 11D, 12D, 13D, dieron positivo para Carr Price: color azul, posibles
derivados de colestano con dieno o trieno potencial en anillos A y B - Fuente: FODECYT 39-2008
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Fotografía 13. Prueba de esteroides o triterpenoides: Carr Price en extractos metanólicos
Ningún extracto metanólico fue positivo para Carr Price: color azul, posibles derivados de colestano con
dieno o trieno potencial en anillos A y B - Fuente: FODECYT 39-2008
Fotografía 14. Prueba de esteroides o triterpenoides: Lieberman Burchand, extractos
metanólicos
Los extractos 1M, 3M, 5M, 7M, 8M, 9M, 12M y 13M dieron positivos verde, azul-verdoso, lo que indica
que presentan posibles esteroides conteniendo enlaces C=C conjugados o formados por la deshidratación
con ácido sulfúrico - Fuente: FODECYT 39-2008
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Fotografía 15. Prueba de cumarinas en extractos diclorometánicos y metanólicos
Los extractos 1D, 8D, 2M, 8M, 9M y 15M dieron positivo para la prueba de cumarinas ya que mostraron
una fluorescencia azul - Fuente: FODECYT 39-2008
La prueba de antraquinonas por TLC presentó resultados positivos para los
extractos 1D (T. lucida), 6D (T. tepezapote), 8D (raíces de D. contrajerva var. houstoni),
13D (hojas de D. contrajerva var. houstoni), ya que mostraron una fluorescencia amarilla
en UV-365 nm.
Ninguno de los extractos diclorometánicos dio positivo para cardenólidos y
bufadienólidos, ya que ninguno mostró fluorescencia en luz ultravioleta a 254 nm
(cardenólidos) ni mostraron zonas rosa o azul violeta en la luz visible (bufadienólidos)
(Cuadro 19 y Fotografía 16).
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Fotografía 16. TLC de antraquinonas, cardenólidos y bufadienólidos de ambos extractos
diclorometánicos y metanólicos
Los extractos 8M, 9M y 15M, dieron positivo para antraquinonas (antronas y antranolas) ya que mostraron
fluorescencia amarilla en UV-365nm. Ningún extracto dio positiva la prueba de cardenólidos y
bufadienólicos - Fuente: FODECYT 39-2008
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Cuadro 19. TLC para antraquinonas, cardenólidos y bufadienólidos de extractos diclorometánicos
Metabolito Antraquinonas Glicósidos cardiotónicos
Fase móvil éter de petróleo: acetato de etilo: ácido fórmico 70:25:1 acetato de etilo: metanol: agua 100:13.5:10
Revelador sin tratamiento químico KOH 10% frente de
solvente
(cm)
recorrido
de mx
(cm)
Rf sin tratamiento
químico
Reactivo de Kedde frente del
solvente
(cm)
Rf
254nm 365nm 365nm 254nm visible
1D (-) (+) 1 mancha
amarilla
(+) 1 mancha amarilla 6.9 1.4 0.20 (-) (-) 6.75 —
2D (-) (-) (-) 6.9 — — (-) (-) 6.75 —
3D (-) (-) (-) 6.9 — — (-) (-) 6.75 —
4D (-) (-) (-) 6.9 — — (-) (-) 6.75 —
5D (-) (-) (-) 6.9 — — (-) (-) 6.75 —
6D (-) (+) 1 mancha
amarilla
(+) 1 mancha amarilla 6.9 5.65 0.82 (-) (-) 6.75 —
7D (-) (-) (-) 6.9 — — (-) (-) 6.75 —
8D (-) (+) 2 manchas
amarillas
(+) 2 manchas amarillas 6.9 1.0, 2.7 0.14,
0.39
(-) (-) 6.75 —
10D (-) (-) (-) 6.9 — — (-) (-) 6.75 —
11D (-) (-) (-) 6.9 — — (-) (-) 6.75 —
12D (-) (-) (-) 6.9 — — (-) (-) 6.75 —
13D (-) (+) 1 mancha
amarilla
(+) 1 mancha amarilla 6.9 1.2 0.17 (-) (-) 6.75 —
14D (-) (-) (-) 6.9 — — (-) (-) 6.75 —
Positivo Fluorescencia fluorescencia
amarilla o rojo-
café
antraquinonas:
fluorescencia roja en UV-
365nm; antronas y
antranolas: fluorescencia
amarilla en UV-365nm
— — — fluorescencia por
cardenólidos en
UV-254nm
zonas rosa o azul
violeta en visible, los
bufadienolidos no
reaccionan
— —
—
Fuente: FODECYT 39-2008
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Cuadro 20. TLC para antraquinonas, cardenólidos y bufadienólidos de extractos metánolicos
Metabolito Antraquinonas Cardenólidos y Bufadienólidos
Fase móvil acetato de etilo: metanol: agua (100:17:13) acetato de etilo: metanol: agua (100:13.5:10)
Revelador sin tratamiento químico KOH 10% frente de
solvente
(cm)
recorrido de
muestra
(cm)
Rf sin
tratamiento
químico
Reactivo de
Kedde
frente del
solvente
(cm)
Rf
254nm 365nm 365nm 254nm visible
1M (-) (-) (-) 7.1 — — (-) (-) 6.85 —
2M (-) (+) 2 manchas
amarillas
(-) 7.1 — — (-) (-) 6.85 —
3M (-) (-) (-) 7.1 — — (-) (-) 6.85 —
4M (-) (-) (-) 7.1 — — (-) (-) 6.85 —
5M (-) (-) (-) 7.1 — — (-) (-) 6.85 —
6M (-) (-) (-) 7.1 — — (-) (-) 6.85 —
7M (-) (-) (-) 7.1 — — (-) (-) 6.85 —
8M (-) (+) 4 manchas
amarillas
(+) 4 manchas
amarillas
7.1 0.7, 1.8, 3.2,
6.3
0.10, 0.25,
0.45, 0.89
(-) (-) 6.85 —
9M (-) (+) 4 manchas
amarillas
(+) 4 manchas
amarillas
7.1 0.7, 1.8, 3.2,
6.4
0.10, 0.25,
0.45, 0.90
(-) (-) 6.85 —
10M (-) (-) (-) 7.1 — — (-) (-) 6.85 —
11M (-) (-) (-) 7.1 — — (-) (-) 6.85 —
12M (-) (-) (-) 7.1 — — (-) (-) 6.85 —
13M (-) (-) (+) 1 mancha
amarilla
7.1 6.2 (-) (-) 6.85 —
14M (-) (-) (-) 7.1 — — (-) (-) 6.85 —
Positivo Fluorescencia Fluorescencia
amarilla o rojo-
café
Antraquinonas:
fluorescencia roja en
UV-365nm; antronas
y antranolas:
fluorescencia
amarilla
— — — fluorescencia
por
cardenólidos
en UV-254nm
zonas rosa o azul
violeta en
visible, los
bufadie-nolidos
no reaccionan
— —
Fuente: FODECYT 39-2008
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III.5.3.2 TLC: La determinación de cumarinas por TLC evidencia que las muestras 1D
(inflorescencias de T. lucida), 2D (inflorescencias de C. pentadactylon), 4D (raíz de P.
alliacea), 6D (inflorescencias de T. tepezapote), 8D (raíz de D. contrajerva var.
houstoni), 9D (raíz D. contrajerva var. tenuifolia), y 10D (rizoma de P. pseudoaureum)
muestran fluorescencia azul o azul-verdoso (prueba positiva) (Cuadro 21).
Cuadro 21. Determinación de cumarinas por TLC en extractos diclorometánicos
Estándar/Extracto Frente del Solvente (cm) Distancia recorrida (cm) Rf Color
Cumarinas 7.2 3.0
4.6
0.42
0.64
verde claro, celeste
Ácido p-cumárico 7.2 0.7 0.10 celeste
1D 7.2 0.9
4.7
6.3
0.12
0.65
0.88
celeste intenso
verde azulado
celeste claro
2D 7.2 2.1 0.29 verde claro
3D 7.2 — — —
4D 7.2 2.9
5.9
0.40
0.82
verde claro
verde tenue
5D 7.2 — — —
6D 7.2 0.5
2.2
6.9
0.07
0.31
0.96
verde
verde
verde claro
Cumarinas 6.9 3.8
3.1
0.5
0.55
0.45
0.07
verde fluorescente
verde fluorescente
celeste tenue
Ácido p-cumárico 6.9 0.7 0.10 celeste fluorescente
7D 6.9 — — —
8D 6.9 6.2
2.0
0.90
0.29
verde tenue
verde claro
9D 6.9 6.5
2.1
0.93
0.30
verde tenue
verde claro
10D 6.9 2.2 0.32 verde-menta tenue
11D 6.9 — — —
12D 6.9 — — —
13D 6.9 — — —
14D 6.9 — — —
Fuente: FODECYT 39-2008
Se observa que las muestras 1M (T. lucida), 6M (T. tepezapote), 8M (raíz de D.
contrajerva var. houstoni), 9M (raíz de D. contrajerva var. tenuifolia) y 10M (rizoma de
P. pseudoaureum) demuestran la presencia de cumarinas ya que muestran u8na clara
fluorescencia azul o azul-verdoso (positivo) en las placas de TLC (Cuadro 22).
Cuadro 22. Determinación de cumarinas por TLC en extractos metanólicos
Estándar/Extracto Frente del Solvente (cm) Distancia recorrida (cm) Rf Color
Cumarinas 7.0 3.1 0.44 verde claro
Ácido p-cumárico 7.0 0.6 0.09 verde tenue
1M 7.0 6.6
5.1
4.5
3.3
2.9
0.5
0.94
0.73
0.64
0.47
0.41
0.07
2M 7.0 0.4 0.06 verde
3M 7.0 (-) — —
Página 58 de 130
4M 7.0 (-) — —
5M 7.0 (-) — —
6M 7.0 2.3
0.4
0.33
0.06
verde
verde tenue
7M 7.0 (-) — —
Cumarinas 8.0 3.3 0.41 verde claro
Ácido p-cumárico 8.0 0.7 0.09 celeste azulado
8M 8.0 0.7
2.5
0.09
0.31
celeste
verde claro
9M 8.0 0.6
2.5
0.08
0.31
celeste
verde claro
10M 8.0 2.4 0.30 verde tenue
11M 8.0 (-) — —
12M 8.0 (-) — —
13M 8.0 (-) — —
14M
Fuente: FODECYT 39-2008
III.5.4 Aceites volátiles
Se evaluó la presencia de aceites volátiles en los extractos por TLC, encontrándose
estos metabolitos en todas las muestras analizadas (Cuadro 23 y 24 y Fotografía 17).
Cuadro 23. Determinación de aceites volátiles por TLC en extractos diclorometánicos
Estándar
Extracto
Frente del
solvente (cm)
Distancia (cm) Rf Color
Limoneno 7.3 2.1 0.29 violeta tenue
Mirceno 7.3 7 0.97 morado rojizo
1,8-cineol 7.3 3.7 0.51 morado
Timol 7.3 4 0.56 azul claro
1D 7.3 0.8, 1.1, 1.3, 1.5,
1.7, 2.2, 2.4, 3.1,
3.8, 4.1, 4.4
0.11, 0.15, 0.18, 0.21,
0.24, 0.31, 0.33, 0.43,
0.53, 0.57, 0.61
violeta tenue, violeta tenue, violeta, rosado,
verde claro, verde, verde tenue, rosado,
violeta, violeta claro, violeta claro
2D 7.3 1.6, 2.2, 2.5, 3.1,
3.5,5.0, 6.1
0.22, 0.31, 0.35, 0.43,
0.49, 0.69, 0.85
violeta, azul, violeta, morado, morado
claro, morado, morado rojizo
3D 7.3 0.5, 0.6, 0.8, 1.1,
1.3, 1.6, 1.9, 2.2,
2.4, 2.6, 2.8, 3.2,
3.6, 4.5, 5.4, 6.8
0.07, 0.08, 0.11, 0.15,
0.18, 0.22, 0.26, 0.31,
0.33, 0.36, 0.39, 0.44,
0.50, 0.63, 0.75, 0.94
verde azulado, verde azulado, violeta,
violeta, verde claro, verde, violeta, verde
claro, violeta, verde, violeta, morado,
morado intenso, violeta, morado, morado
rojizo
4D 7.3 1.5, 1.9, 2.3, 2.5,
2.8, 3.1, 3.4, 3.7,
4.3, 5.5, 6.3
0.21, 0.26, 0.32, 0.35,
0.39, 0.43, 0.47, 0.51,
0.60, 0.76, 0.88
morado intenso, violeta, morado, verde
tenue, rosado, morado tenue, morado tenue,
morado tenue, morado tenue, morado
rojizo, morado rojizo
5D 7.3 0.4, 0.7, 1.7, 1.9,
2.7, 3.4, 3.6, 5.4,
5.6, 6.6
0.06, 0.10, 0.24, 0.26,
0.38, 0.47, 0.50, 0.75,
0.78, 0.92
verde musgo tenue, verde musgo tenue,
verde, rosado, verde musgo, rosado, violeta,
violeta, rosado tenue, rosado
6D 7.3 0.3, 0.5, 1.5, 1.8,
2.1, 2.3, 2.5, 2.7,
3.2, 3.8, 4.9, 5.7,
6.6
0.04, 0.07, 0.21, 0.25,
0.29, 0.32, 0.35, 0.38,
0.44, 0.53, 0.68, 0.79,
0.92
Verde, morado tenue, morado, violeta,
violeta tenue, verde claro, verde tenue,
verde, rosado, morado claro, rosado,
morado, morado
7D 7.3 0.4, 0.7, 1.1, 1.4,
1.7, 1.9, 2.1, 2.2,
2.3, 2.6, 2.8, 3.2,
3.8, 4.4, 4.7, 6.2
0.06, 0.10, 0.15, 0.19,
0.24, 0.26, 0.29, 0.31,
0.32, 0.36, 0.39, 0.44,
0.53, 0.61, 0.65, 0.86
verde musgo, violeta, violeta, violeta,
morado, violeta, azul, verde, verde claro,
verde, verde tenue, violeta, rosado, rosado,
rosado tenue, morado intenso
8D 7.4
6.6, 5.4, 4.1, 3.8,
3.4, 3.1, 2.7, 2.4,
1.9, 1.6, 0.7, 0.4
0.89, 0.73, 0.55, 0.51,
0.46, 0.42, 0.36, 0.32,
0.26, 0.22, 0.09, 0.05
púrpura, púrpura, violeta tenue, violeta
tenue, morado intenso, morado claro,
violeta oscuro, morado intenso, azul,
morado, violeta azulado, azul
Página 59 de 130
9D 7.4
6.4, 5.5, 4.2, 3.8,
3.4, 3.1, 2.7, 2.4,
2.0, 1.6, 0.7, 0.5
0.86, 0.74, 0.57, 0.51,
0.46, 0.42, 0.36, 0.32,
0.27, 0.22, 0.09, 0.07
púrpura, púrpura, violeta tenue, violeta
tenue, morado intenso, morado claro,
violeta oscuro, morado intenso, azul,
morado, violeta azulado, azul
10D 7.4
6.3, 5.3, 4.7, 4.5,
4.1, 3.9, 3.5, 3.3,
3.1, 2.9, 2.7, 2.5,
2.2, 1.9, 1.6, 1.2,
0.7, 0.4
0.85, 0.72, 0.63, 0.61,
0.55, 0.53, 0.47, 0.45,
0.42, 0.39, 0.36, 0.34,
0.30, 0.26, 0.22, 0.16,
0.09, 0.05
violeta rojizo, violeta rojizo, rosado, rosado,
rosado tenue, rosado tenue, violeta, violeta
tenue, violeta, violeta tenue, violeta tenue,
violeta, violeta, violeta tenue, rosado,
rosado tenue, violeta, violeta tenue
11D 7.4
6.6, 5.4, 4.1, 3.4,
3.1, 2.6, 2.4, 2.0,
1.8, 1.6, 1.2, 0.3
0.89, 0.73, 0.55, 0.46,
0.42, 0.35, 0.32, 0.27,
0.24, 0.22, 0.16, 0.04
púrpura, violeta rojizo, rosado, violeta,
violeta, verde tenue, verde intenso, verde
claro, violeta, fucsia, violeta tenue, azul
12D 7.4
6.7, 6.5, 5.4, 5.0,
4.2, 4.0, 3.8, 3.5,
2.8, 2.7, 2.5, 2.3,
2.1, 2.0, 1.8, 1.4,
1.1, 0.9, 0.6, 0.4,
0.3
0.90, 0.88, 0.73, 0.68,
0.57, 0.54, 0.51, 0.47,
0.38, 0.36, 0.34, 0.31,
0.28, 0.27, 0.24, 0.19,
0.15, 0.12, 0.08, 0.05,
0.04
violeta amarillento, violeta rojizo, rosado,
amarillo, amarillo, amarillo, rosado,
amarillo, rosado, verde tenue, verde
intenso, violeta, verde claro, verde
amarillento, rosado, rosado naranja, verde
amarillento, mostaza, violeta amarillento,
verde, verde grisáceo
13D 7.4
6.6, 5.9, 3.6, 2.8,
2.5, 2.3, 2.1, 1.8,
1.5, 1.3, 0.6, 0.3
0.89, 0.80, 0.49, 0.38,
0.34, 0.31, 0.28, 0.24,
0.20, 0.18, 0.08, 0.04
amarillo violeta, púrpura, violeta rojizo
intenso, verde, verde intenso, verde claro
tenue, verde claro, morado claro, verde
musgo, violeta, verde musgo,verde olivo
14D 7.4
6.5, 4.3, 3.8, 3.2,
2.9, 2.7, 2.5, 2.3,
2.1, 2.0, 1.7, 1.5,
1.3, 1.1, 0.9, 0.6,
0.4
0.88, 0.58, 0.51, 0.43,
0.39, 0.36, 0.34, 0.31,
0.28, 0.27, 0.23, 0.20,
0.18, 0.15, 0.12, 0.08,
0.05
violeta rojizo, vosado, fucsia, rosado,
rosado, rosado, verde, verde amarillento,
verde claro, verde amarillento, rosado,
verde, verde claro, rosado tenue, violeta,
violeta tenue, verde
Fuente: FODECYT 39-2008
Fotografía 17. Aceites volátiles por TLC en extractos diclorometánicos y metanólicos
Extractos diclorometánicos
(arriba) y metanólicos
(derecha) de las muestras
analizadas
Fuente: FODECYT 39-2008
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Cuadro 24. Determinación de aceites volátiles por TLC en extractos metanólicos
Estándar/
Extracto
Frente
solvente (cm)
Distancia
recorrida (cm)
Rf Color
Limoneno 7.4 4.2 0.57 Morado tenue
Mirceno 7.4 7.0 0.95 Violeta rojizo
Cineol 7.4 3.5 0.47 Morado
Timol 7.4 4.2 0.57 Rosado
1M 7.4 6.8, 5.3, 3.7,
2.6, 2.1, 1.7, 1.0
0.92, 0.72, 0.50,
0.35, 0.28, 0.23, 0.13
Violeta rojizo tenue, morado, violeta,
verde, verde claro, violeta tenue, morado
2M 7.4 7.0 0.95 Violeta rojizo tenue
3M 7.4 5.6, 3.6, 2.9,
2.8, 2.4, 1.9,
1.6, 1.1
0.76, 0.49, 0.39,
0.38, 0.32, 0.26,
0.22, 0.15
Morado azulado tenue, morado, verde
tenue, verde intenso, verde tenue, verde
tenue, verde claro, violeta
4M 7.4 2.2, 1.7, 1.2 0.30, 0.23, 0.16 Azul tenue, morado, violeta
5M 7.4 6.9, 5.4, 2.8,
2.1, 1.2, 1.0, 0.6
0.93, 0.73, 0.38,
0.28, 0.16, 0.13, 0.08
Violeta rojizo, violeta rojizo, verde musgo,
morado tenue, verde musgo, verde musgo,
verde musgo
6M 7.4 6.9, 5.2, 3.8,
2.6, 2.2, 1.8,
1.4, 1.0, 0.5
0.93, 0.70, 0.51,
0.35, 0.30, 0.24,
0.19, 0.13, 0.07
Violeta rojizo tenue, morado, azul tenue,
verde, verde claro, violeta tenue, morado,
violeta, violeta
7M 7.4 7.1, 5.6, 3.0,
2.8, 2.5, 1.8,
1.5, 1.2, 0.4
0.96, 0.76, 0.40,
0.38, 0.34, 0.24,
0.20, 0.16, 0.05
Violeta rojizo, violeta azulado tenue, verde
tenue, verde intenso, verde tenue, verde
oscuro, verde claro, azul, azul
8M 7.0 1.0, 1.6, 2.2,
3.4, 5.3, 6.3
0.14, 0.23, 0.31,
0.49, 0.76, 0.90
Azul oscuro, violeta, azul tenue, violeta,
violeta, morado
9M 7.0 0.9, 1.7, 2.3,
3.4, 5.5, 6.7
0.13, 0.24, 0.33,
0.49, 0.79, 0.96
azul oscuro, violeta, azul tenue, violeta,
violeta, morado
10M 7.0 0.7, 1.0, 1.3,
1.6, 2.1, 2.4,
3.0, 3.4, 4.4,
5.2, 6.5
0.10, 0.14, 0.19,
0.23, 0.30, 0.34,
0.43, 0.49, 0.63,
0.74, 0.93
Morado, morado tenue, morado, rosado,
morado, morado, morado, morado, violeta
tenue, violeta rojizo, violeta rojizo
11M 7.0 1.1, 1.6, 2.0,
2.4, 5.3, 6.5
0.16, 0.23, 0.29,
0.34, 0.76, 0.93
Verde claro, rosado, verde claro, verde
oscuro, violeta tenue, morado
12M 7.0 0.3, 0.4, 0.8,
1.3, 1.6, 2.1,
2.6, 6.4
0.04, 0.06, 0.11,
0.19, 0.23, 0.30,
0.37, 0.91
Verde musgo, morado, violeta grisáceo,
verde claro tenue, violeta tenue, verde
claro, verde oscuro, violeta
13M 7.0 0.3, 0.5, 1.2,
1.5, 1.7, 2.2,
2.5, 3.3, 5.3, 6.8
0.04, 0.07, 0.17,
0.21, 0.24, 0.31,
0.36, 0.47, 0.76, 0.97
Azul oscuro, violeta grisáceo, morado,
violeta oscuro, rosado, violeta, violeta,
morado, violeta, morado
14M 7.0 2.8, 2.6, 3.8,
4.2, 4.6, 5.1,
5.7, 6.8
0.40, 0.37, 0.54,
0.60, 0.66, 0.73,
0.81, 0.97
Violeta intenso, violeta intenso, fucsia,
morado, violeta, morado, violeta intenso,
morado intenso
Fuente: FODECYT 39-2008
III.5.5 Principios amargos y sesquiterpenlactonas
Los extractos diclorometánicos 4D (raíz P. alliacea), 5D (raíz de V. prionophylla),
6D (inflorescencias de T. tepezapote), 7D (hoja de L. camara), 8D (raíz de D. contrajerva
var. houstoni),10D (rizoma de P. pseudoaureum), 11D (fronda de P. pseudoaurreum),
12D (hoja y flor de S. microphylla), 13D (hoja de D. contrajerva var. houstoni), y 14D
(hoja de L. graveolens), contienen principios amargos ya que al revelar la placa se
observaron manchas rojas-violetas, cafés-rojas, azules-verdes (Cuadro 25 y Fotografía
18).
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Tabla 25. TLC de principios amargos y sesquiterpenlactonas de extractos diclorometánicos
Metabolito Principios amargos Sesquiterpenlactonas
Fase móvil cloroformo: metanol (95:5) cloroformo: metanol (99:1)
Revelador vainillina-H2SO4 frente
solvente
(cm)
recorrido
muestra
(cm)
Rf vainillina-
H2SO4
frente
solvente
(cm)
recorrido
muestra
(cm)
Rf
visible visible
1D (-) 6.8 — — (-) 6.75 — —
2D (-) 6.8 — — (-) 6.75 — —
3D (-) 6.8 — — (-) 6.75 — —
4D (+) violeta, violeta,
violeta
6.8 0.4, 1.65,
4.75
0.059,
0.24,
0.70
(-) 6.75 — —
5D (+) azul, azul,
violeta, violeta,
violeta
6.8 1.45, 1.95,
3.2, 5.15,
5.45
0.21,
0.29,
0.47,
0.76,
0.80
(+) marrón,
marrón
6.75 0.7, 4.2 0.10,
0.62
6D (+) azul, azul, azul,
violeta
6.8 1.35, 1.65,
3.0, 4.7
0.20,
0.24,
0.44,
0.69
(-) 6.75 — —
7D (+) verde azulado,
rojo-café
6.8 1.8, 3.25 0.26,
0.48
(-) 6.75 — —
8D (+) azul, azul 6.8 1.3, 2.15 0.19,
0.32
(+) marrón
rojizo, marrón
rojizo
6.75 0.65, 2.0 0.096,
0.30
10D (+) azul 6.8 1.4 0.21 (-) 6.75 — —
11D (+) verde, rojo-
café
6.8 1.4, 2.7 0.21,
0.40
(-) 6.75 — —
12D (+) rojo-café, rojo-
café
6.8 0.7, 1.9 0.10,
0.28
(-) 6.75 — —
13D (+) violeta,
azul,
rojo café
6.8 0.25, 1.15,
3.2
0.037,
0.17,
0.47
(-) 6.75 — —
14D (+) verde azulado,
café, verde
azulado, azul
6.8 0.95, 1.6,
1.9, 3.3
0.14,
0.24,
0.28,
0.49
(+) marrón 6.75 1.7 0.25
Estándar stdr: café 6.8 6.3 0.92 — — — —
Positivo zonas: rojas-
violetas, cafés-
rojas, azules-
verdes.
— — — zonas: verdes,
amarillas,
marrones, rojas
o azules.
— — —
Fuente: FODECYT 39-2008
Los extractos metanólicos 3M (hoja de P. alliacea), 6M (inflorescencias de T.
tepezapote), 7M (hojas de L. camara), 8M (raíz de D. contrajerva var. houstoni), 12M
(hojas y flores de S. microphylla), 13M (hojas de D. contrajerva var. houstoni), 14M
(hoja de L. graveolens), 5D (raíz de V. prionophylla), 8D (raíz de D. contrajerva var.
houstoni), 9D (raíz de D. contrajerva var. tenuifolia) y 14D (hoja de L. graveolens)
dieron positivos para sesquiterpenlactonas, ya que mostraron zonas verdes, amarillas,
marrones, rojas o azules (Cuadro 26 y Fotografía 18).
Página 62 de 130
Fotografía 18. TLC de
principios amargos y
sesquiterpenlactonas de
extractos
diclorometánicos
metanólicos
Fuente: FODECYT 39-2008
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Tabla 26. TLC para principios amargos y sesquiterpenlactonas de extractos metanólicos
Metabolito Principios amargos Sesquiterpenlactonas
Fase móvil cloroformo: metanol (95:5) cloroformo: metanol (99:1)
Revelador vainillina-
H2SO4
frente
solvente
(cm)
recorrido
muestra
(cm)
Rf vainillina-
H2SO4
frente
solvente
(cm)
recorrido
muestra
(cm)
Rf
visible visible
1M (-) 6.9 — — (-) 7.9 — —
2M (-) 6.9 — — (-) 7.9 — —
3M (+) verde 6.9 1.55 0.22 (-) 7.9 — —
4M (-) 6.9 — — (-) 7.9 — —
5M (-) 6.9 — — (-) café, café 7.9 1.1, 6.25 0.14,
0.79
6M (+) verde
azulado
6.9 1.2 0.17 (-) 7.9 — —
7M (+) azul,
rojo
cafesaceo
6.9 1.15, 2.5 0.17,
0.36
(-) 7.9 — —
8M (+) violeta,
violeta
6.9 0.9, 2.1 0.13,
0.30
(+) café 7.9 0.55 0.07
9M (-) 6.9 — — (+) marrón 7.9 0.55 0.07
10M (-) 6.9 — — (-) 7.9 — —
11M (-) 6.9 — — (-) 7.9 — —
12M (+) azul 6.9 1.15 0.17 (-) 7.9 — —
13M (+) café
rojizo
6.9 2.7 0.39 (-) 7.9 — —
14M (+) verde
cafesaceo
6.9 1.4 0.20 (+) marrón 7.9 0.7 0.09
Estándar: stdr: café 6.9 6.0 0.87 —— — — —
Positivo Zonas:
rojas-
violetas,
cafés-rojas,
azules-
verdes.
— — — Zonas:
verdes,
amarillas,
marrones,
rojas o
azules.
— — —
Fuente: FODECYT 39-2008
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III.5.5 Taninos
La determinación de taninos por pruebas macrométricas indicó que existe la
presencia de estos metabolitos en seis de los extractos metanólicos ensayados (1M, 2M,
6M, 10M, 11M, 14M) (Tabla 27).
Tabla 27. Evaluación de taninos en los extractos metanólicos
Tubo 1
Testigo
Tubo 2
+ gelatina 1%
Tubo 3
+ gelatina-sal
Tubo 4
FeCl3
Presencia de
taninos:
1M Solución amarillo
claro
Formación de
precipitado blanco
Formación de
precipitado blanco
Cambio de color
a negro
Hay presencia
de taninos
2M Color salmón Formación de
precipitado blanco
Formación de
precipitado blanco
Cambio de color
a negro-grisáceo
Hay presencia
de taninos
3M Solución verde Solución verde Solución verde Solución verde
oscuro
Sin presencia
de taninos
4M Solución amarilla Solución amarilla Solución amarilla Solución café Sin presencia
de taninos
5M Solución verde Solución verde Solución verde Solución verde Sin presencia
de taninos
6M Solución naranja Formación de
precipitado blanco
Formación de
precipitado blanco
Cambio de color
a negro-grisáceo
Hay presencia
de taninos
7M Solución café Solución café Solución café Cambio de color
a negro
Sin presencia
de taninos
8M Solución amarilla Solución amarilla Solución amarilla Cambio de color
a café
Sin presencia
de taninos
9M Solución amarilla Solución amarilla Solución amarilla Cambio de color
a café
Sin presencia
de taninos
10M Solución naranja
claro
Formación de
precipitado blanco
Formación de
precipitado blanco
Cambio de color
a café
Hay presencia
de taninos
11M Solución café Formación de
precipitado blanco
Formación de
precipitado blanco
Cambio de color
a verde-azulado
Hay presencia
de taninos
12M Solución naranja Solución naranja Solución naranja Cambio de color
a negro-azulado
Sin presencia
de taninos
13M Solución amarilla
verdosa
Solución amarilla
verdosa
Solución amarilla
verdosa
Cambio de color
a café
Sin presencia
de taninos
14M Solución café
naranja
Formación de
precipitado blanco
Formación de
precipitado blanco
Cambio de color
a negro
Hay presencia
de taninos
Fuente: FODECYT 39-2008
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III.6 OBJETIVO 6
Realizar una partición líquido-líquido del extracto activo y determinar la actividad IACE,
para orientar la separación y aislamiento de los componentes activos.
III.6.1 Partición líquido:líquido
Se realizaron particiones de los extractos más promisorios obtenidos en la actividad
IACE por TLC. Se tomaron 20 g de cada extracto (V. prionophylla, T. lucida y L.
camara), se disolvieron en metanol, se extrajeron con tres porciones de disolventes de
diferente polaridad (hexano, cloroformo y acetato de etilo) y se separaron en ampolla de
decantación, obteniéndose así las fracciones hexánicas, clorofórmicas, de acetato de etilo
y metanólicas (Fotografía 19). Los porcentajes de rendimiento de cada una de las
particiones se muestran en la Tabla 28.
Tabla 28. Porcentajes de rendimiento de las particiones de extractos promisorios
Disolvente L. camara T. lucida V. prionophylla
Hexano 36.13 31.94 8.87
Cloroformo 16.36 14.02 15.38
Acetato de etilo 20.68 15.74 15.00
Metanol 19.00 31.39 55.90
Total 92.17 93.09 95.15
Fotografía 19. Procedimiento de partición líquido:líquido y separación de fases
Fuente: FODECYT 39-2008
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III.6.2 Bioautografía de las particiones
De las particiones de los extractos que dieron alguna actividad de inhibición
(decoloración) en el extracto crudo se realizó una bioautografía en TLC, demostrándose
que existe actividad IACE en la mayoría de las particiones (Fotografía 20).
Fotografía 20. Actividad IACE en particiones de V. prionophylla, T. lucida y L. camara
Inhibición se observa como zonas blancas Señalización de las áreas con actividad IACE
Fase Móvil: Tolueno : Acetato de Etilo : Metanol (30:8:1)
De izquierda a derecha fracción hexánica, clorofórmica, de acetato de etilo y metanólica de los extractos
metanólicos de V. prionophylla, T. lucida y L. camara, respectivamente (se aplicaron 10µL) galantamina
0.05mM, rivastigmina 22mM, (se aplicaron 5µL)
Fuente: FODECYT 39-2008
III.6.3 Cuantificación microcolorimétrica de IACE
De los extractos vegetales en bruto que presentaron positividad, se efectuaron las
particiones indicadas, demostrando en el ensayo cuantitativo que la actividad IACE de la
fase clorofórmica fue la más activa en las tres especies (38%, 34% y 5% respectivamente
para L. camara, T. lucida y V. prionophylla), mientras que T. lucida fue la especie que
presentó mayor actividad IACE en las cuatro particiones, siendo la fase metanólica la de
mejor respuesta (35%), sin embargo, no se catalogó como inhibición ya que no sobrepasa
el 50% de actividad. De V. prionophylla se obtuvieron resultados negativos por lo que se
puede inferir que el extracto crudo contenía metabolitos que en sinergía presentaban una
mejor actividad que las particiones.
Tabla 29. Porcentaje de IACE de las particiones de extractos con actividad preliminar Disolvente % de inhibición
L. camara T. lucida V. prionophylla
Acetato de etilo 14±31.63 34±13.71 0±3.99
Cloroformo 38±6.24 34±8.70 5±4.30
Hexano 24±4.25 28±2.25 -1±4.97
Metanol -12±10.98 35±11.45 -1±6.22
Fuente: FODECYT 39-2008
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PARTE IV.
IV.1 CONCLUSIONES
1. Se prepararon 12 POEs correspondientes a los procedimientos que se emplearon
desde la colecta hasta el análisis cualitativo y cuantitativo de los extractos y se
elaboraron 10 monografías farmacopéicas (Anexo 1) según el modelo de la OMS, con
un total de 50 páginas.
2. De una lista de 24 especies nativas popularmente usadas para afecciones nerviosas,
neurológicas y de la memoria, se colectó material vegetal de 10 especies (Cuadro 4);
en el caso de D. contrajerba se colectó material de dos variedades. Se ampliaron los
resultados comprometidos en el proyecto, al apoyar la recolección de ocho especies
correspondientes al Seminario de Investigación de Tesis de dos estudiantes de la
Escuela de Química Biológica. De las 18 especies colectadas se cuenta con muestras
de herbario, coordenadas geográficas, fotografía digital y materia seca vegetal para
estudios complementarios.
3. Se procesaron 14 muestras de 10 especies en las cuales se verificó un porcentaje de
humedad <10% y se obtuvo aceite esencial de siete muestras y extractos diclorome-
tánicos y metanólicos de todas. El mejor rendimiento se obtuvo de S. microphylla
(aceite esencial 0.32±0.03% y extracto diclorometánico 7.84%) y V. prionophylla
(extracto metanólico 33.4%). De tres especies (C. pentadactylon, L. camara y P.
pseudoaureum) no se obtuvo aceite esencial, y los rendimientos más bajos de los
extractos fueron para el diclorometánico, la raíz de P. alliacea (0.37±0.01%) y para el
metanólico, la flor de T. tepezapote (3.40±0.02%).
4. Se probaron varias fases móviles para buscar por la bioautografía cualitativa de TLC
aquella que da mejor actividad IACE y una clara separación de las bandas con
respecto a los estándares, encontrándose que inicialmente todos los extractos
diclorometánicos mostraban algún grado de actividad, pero la separación no era muy
buena; al optimizarse la fase móvil se logró una mejor separación y se demostró
actividad IACE en los extractos de T. lucida, L. camara y V. prionophylla.
5. Se realizaron los ensayos necesarios para establecer y validar el procedimiento
cuantitativo de la actividad IACE de los extractos a través de determinar su velocidad
de reacción contra la droga control (eserina), determinándose que el mejor tiempo de
lectura por ser mas reproducible la actividad es a los 136 seg, con un límite de
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detección de 15.6 μM y una CI50 de 250 μM. Ninguno de los extracto dio una
actividad IACE mayor del 50%, pero la hoja de L. graveolens (45%) y raíz de D.
contrajerva var. houstoni (39%) dieron una actividad interesante.
6. Se caracterizó la composición química de los extractos, determinándose que
prácticamente todos contienen flavonoides, aunque dos especies (P. pseudoaureum y
T. lucida) presentaron ocho bandas por TLC; 11 extractos presentaron alcaloides,
pero dos (L. camara y P. alliacea) presentaron cuatro bandas; tres extractos
diclorometánicos (D. contrajerva var. houstoni, L. graveolens y S. microphylla) y uno
metanólico (P. pseudoaureum) presentaron antraquinonas; solamente un extracto
(diclorometánico de L. graveolens) presentó cardenólicos y bufadienólicos; en todos
se evidenciaron esteroides o titerpenoides y en siete cumarinas, de las cuales T. lucida
presentó seis bandas; todos presentaron principios amargos y sesquiterpenlactonas,
sobresaliendo V. prionophylla que demostó cinco bandas por TLC; seis extractos
presentaron taninos. Se concluye que si bien hay una amplia diversidad fitoquímica
no existe un patrón que pueda sugerir una composición en común.
7. Si bien en el proyecto se compometió a realizar los estudios de partición líquido:
líquido en uno de los extractos bioactivos, se realizó dicha partición a tres extractos
con algún potencial en la fase de tamizaje cualitativo, demostrándose por
bioautografía con TLC actividad en todas las particiones; al cuantificar se demostró
que la partición clorofórmica fue la más activa, para L. camara (38%) y T. lucida
(34%), esta última especie además presentó actividad moderada en las cuatro
particiones.
8. Se concluye que fue posible establecer un método cualitativo por bioautografía en
TLC, pero no el originalmente propuesto, ya que este demostró mucha actividad y
poca separación, los mejores resultados se obtuvieron con la prueba de Fast blue B.
Igualmente se estableció por primera vez en el país un método microcolorométrico
para cuantificar la actividad IACE.
9. De los nueve extractos de ocho especies estudiados en el Seminario de Investigación
de Tesis, el extracto diclorometánico de W. urens var. caracasana demostró una
actividad IACE moderada (43%).
10. Finalmente se concluye que si bien ninguno de los extractos demostró una actividad
IACE significativa (>50%), por lo menos L. camara, L. graveolens, raíz de D.
contrajerva var. houstoni y T. lucida (comprometidas en el proyecto) y W. urens var.
caracasana (parte del Seminario de Investigación de Tesis) presentaron una actividad
interesante que deberá seguirse estudiando hasta arribar a alguna conclusión que
permita su desarrollo preclínico y su eventual aplicación clínica.
11. La hipotésis planteada se acepta parcialmente, ya que a pesar que L. camara, L.
graveolens, raíz de D. contrajerva var. houstoni y T. lucida presentaron actividad
mayor al 50% de inhibición enzimática, no presentan una actividad potente.
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IV.2 RECOMENDACIONES
1. Preparar las 10 monografías farmacopéicas elaboradas y transformarlas a un formato
PDF para poder difundir su información un una forma amplia.
2. Continuar la investigación de las especies con uso tradicional sobre el sistema
nervioso, completando el listado inicialmente detectado y luego ampliando con otras
especies nativas, particularmente de las familias Amarillydaceae y Piperaceae, que
han demostrado actividad IACE en otros estudios.
3. Identificar la composición cualitativa y cuantitaiva de los aceites esenciales
detectados, principalmente de aquellas especies cuyo aceite esencial se describe por
primera vez.
4. Perfeccionar la bioautografía por TLC para tamizar la actividad IACE usando el
reactivo de Fast blue B y capacitar a personal de laboratorio en su uso en forma
rutinaria en extractos vegetales.
5. Aplicar la técnica de cuantificación de la actividad IACE por el método microcolori-
métrico para conocer las variables que afectan robustez, reproducibilidad,
confiabilidad y otros factores que permitan el uso confiable de este procediminto
recientemente establecido en el país.
6. Ampliar los estudios fitoquímicos de las especies que mostraron una alta diversidad
evidenciada por múltiples bandas en TLC, cuantificar los componentes (alcaloides,
flavonoides y cumarinas) para conocer su verdadero potencial medicinal, aislando y
caracterizando los constituyetes relevantes.
7. Realizar una partición líquido:líquido de los otros extractos que mostraron algún
potencial en la fase de tamizaje cualitativo, tanto los del proyecto (L. graveolens y
raíz de D. contrajerva var. houstoni) como del Seminario (W. urens var. caracasana)
para conocer si al purificar las fracciones mejora la actividad.
8. Analizar los extractos que dieron alguna actividad, tanto los comprometidos en el
proyecto (L. camara, L. graveolens y T. lucida raíz de D. contrajerva var. houstoni)
como los estudiados en el Seminario (W. urens var. caracasana), utilizando otras
técnicas para evaluar la actividad IACE permita conocer su verdadero potencial
preclínico y su eventual aplicación clínica.
9. Buscar la cooperación de otros grupos internacionales trabajando en la búsqueda de
actividad IACE por extractos vegetales, para ampliar la información obtenida y
confirmar los hallazgos preliminares.
10. Continuar con el fraccionamiento de las especies de L. camara, L. graveolens, raíz de
D. contrajerva var. houstoni y T. lucida para determinar la fracción responsable de la
actividad IACE.
Página 70 de 130
IV.3 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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IV.4 ANEXOS
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Anexo 1. Chiranthodendron pentadactylon Larr.
(Sterculiaceae)
I. DENOMINACIÓN, SINÓNIMOS Y EQUIVALENCIAS
1. Denominación: Flor seca de C. pentadactylon Larr. (1-5).
2. Sinónimos: Cheirostemon platanoides Humb. & Bonpl., C.
platanoides Baill (1,4,5).
3. Nombres vernáculos: Mano de león, Tayuyo, Canac,
Q’anaq’, Mano de mico, Árbol de las manitas, Majagua,
mapasúchil (del Nahuatl macpal-xochitl que significa ―flor de
mano‖), Cacpalxochitl, Papasuchil, Ranac, Palo de tayuco,
Teyacua, Mapilxochitl, Mano de dragón, Palo de yaco (1-6).
4. Partes usadas: Flores secas (1-4,6).
II. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Árbol grande, de 12-30m de alto o más, el tronco frecuentemente
1-2m de diámetro. Hojas palmatinervias largo pecioladas, más o
menos ovado-redondeadas en su contorno, 12-30cm de largo,
subagudas a acuminadas, profundamente y estrechamente cordada
en la base, superficialmente lobadas o subentereas, verde oscuro y glabrado arriba, densamente café-
tomentoso abajo. Pedúnculos más cortos que el cáliz. Cáliz de 3.5-5cm de largo, café-tomentoso en la parte
externa, glabro en la parte interna y de un color rojo oscuro encendido, con una gran estructura nectarífera
en la base de cada lóbulo. La columna de estambres igualando el cáliz, sustentando en su ápice cinco largas
ramas curvadas, estas prolongándose en puntas muy delgadas y ahusadas. La cápsula oblongo-elipsoide,
muy dura y leñosa, 10-15cm de largo, profundamente penta-lobada, los ángulos estrechos y borde sin punta.
Los arilos de las semillas son anaranjados (5).
III. DATOS AGROTECNOLÓGICOS
1. Distribución y hábitat: Abundante en muchos lugares en bosques mixtos altos en las montañas;
frecuentemente crecen también en campos en los cuales los bosques han sido cortados, y probablemente
plantados en algunas regiones rurales. El rango altitud se encuentra entre los 2,000-3,000msnm.
Se reporta para México (Morelos, Michoacán, Oaxaca y Chiapas); Guatemala (El Progreso, Zacapa,
Guatemala, Sacatepéquez,, Chimaltenango, Sololá, Quiché, Huehuetenango, Totonicapán, Quetzaltenango
y San Marcos), Honduras y Estados Unidos (cultivado) (4,5).
2. Cultivo
2.1 Cultivo: La propagación es por medio de semillas; aunque, es un árbol de crecimiento lento y difícil
cultivo (1,5).
2.1 Plagas o enfermedades: El árbol es atacado por un insecto del grupo de los microlepidópteros
(Fischeria heliopsisella) (1).
IV. USOS ETNOMÉDICOS O TRADICIONALES
1. Usos medicinales: Se reporta que las flores son usadas por los indígenas para el tratamiento de
úlceras crónicas, oftalmia o inflamación de los ojos y hemorroides. Se recomienda comúnmente para
problemas del corazón, diarrea, disentería, nervios, epilepsia, inflamaciones en la piel (dermatitis), llagas,
quemaduras, raspones. Las flores, corteza y hojas se usan en baños para tratar las hemorroides (2,3,5-9).
A las flores y hojas se les atribuye propiedad analgésica, antiepiléptica, antiinflamatoria, antiodontálgica,
astringente, cardiotónica, catártica, diurética y emoliente (4,6,7,9).
2. Formas de preparación: La infusión de las flores se utiliza para el tratamiento crónico de úlceras,
oftalmia y hemorroides. El té de la flor sirve para la disentería. La infusión que se obtiene del cocimiento de
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las flores la empleaban los aztecas en Toluca como remedio para la inflamación de los ojos y de las
hemorroides. En México, las hojas cocidas son usadas como cataplasmas (2-5,9).
3. Uso en combinación con otros ingredientes: Cuando hay dolor se unge con el líquido preparado de
corteza y hojas de manita, zarzal, tolohuaxihuitl y xiuhtonli, navaja de las indias, pedernal, un fruto de
tetzapotl y piedra texoxoctli; todo eso molido en sangre caliente de golondrina, lagartija y ratón. En el
mercado de Sonora, México se recomiendan los siguientes usos: para los nervios y el corazón, combinada
con el yoloxóchitl (Talauma mexicana), magnolia (Magnolia sp.), los tres toronjiles (el blanco y el morado
(Agastache mexicana) y el azul o chino (Dracocephalum moldavica), azahar (Citrus sp.), tomada como té
cuando sea necesario (2,3).
4. Otros usos populares: El principal uso que se le da es como planta de sombra y ornato en parques y
jardines, por su follaje y por la belleza de sus flores rojas que se asemejan a una mano. Las hojas suaves y
flexibles son usadas para cubrir o envolver comida en los mercados. Los pobladores utilizan el abundante
néctar de los cálices. Por el color rojo, fuerza y dureza de la madera, esta se utiliza en carpintería (4,5,9).
V. DROGA VEGETAL
1. Denominación: Flores y hojas de C. pentadactylon
2. Definición: Flores secas.
3. Obtención: El material usado medicinalmente es obtenido exclusivamente por recolección de árboles
silvestres. Las flores se recolectan únicamente en los meses de otoño y principios del invierno (agosto-
diciembre); se recolectan a media mañana y se secan inmediatamente a la sombra. Se recomienda proteger y
manejar las áreas de crecimiento silvestre para garantizar su aprovisionamiento sostenible (1).
4. Descripción macroscópica: No hay información disponible
5. Descripción microscópica de la droga: No hay información disponible
6. Composición química: No hay información disponible
7. Monografía de control de calidad
7.1 Identificación
7.1.1 Descripción macroscópica: No hay información disponible
7.1.2 Descripción microscópica: No hay información disponible
7.1.3 Características organolépticas: No hay información disponible
7.2 Ensayos
7.2.1 Características fisicoquímicas:
No debe contener más del 10% de materia extraña y órganos deteriorados.
No debe presentar: Partes de otras plantas, insectos o larvas, partículas de tierra, arena y otras materias.
Humedad: Por método gravimétrico no debe contener más del 10%
Cenizas totales: Por incineración en mufla a 700-750ºC, no debe pasar el 9% (10).
7.2.2 Análisis microbiológico: El producto en cualquiera de sus presentaciones no contendrá micro-
organismos patógenos o sus toxinas. Coliformes totales <104 NMP, coliformes fecales <10
3 NMP, E. coli
<102 NMP, y recuento de mohos y levadura <10
4 UFC/mL (10).
7.2.3 Contaminantes: No deberá contener contaminantes químicos o biológicos en cantidades que
sobrepasen los límites máximos aceptados por la unidad sanitaria.
8. Ficha técnica de seguridad y eficacia
8.1 Toxicología: El estudio toxicológico de la infusión de flores no demostró toxicidad aguda en el ratón
por vía oral hasta dosis de 10 g/kg (1).
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8.2 Dosis: Por su uso popular como cardiotónico y aparente falta de toxicidad, el uso de las flores está
indicado por vía oral para el tratamiento de afecciones cardíacas y epilepsia. Se recomienda administrar tres
veces al día en dosis de 1-3 g/taza en infusión, 1-3mL de tintura 1:10 en etanol 35% (1).
9. Datos farmacológicos: El extracto etanólico 95% a una concentración de 50.0μg/mL, demostró
actividad in vitro en cultivo celular contra el Herpes simplex y Virus de la estomatitis vesicular. El extracto
etanólico (95%), demostró tener actividad contra A. salina (LC50 en 4.81μg/mL). El extracto acuoso en
aorta de rata, demostró actividad espasmolítica, contra contracciones inducidas con norepinefrina (11).
En ensayos farmacológicos, las flores han demostrado tener actividad antiinflamatoria y antiaterogénica. A
dosis de 750 y 1000 mg/kg, tiene acción diurética comparada con el control (1mL de agua), sin embargo, no
tiene la potencia del fármaco de referencia (hidroclorotiazida) a dosis de 25mg/kg (7,9).
El extracto etanólico mostró actividad contra ocho especies de bacterias enteropatógenas que provocan
diarrea y disentería en México. Las bacterias utilizadas fueron: dos cepas de E. coli, dos de S. sonnei, dos de
S. flexneri y dos cepas de Salmonella sp; siendo S. sonnei la que presentó mayor susceptibilidad. Los
extractos acuoso y metanólico (300mg/kg) fueron evaluados por su actividad antisecretoria en secreciones
intestinales producidas por toxinas del cólera, utilizando para ello el modelo de asa yeyunal en ratas. Ambos
extractos fueron potentes con valores de inhibición entre 68.0 y 87.6%. Los extractos acuosos (0.5-
12mg/mL) en aorta torácica de rata precontraída por noradrenalina inhibieron significativamente la
concentración de la arteria. Esto indica que el o los principios activos presentes en el extracto ejercen un
efecto vasorelajante (12-14).
VI. REFERENCIAS
1. Cáceres A. Plantas de uso medicinal en Guatemala. Editorial Universitaria, USAC. Guatemala.1996.
2. Linares E, Flores B, Bye R. Selección de plantas medicinales de México. Editorial LIMUSA. México. 1998.
3. Linares E, Flores B, Bye R. Tés curativos de México. Universidad Nacional Autónoma de México, UNAM. 1990.
4. Niembro A. Árboles y arbustos útiles de México. Editorial LIMUSA. Mexico. 1990.
5. Standley PC, Steyemark, JA. Flora of Guatemala. Fieldiana: Botany, 1949, 24(6):408-409.
6. Orellana SL. Indian Medicine in Highland Guatemala. Albuquerque, New Mexico Press, 1987.
7. Lemus M. Evaluación de la actividad diurética in vivo de Chiranthodendron pentadactylon Larreategui (manita)
distribuida por centros naturistas de la ciudad de Guatemala. Tesis Químico Farmacéutico. Facultad de CCQQ y
Farmacia, USAC. Guatemala.1990.
8. Martínez M. Las Plantas Medicinales de México. Ediciones Botas. Sexta Edición. México D.F. 1992.
9. Morton J. Altas of Medicinal Plants of Middle America, Bahamas to Yucatan. Charles C Thomas Pub., Estados
Unidos.1981.
10. Departamento de Control de Calidad; Laboratorio de Productos Fitoterapéuticos Farmaya, S.A. Certificados de
Control de Calidad de Materia Prima Vegetal. Guatemala. 2007
11. Abad MJ et al. Antiviral activity of medicinal plant extracts. Phytotherapy Research, 1997, 11(3):198-202.
12. Alanís AD et al. Antibacterial properties of some plants used in Mexican traditional medicine for the treatment of
gastrointestinal disorders. Journal of Ethnopharmacology, 2005, 100:153-157.
13. Velasquez C et al. Antisecretory activity of plants used to treat gastrointestinal disorders in México. Journal of
Ethnopharmacology, 2006, 103:66-70.
14. Perusquía M et al. Vasoactive effects of aqueous extracts from five Mexican medicinal plants on isolated rat
aorta. Journal of Ethnopharmacology, 1995, 46:63-69.
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Anexo 2. Dorstenia contrajerva L. (Moraceae)
D. contrajerva var. tenuifolia D. contrajerva var. houstoni
I. DENOMINACIÓN, SINÓNIMOS Y EQUIVALENCIAS
1. Denominación: Raíz, hojas y/o planta entera seca de Dorstenia contrajerva L.
2. Sinónimos: Dorstenia contrajerva subsp. tenuiloba S.F. Blake, D. contrajerva var. houstonii (L.)
Bureau, D. contrajerva var. maculata (Lem.) Bureau, D. contrajerva var. tenuiloba (S.F. Blake) Standl. &
Steyerm., D. houstonii L., D. maculata Lem., D. palmata Willd. ex Schult., D. quadrangularis var.
pinnatifida Stokes, D. quadrangularis var. sinuata Stokes (1).
Nombres vernáculos: Contrahierba; Contrahierba; Mano de león; Hierba de sapo; Hierba de cáncer;
Cambahan; Contaúl; X-chambalhu; Xbabaljau; Xcambalhan; Cabalhau; Refriyau; Raíz de resfriado (1-4).
3. Partes usadas: Raíz, hojas y/o planta entera (1,2,4-7).
II. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Planta acaulescente o casi acaulescente. Hojas frecuentemente muy numerosas y amontonadas, largamente
pecioladas, pinadamente lobadas o casi palmadamente lobadas, escasamente escabrosas o puberulentas,
usualmente algo rugosas al tacto, los lóbulos agudos a acuminados, estrechos o amplios. Receptáculos en
largos pedúnculos delgados, cuadrangulares o profunda o irregularmente lobados, acrescentes en edad y 2-5
cm de ancho, escaberuloso abajo (1).
III. DATOS AGROTECNOLÓGICOS
1. Distribución y hábitat: Crece en selvas perennifolias húmedas tropicales y subtropicales. La altura va
desde el nivel del mar hasta los 1,800 msnm.
Se ha reportado para Florida (USA), México, Guatemala (Petén, Alta Verapaz, Chiquimula, Jalapa, Santa
Rosa, Escuintla, Suchitepéquez, Guatemala, Sacatepéquez, Chimaltenango, Retalhuleu, Quetzaltenango,
Huehuetenango), de Belice a Panamá, Suramérica e Islas del Caribe (1,8,9).
IV. USOS ETNOMÉDICOS O TRADICIONALES
1. Usos medicinales:
Hoja: En Guatemala, la decocción y el extracto acuoso (en caliente) de la hoja, de la contrahierba, es usada
como remedio casero para la diarre. Raíz: En Costa Rica, el extracto acuoso, caliente, de la raíz seca se
utiliza como emenagoga. En las Indias occidentales, el té y la infusión del rizoma de contrahierba se
utilizan para la disentería, indigestión, fiebre, calenturas, dolores musculares y mordeduras de serpiente
(2,4,8). Partes aéreas: En Bolivia, la infusión de las partes aéreas secas es usada como un antídoto para
mordeduras de serpientes e insectos. Planta entera: En Panamá, la infusión de la planta entera seca se utiliza
como tratamiento para la fiebre (8). Sin especificar parte: En Guatemala, se utiliza para tratar la disentería y
para el tratamiento de mordeduras de animales venenosos. En Nicaragua se usa como medicina casera
contra la fiebre y la diarrea. En Brasil, se utiliza como emenagogo. En México, el extracto acuoso en
caliente se utiliza para menstruaciones irregulares (1,8,9).
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V. DROGA VEGETAL
1. Denominación: Raíz, hojas y/o planta entera de D. contrajerva.
2. Definición: Raíz, hojas y/o planta entera seca
3. Obtención: No hay información disponible
4. Descripción macroscópica: No hay información disponible
5. Descripción microscópica de la droga: No hay información disponible
6. Composición química: Las hojas contienen: alcaloides, péptidos como la contrayervina y el
psoraleno de 5-(3-4-epoxi-2-7-dimetil-6-7-octenoil). En el rizoma se encuentran mucílagos, la cumarina
dorsteniol y el cardenolido siriogenina). Las partes aéreas son ricas en furanocumarinas glucosiladas como
α-L-rhamno-piranosil-(16)-β-D-glucopiranosil-bergaptol, bergapteno, 4-[[3-(4,5-dihidro-5,5-dimetil-4-
oxo-2-furanil) butil]oxi]-7H-furo[3,2-g][1]benzopiran-7-one, bergaptol, catequina y epicatequina, geipar-
varina, 2,3-dihidro-2-isopropenil-6-metoxibenzofurano, (2S*,1´S*)-2,3-dihidro-2-(1´-hidroxi-1´acetil-
oximetiletil)-7H-furo [3,2] [1] benzopiran-7-o. La planta entera posee alcaloides y la cumarina bergapten
(2,4-6,9-11).
7. Monografía de control de calidad
7.1 Identificación
7.1.1 Descripción macroscópica: No hay información disponible..
7.1.2 Descripción microscópica: No hay información disponible..
7.1.3 Características organolépticas: No hay información disponible..
7.2 Ensayos
7.2.1 Características fisicoquímicas:
No debe contener más del 10% de materia extraña y órganos deteriorados.
No debe presentar: Partes de otras plantas, insectos o larvas, partículas de tierra, arena y otras materias.
Humedad: Por método gravimétrico no debe contener más del 10%
Cenizas totales: Por incineración en mufla a 700-750ºC, no debe pasar el 9% (10).
7.2.2 Análisis microbiológico: El producto en cualquiera de sus presentaciones no contendrá micro-
organismos patógenos o sus toxinas. Coliformes totales <104 NMP, coliformes fecales <10
3 NMP, E. coli
<102 NMP, y recuento de mohos y levadura <10
4 UFC/mL (12).
7.2.3 Contaminantes: No deberá contener contaminantes químicos o biológicos en cantidades que
sobrepasen los límites máximos aceptados por la unidad sanitaria.
8. Ficha técnica de seguridad y eficacia: datos sobre toxicología y dosis no hay información disponible
9. Datos farmacológicos: El péptido contrayervina produjo una fuerte inhibición del efecto citopático de
la infección del virus de inmunodeficiencia adquirida HIV (HIV-1RF) en una línea celular de linfocitos T-
linfoblatos humana (5).
Un estudio in vitro demostró que el extracto etanólico al 95% tiene actividad anticrustácea contra A. salina.
Este ensayo tiene por finalidad predecir actividad antitumoral. Además, no produjo ningún efecto citotóxico
en cultivos celulares de células de ovario de hámster chinos y células HeLa (8).
Otro estudio in vitro demostró que el extracto etanol-agua (50:50) no tiene actividad contra bacterias
patógenas como E. coli, S. enteriditis, S. typhi, S. dysenteriae y S. flexneri (8). El extracto etanólico no
presentó actividad inhibitoria contra M. tuberculosis H37Rv (13).
El extracto diclorometánico de la hoja exhibió una leve actividad larvicida y propiedades antibacteriana. El
efecto larvicida fue probado contra larvas de A. aegypti; y este fue activo (100% de mortalidad en 24 horas)
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a una concentración de 125 ppm. Las fracciones del extracto fueron probadas pero solamente tres de ellas
fueron activas (10).
Se ha determinado que los polifenoles de la raíz son antipiréticos, astringentes e hipotensores. La
contrayervina aislada (parte no especificada) tiene un efecto inhibitorio citopático contra la infección de una
línea del virus HIV (2,5).
La actividad contra las fiebres, diarrea y mordeduras de serpientes se le atribuye a las cumarinas, chalconas,
flavonas y flavononas (5).
Un estudio in vitro, demostró que la geiparvarina, una cumarina 7-substituida, inhibe el carcinoma humano
de la nasofaringe (10).
El extracto etanólico de la raíz posee actividad inhibidora sobre la vía clásica del complemento, pero es
inactiva en la vía alterna. El extracto etanólico de la flor es inactiva sobre la vía alterna y clásica (7).
VI. REFERENCIAS
1. Standley PC, Steyemark, JA. Flora of Guatemala. Fieldiana: Botany, 1946, 24(4):28-29.
2. Ayensu E. Medicinal plants of the West Indies. Algonac, Reference Publications, 1981.
3. Farmacopea Vegetal Caribeña. Segunda Edición. Editorial Universitaria, UNAN-León. León, Nicaragua. 2005
4. Morton, J. Atlas of Medicinal Plants of Middle America Bahamas to Yucatán, Charles C. Thomas. Publisher,
Estados Unidos, 1981.
5. Bokesch H et al. Isolation and characterization of anti-HIV peptides from Dorstenia contrajerva and Treculia
obovoidea. FEBS Letters, 2004, 567:287-290.
6. Cáceres A et al. Furanocoumarins from the aerial parts of Dorstenia contrajerva. Fitoterapia, 2001, 00:1-5
7. Castillo C et al. Actividad moduladora del Sistema del Complemento de diez plantas medicinales nativas de
Guatemala. Revista Científica, Número especial, 2005, 3(1): 30-34.
8. Chavez PI et al. Cytotoxicity correlation of Puerto Rican plants using a simplified brine shrimp lethality screening
procedure. International Journal of Pharmacognosy, 1997, 35: 222-226
9. Stevens, WD et al. Flora de Nicaragua. Missouri Botanical Garden Press, 2001, 3:2510.
10. Terreaux C et al. Structure revision of a furanocoumarin from Dorstenia contrajerva. Phytochemistry, 1995,
39(3):645-647.
11. Tovar-Miranda R. Isolation, Total Synthesis, and relative stereochemistry of a dihydrofurocoumarin from
Dorstenia contrajerva. Journal of Natural. Products, 1998, 61:1216-1220.
12. Departamento de Control de Calidad; Laboratorio de Productos Fitoterapéuticos Farmaya, S.A. Certificados de
Control de Calidad de Materia Prima Vegetal. Guatemala, 2007.
13. Quiñonez SP et al. Actividad micobactericida de 14 extractos de plantas mesoamericanas utilizadas popularmente
en infecciones pulmonares. Revista Cientifica, Universidad de San Carlos de Guatemala, Facultad de Ciencias
Químicas y Farmacia, 2008, 4:1. 9-15.
Página 83 de 130
Anexo 3. Lantana camara L. (Verbenaceae)
I. DENOMINACIÓN, SINÓNIMOS Y EQUIVALENCIAS
1. Denominación: Raíz, hojas y/o fruto de Lantana camara L.
2. Sinónimos: Lantana hirsuto Mart & Galeotti, L. horrida Kunth.,
L. tiliaefolía Schlecht. & Cham., L. glandulosissima Hayech., L.
hispida Kunth.
3. Nombres vernáculos: Alantana, alfombrilla, hedionda,
manchana, cámara de chumbo, cámara de espinho, cámara vermelho,
mabara, cambara verdadera, cariaquillo, cariaquito, cariaquito
colorado, chiligua nigrita, cinco coloraditos, cinco negritos, comida
de paloma, confite, corona de sol, corronchocho, erva sagrada, filigrana, flor de duende, flor de San
Cayetano, flor di sanger, hierba de Cristo, jaral, jarilla, lampana, lantana, lauraimana, maíz zorro,
matizadilla, mora, mora de caballo, mora de muerto, crozuz del país, palabra de caballero, palabra de mujer,
peona negra, petekin, cimarron, santuario, santo negrito, sapotillo, siete colores, sonora, sonora roja, tres
colores, uña de gato, venturosa, venturosa colorada, verbena, verbena morada, vivarana, zapotillo,
zarzamora (1-4).
4. Partes usadas: raíz, hojas y/o fruto (1).
II. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Arbusto de 1-3m de altura, tallo espinoso, flores de color amarillo, anaranjado y rojo en forma de
manojitos. Los frutos son bayas de color azul verdoso o negro, de sabor dulce. (4).
Arbusto altamente aromático, 1-4m de alto. Las hojas son opuestas o en grupos de tres, redondas ovaladas u
oblongadas ovaladas, de 4-12cm de largo y 5cm de ancho, puntiagudas en el ápice, ásperas en la superficie,
mas o menos peludas en la parte anversa, dentadas en los márgenes. Las flores son una mezcla de amarillo
y rosado cambiando a rojo y anaranjado (en la variedad aculeata el amarillo cambia a lavanda con ojo
amarillo). Las flores son planas o cabezas hemisféricas de 2.5-3.8cm de ancho. Las frutas son redondas
verdes cuando están inmaduras, y un color azul profundo cuando se deben cortar, de 3-5mm de ancho con
una semilla dura (1).
III. DATOS AGROTECNOLÓGICOS
1. Distribución y hábitat
Planta nativa de América subtropical y tropical, pero varios taxos son nativos de Asia y África tropical.
Ahora aparecen en aproximadamente 50 países cultivadas bajo cientos de nombres de cultivo.
Es la especie que esta mas esparcida de este género, crece a elevaciones de hasta 2,000 m en regiones de
temperatura tropical y subtropical. El nombre de la especie ―cámara‖ es probablemente adoptado del
nombre coloquial de las epecies comunes. (1-3, 5).
Habita en los climas cálido, semicálido, semiseco, muy seco y templado y desde 0 hasta los 1000 y de los
2300 a los 3000 msnm. Se asocia con vegetación perturbada en potreros o a orillas de caminos, dunas
costeras, manglar, palmar; con bosques espinosos, matorral, pastizal y de montaña (6).
IV. USOS ETNOMÉDICOS O TRADICIONALES
1. Usos medicinales:. ha sido utilizada en varias partes del mundo para tratar una gran variedad de
desórdenes. Se encontró uso en remedios folclóricos para cáncer y tumores. Un té preparado de las hojas y
flores se utilizó contra fiebre, influenza y dolor de estómago (5).
En Centro y Sudamerica las hojas se preparaban en cataplasma y se utilizaban para tratar dolores, varicela y
sarampión. Fiebres, catarros, reumatismo, asma y presión arterial alta fueron tratados con preparaciones de
la planta (5).
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En Ghana, la infusión de toda la planta se utilizó para bronquitis y la raíz pulverizada se daba en la leche
para dolor de estómago. En países asiáticos, las hojas eran usadas para tratar cortaduras, reumatismos,
úlceras y como vermífugo. Las decocciones eran aplicadas externamente para lepra y sarna. Se ha
encontrado que el esteroide lancamarone de las hojas exhibe propiedades cardiotónicas, y el lantamine es un
alcaloide de la corteza del tallo y raíces mostraron propiedades antipirética y antiespasmódica comparables
con las de la quinina, pero la validez de estos hallazgos no han sido confirmados. De las hojas, una fracción
del alcaloide que baja la presión sanguínea aceleraba la respiración y causaba temblores en perros. Se
separó y se sugirió que podía ser utilizada para reducir fiebres, tratamiento contra asma e hipertensión (5).
Utilizado como diaforético, carminativo, antiséptico, antiespasmódico, tónico, aperitivo y vomitivo. Varias
partes de la planta son usados en el tratamiento de picaduras, cortes, úlceras, hinchazón, fiebre biliosa,
catarro, eczema, disentería, molestias en el pecho de niños, fistula, pústulas, tumores, tétanos, malaria,
reumatismo, dolor de muelas, frío, dolor de cabeza, varicela, hemorragias uterinas, lesiones de ojos, tos
ferina, asma, bronquitis e hipertensión arterial. (7).
Se reportó que son alexitéricos, antibióticos, carminativo, depurativo, diaforético, digestivo, emenagogo,
expectorante, hemostático, sedativo, estimulante, estomático, sudorífico, tónico. Remedio para anemia,
asma, catarro, varicela, resfriados, constipación, diarrea, disentería, dismenorrea, eczema, fiebre, fístula,
gripe, hemorragia, hipertensión, inflamación, picazón, ictericia, lepra, malaria, sarampión, neurodermatitis,
paratiditis, reumatismo, picadura de serpiente, dolores, espasmos, dolores estomacales, tumor, heridas y
fiebre amarilla. Los venezolanos pulverizan las hojas en heridas. En las Bahamas se aplican las hojas en la
varicela y sarampión. En Surinam usan las plantas para tratar las fiebres (8).
En Panamá lo utilizan para resfriados. En Mexico para reumatismo. En Costa Rica para asma y presión
arterial alta. En Venezuela para diarrea y dismenorrea. El Jamaica para resfriados y en El Salvador para
enfermedades venéreas. Al sur de China usan la planta en decocción para lepra y sarna. En Malasia
pulverizan las hojas para cortadas, reumatismo y úlceras. Las hojas secas para aliviar la respiración
asmática y las hojas frescas para prevenir la fiebre (8).
En Puerto Rico y Guatemala la decocción de la planta es tomada como un remedio estomático y para el
reumatismo. Una decocción fuerte se da como antídoto para la picadura de serpiente, mientras que las hojas
machacadas se esparcen en la herida. En Camaguey, Cuba la decocción se toma como un diurético y se
utiliza para la estimulación de los baños. En Surinam es un remedio para la fiebre. La gente en Perú lo toma
como un tónico. En Costa Rica como un tónico y como remedio para la hipertensión. Los venezolanos
hierven las ramas de la planta a florecer y se toman la decocción como un diurético en todas las molestias
urinarias; también para regular la menstruación, diarrea y hemorragias. Externamente aplican las hojas en
úlceras. En Curacao, la decocción de la hoja se utiliza como emenagoga y sudorífica (1-4,6,9).
Australia: La fruta fresca se come como alimento. Las hojas frescas machacadas son aplicadas a la piel para
tratar neurodermatitis, eccema, erupciones, psoriasis, varicela, mordeduras y para detener sangrado traumá-
tico de heridas. La infusión se toma oral para tratar tosferina, catarro, problemas pulmonares, y para bajar la
fiebre. La decocción se utiliza para tratar áfidos. Hervir 500 g de hojas en un litro de agua, colar y rociar
(10).
Brasil: La decocción de las partes aéreas secas es utilizada externamente para el tratamiento de sarna. La
decocción de las hojas secas es tomada oralmente para malaria, fiebres, resfriados, dolor de cabeza y como
tónico y febrífugo. La planta seca se les da a las vacas para tratar la sarna. Islas Canarias. La infusión de las
partes aéreas secas lo toman oralmente las mujeres embarazadas como abortivo (10).
Colombia: La decocción del extracto acuoso caliente de toda la planta se toma oralmente para facilitar el
parto. La infusión del extracto acuoso caliente se toma oralmente como emenagogo. Este de África. Las
cenizas de las hojas secas son mezcladas con sal y se toma oralmente para el dolor de garganta, tos y dolor
de diente. Las hojas se mastican para el dolor de diente. El vapor de las hojas hirviendo se inhala para el
dolor de cabeza y resfriados. El extracto acuoso caliente de hojas secas se toma oralmente como diaforético,
estimulante, para la ictericia, enfermedades pulmonares y para el reumatismo. Se dice que la fruta fresca es
tóxica para los niños, aunque hay desacuerdos. El extracto acuoso caliente de la raíz seca se toma oralmente
como febrífugo y para la malaria, incluyendo los casos de resistencia a la quinina. Se ha reportado toxicidad
en ovejas y ganado (10).
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Guatemala: La decocción de las hojas secas se toma oralmente para tratar reumatismo, constipado y
eccema. La infusión de hojas secas se toma oralmente como tónico y estimulante. El extracto acuoso
caliente se usa externamente para heridas, ulceras, moretes, dolor e infecciones de la piel y mucosa (10).
India: La ceniza de toda la planta se usa externamente para ulceras crónicas. Se ha reportado que cuando se
ingieren las hojas frescas causa foto dermatitis en animales domésticos; también puede causar la muerte. El
extracto acuoso de las hojas frescas se aplica en el ojo para heridas en el mismo (10).
Indonesia: La decocción de la raíz fresca se toma oralmente para tratar gonorrea y leucorrea. Las hojas
frescas machacadas se aplican en la piel para tratar forúnculos. Las hojas se toman oralmente para tratar
espasmo intestinal y como emético. La infusión se toma oralmente para tratar reumatismo y como
diaforético. La tintura de la corteza fresca se toma oralmente como tónico. Se da el extracto acuoso de
flores frescas a niños para tratar la tos. Las hojas machacadas son aplicadas en heridas. El extracto acuoso
caliente de las hojas es tomado oralmente como diaforético, carminativo y antiséptico (10).
Kenia. El tallo seco se utiliza como cepillo de dientes. México. Las hojas secas hervidas con cebada se da
oralmente a mujeres que están en labor de parto. La decocción se toma oralmente para aliviar la indigestión,
para tratar reumatismo, como tónico estomacal y para tratar picaduras de serpientes (el cataplasma de las
hojas machacadas se aplica en la herida). Toda la planta se frota con agua fría para tratar escalofríos. El
extracto acuoso de la raíz fresca se toma oralmente para la disentería, dolor gastrointestinal, dolor de
dientes, hemorragia uterina y exceso de descarga menstrual (1,3,4).
V. DROGA VEGETAL
1. Denominación: Hojas, raíz y fruto seco de L. camara.
2. Definición: Hojas, raíz y fruto seco.
3. Obtención: Recolectada en sus lugares de crecimiento silvestre. Las hojas se colectan en plena
floración y se secan a la sombra. Las hojas maduras verdes y frescas, libres de insectos, hongos u otros
materiales contaminantes, se lavan con agua y se secan a la sombra. (6).
4. Descripción macroscópica: No hay información disponible.
5. Descripción microscópica: No hay información disponible.
6. Composición química: Se encontró que las raíces contienen acido oleanólico, acetato de ácido
oleanólico, acido oleanonico, lantadeno A, ácido camarico, β-sitosterol y glucósido, acido pomonico, y
varios complejos de triterpenoides. Las hojas aromáticas contienen relativamente altas concentraciones de
aceite esencial y son ocasionalmente usados en la preparación de ―agarbattis‖ para generar humo
perfumado cuando queman durante oraciones religiosas en la sociedad de la India. (11).
Las hojas contienen de 0.2-0.7% de lantadeno A y 0.2% de lantadeno B, icterogenina, 0.2-0.5% de aceite
esencial con cítricos y otros cesquiterpenos, más del 80% de cariofileno, y de 10-12% de felandreno,
dipenteno, termineol, geraniol, linalol, cineol, eugenol, furfural y filandreno; taninos, resinas, azúcares
reducidos y 1.7% de lantadene, ácido lantonol, y ácido lantánico, 3-metil-oxoursolato. Las flores contienen
antocianina, caroteno, 0.07% de aceite esencial, resina de la corteza del tallo, taninos de la corteza de la
raíz. Las semillas secas contienen 35.1% de proteínas y 48% de grasa (8,12).
Contiene un principio tóxico triterpenoide policíclico llamado lantadeno A. se han reportado la presencia de
los siguientes compuestos: a-amirina tantamorona, lantadeno B, C y D, ácidos lantanílico, lantanólico, y
lantoico, ácido oleanólico, triacontan-I-ol, verbascósido, ácidos betulinicos, y butulónico, lantabetúlico, B-
sitosterol, ácido ursólico, furanonaftoquinonas y el aceite esencial tiene múltiples terpenos (4,6).
7. Monografía de control de calidad
7.1 Identificación
7.1.1 Descripción macroscópica: No hay información disponible.
7.1.2 Descripción microscópica: No hay información disponible.
7.1.3 Características organolépticas: No hay información disponible.
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7.2 Ensayos
7.2.1 Características fisicoquímicas:
No debe contener más del 10% de materia extraña y órganos deteriorados.
No debe presentar: Partes de otras plantas, insectos o larvas, partículas de tierra, arena y otras materias.
Humedad: Por método gravimétrico no debe contener más del 10%
Cenizas totales: Por incineración en mufla a 700-750ºC, no debe pasar el 9% (13).
7.2.2 Análisis microbiológico: El producto en cualquiera de sus presentaciones no contendrá micro-
organismos patógenos o sus toxinas. Coliformes totales <104 NMP, coliformes fecales <10
3 NMP, E. coli
<102 NMP, y recuento de mohos y levadura <10
4 UFC/mL (13).
7.2.3 Contaminante: No deberá contener contaminantes químicos o biológicos en cantidades que
sobrepasen los límites máximos aceptados por la unidad sanitaria.
8. Ficha técnica de seguridad y eficacia
8.1 Toxicología: Algunos taxones son tóxicos para ruminants y se han reportado envenenamientos en
Australia, India, Nueva Zelanda, Sudáfrica y las Américas. Todos los taxos tóxicos contienen lantadeno A y
B y ambos (80 y 200 mg/kg, respectivamente) han sido mostrados por ser tóxicos para las ovejas. El 3β-
hidroxi análogo del lantadeno A también es tóxico (40 mg/kg) pero, normalmente, no se produce en
cantidad suficiente para contribuir de manera significativa a la toxicidad. La cantidad estimada que esta
presente en una dosis toxica de una hoja es de 3 mg/kg. (5).
Envenenamientos humanos incluyendo una muerte en Tampa, Florida, son atribuidos a la ingestión de
frutas verdes. Los síntomas pueden aparecer en 2.5-5 horas; vómito, letargo, pupilas dilatadas, después
debilidad y cansancio, disminución de la respiración, diarrea ocasional, interrupción de la circulación,
colapso de la circulación y muerte. Las últimas etapas se sugiere que es por envenenamiento de atropina (8).
Es tóxica cuando ingerida por animales pastando. Contiene lantadeno A triterpénico, el cual se degrada en
el hígado; produce filoeritrina que va al torrente sanguíneo y produce fotosensibilización e ictericia, con-
gestión renal y muerte. Las moras verdes en cantidad han envenenado niños en Florida, los efectos incluyen
vómitos, diarrea, letargo, cianosis, cansancio, pupilas dilatadas, ataxia y coma. El aceite esencial es similar,
contiene α-felandreno, dipenteno, α-terpeneol, geraniol, linalol, cineol, eugenol, citral y furfural. La planta
contiene los triterpenos α-amirina, β-citosterol, lantadeno B y ácido triterpenoide (1,6,12).
Su ingestión provoca envenenamiento caracterizado por ictericia, extrema sensibilidad a la luz, debilidad,
anorexia, deshidratación y constipado. La necropsia de los animales intoxicados muestra daños en el
hígado, con acumulación de bilis, alargamiento de la vesícula biliar y daño en el riñón, además de
inflamación del tracto gastrointestinal. Las dosis tóxicas de las hojas varían en un rango de 2-6g/kg por vía
oral en los animales tratados y que incluyen ratas y cuyos, conejos, ovejas, vacas y búfalos. Se reporta que
el extracto etanólico al ser administrado por vía intragástrica en ratas a una dosis de 2.0mg/kg produjo
fotodermatitis la cual se desarrolló a los tres minutos de ser expuesto el animal a la luz del sol (14,15).
8.2 Datos farmacológicos
Triterpenos pentacíclicos: El acetato de ursulato se encontró que es activo (30μg/disco) contra S. aureus y S.
typhi, con un promedio de índice microbiano de 0.95 y 0.55. Por comparación, cloranfenicol para S. aureus,
y tetraciclina para S. typhi tuvieron un índice de 1.6 y 0.8 a la misma concentración. Compuestos aislados
de una muestra de Filipinas, mostró actividad antimutagénica en ratones. Lantadenos y otros compuestos
inhibieron al virus de Epstein-Barr activando células Raji, inducido por acetato de 12-O-tetradecanoil-
forbol-13 (TPA). Los lantadenos A y B mostraron efectos inhibitorios sobre dos escenarios de la carcino-
génesis en papilomas de la piel de ratón. Existe interés en la acción antiinflamatoria de algunos triterpenos.
Por ejemplo, el acido oleanólico y el ácido ursólico, tienen actividad significativa (CI50 2-4, 6μM) como
inhibidores de la elastasa leucocitaria humana. El ácido ursólico mostró efecto inhibitorio contra la
isoenzima ciclooxigenasa (Cox-2) con CI50 de 130μM y el ácido oleanolico una CI50 de 295μM (5).
Triterpenos tetraciclicos: Envenenamientos experimentales por administración de una fracción cruda de
lantadene proveniente de las hojas, es notado por el acompañamiento de cambios hematológicos en ovejas
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que indican un incremento en el tiempo de coagulación y tiempo de protrombina, y un decrecimiento en la
velocidad de sedimentación de globular, proteína total en plasma y fibrinógeno. La actividad inhibitoria de
la trombina fue encontrado por ser asociado con el eufano lactona triterpenos que inhiben la cascada de la
coagulación con la acilación del sitio activo de la Ser 195 de la trombina (5).
Glucósidos iridoides: Esta clase de compuestos están bien representados en las plantas usadas en la
medicina tradicional para la preparación de tónicos amargos, sedantes, medicinas para tos, remedios para
heridas e hipotensivos. Compuestos individuales son conocidos por exhibir varias actividades farma-
cológicas inclu-yendo cardiovasculares, antihepatotóxicos, coléricos, hipoglicémicos, antiinflamatorios,
antiespasmódicos, antitumorales y con actividad antiviral. (5).
Furano-naftoquinonas: Un gran número de furano-naftoquinonas han sido mostrados como poseedores de
actividad antimicrobiana contra bacterias Gram positivo y hongos, efectos inhibitorios sobre el virus de
encefalitis Japonesa y una pronunciada actividad contra el parásito Trypanosoma. Se ha reportado actividad
antimalárica (IC50: 10.0μg/mL) (5).
El extracto etanólico obtenido de las ramas de esta planta presentó un efecto antibiótico contra S. aureus, B.
subtilis y S. faecalis; en cuanto E. coli y C. albicans hubo ausencia de actividad. Se ha detectado además
actividad antibiótica de las hojas, aceite esencial y extracto crudo sobre P. aeruginosa, S. lutea, S. typhi y
los hongos A. niger y A. fumigatus, por lo que se considera un antimicrobiano de amplio espectro (6,17). El
aceite esencial inhibe notablemente el crecimiento de B. subtilis, P. aeruginosa, S. aureus, A. niger, F.
solani y C. albicans aparentemente fueron más sensibles. (7).
No se indujo muerte ni otro signo de toxicidad fue aparente en ratas hembras, que fueron tratadas con
extracto hidroalcoholico de hojas en tres dosis (1, 3 y 5g/kg) antes y durante el embarazo y en el periodo de
lactancia. Entre los grupos tratados no se encontraron diferencias estadísticamente significativas con el
control. La exposición prenatal a el extracto hidroalcohólico produjo anormalidades en el esqueleto fetal de
ratas. La frecuencia de malformación se incremento a 3g/kg. La duración del embarazo no fue afectada por
la exposición al extracto hidroalcohólico a ningún nivel de dosis. Ningún efecto adverso en el parto, durante
el período de lactancia, y desde el primer día postnatal hasta el día 21. El tiempo peri y post natal no causó
ningún signo de retraso en el desarrollo de las características como: el doblez de la oreja, desarrollo del
pelo, abrir los ojos, separación del prepucio y dilatación de la vagina (16).
El lantanino deprime la circulación y disminuye la temperatura (8,12). El verbascosido es un inhibidor de la
proteína quinasa C (PKC) en el cerebro de ratón. La inhibición media máxima de la quinasa ocurre a 25μM.
El verbascosido, también llamado acteosido, ha sido aislado de varias plantas. Tiene efectos anti-
microbianos, inmunosupresivos, y actividad antitumoral (17).
Tiene actividades como feromonas. La corteza presenta actividad relajante de músculos lisos; demuestra
hepatotoxicidad y un aumento en los niveles de TGO. La hoja ha demostrado actividad supresiva litogénica
de bilis, una actividad inmunosupresora e inhibición de formación de peróxidos lipídicos. Esta planta puede
causar fotosensibilización (4).
Es una planta tóxica al ganado y ovejas. Es un fotosensibilizador hepatogénico h produce gastroenteritis
severa. Una dosis de ¾ a 1 libra de hojas secas es suficiente para producir envenenamiento crónico en un
bovino de 400 lbs. La muerte puede ocurrir en 3 o 4 días. Los frutos pueden ser tóxicos a los niños. El
verbascósido es un inhibidor de la proteína cinasa C (4).
El extracto etanólico de las hojas frescas y raíz, administrado por vía IP en ratones en dosis variables,
produjo una actividad depresora del sistema nervioso central y anticonvulsiva. Los extractos etanólico y
acuoso obtenidos de hoja produjeron una actividad estimulante de la musculatura lisa de íleon de cuyo a
una concentración de 0.1mg/mL (6). En un estudio in vivo se demostró que el extracto etanólico aumenta la
cicatrizacion y epitelializacion de heridas (19)
Extractos de las hojas fueron estudiados por sus componentes fitoquímicos y los efectos antitermita,
enfrentándolo a Microcerotermes beesoni, donde se demostró que el extracto al 5% de cloroformo resultó
ser significativamente eficaz contra las termitas (20).
La infusión de las hojas de esta planta a una dosis de 1500 mg/kg por vía oral al día durante 14 días produjo
actividad hipoglucemiante significativa en las ratas (21).
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VI. REFERENCIAS
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2. Standley PC, Steyemark, JA. Flora of Guatemala. Fieldiana: Botany, 1970, 24(9):202-204.
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4. Gupta M. 170 Plantas medicinales Iberoamericanas. Primera Edición. CYTED-SECAB. Colombia. 1995.
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9. Aguilar A et al. Herbario medicinal del Instituto mexicano del Seguro Social, Primera Edición. México. Redacta,
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10. Ross I 1999. Medicinal Plants of the World: Chemical Constituents, Traditional and Modern Medicinal Uses.
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11. Misra L, Laatsch H. Triterpenoids, essential oil and photo-oxidative 28-13 lactonization of oleanoic acid from
Lantana camara. Phytochemistry, 2000, 54: 969-974.
12. Orellana S. Indian Medicine in Highboal Guatemala. Universidad of New Mexico. 1997.
13. Departamento de Control de Calidad; Laboratorio de Productos Fitoterapéuticos Farmaya, S.A. Certificados de
Control de Calidad de Materia Prima Vegetal. Guatemala. 2007
14. Mukherjee P et al. Leads from Indian medicinal plants with hypoglucemic potentials. Journal of
Ethnopharmacology, 2006, 1-28.
15. Akhter MH, Mathur M, Bhide NK. Skin and liver toxicity in experimental L. camara poisoning in albino rats.
Indian Journal of Physiology and Pharmacology, 1990, 1:16-6.
16. Mello F et al. Effects of Lantana cámara (Verbenaceae) on general reproductive performance and teratology in
rats. Toxicon, 2005, 45:459-466.
17. Herbert J, Maffrand J. Verbascoside isolated from Lantana camara, an inhibitor of protein kinasa C. Journal of
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18. Kumar V et al. Search for antibacterial and antifungical agents from selected Indian medicinal plants. Journal of
Ethnopharmacology, 2006, 182-188.
19. Nayak B et al. Evaluation of wound healing activity of Lantana camara L. A preclinical study. Phytotherapy
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20. Verma R, Verma S. Phytochemical and termiticidal study of Lantana camara var aculeate leaves. Fitoterapia,
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21. Mukherjee P et al. Leads from Indian medicinal plants with hypoglucemic potentials. Journal of
Ethnopharmacology, 2006, 1-28.
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Anexo 4. Lippia graveolens HBK (Verbenaceae)
I. DENOMINACIÓN, SINÓNIMOS Y EQUIVALENCIAS
1. Denominación: Hojas secas de Lippia graveolens HBK (1-4).
2. Sinónimos: Lantana origanoides Mart. & Gal., L. berlandieri
Schauer in DC, Goniostachyum graveolens (Kunth) Small,
Lippia berlandieri Schauer (5).
3. Nombres vernáculos: Orégano, mejorana, orégano de monte
(Guatemala). oreganito, orégano finito (Honduras) (1,2,6).
4. Partes usadas: Hojas secas (1-4,7-9).
II. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Arbusto delgado de hasta 2m de alto, ramas corto-pilosas. Hojas en pecíolos usualmente 5-10mm de largo,
oblongas a elípticas u ovadas a ovado-oblongas, 2-4cm de largo, usualmente obtusas o redondeadas en el
ápice, algunas veces agudas, redondeadas o subcordadas en la base, densamente pilosulosas en el haz, suave
al tacto, glandular y densamente tomentosas o pilosulosas abajo, márgenes finamente crenados. Pedúnculos
2-6 en las áxilas de las hojas, 4-12mm de largo. Flores, en espigas, subglobosas a oblongas, 4-12mm de
largo. Brácteas cuatro hileras, ovadas a lanceoladas, agudas, glandulares y densamente pilosulosas. Cáliz 1-
2mm de largo, glándular y viloso. Corola blanca, el tubo estrigiloso, 3-6mm de largo (10).
III. DATOS AGROTECNOLÓGICOS
1. Distribución y hábitat: Se encuentra en bosques secos y montes espinosos, pendientes rocosas o
matorrales húmedos en llanuras. La altitud va desde el nivel del mar hasta los 350msnm.
La distribución geográfica comprende Estados Unidos (Texas), México, Guatemala (Petén, Zacapa,
Chiquimula), Belice, Honduras, Nicaragua y Costa Rica (5,11).
2. Cultivo: Se propaga por semilla o estacas de madera suave. Existen algunas investigaciones para su
manejo y siembra comercial para garantizar su aprovisionamiento sostenido (4,12).
IV. USOS ETNOMÉDICOS O TRADICIONALES
1. Usos medicinales: Se le atribuye propiedad antioxidante, antiséptica, aromática, calmante,
carminativa, cicatrizante, desinflamante, diaforética, digestiva, diurética, emenagogo, espasmolítico,
estomáquica, expectorante, pectoral, sudorífica y tónica (1).
Hoja: La infusión de las hojas se usa para tratar anemia, diversas afecciones gastrointestinales y
respiratorias (asma, bronquitis, influenza, laringitis, resfrío, tos, tuberculosis), ictericia, amenorrea y
reumatismo. Un jarabe de las hojas se usa para tratar diabetes, disentería y resfrío. Tópicamente la infusión
se usa para cicatrizar heridas, lagas e inflamaciones; en baños se usa para fortalecer niños debilitados,
combatir la gripe y aliviar el prurito y la sarna; en cataplasma para madurar abscesos, calmar neuralgias y
aliviar induraciones; en fricciones y baños como calmante (1).
Planta entera: En México, la planta entera en forma de decocción se usa como emenagogo y expectorante,
mientras que la decocción de hojas sirve para inducir la menstruación, como antitusivo y condimento. En El
Salvador se usa para inflamaciones, contra el dolor de estómago. La esencia de la hoja se utiliza para
masajes musculares y para dolor de muelas (13).
2. Uso en combinación con otros ingredientes: Como antiséptico se utiliza la hoja de orégano junto
con eucalipto, nance, tomillo y zarzaparrilla. Como digestiva se utiliza junto con anís, hierbabuena,
manzanilla y pericón. Como emenagogo se usa en combinación con borraja, manzanilla, milenrama y ruda.
Como expectorante se usa con hierbabuena, eucalipto, marrubio y sauco (9).
3. Otros usos: Por su sabor, aroma y valor nutritivo las hojas secas se usan para sazonar carne, pescado,
embutidos, ensaladas, guacamol, pozol, salsas y licores; además se usa como planta de jardín aromática,
cosmética y para preparar arreglos florales (9).
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4. Usos etnoveterinarios: Las hojas, tallos y semillas se utilizan como forraje en la dieta del ganado
vacuno para aumentar la producción de leche. También puede usarse en cabras, ovejas, cerdos, mulas y
caballos (5).
V. DROGA VEGETAL
1. Denominación: Hojas secas de L. graveolens
2. Definición: Hojas secas en pecíolos, oblongas a elípticas u ovadas a ovado-oblongas, obtusas o
redondeadas en el ápice, algunas agudas, redondeadas o subcordadas en la base, densamente pilosulosas en
el haz, suave al tacto, glandular y densamente tomentosas o pilosulosas abajo, márgenes finamente
crenados.
3. Obtención: Recolectada en sus lugares de crecimiento silvestre. Las hojas se colectan en plena
floración y se secan a la sombra. Las hojas maduras verdes y frescas, libres de insectos, hongos u otros
materiales contaminantes, se lavan con agua y se secan a la sombra (3,17).
4. Descripción macroscópica: Hojas pequeñas, fragantes, oblongas u ovado-oblongas a elípticas de 1-
6.5cm de longitud y 0.5-3.5cm de ancho, generalmente obtusas o redondeadas en el ápice, redondeadas o
subcordadas en la base, a veces agudas y entonces ligeramente prolongadas en el pecíolo, regularmente
crenadas desde la base al ápice con dientes apretados; con indumento piloso variable, desde pubérulas hasta
canescentes (10).
5. Descripción microscópica de la droga: En el semidiafanizado, hecho en las hojas, se pueden
observar las siguientes características: epidermis adaxial constituida por células pavimentosas de borde más
o menos liso y epidermis inferior de las células pavimentosas de borde ligeramente sinuoso. Estomas de
tipo atómico, presentes en la epidermis inferior. En sección transversal epidermis provista de cutícula
delgada (13).
Tricomas distribuidos en forma homogénea en ambas epidermis. La relación entre los pelos glandulares con
cabeza esférica y los pelos glandulares bicéfalos es 8:1. Mesófilo constituido por dos capas de células de
clorénquima en empalizada en relación con la epidermis superior y por 3-4 capas de células más o menos
isodiamétricas de clorénquima esponjoso en relación a la epidermis inferior. Aparece una colénquima de
tipo angular en relación con la epidermis inferior. Nervio central constituido por un solo haz de tipo
colateral. El floema está rodeado de una capa de fibras celulósicas (13).
Pelos tectores: Unicelulares cristolíticos, largos, de 175-315μ de longitud, rodeados por una roseta de
células poligonales; unicelulares simples, largos, de 195-210μ.
Pelos glandulares: Con cabeza esférica y pie unicelular de 25-45μ de longitud; con cabeza bicelular y pie
unicelular de 20-30μ de longitud; y, de cabeza unicelular y pie bicelular 30-40μ.
En disociado débil se observan fibras de 180-220µm de longitud y fragmentos de tráqueas espiraladas.
6. Composición química: Las hojas, corteza y raíz contienen glicósidos saponínicos, taninos, triterpenos
y aceite esencial, entre los que se pueden mencionar: a) los monoterpenos borneol, camfeno, camacrol,
cimeno, p-cimeno, mirceno, α- y β-pineno, terpinenol, α-terpineno, α-terpineol, α-tuyeno y timol; b) los
sesquiterpenos β-cariofileno y humuleno y c) el componente fenílico eugenol. En las ramas y en la raíz se
han identificado los flavonoides naringenina y pinocembrina; y el compuesto heterocíclico de oxígeno,
papachenole (7,14).
La planta contiene ácidos fenólicos, caféico, clorogénico, rosmarínico; flavonoides: derivados del apigenol,
luteolol, y diosmetol; ácido ursólico; sustancias tánicas y elementos minerales. El aceite esencial es de
composición variable según las especies y según la zona donde se cultive. Está constituido
fundamentalmente por carvacrol y timol, fenoles que pueden alcanzar hasta el 90% del total; contiene
también pinemo, sesquiterpernos, cimeno (15).
7. Monografía de control de calidad
7.1 Identificación
7.1.1 Descripción macroscópica: Hojas pequeñas, fragantes, oblongas u ovado-oblongas a elípticas (13).
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7.1.2 Descripción microscópica: En el semidiafanizado de las hojas, se pueden observar epidermis adaxial
y epidermis inferior de las células pavimentosas. Estomas de tipo atómico, en la epidermis inferior.
Tricomas en ambas epidermis. El floema está rodeado de una capa de fibras celulósicas (13).
7.1.3 Características organolépticas: No hay información disponible.
7.2 Ensayos
7.2.1 Características fisicoquímicas:
No debe contener más del 10% de materia extraña y órganos deteriorados.
No debe presentar: Partes de otras plantas, insectos o larvas, partículas de tierra, arena y otras materias.
Humedad: Por método gravimétrico no debe contener más del 10%
Cenizas totales: Por incineración en mufla a 700-750ºC, no debe pasar el 9% (16).
7.2.2 Análisis microbiológico: El producto en cualquiera de sus presentaciones no contendrá micro-
organismos patógenos o sus toxinas. Coliformes totales <104 NMP, coliformes fecales <10
3 NMP, E. coli
<102 NMP, y recuento de mohos y levadura <10
4 UFC/mL (16).
7.2.3 Contaminante: No deberá contener contaminantes químicos o biológicos en cantidades que
sobrepasen los límites máximos aceptados por la unidad sanitaria.
8. Ficha técnica de seguridad y eficacia:
8.1 Toxicología: Los extractos acuosos y etanólicos de hojas (500ppm) presentan cierta toxicidad dosis-
dependiente contra peces del género Mollinesia. El lapachenol tiene actividad carcinogénica y podría
explicar cierta actividad antifertilidad atribuida (13).
8.2 Indicaciones terapéuticas: No es oficinal en ningún país, únicamente se encuentra en la farmacopea
mexicana. Se comercializa como droga vegetal, condimento y en como producto fitoterapéutico. Por su uso
tradicional y acción antiséptica, colerético, espasmolítico, digestiva, expectorante y sedante está indicado su
uso por vía oral en el tratamiento de inapetencia, digestión lenta, meteorismo, tos irritativa, disquinesia
hepatobiliar, dismenorrea, bronquitis, faringitis y sinusitis (13).
8.3 Contraindicaciones: No prescribir el aceite esencial durante el embarazo, ni en pacientes con
gastritis, colitis y úlcera péptica. Su administración durante el embarazo puede producir aborto (13).
8.4 Reacciones adversas: En altas dosis el aceite esencial puede tener efecto estupefaciente (13).
8.5 Dosis: Administrar 2-3 veces al día después de las comidas durante 4-5 semanas a dosis de: 2-4g /
taza en infusión; 4-6 gotas en esencia y 1-3mL de tintura 1:5 en etanol al 35%. Aplicar tópicamente en
baños o lavados de la decocción al 10%, tintura diluida 1:10 ó gel al 10% (13).
9. Datos farmacológicos: En estudios in vitro, la tintura y la infusión de la hoja (2mg/mL) demostraron
actividad contra el crecimiento de E. coli, E. aerogenes, P. aeruginosa, S. aureus, S. typhi, S. flexneri, S.
pneuomoniae y S. pyogenes. Los extractos diclorometánico y etanólico tienen actividad contra C. albicans,
A. flavus, E. floccosum, M. gypseum y T. rubrum. La decocción (30mg/mL) fue activa contra G. intestinalis,
la tintura de la hoja seca al 10% (1mg/mL), mostró actividad contra P. falciparum y L. mexicana pero no
contra L. brasilensis (17).
El extracto etanólico presentó actividad contra F. pedrosoi en fase miceliar (CIM: 1mg/mL), y contra S.
schenckii en fase miceliar y levaduriforme (1mg/mL y 0.25mg/mL respectivamente) (2).
Los extractos etanólicos no presentaron actividad a una concentración de 0.1mg/mL contra bacterias y
levaduras, no mostraron citotoxicidad contra A. salina a 0.5mg/mL, y tampoco fueron activos contra larvas
de A. aegypti y A. albimanus. El aceite esencial a concentración de 1 μL presentó actividad contra B.
subtilis, E. coli, M. smegmatis, S. typhi, C. albicans, C. neoformans; citotoxicidad contra A. salina (DL50:
0.076mg/mL), y, actividad insecticida contra larvas de A. aegypti (CL100: 0.124mg/mL) en el primer y
segundo estadío, y hasta el tercer estadío contra A. albimanus (18).
El extracto etanólico de la hoja no mostró ningún tipo de actividad frente a la vía clásica y alterna del
complemento (14).
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Por medio de técnicas cromatogràficas y espectrofotométricas se logró identificar y cuantificar al menos 20
flavonoides de esta planta, lo que la califica como beneficiosa en la dieta de los norteamericanos (19).
VI. REFERENCIAS
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13. Cáceres A. Vademécum Nacional de Plantas Medicinales. Editorial Universitaria. Guatemala. 2006.
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15. Bonilla G. Evaluación de la Reproducción Sexual y Asexual de Orégano Lippia graveolens HBK. Tesis de
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17. Germosén L. Farmacopea Vegetal Caribeña. Segunda Edición. Editorial Universitaria, UNAN- León. León,
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Anexo 5. Petiveria alliacea L. (Phytolaccaceae)
I. DENOMINACIÓN, SINÓNIMOS Y EQUIVALENCIAS
1. Denominación: Hojas y raíces secas de Petiveria alliacea L.
2. Sinónimos: Petiveria alliacea var. grandifolia (L.) Moq., P.
alliacea var. octandra (L.) Moq., P. foetida Salisb., P. tetandra L., P.
hexandra S. et Moq., P. ochroleuca Moq., P. octandra L., P.
paraguayensis D. Parodi, P. correutina Rojas (1,2).
3. Nombres vernáculos: Apacina, hierba de zorrillo, hierba de toro,
zorrillo, apazote de zorro, espacina, ipacina, apacín, epacín, hierba de
zorro, payché, mazote, hierba de las gallinitas, petiveria, anamú,
barbasco, cenizo, chimú, da-hua-ta, hierba hedionda, jazmillo,
lancetilla, mapurito, mopurito, mucura, raíz de pipí, namú, anamo,
urgat, micura, chanviro, mapurite, pipi o ruderal, ajillo, guiné, erva tipi,
tipi, erva pipí, mikura, pisajachu, sunikila, garlic sented petiveria,
verbeine puante, amurru, aposín, ave, calauchin, chinea hen weed,
congo root, douvant-douvant, emeruaiuma, fits bush, fitsy bush, garlic
guinea henweed, guine, guinea hen, guinea henweed garlic, guinee,
gully root, henweed, garlic guinea, herba pipi, kiski sakbatkira, kispar,
kojo root, kuan, kudjuruk, koujourouk, ave, lemtewei, lemuru, mapurit,
mocosa, mucura-caa, mucuracaa, ocano, pasim, puante verveine, root
gully, root kojo, sacha ajo, sep’toq, sep(e)’toq, surua, verbena hedionda,
verveine puante (1-5).
4. Partes usadas: Hoja, raíz y semilla (1-3,6,7).
II. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Planta usualmente rígida, erecta y cerca de 1m de alto o más pequeña, frecuentemente leñosa abajo, las
ramas jovenes puberulentas o glabradas. Pecíolos 1.5cm de largo o menos. Hojas oblongas a elípticas u
obovadas, 5-15cm de largo y 2-6cm de ancho, acuminadas, redondeadas en el ápice, estrechándose hacia la
base aguda o cuneada, verde lustrosas, delgadas, glabras o esparcidamente pubescentes. Racimos delgados,
10-35cm de largo, escasamente floreadas. Flores subsésiles o en pedicelos muy cortos. Sépalos blanco
verdoso, oblongo lineares, 3.5-4mm de largo. Frutos adpressos al raquis del racimo, estrechamente
cuneados, cerca de 8mm de largo (1).
III. DATOS AGROTECNOLÓGICOS
1. Distribución y hábitat: El hábitat son campos húmedos o secos, matorrales o aún en bosques;
frecuentemente cerca de viviendas, especialmente en cercos y terrenos de desecho (1).
Se encuentra desde el sur de los Estados Unidos (Florida y Texas) hasta Suramérica y en el Caribe (Puerto
Rico, Dominica, Guyana, etc.). Existen cultivos en Cuba (desde 1986 en San Antonio de los Baños), India,
Europa (desde el siglo XVIII) y más recientemente en Africa (1,2).
2. Propagación y manejo de cultivo: No hay información disponible
3. Plagas: No hay información disponible
4. Cosecha y secado: No hay información disponible
IV. USOS ETNOMÉDICOS O TRADICIONALES
1. Usos medicinales: en Guatemala: La planta entera se usa como un remedio para calambres en el
estómago, diarrea. Las hojas se utilizan para inducir la menstruación. Las hojas secas se utilizan para la
tiña, hongos en la piel, enfermedades de la piel e irritaciones, granos y pústulas, erupciones en la piel,
erisipelas, dermatitis e inflamaciones, abscesos y furúnculos (7-9).
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México: La planta entera se utiliza como un abortivo y emenagoga. La planta entera seca se utiliza para
calmar el dolor del parto y para acelerar partos tardíos. Las hojas secas se utilizan para acopiar y calentar
salpullidos; y también son utilizadas para forúnculos y pústulas (6,8,10,11).
Colombia: La decocción de las partes aéreas se administra a las mujeres antes del parto para aliviar los
dolores y facilitar el parto. La planta entera fresca se mastica para prevenir la pudrición de los dientes
(5,12).
Brasil: Las ramas secas se usan para el dolor de dientes. La planta entera se usa como un abortivo,
diaforética, diurética, antirreumática. La hoja seca se utiliza para combatir el reumatismo, condiciones
cancerosas y como insecticida. Las hojas frescas se utilizan como analgésico. La raíz se utiliza como
diurética, febrífuga, anihelmíntica, antiespasmódica, abortiva, antirreumática, contra enfermedades venéreas
y cefalea (9,13,14).
Caribe: La planta entera es usada como una ayuda para las mujeres en trabajo de parto. En las Guyanas la
planta entera se utiliza para inducir el aborto; las hojas se utilizan como diurético. La raíz se utiliza como
una emenagoga y como un abortivo. En las Indias Occidentales la planta entera se utiliza en el proceso de
parto, como diaforética, diurética, abortiva. La hoja y las ramas se utilizan como diurética, emenagoga y
abortivo. La raiz se usa para tratar la dismenorrea y como un abortivo (15-18).
Argentina: Se utiliza como emenagoga, antirreumática, febrífuga y diurética (19).
Sin información del país: La raíz y tallo se utilizan para la sinusitis. La raíz se utiliza para la gripe y cefalea.
La hoja se utiliza para la cefalea, enfermedades de la piel y dolor de muela. La hoja y raíz se utiliza para el
reumatismo (20).
2. Formas de preparación: Para el tratamiento de la sinusitis, la raíz y tallo se hacen polvo y se inhalan.
Para la gripe la raíz se machaca y se inhala. Para la cefalea la hoja se estruja e inhala, se machaca e inhala o
por decocción en asociación con el baño. Para las enfermedades de la piel, la utiliza la decocción de la hoja
para hacer un lavado. Para el dolor de muela, la maceración de la hoja se utiliza para hacer enjuagues
bucales. Para el dolor muscular, la decocción de la hoja se utiliza en el baño (20).
Hojas: En decocción de 15-20 hojas en un litro de agua, se usa para resfriados, como desinfectante,
afecciones gastrointestinales, alteraciones de las vías respiratorias (amigdalitis, asma, bronquitis, catarros,
tos ferina), calambres, inflamación de la vejiga y para el dolor de muelas se hacen buches tibios con el
mismo preparado. Para el tratamiento de tumores malignos, de 25-50 hojas frescas se licúan con un litro de
agua y esté preparado se divide en tres tomas durante el día y así se toma durante varios meses hasta la
desaparición de los síntomas; los estudios indican que esta preparación es especialmente efectiva para el
tratamiento de leucemias y de cáncer de estómago (4,20).
Raíces: Se mastican las raíces para aliviar el dolor de las muelas; la raíz machacada se aplica sobre la caries
dental, con lo cual destruye el nervio y quita el dolor. Tópicamente en compresas y cataplasmas para tratar
afecciones de la piel como granos, erupciones, psoriasis; masticada para el dolor de muela e ihalada para el
dolor de cabeza y la sinusitis (4,20).
Toda la planta: En decocción para facilitar y aliviar el dolor de parto (4,20).
Como abortiva; la decocción en forma de buches todos los días evita la caries dental, la caída de los dientes
y fortalece las encías, también para curar las llagas que producen las prótesis y cura en poco tiempo la
piorrea (20).
Parte aérea:
Sin especificar la parte de la planta: Tratamiento de cistitis, como anticoagulante y depurativo, en
dismenorrea, enfermedades venéreas y desórdenes uterinos; se cree es abortivo (20).
3. Uso en combinación con otros ingredientes: Para el reumatismo, la decocción de la hoja y raíz se
mezcla con sal o azúcar, por vía oral. Hervida en vino como cataplasma. Mezclada con limón, el apacín se
usa como remedio para las mordeduras de serpiente (20).
4. Otros usos: Las raíces machacadas se utilizan para repeler insectos, piojos de los niños y animales
domésticos. Además, se ha demostrado que tiene propiedades antipatógenos en plantas, ya que fue eficaz
para el combate del hongo C. cucumerinum y el nematodo larval M. incognita (4,20,21).
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V. DROGA VEGETAL
1. Denominación: Hojas y raíces de P. alliacea
2. Definición: Hojas y raíces secas.
3. Obtención: no hay información disponible
4. Descripción macroscópica: Las raíces son leñosas, fibrosas y amarillentas. Los tallos son ramosos,
delgados y también de color amarillento. Las hojas verde brillante cuando frescas, al secarse toman un color
verde seco, oscuro (22).
Toda la planta pero especialmente las raíces tienen un fuerte olor aliáceo desagradable y un sabor acre (22).
5. Descripción microscópica:
5.1 Anatomía de la raíz: La raíz secundaria presenta estructura anómala dado que se establecen cambia
supernumerarios. De ésta forma encontramos anillos de xilema alternando con anillos de floema. En el
corte transversal de una raíz madura encontramos desde afuera hacia adentro la siguiente disposición de los
tejidos: una peridermis de desarrollo limitado constituida por 8-10 capas de células de súber, le continúa un
parénquima cortical de 15-20 capas de células, luego se observan islotes de floema secundario inmersos en
tejido parenquimático alternando con anillos de xilema secundario donde se observan elementos de conduc-
ción en series radiales, radios parenquimáticos de 5 células de ancho y parénquima fuertemente lignificado.
La región medular de la raíz se halla ocupada por xilema. En todos los parénquimas se encuentran estiloides
y cristales tetraédricos de oxalato de calcio. Los elementos disociados de la raíz muestran fibras escleren-
quimáticas con puntuaciones semirebordeadas de 180-270μm de largo por 25μm de ancho, fibrotraqueidas,
escasas traqueadas, vasos reticulados con placa de perforación simple con apéndices que miden 190μm de
largo por 40μm de ancho y características células del parénquima disyunto y parénquima axial (22-24).
5.2 Anatomía del tallo:
5.2.1 Estructura primaria: El corte transversal por la zona media del primer o segundo entrenudo muestra
la siguiente organización interna: epidermis uniestratificada con estomas y pelos simples pluricelulares.
Colénquima laminar en 2 ó 3 capas de células, parénquima cortical clorofiliano de células grandes con
espacios intercelulares. Haces colaterales abiertos en un ciclo limitado por casquetes de fibras escleren-
quimáticas fuertemente engrosadas y lignificadas. El parénquima medular es amplio y no tabicado (22-24).
5.2.2 Estructura secundaria: Presenta una estructura típica normal. De afuera hacia adentro observamos,
un súber pluriestratificado constituido por varias capas de células aplanadas y de paredes engrosadas, el
felógeno es de origen subepidérmico, se continúa un colénquima laminar y parénquima cortical de 4-6
capas de células. Las fibras esclerenquimáticas perifloemáticas con puntuaciones simples están fuertemente
lignificadas y se disponen en forma de casquetes triangulares. El floema secundario presenta radios ensan-
chados. La zona cambial es amplia. El xilema secundario muestra anillos de crecimiento levemente deli-
mitados por parénquima inicial. La porosidad es difusa, los vasos se disponen en series radiales largas en
forma predominante, el parénquima axial xilemático es paratraqueal vasicéntrico. El parénquima medular es
desarrollado, no tabicado. En todos los parénquimas encontramos estiloides y cristales tetraédricos de
oxalato de calcio (22-24).
En el corte longitudinal tangencial se determina una estructura estratificada. Se observan radios uni, bi y
tetraseriados, con 6-12 células de alto (22-24).
En el material disociado del xilema se observan elementos vasculares con apéndices, con placa de
perforación simple y oblicua. Los vasos son reticulados y miden 190μm de largo por 40μm de ancho.
Encontramos algunas traqueadas, fibras libriformes que miden de 300-400μm de largo por 35μm de ancho y
parénquima axial disyunto (22-24).
5.3 Anatomía foliar
5.3.1 Epidermis e vista superficial: La epidermis adaxial presenta células poligonales de paredes finas y
onduladas. La epidermis abaxial está compuesta por células rectangulares, de paredes onduladas, los
estomas son de tipo paralítico y anisocítico. El número de estomas por mm2 es de 128 y la densidad
estomática es del 16% (22-24).
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5.4 Arquitectura foliar
La arquitectura foliar es de tipo cerrada, pinada, camptódroma y broquidódroma. La venación última
marginal es ojalada. Sin vénulas marginales. Red vascular reforzada por esclereidas (22-24).
5.4.1 Lámina: epidermis adaxial de células rectangulares aplanadas tangencialmente. A la altura del nervio
medio, las células epidérmicas son más grandes, papilosas con cutícula estriada. La epidermis abaxial
presenta iguales características que la adaxial, con estomas a nivel y a la altura del nervio medio
encontramos pelos simples pluricelulares. El mesófilo es de estructura dorsiventral con una sola capa de
parénquima en empalizada, el parénquima esponjoso es poco desarrollado y con amplios espacios
intercelulares. El nervio medio consta de una a tres haces vasculares colaterales abiertos dispuestos en arco,
las fibras esclerenquimáticas forman un casquete del lado del floema. Los nervios menores están rodeados
por una vaina parenquimática desarrollada. En el lumen de los elementos vasales encontramos cristales de
oxalato de calcio. A la altura del nervio medio y en posición subepidérmica se observa colénquima del tipo
laminar. 2
En el mesófilo y en el parénquima del floema encontramos, estiloides de distintos tamaños y
cristales cúbicos de oxalato de calcio (22-24).
5.4.2 Pecíolo: El corte transversal es de forma plano convexo. La epidermis es uniestratificada con pelos
simples pluricelulares, del lado de la cara adaxial. En todo el contorno del pecíolo y en posición sub-
epidérmica se encuentran de 4-5 capas de células colénquimáticas de tipo laminar. El parénquima está
constituido por grandes células con espacios intercelulares. El nervio medio consta de tres haces colaterales
abiertos dispuestos en arco, limitado por un casquete de fibras fuertemente lignificadas (22-24).
6. Composición química
6.1 Planta entera: Contiene cumarinas, alantoína, pinitol, alcohol lignocerílico, ácido lignocérico, ligno-
cerato de lignoceril, triterpenos como el acetato de isoarbinol, cinamato de isoarbinol, β-sitosterol y la α-
friedelinol (20,25).
6.2 Ramas: Se componen del alcaloide alantoína, trans-N-metil-4-methoxiprolina; compuestos sulfurados
como el benzil-2-hydroxi-5-etil trisulfuro; compuestos inorgánicos como el nitrato de potasio; lípidos como
el ácido lignocérico; esteroides como el β-sitosterol (20,26).
6.3 Hojas: Se componen del alcaloide alantoína; compuestos inorgánicos como el nitrato de potasio,
alcanos como el alcohol lignocerílico; lípidos como el lignocerato de lignoceril, ácido linoléico, ácido
nonadecanoico, ácido oleóico, ácido palmítico, ácido esteárico. También se reporta la presencia de
esteroides, terpenoides (isoarborinol, acetato de isoarborinol y cinamato de isoarborinol), saponinas,
polifenoles y taninos (20,26).
6.4 Raíz y tallos: Derivados sulfurados como el benzil-2-hydroxi-5-etil trisulfuro y tritiolaniacina:
derivados bencénicos como el dibenzil trisulfuro, benzaldehido y ácido benzóico. La raíz además contiene:
nitrato de potasio, cumarinas, tritiolaniacina, N-metil-4-methoxiprolina, alantoína, friedelino, ácido
benzoico, β-sitosterol, dipéptidos γ-glutamil como (RsRc)/(SsRc)-S-benzilcisteina sulfóxidos (petiverinas A
y B) y (RsRc)/(SsRc)-S-(2-hidroxietil)cisteina sulfóxidos (6-hydroxyethiins A y B). Además contiene
saponósidos, polifenoles, esteroides y terpenoides (20,26,27).
6.5 Inflorescencia: Compuesta del carbohidrato pinitol (26).
6.6 Semillas: Contiene isotiocianatos volátiles (conocidos también como aceite de mostaza).
7. Monografía de control de calidad:
7.1 Identificación
7.1.1 Descripción macroscópica:
7.1.2 Constantes fisicoquímicas: pH: 6.5-7.5, Ácidez: 1-2.5 meq/100mL, Materia seca: 2-2.5 g%, Sólidos
totales (%Brix): 11-15 % (28).
7.1.3 Pruebas fitoquímicas preliminares: La parte aérea del apacín da pruebas positivas para los siguientes
grupos de sustancias: Alcaloides, flavonoides, quinonas, taninos (28).
7.1.4 Descripción microscópica: La droga pulverizada es el polvo de la hoja muestra fragmentos de la
epidermis abaxial y pelos pluricelulares, uniseriados característicos de la especie. En el polvo del tallo se
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observan vasos reticulados con placa de perforación simple, radios parenquimáticos de diversos elementos
celulares, fibras xilemáticas, células de parénquima disyunto del xilema (típico de la especie), parénquima
esclerosado y traqueiadas. El polvo de la raíz presenta fibrotraqueidas con puntuaciones semirebordeadas,
parénquima del floema con estiloides de oxalato de calcio, vasos reticulados con placa de perforación
simple, estiloides de oxalato de calcio y traqueiadas (22-24).
7.1.5 Características organolépticas: olor característico aliáceo. Color pardo y sabor: Sui generis (28).
7.2 Ensayos
7.2.1 Características fisicoquímicas:
No debe contener más del 10% de materia extraña y órganos deteriorados.
No debe presentar: Partes de otras plantas, insectos o larvas, partículas de tierra, arena y otras materias.
Humedad: Por método gravimétrico no debe contener más del 10%
Cenizas totales: Por incineración en mufla a 700-750ºC, no debe pasar el 9% (29).
7.2.2 Análisis microbiológico: El producto en cualquiera de sus presentaciones no contendrá micro-
organismos patógenos o sus toxinas. Coliformes totales <104 NMP, coliformes fecales <10
3 NMP, E. coli
<102 NMP, y recuento de mohos y levadura <10
4 UFC/mL (29).
7.2.3 Contaminante: No deberá contener contaminantes químicos o biológicos en cantidades que
sobrepasen los límites máximos aceptados por la unidad sanitaria.
8. Ficha técnica de seguridad y eficacia
8.1 Toxicología: No se ha reportado efecto alguno en humanos, aunque hay informes sobre debilidad y
ataxia de los miembros posteriores en ovinos que la ingieren diariamente. Además se agrega que existiría
una relación entre el consumo excesivo de esta planta y la inhibición de la colinesterasa sanguínea,
considerándose la reacción toxicológica similar a la producida por los carbamatos (30).
Otros estudios no detectaron toxicidad ni citotoxicidad alta. Tampoco detectaron problemas de irritabilidad
local, ni lesiones de la mucosa gastrica y las pruebas de citotoxicidad con A. salina resultaron negativas.
Aunque, se ha mencionado la posibilidad mutagénica y carcinogénica de esta especie durante períodos muy
largos de consumo. Por lo anteriormente mencionado, no se recomienda su administración en mujeres en
gestación, en lactantes y en niños pequeños. No se conocen interacciones con otros medicamentos, pero por
su reconocida bioactividad, es preferible indicarla como terapia única, hasta una respuesta sintomática (20).
En razón de los efectos tóxicos conocidos a través de la literatura, es necesario que se utilice dentro de las
dosis recomendadas (31).
8.2 Contraindicaciones: El extracto acuoso de hojas y tallos ha demostrado poseer actividad estimulante
uterina débil en ratas. Otros trabajos mencionan el efecto antiimplante de extractos de raíz y hoja y la acción
cigotóxica del tallo. Por tal motivo, se desaconseja su empleo durante la gestación, sobre todo teniendo en
cuenta que en muchos países emplean esta planta como abortiva. También está contraindicado su uso en
personas con hipersensibilidad a los compuestos derivados del azufre. En humanos se sabe que por su uso
continuado del anamú se produce un aliento aliáceo (20).
8.3 Dosis: El polvo de raíz y tallo, respectivamente, se prepara a partir del material desecado, molido y
tamizado, una dosis de aplicación consiste e una aspiración ligera del polvo fino así obtenido (20).
La decocción de raíz para aplicación en forma de baño puede obtenerse con 100-200g de la droga vegetal,
en cantidad suficiente de agua. Para fines inhalatorios pueden emplearse 5-10g de hoja (20).
8.4 Posología: En forma de gotas, se administra 30 gotas tres veces al día. En forma de jarabe, se
administra una cucharada (10mL) tres veces al día (20).
8.5 Vencimiento y condiciones de almacenamiento: No se conocen estudios de estabilidad ni
farmacocinéticos (20).
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9. Datos farmacológicos:
9.1 Guatemala: La tintura de las hojas secas (30.0 μL/disco), preparado del extracto de 10g de planta en
100mL de etanol, no tuvo actividad antibacterial contra E. coli, P. aeruginosa y S. aureus. El extracto
acuoso (1.0mL) de las hojas secas tuvo actividad contra E. floccosum y fue inactivo contra M. canis, M.
gypseum, T. mentagrophytes var. algodonosa, T. mentagrophytes var. granulare y T. rubrum (27). El
extracto etanólico al 60% no tuvo actividad contra C. albicans, con las infusiones de las hojas frente a S.
pyogenes y S. pneumoniae (32). Tampoco el extracto seco elaborado con las hojas de apacín ha demostrado
actividad sobre cultivos de S. typhi (20).
9.2 México: El extracto hidroetanólico (1:1) de la raíz + ramas tuvieron actividad antibacterial,
antifúngica contra patógenos de plantas, antituberculósis (M. tuberculosis) y actividad antilevadura (C.
albicans) (33).
9.3 Brasil: El extracto etanólico (95%), acuoso y pulverizado de las hojas secas tuvo actividad anti-
proliferación en cultivo celular. El extracto hidroetanólico (1:1), en dosis de 1.0g/kg, de las hojas frescas
tuvo actividad analgésica en inyección intragástrica en ratas versus la prueba del retorcimiento; pero fue
inactiva cuando se aplicó la prueba de presión de la cola (34). El extracto hidroalcohólico administrado
oralmente a ratas mostró un efecto inhibitorio en edema de la pata inducida por carragenina y nistatina, y
redujo la formación de granulomas. Los valores de la DL50 (>1,270mg/kg) fue al menos 40 veces la ED50
(31.4mg/kg) en las ratas. A dosis diferentes el extracto mostró una toxicidad subaguda muy baja y no hubo
efecto ulcerogénico en la mucosa gástrica (35).
Un estudio determinó el efecto del extracto hidroalcohólico sobre el crecimiento y diferenciación de los
precursores hematopoyéticos de la médula ósea (UFC-C) en ratones susceptibles a la infección con L.
monocyogenes. El estudio consistió en tratar a estos animales con el extracto hidroalcohólico (EHA)
(1000mg/kg/día) durante 10 días antes de la infección con 1 x104 colonias/animal. Al final de esto, los
animales fueron infectados y los efectos sobre el UFC-C fueron estudiados 48-72 horas después de la
infección. Los resultados demostraron que después de la infección hubo una disminución aguda
significativa del número de UFC en 48 h (control 99.6±4.4; 48 h- 51.2±4.5; 72 h- 81.1±9). Los resultados
de los animales previamente tratados con EHA, mostraron un efecto mielosupresor de reversión (control
100.2±2.8; 48 h- 1429±10; 72 h- 103.8±8). Estos resultados evidencian que el tratamiento de los animales
con EHA revierte la supresión de la respuesta de granulocitos y macrófagos de la médula ósea después de la
infección.
El extracto crudo fue estudiado para evaluar su efecto neuroactivo (anticonvulsivo y
tranquilizante), para lo se administró oralmente o subcutáneamente en ratas y ratones, demostrando que
presenta efectos anticonvulsivos significativos (36).
9.4 Cuba: El extracto con acetona, etanólico (95%) y acuoso de las hojas y ramas secas (por separado), en
concentración 50%, tuvieron actividad antifúngica contra N. crassa, cultivada en placa de agar (37).
9.5 Jamaica: El extracto acuoso caliente de las hojas + ramas tuvieron un efecto uterino estimulante débil,
en dosis de 33.0mL/L, en el útero de ratas (38).
9.6 Otros: El extracto etanólico de la corteza de raíz, en dosis de 0.5mL/animal, tuvo actividad débil de la
estimulación fagocítica al inyectar IP a ratas macho. Pero la fracción insaponificable si tuvo actividad (39).
El extracto metanólico de las semillas causó contracción del útero de ratas. También, en tiras aisladas del
útero de ratas, el extracto causó un incremento en la frecuencia y fuerza de contracción en la respuesta
contráctil a la oxitocina. El efecto contráctil puede involucrar síntesis de la prostaglandina puesto que la
indometacina redujo la frecuencia y amplitud de las contracciones uterinas (40).
El extracto hidroalcohólico al 70% elaborado a partir de las partes aéreas, ha desarrollado actividad
antimalárica in vitro frente a cepas de P. falciparum en dosis de 100μg/mL (41).
La decocción de hojas a dosis de 100 μg/mL indujo la producción de interferón in vitro y estimuló la
actividad de las células asesinas de esplenocitos de ratón (42).
Las fracciones con derivados del tiofeno obtenidas a partir de un extracto metanólico de las hojas
presentaron actividad frente a Melodoygine sp. En Puerto Rico un extracto etanólico presentó una CI50>
65μg/mL frente a cultivos de P. falciparum y por tanto fue inactivo, pero en otro estudio el extracto
etanólico presentó actividad a 100mg/mL y una infusión de las hojas no inhibió a T. vaginalis. El extracto
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etanólico en éter de petróleo fue inactivo a una concentración de 50μg/mL frente a R. neglictus, sin
embargo, el aceite esencial de las hojas con éter de petróleo presentó actividad contra algunos insectos y
repelente frente a otros. El extracto acuoso de la parte aérea disminuye en un 60% los niveles de glucosa
sanguínea en ratones normales y un extracto hidroalcohólico administrado a ratones vía intragástrica a dosis
de 0.1 g/animal produjo disminución de los niveles de glucosa en sangre (35).
En forma aislada el bencil-2.hidroxietil-trisulfuro ha demostrado actividad contra B. subtilis (CIM: 3mg), S.
aureus (CIM: 6.3mg), E. coli (CIM: 50mg) y C. albicans (CIM: 3.1mg). Es importante señalar que el aceite
esencial de las hojas ha demostrado acción insecticida contra ejemplares adultos de algunas variedades de
mosquitos y actividad repelente contra la polilla de la ropa (33).
En un ensayo, el extracto hexánico de una muestra de tallos y hojas colectada en Jamaica produjo
inmunoestimulación en concentración de 0.5 mg/mL al incrementar el índice fagocitótico de granulocitos
humanos de 4.0-6.2, mientras que una fracción obtenida con ciclohexano-metanol produce un máximo valor
de 5.6; estos valores son similares a los producidos por el dipéptido inmunoestimulante N-metil-metionil-
fenilalanina a las mismas concentraciones. Uno de los compuestos inmunoestimulantes presentes en el
extracto es el dibenzil trisulfuro. Tanto el extracto como el dibenzil trisulfuro causaron un incremento en el
peso del timo y de las placas de Peyer de ratones, mientras que la masa esplénica no fue alterada
significativamente. Un extracto etanólico total y con mayor intensidad, la fracción insaponificable,
estimularon la actividad fagocítica del sistema retículo-endotelial de ratones inoculados con E. coli (33).
Los extractos etanólicos de raíz y hoja presentaron actividad inhibidora de la vía clásica y actividad
estimuladora de la vía alterna del complemento (43).
Se demostró que el extracto de raíz de esta planta a concentración de 32.4mg/kg inhibe la acumulación de
eosinofilos y células mononucleares en la cavidad pleural, en ratas que previamente habían sido inyectadas
intrapleuralmente con una solución estimuladora de leucocitos, por otro lado la acumulación neutrofilos fue
parcialmente inhibida solo que con una dosis mayor de extracto que fue de 43.9mg/kg (42).
Rossi y colaboradores encontraron que los extractos acuosos y etanólicos (95%) presentaron actividad
contra las líneas celulares CA-IMMA, CA-Mamario-MCF-7, Células DAUDI, Células MOLT-4 y LEUK-
K562; el polvo de la hoja fue inactivo frente a CA-Mamario-MCF-7 y activo frente a las otras 4 líneas
celulares (44).
Un extracto en etanol:agua (1:1) de las hojas de P. alliacea colectada em Brasil administrada a ratones vía
intragástrica a dosis de 1g/Kg presentó acción analgésica mediante la prueba de las contorsiones inducidas
por peróxido de benzoílo (Prueba de Writhing), pero fue inactivo por la prueba del latigazo de la cola de
ratón (34).
10. Farmacología clínica: En Brasil se determinó la actividad analgésica, del extracto de la planta entera
seca de apacín, en un estudio clínico con ensayos cruzados doble ciego (cross-over double blind trial). El
estudio se realizó en 22 pacientes con osteoartritis en caderas y rodillas, quienes ingirieron diariamente
200mL del extracto filtrado 15.0g/L. Hubo una reducción significativa en el dolor en el tratamiento
experimental y el placebo; y no hubo diferencia significativa entre estos dos regímenes. Cinco pacientes
reportaron leves efectos adversos (45).
Por otro lado el departamento de Química de la Universidad Federal de Santa María, Brasil analizó doce
plantas que se utilizan en el sur de Brasil para tratar heridas, donde se comprobó, que uno de los extractos
con más actividad fue el extracto etanólico de las hojas (31).
VI. REFERENCIAS
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Anexo 6. Phlebodium pseudoaureum (Cav.)
Lellinger (Polypodiaceae)
I. DENOMINACIÓN, SINÓNIMOS Y EQUIVALENCIAS
1. Denominación: Rizoma y fronda secos de Phlebodium
pseudoaureum (Cav.) Lellinger
2. Sinónimos: Chrysopteris grandis Fée, C. lanosa Fée, C.
microdictya Fée, C. trilobata Fée, Phlebodium aureum auct, en part (L.) J. Sm, Polypodium areolatum
Humb. & Bonpl. ex Willd., P. areolatum var. loreum J. Bommer, P. auratum Vell., P. aureum auct. en
part L., P. aureum var. areolatum (Humb. & Bonpl. ex Willd.) Baker, Goniophlebium areolatum (Humb. &
Bonpl. ex Willd.) C. Presl, P. aureum var. reductum Jenman, P. leucatomos Poir, P. pseudoaureum Cav., P.
pulvinatum Link (1,2).
3. Nombres vernáculos: Calaguala, Calahuala, Polipodio ( 2-7).
4. Partes usadas: Rizoma y fronda (3,4,8-11).
II. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Rizoma de 0.7-1.5cm de ancho, generalmente farinoso, escamas 5-8mm subenteras a moderadamente
denticuladas, la farina blanca, las escamas concoloras, generalmente anaranjadas, no clatradas; hojas
monomorfas, pinatisectas, a menudo glaucas en el envés, los márgenes engrosados y cartilaginosos, enteros
o casi enteros; nervaduras areoladas, las areolas con o sin nérvulos incluidos; soros redondeados, sin
parafisos, dispuestos en el ápice fusionado de 2 nérvulos incluidos, en 1-7 series entre la costa y el margen;
esporas hialinas; x = 37.4 especies (12).
III. DATOS AGROTECNOLÓGICOS
1. Distribución y hábitat: Nativa de Centro América. Crece silvestre en troncos de palmas, árboles de
encino y roca caliza desintegrada, en lugares de gran humedad a la sombra. Se encuentran desde Florida,
México, Centro América y el Caribe hasta Sur América en alturas de 1,000-2,600msnm. En Guatemala se
ha descrito en Alta Verapaz, Baja Verapaz, Chimaltenango, Escuintla, Guatemala, Huehuetenango, Jalapa,
Quetzaltenango, Suchitepéquez y Zacapa (1,2,6,7,13).
Hábito epífito distribuida en un rango de altura de 4–12m sobre el dosel de los árboles y estar acompañada
de otras especies vegetales. Las condiciones climáticas en las cuales se encuentra se caracterizan por un
clima templado, época lluviosa no bien definida, alta nubosidad que favorece la precipitación horizontal de
800-1,200msnm, estableciéndose las condiciones típicas de un bosque nuboso donde la precipitación
horizontal es más frecuente en época seca, esta condición se da en la posición noreste de las montañas. La
humedad relativa promedio requerida es al menos del 80%, esta condición ambiental es la que presenta
menor variación a lo largo del tiempo, esta característica de variación se relaciona con el hábito y las
condiciones de bosque nuboso. La presencia inicia de los 800 hasta los 1,125 msnm, la presencia y
abundancia aumenta considerablemente en relación a los otros estratos altitudinales (9,14).
2. Cultivo
2.1 Suelo: Como la calaguala es una planta epífita, por lo general se desarrolla sobre la materia orgánica
que se encuentra en los troncos viejos o entre las bases de las hojas de palmeras. Cuando crece en el suelo
lo hace sobre lugares con materia orgánica y suelos calizos (11).
2.2 Clima: Crece en sitios sombreados y húmedos de los bosques, en regiones subtropicales. Soporta hasta
un 60% de luz, necesita de mucha humedad con una precipitación de 1,000-3,000mm anuales (11).
2.3 Altitud: De 1,200-2,200msnm
2.4 Propagación: Se puede obtener mediante propagación sexual, la propagación por esporas en cultivo de
tejidos, se sabe que la iniciación y multiplicación requiere 20 semanas. Para la iniciación y multiplicación
se obtienen los soros maduros que contienen las esporas. La propagación asexual, los rizomas se colocan en
el sustrato dos meses antes que empiece la época lluviosa para que reciban la luz y temperatura que
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necesitan para brotar con las primeras lluvias, tal como sucede en condición silvestre. Los rizomas se
ubican en forma horizontal y se les cubre con una capa delgada de sustrato, de tal forma que algunas partes
queden expuestas a la luz para facilitar su brote (14).
2.5 Fertilización: Por provenir del bosque al someterse a cultivo su fertilización deber ser orgánica (15).
2.6 Plagas y enfermedades: no hay información disponible.
2.7 Cosecha y secado: El rizoma y las hojas se colectan, después de las últimas lluvias, en plena madurez
y se secan a la sombra o con aire caliente forzado a temperatura no mayor de 60ºC. Los rizomas secos se
guardan enteros y se muelen o quebrantan al momento de utilizarlos (14,15).
2.8 Rendimiento: no hay información disponible
IV. USOS ETNOMÉDICOS O TRADICIONALES
1. Usos medicinales: La infusión y decocción del rizoma se usa oralmente para tratar afecciones
digestivas, respiratorias y cardiacas, reumatismo, diabetes, gota, hipertensión, purificar la sangre, parásitos,
enfermedades venéreas, sífilis y afecciones renales. Tópicamente se usa la infusión en emplasto y cata-
plasma para el tratamiento de confusiones, reumatismo, úlceras, quebraduras, cáncer, tumores, psoriasis y
eczema. La decocción de las hojas se usa para detener las hemorragias. Se le atribuye la propiedad
analgésica, antihemorrágica, depurativa, diurética, desinflamante, emenagogo, espasmolítico, expectorante,
febrífuga, laxante, pectoral, purgante, sudorífica y tranquilizante (5,8).
En Ecuador usan las raíces y tallos de helecho macho como antirreumático, diaforético, sudorífico, purgante
antihelmíntico. La cocción profunda produce la expulsión de la tenia. Además se utiliza para tratar la
psoriasis y problemas respiratorios como expectorante. En Honduras el rizoma se utiliza para el mal de orín,
sangre, cáncer, afecciones del hígado, dolor de huesos, reumatismo y artritis, gastritis, problemas de la piel,
dolor de vientre, dolor de estómago, golpes, flujo y dolor de cintura. En Nicaragua las frondes se utilizan
para los trastornos mentales. En Argentina la población rural usa calaguala como emenagogo. En
Guatemala la decocción de calaguala se utiliza para tratar la inflamación renal y diurético. La infusión y
decocción se utiliza vía oral como tratamiento gastrointestinal (diarrea, dolor de estómago, estreñimiento y
gastritis) y desórdenes respiratorios (asma, catarro, tos ferina) problemas cardíacos (hipertensión), dolor de
huesos, reumatismo, diabetes, gota, enfermedades venéreas y problemas renales (piedras en el riñón e
hidropesía) inflamación, dolor y sangrado (3,5,10,13,15-18).
2. Formas de preparación: Para la preparación de la infusión de los rizomas de calahuala se
recomienda dejar 20g de la raíz en ½ litro de agua hirviendo, tomando en dosis de una taza de té (15).
Para el mal de orín se machaca la raíz y se coloca por tres días en una olla de barro que contenga agua.
Tomar como agua de pasto. Para la sangre, cáncer y afecciones del hígado se machaca la raíz y se pone en
agua; se agrega dulce y se toma como agua de pasto. Para la gastritis se machaca la raíz y se deja reposar en
agua y se toma como agua de pasto (5).
Para el tratamiento de la hipertensión, afecciones de los riñones, reumatismo, estreñimiento se preparan los
rizomas de la siguiente manera: Para el cocimiento se cortan varios rizomas en pedazos pequeños, se mide
una cucharada y se pone a cocer en dos tazas de agua durante 5-9 min; se retira del fuego, se cuela y se
toma una taza en ayunas todos los días. Para la tintura se pone una cucharada de rizomas secos en un octavo
de alcohol al 45%; se deja reposar por 7 días en un recipiente oscuro bien cerrado; se agita rápidamente; se
filtra y guarda; se aplica en forma de fricciones en la región afectada o beber 20-30 gotas al día (10).
Para ayudar a bajar la fiebre en enfermedades eruptivas, a descongestionar los bronquios de flemas y a
aliviar el dolor de pecho se prepara el cocimiento de la siguiente manera: Se debe hervir durante 5 min una
cucharada de rizoma en taza y media de agua o leche, se cuela y toma bien caliente varias veces al día y
antes de acostarse; se endulza con miel de abeja si se desea (10).
3. Uso en combinación con otros ingredientes: La calahuala combinada con amargón, bardana (palo de
jiote) y sauco sirve como depurativo. Combinado con eucalipto, oruzus y salvia sija sirve como
expectorante y combinado con ciruela, linaza y sen se utiliza como laxante (14,15).
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V. DROGA VEGETAL
1. Denominación: Rizoma y fronda de P. pseudoaureum
2. Definición: Rizoma y fronda secos
3. Obtención: El rizoma y las hojas se colectan en plena madurez y se secan a la sombra o con aire
caliente forzado a temperatura no mayor de 60ºC (14,15).
4. Descripción macroscópica: Los rizomas se presentan en porciones, cortados en forma transversal, al
estado fresco o seco cubiertos de páleas rojizas y acompañados por restos de raíces, estas son de diámetro
pequeño, monopodiales. Las escamas y las raíces deben ser eliminadas de la droga. En la superficie del
rizoma se observan las cicatrices que dejan la inserción de las hojas.
4.1 Descripción microscópica: Anatomía del rizoma: La sección transversal del rizoma es circular más o
menos aplanada dorsiventralmente, ampliamente surcada, en al parte profunda de los surcos se insertan las
hojas. Las células epidérmicas son cuadrangulares con cutícula fina, le continúa un parénquima externo sin
almidón y un parénquima interno que contiene granos de almidón, simples céntricos los de menor tamaño y
excéntricos los mayores. El sistema vascular constituye una dictiostela. Las meristelas localizadas en el
parénquima adoptan forma de U. Cada meristela se halla limitada por una vaina de células que presentan un
engrosamiento en U muy desarrollado que abarca las caras radiales y tangencial interna. Internamente se
observa una endodermis en estado primario de desarrollo, un periciclo 1-2 estratificado que envuelve al
floema; este se halla compuesto por grandes células cribosas y parénquima. En el centro los cordones del
xilema se disponen en dos ramas divergentes y se hallan acompañados por parénquima engrosado. En el
disociado del rizoma se observan traqueadas prismáticas escalariformes con placa de perforación
escalariforme que miden 1500μm de longitud por 70 μm de ancho y 3500μm de longitud por 100μm de
ancho; estas últimas se encuentran en mayor proporción. Encontramos células poligonales largas de pared
engrosada, con engrosamiento en U que miden 300 x 100μm y células parenquimáticas con o sin almidón;
estas presentan diámetros de 200-400 x 120 μm. El almidón simple céntrico mide de 30-50μm de diámetro,
los granos excéntricos pueden medir hasta 80μm en su diámetro mayor.
4.2 Anatomía foliar: Epidermis en vista superficial: Las epidermis adaxial y abaxial presentan células
poligonales de paredes marcadamente sinuosas y gruesas. La epidermis abaxial presenta estomas
polocíticos; el estoma está rodeado por una célula subsidiaria en forma de U y por una célula distal de
posición polar; también se encuentran estomas acompañados por tres células, una de las cuales es más
pequeña. No se observan pelos. Venación: En cada segmento se observa una hilera de areolas costales
alargadas, sin venillas incluidas, a continuación una serie de areolas mayores fértiles, generalmente con dos
venillas que se unen en el ápice y varias series de areolas marginales, poligonales, pequeñas, estériles.
4.3 Lámina: La sección transversal de segmentos del limbo presenta la epidermis adaxial y abaxial de
células rectangulares con cutícula fina. La epidermis abaxial presenta estomas a nivel. La hoja es
hipostomática y glabra. El mesófilo presenta estructura isobilateral presentando un parénquima lagunoso
homogéneo. El nervio principal del segmento de la lámina se halla representado por una meristela o haz
anficribal el que se halla rodeado por una vaina que presenta un engrosamiento en U que abarca las caras
radiales y tangencial interna. Ésta vaina de células presenta un color pardo oscuro debido a la presencia de
taninos en las paredes. Internamente a ésta vaina se puede encontrar una endodermis en estado primario de
desarrollo, un periciclo 1-2 estratificado. El floema está compuesto por grandes células cribosas y
parénquima. Los cordones del xilema se disponen en 2-3 ramas divergentes y se hallan acompañados por
parénquima engrosado. Por encima y debajo del nervio así como en los márgenes del limbo se presenta
colénquima laminar como tejido de sostén.
En la cara abaxial de la lámina se encuentran los soros circulares, uniseriados, desnudos (sin inducio),
localizados en el extremo de 2 venillas convergentes. Los esporangios se unen a la superficie foliar en el
receptáculo, presentan un pie biseriado y el anillo incompleto es de 13 células.
Pecíolo o estípite de la lámina. El pecíolo en sección transversal presenta forma cilíndrica, algo aplanado
dorsiventralmente, presentando en la cara dorsal dos alas (lámina decurrente) y una carena central más o
menos prominente. La epidermis está constituida por células cuadrangulares pequeñas fuertemente
esclerosadas; le continúan de 2-3 capas de fibras muy esclerosadas y lignificadas que miden de 750-300μm
de largo y 5-6 capas de fibras blandas de esclerénquima con paredes muy engrosadas que miden 600μm. En
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el parénquima interno se encuentran 5 haces o meristelas dispuestos en U y dos rastros foliares de mayor
tamaño. Cada haz anficribal o meristela se estructura de la misma forma que en la lámina.
4.4 Anatomía de la raíz: La sección transversal de la raíz presenta contorno circular. La epidermis es de
células cuadrangulares con largos pelos radicales y cutícula fina. Internamente el parénquima cortical se
encuentra fuertemente esclerosado. La endodermis se presenta desarrollada. La raíz es diaria.
4.5 Droga pulverizada: En la droga pulverizada (rizoma) se encuentran células parenquimáticas sin
almidón y células parenquimáticas con almidón simple céntrico. También se encuentran fragmentos de
rizoma que incluye células esclerosadas en U, endodermis primaria y parénquima de floema. Se hallan
fragmentos de la epidermis del rizoma; traqueadas facetadas, escalariformes y células esclerosadas en U.
4.6 Composición química Los estudios de composición química se han realizado en algunas de las
especies, pero aún es incompleto. El rizoma contiene azúcar, aceite esencial, mucílago, nitrato de potasio y
colorante rojo, calagualina, polipodina, aceites grasos y taninos, así como esteroides (ecdisterona y dos
ecdisonas como la polipodaureina). Las especies usadas medicinalmente en El Salvador contienen
alcaloides, sesquiterpenlactonas y taninos. En la fronda, los flavonoides glicósidos de camferol y quercetina
y rutin. En la planta completa y el rizoma, se ha detectado el esteroide polipodaureína (2,5,10,15).
En el extracto de las frondas se identificó el ácido caféico en su composición (19,20). En cinco muestras se
identificó la presencia de alcaloides, taninos, saponinas, flavonoides y sesquiterpenlactonas (21).
5. Monografía de control de calidad:
5.1 Identificación
5.1.1 Descripción macroscópica: Los rizomas cubiertos de páleas rojizas y acompañados por restos de
raíces, En la superficie del rizoma se observan las cicatrices que dejan la inserción de las hojas.
5.1.2 Descripción microscópica:
Anatomía del rizoma: Las células epidérmicas son cuadrangulares con cutícula fina, parénquima externo sin
almidón y un parénquima interno con granos de almidón, simples céntricos y excéntricos. Traqueadas
prismáticas escalariformes con placa de perforación escalariforme Células poligonales largas de pared
engrosada, con engrosamiento en U y células parenquimáticas con o sin almidón.
Anatomía foliar: Células poligonales de paredes marcadamente sinuosas y gruesas. La epidermis abaxial
presenta estomas polocíticos; el estoma está rodeado por una célula subsidiaria en forma de U y por una
célula distal de posición polar; también se encuentran estomas acompañados por tres células. No se
observan pelos.
Características organolépticas: Extractos y tinturas de color ámbar y olor característico (19).
5.2 Ensayos
5.2.1 Características fisicoquímicas:
No debe contener más del 10% de materia extraña y órganos deteriorados.
No debe presentar: Partes de otras plantas, insectos o larvas, partículas de tierra, arena y otras materias.
Humedad: Por método gravimétrico no debe contener más del 10%
Cenizas totales: Por incineración en mufla a 700-750ºC, no debe pasar el 9% (22).
5.2.2 Análisis microbiológico: El producto en cualquiera de sus presentaciones no contendrá micro-
organismos patógenos o sus toxinas. Coliformes totales <104 NMP, coliformes fecales <10
3 NMP, E. coli
<102 NMP, y recuento de mohos y levadura <10
4 UFC/mL (22).
5.2.3 Contaminante: No deberá contener contaminantes químicos o biológicos en cantidades que
sobrepasen los límites máximos aceptados por la unidad sanitaria.
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6. Ficha técnica de seguridad y eficacia
6.1 Toxicología: Los extractos acuosos y etanólicos del rizoma (500mg/kg) no fueron tóxicos en peces del
género Mollinesia. En la revisión de literatura y bases de datos no se encontró ninguna referencia sobre su
toxicidad en humanos (15).
6.2 Indicaciones terapéuticas: Se han descrito por su actividad antiinflamatoria, inmunomoduladora y
depurativa. Indicaciones en el tratamiento de psoriasis, eczemas, dermatosis y vitíligo, y estados de
disfunción inmune (1,15).
6.3 Dosis: El extracto fluido del rizoma se consume en dosis de 1-4 mL/día. Para el tratamiento de
psoriasis, eccemas, dermatosis, vitíligo y estados de disfunción inmune, se recomienda administrar tres
veces al día en dosis de 1 cápsula antes de las comidas, 1-4g/taza de decocción, 3-5mL de tintura 1:10 en
etanol 35%. Por las mismas indicaciones puede aplicarse tópicamente, ya sea en forma de pomada o
ungüento (15).
7. Datos farmacológicos: Ciertos estudios antimicrobianos demostraron que el extracto acuoso tiene
alguna actividad antibacteriana, aunque en otros estudios los extractos acuosos y etanólicos fueron inactivos
contra E. coli y S. aureus. El extracto de hojas es activo contra bacterias fitopagótenas (X. campestris). Se
ha demostrado que la administración oral del extracto acuoso tiene acción inmunomoduladora medida por
proliferación del bazo de ratón con ConA. La calagualina bloquea la activación inducida por TNF de NF-
κB por inhibición de la fosforilación y de la degradación de κBα, explicando su habilidad para suprimir la
inflamación y tumorigénesis (1,23).
La calagualina es una saponina aislada del rizoma que tiene actividad antitumoral. La decocción del rizoma
produce moderada actividad diurética en ratas. La administración de una fracción del extracto acuoso
(anapsos) en ratas produce hipoactividad cerebral dosis-dependiente posiblemente por variación en los
niveles de IL-1β hipotalámica. El extracto acuoso prolonga la sobrevivencia de aloinjertos cutáneos en
ratones, sugiriendo una actividad inmunosupresora (15,24,25).
El extracto etanólico de la fronda presentó actividad inhibidora de la vía clásica y actividad estimuladora de
la vía alterna del complemento (19). Los extractos de frondas y rizoma poseen actividad inhibidora sobre la
vía alterna del complemento, cada una con una CI50 de 3.43 μg/mL y 7.47 μg/mL respectivamente (26). Las
frondas con una CI50 de 13.76 μg/mL y loas rizomas de 13.84 μg/mL mostraron actividad inhibitoria sobre
la vía clásica del sistema de complemento (26).
Los extractos de frondas y rizomas presentaron actividad inhibidora de la actividad linfocítica in vitro (26).
La proteína ligadora de ácidos grasos (FABP) tiene una buena respuesta protectora inmune contra la
infección de F. hepática; un estudio evaluó la protección inducida por el FABP de F. hepatica (Fh12)
combinado con nuevo immunomodulador, el lipido aminoalcohol OA0012 en el sistema de adaptación de
adyuvantes en ratones y ovejas. Los resultados son rangos de supervivencia mayores, recuperaciones
hepáticas prontas y aumento de protección contra F. hepatica en dichos animales (27).
Por medio de técnicas cromatograficas y de quimioluminisencia se determinó que la mayoría de
componentes químicos que se encuentran en el extracto de esta planta, son fenoles, y que éstos son los
responsables de la capacidad antioxidante y fotoprotectora que caracteriza a esta planta (28,29).
VI. REFERENCIAS
1 Laboratorio y Droguería de productos fitofarmacéuticos Farmaya, S. A. 1990. Fichas populares sobre plantas
medicinales, Serie 2 No. 2. Segunda edición. CEMAT. 180p.
2 Moran, R. (1996) Polypodiaceae. En: Davidse, G.; Sousa, M & Chater, A. (Eds.) Flora Mesoamericana. Vol 5.
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pp. 130-133.
3 García CL. Estudio de las condiciones ambientales de la calahuala (Phlebodium spp.) en la Sierra Caral,
municipio de Morales, departamento de Izabal, Guatemala, Tesis de Maestrìa, USAC, 2005.
4 Girón L.M. et al. Ethnobotanical survey of the medicinal flora used by the caribs of Guatemala. J.
Ethnopharmacol, 1991, 34:173-187
5 Guerra A. (2005) Obtención, caracterización y evaluación de las propiedades físico-químicas de los extractos
fluidos, blandos y secos así como de las tinturas del rizoma y de la fronda de calahuala (Phelebodium
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pseudoaureum) a nivel de laboratorio. Guatemala, USAC (tesis, Facultad de Ingienería, Escuela de Ingienería
Química) p. 67.
6 PLANTER. (1989) Obtención y Aprovechamiento de Extractos Vegetales de la Flora Salvadoreña. San Salvador,
U. de El Salvador, p. 468.
7 Stolze, RG. (1981) Ferns and Fern Allies of Guatemala. Fieldiana: Botany New Series 6:374-377.
8 Antón A et al. Effects of anapsos on behaviour and brain cytokines in rats. Annals of Psychiatry, 1992, 3:329-341.
9 Fernández D et al. Inmunosupressive and pharmacologically active compounds from Polypodium leucotomos L.
Book of Abstracts, WOCMAP, Maastricht,1992.
10 House PR. et.al. Plantas Medicinales Comunes de Honduras. Primera Edición. Litografía López S. de R.L.
Honduras, 1995.
11 Manna, SK. et al. (2003) Calagualine inhibits nuclear transcription factors-kiB activated by various inflammatory
and tumor promoting agents. Cancer Letters. P. 171-182.
12 Martínez J, Bernal N, Cáceres A. Fundamentos de Agrotecnología de Cultivo de Plantas Medicinales
Iberoamericanas. Convenio Andrés Bello y Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnología para el desarrollo
(CYTED). Colombia, 2000.
13 Morton J. Altas of Medicinal Plants of Middle America, Bahamas to Yucatan. Charles C Thomas Publisher.
Estados Unidos.1981.
14 Andrade JC. Búsqueda de sustratos alternativos para la producción bajo cultivo de calahuala de Phelebodium
aureum L. Tesis Facultad de Agronomía, Universidad de San Carlos de Guatemala, dirección General de
Investigación, Programa de Recursos Naturales y Ambiente, 2003.
15 Cáceres A et al. Diuretic Activity of plants used for the treatment of unrinary ailments in Guatemala. J.
Etnopharmacol,1987, 19:233-245.
16 Cáceres A. Propuesta de Monografías Farmacopeicas de 10 especies Vegetales de Centroamérica. Proyecto de
Desarrollo de Tecnología de Cultivo de Plantas Medicinales y Producción de Fitoterápicos (OEA/AICD/AE).
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17 Murillo, MT. (1983) Usos de los Helechos en Suramerica con Especial Referencia a Colombia, Instituto de
Ciencias Naturales de la Universidad Nacional de Colombia Bogota. p. 156.
18 White, A. (1985) Hierbas del Ecuador, Plantas medicinales, ediciones Libri, Quito Ecuador, p. 379.
19 Castillo C et al. Actividad moduladora del Sistema del Complemento de diez plantas medicinales nativas de
Guatemala. Revista Científica, Actividad biocida de especies vegetales nativas de la flora Mesoamericana, 2005,
3(1): 30-34.
20 Wren, RC. (1994) Enciclopedia de medicina herbolaria y preparados botánicos. Editorial Grijalbo. San Miguel-
México. 233-234p.
21 Zuleta, E. (2005) Perfil fitoquímico de Phlebodium pseudoaureum (Cav.) Lellinger proveniente de cinco regiones
de Guatemala. Tesis para optar al título de Licenciada Química Farmacéutica. Facultad de Ciencias Químicas y
Farmacia, USAC, Guatemala.
22 Departamento de Control de Calidad; Laboratorio de Productos Fitoterapéuticos Farmaya, S.A. Certificados de
Control de Calidad de Materia Prima Vegetal. Guatemala, 2007.
23 Cruz S et al. Caracterización fitoquímica de extractos de frondas y rizomas de dos especies del género
Phlebodium provenientes de Honduras y Guatemala. Revista Científica, Actividad biocida de especies vegetales
nativas de la flora Mesoamericana, 2005,3(1): 39-42.
24 Cáceres A. Plantas de uso medicinal en Guatemala. Primera edición. Editorial Universitaria Dirección General de
Extensión, USAC. Guatemala.1996.
25 Tuominen, M. et al. (1991) Enchancing effect of calaguala on the prevention of rejection on skin transplants in
mice. Phytotherapy Research 5:234-236.
26 Alvarez E. Actividad inmunomoduladora de rizoma y frondas de Phlebodium pseudoaureum y Phlebodium
decumanum. Tesis para optar al título de Licenciatura en Química Biológica, Facultad de Ciencias Químicas y
Farmacia, Universidad de San Carlos de Guatemala, Guatemala, Guatemala. 2006
27 Lòpez- Abàn J. et al. (2008) The addition of a new inmunomodulator with the adjuvant adaptation ADAD system
using fatty acid binding proteins increases the protection against Fasciola hepatica.Veterinary Parasitology
153:176-181
28 Gombau L. et al. Polypodium leucotomos extract: Antioxidant activity and disposition. Toxicology in vitro, 2006,
20: 464-471.
29 Reyes E. et al. (2006) Systemic inmunomodulatory effects of Polypodium leucotomos as an adjuvant to PUVA
therapy in generalized vitiligo: A pilot study. Journal of Dermatological Sciences, 2006 41:213-216
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Anexo 7. Salvia microphylla HBK (Lamiaceae)
I. DENOMINACIÓN, SINÓNIMOS Y EQUIVALENCIAS
1. Denominación: Partes aéreas secas de Salvia microphylla
HBK (1,3-5).
2. Sinónimos: Salvia grahamii Benth (1,4).
3. Nombres vernáculos: Mirto dulce, salvia silvestre, diente de
acamaya, hierba de mirto, astranzo, mirto, mirto chico, mirto
cultivado, mirto de castilla, mustia (puré pecha), toronjil, verbena
(1,4).
4. Partes usadas: Partes aéreas
II. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Arbusto bajo o hierba perenne, usualmente 1 m de alto o más bajo, frecuentemente densamente ramificado,
las ramas densamente puberulentas y frecuentemente viscido. Hojas mas bien gruesas, escasamente
pecioladas, deltoide-ovadas a elípticas u oblongas, principalmente 1-2.5cm de largo, usualmente obtusas,
generalmente agudas u obtusas en la base, serrado-crenuladas o subenteras, puberulentas o glabras. Flores
pediceladas principalmente opuestas, formando racimos ininterrumpidos de 15cm de largo o usualmente
mucho más cortas, los racimos usualmente densamente viscido-pubescente, las brácteas ovado-acuminadas,
3-6cm de largo, cadúcas. Cáliz en antésis 10-15mm de largo, muy densamente glandular-puberulento,
verde. Corola rosadas a rojas, el tubo 16-18mm de largo, el labio superior 6-12mm de largo, más largas las
de abajo, extendidas (1).
III. DATOS AGROTECNOLÓGICOS
1. Distribución y hábitat
Nativa de México; cultivada ocasionalmente como ornamental en jardines de Guatemala (Jalapa, Alta
Verapaz y Guatemala). Su hábito es terrestre; crece en bosques de Juniperus sp., Quercus sp., Pinus sp. y
Pino-Encino; aproximadamente a los 2,500msnm. Se ha reportado para Estados Unidos, Argentina y
Uruguay (1,3-5)
2. Cultivo: Es una especie cultivada en huertos familiares y solares y se propaga por semilla.
IV. USOS ETNOMÉDICOS O TRADICIONALES
1. Usos medicinales: El extracto acuoso de las partes aéreas administrado oralmente, se utiliza para los
cólicos y diarrea. Tienen propiedad emenagoga, antiséptica y antihelmíntica. Además se ha detectado su
uso para el tratamiento del dolor de cabeza, dormir niños, tos, problemas menstruales, espanto, vómito,
infección estomacal, aliviar bronquios, mal de ojo, eliminar granos, salpullido y escarlatina con calentura,
dolor de oído. Para los problemas de la bilis, mala digestión, disentería, empacho, posparto, esterilidad no
se tiene definida la parte de la planta que se utiliza (1,4).
2. Formas de preparación: La planta completa se utiliza para dormir niños; estos se bañan con el
cocimiento de la planta y se colocan ramas frescas bajo la almohada. Contra la tos y problemas menstruales
se usa la infusión. Para la diarrea infecciosa se toma el té hecho con dos ramitas en 250mL de agua. El
follaje en infusión se utiliza en lavados para heridas y en baños para aliviar bronquios (1).
La flor restregada se utiliza para el mal de los ojos y se debe colocar en el párpado. Para aliviar el dolor de
oído, las hojas se colocan directamente sobre el orificio auditivo (1).
3. Uso en combinación con otros ingredientes: La planta completa en infusión con tequesquite y flor
de ángel se usa para curar el dolor de cabeza; se debe tomar una vez al día. Para el espanto se toma la
infusión de la planta con los tres toronjiles por nueve días. Para el vómito se toma el té de dos ramitas junto
con un puñado de perejil; se debe tomar una taza 3 ó 4 veces al día. Se usa el cocimiento de las hojas con
otras plantas en baños para eliminar los granos, salpullido y escarlatina con calentura (1).
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V. DROGA VEGETAL
1. Denominación: Partes aéreas secas de S. microphylla
2. Definición: Partes aéreas secas
3. Obtención: cultivo en huertos familiares
4. Descripción macroscópica: No refiere.
5. Descripción microscópica de la droga: No refiere.
6. Composición química Las partes aéreas contiene diterpenos: clerodano-3-13-dien-18-19-15-16-
diolido, neo:7-α-hidroxi; pimara-7-15-dien-14-α-18-diol; ácido SO/sandaracopimarico,7- α-hidro (8).
7. Monografía de control de calidad:
7.1 Identificación
7.1.1 Descripción macroscópica: No hay información disponible
7.1.2 Descripción microscópica: No hay información disponible
7.1.3 Características organolépticas: No hay información disponible
7.2 Ensayos
7.2.1 Características fisicoquímicas:
No debe contener más del 10% de materia extraña y órganos deteriorados.
No debe presentar: Partes de otras plantas, insectos o larvas, partículas de tierra, arena y otras materias.
Humedad: Por método gravimétrico no debe contener más del 10%
Cenizas totales: Por incineración en mufla a 700-750ºC, no debe pasar el 9% (7).
7.2.2 Análisis microbiológico: El producto en cualquiera de sus presentaciones no contendrá micro-
organismos patógenos o sus toxinas. Coliformes totales <104 NMP, coliformes fecales <10
3 NMP, E. coli
<102 NMP, y recuento de mohos y levadura <10
4 UFC/mL (7).
7.2.3 Contaminante: No deberá contener contaminantes químicos o biológicos en cantidades que
sobrepasen los límites máximos aceptados por la unidad sanitaria.
8. Ficha técnica de seguridad y eficacia
8.1 Toxicología: No hay información disponible
8.2 Dosis: No hay información disponible
9. Datos farmacológicos
Los extractos etanólicos no presentaron actividad a 0.1mg/mL contra bacterias y levaduras, no mostraron
citotoxicidad contra A. salina a 0.5mg/mL, y tampoco fueron activos contra larvas de A. aegypti y A.
albimanus. El aceite esencial (1 μL) presentó actividad contra B. subtilis, E. coli y M. smegmatis,
citotoxicidad contra A. salina (DL50: 0.17mg/mL), actividad insecticida contra larvas de A. aegypti (CL100:
0.124mg/mL) en el primer y segundo estadío, y hasta el tercer estadío contra A. albimanu. (2).
El extracto etanólico no mostró actividad contra S. typhi, P. aeruginosa y E. coli, ni contra los hongos C.
albicans y A. flavus, pero si presentó actividad contra B. subtilis, C. neoformans y T. rubrum (6).
VI. REFERENCIAS
1. Nash DL. 1976. Flora de Guatemala. Fieldana: Botany. 24(12): 432
2. Lorenzana L, Cardona A & Cáceres A. Actividad biocida de seis plantas de uso medicinal en el municipio de
Tacaná, San Marcos, Guatemala. Revista Científica, Actividad biocida de especies vegetales nativas de la flora
Mesoamericana 2005; Volumen 3 No.1. 8-13.
3. Salvia microphylla. Página electrónica del Chicago Field Museum. Disponible en http://www.fieldmuseum.org
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4. Salvia microphylla. Página electrónica del Missouri Botanical Garden. Disponible en http://www.tropicos.org
5. Salvia microphylla. Página electrónica del New York Botanical Garden. Disponible en
http://sciweb.nybg.org/science2/hcol/allvasc/index.asp
6. Cáceres A, Cruz S, Samayoa M, Molina R. Caracterización de extractos vegetales y aceites esenciales como
nuevos recursos para el desarrollo agroindustrial. Fase III. Resúmenes de proyectos de investigación DIGI 2005.
7. Departamento de Control de Calidad; Laboratorio de Productos Fitoterapéuticos Farmaya, S.A. (2007)
Certificados de Control de Calidad de Materia Prima Vegetal. Guatemala.
8. Esquivel B, Cardenas J, Rodríguez—Hahn L. The diterpenoid constituents of Salvia fulgens and Salvia
microphylla. J Nat Prod, 1987, 50(4): 738-740.
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Anexo 8. Tagetes lucida Cav. (Asteraceae)
I. DENOMINACIÓN, SINÓNIMOS Y EQUIVALENCIAS
1. Denominación: Partes aéreas secas de Tagetes lucida Cav (1-
6).
2. Sinónimos: Tagetes florida Swart, Tagetes shiedeana Lees
(3,7,8).
3. Nombres vernáculos: Pericón, pericón amarillo, liyá, iýa´,
jolomocox, ucá, hierba de San Juan, anisillo, curucumín, flor de Santa María, hierba anís, hierbanís, hierba
de Santa María, periquillo, yiauhtli, yauhtli, tzitziqui, yerbanis, cravo de difunto, flor de tierra dentro, guía
Laga-Zaa, hipericón, bipericón, hierba de las nubes, periquillo, micua, marigold, guamusi, basigó, coronilla,
warijio, cuauhiyauhtli (7,9,10-15).
4. Partes usadas: tallo, hoja, flor y fruto (1,2,9,12,16-22).
II. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Es una hierba erecta perenne, glabra, comúnmente de 30–75cm de altura, fuertemente aromática, crece a
partir de una base corta gruesa y leñosa, mimosamente ramificada arriba; hojas opuestas, sésiles lineales u
oblongo-lanceoladas, 5-10cm de largo, obtusa o agudas en la base, finamente dentadas, con numerosas y
pequeñas glándulas esparcidas; con cimas densas o abiertas planas en la copa, involucró cilíndrico, 9-10mm
de largo, filarios de 5-7, tubulados en el ápice, con numerosas glándulas pequeñas y esparcidas; flores del
radio femeninas, comúnmente 3 flabeliformes, estigma bifurcado, sin pubescencia; aquenios de 6-7mm de
longitud, estriados; papus escamoso de 5-6, dos de ellos setiformes de 3mm de largo, los cortos dos una
tercera parte de longitud, oblongos, obtusos (7).
III. DATOS AGROTECNOLÓGICOS
1. Distribución y hábitat: Es una planta originaria de Mesoamérica, crece en campos abiertos y a orillas
de bosques de pino y encino, algunas veces en laderas rocosas secas, asociada principalmente con
gramíneas. Su rango altitudinal va desde los 1,000-2,000msnm. Es más abundante en la estación lluviosa y
desaparece en la estación seca (7,13).
Se distribuye desde el Noroccidente de México hasta Honduras. En Guatemala se distribuye en el altiplano
central y occidental (Chimaltenango, Guatemala, Huehuetenango, Quetzaltenango, Quiché, Sacatepéquez y
San Marcos) (7).
2. Propagación
Por semilla: La semilla no necesita ningún tratamiento para germinar, aunque debe ser seleccionada
después de la cosecha. Se coloca en cajas que contengan una mezcla de arena blanca y broza en partes
iguales, o bien en camas directamente en el suelo, en cuyo caso se elaboran de un metro de ancho y el largo
deseado. El suelo se mulle finamente y al momento de la siembra se hacen surcos poco profundos,
separados a 10 cm; se coloca la semilla al chorrillo y se cubre con broza bien desmenuzada (23). La
emergencia de las plántulas se obtiene de 10-15 días después de la siembra y pueden ser trasplantadas al
campo definitivo entre los 40 y 45 días después de la siembra. La época recomendable para la siembra en
semillero es durante el mes de abril, de tal forma que se pueda trasplantar a finales de mayo. La semilla
puede guardarse por varios años en frascos de vidrio en lugares secos y frescos (23).
Propagación vegetativa: Puede ser propagada por estacas, estolones y yemas. Se ha determinado que por
estacas es el método más fácil y práctico. Se recomienda colocarlas en camas de enraizamiento con una
mezcla de broza y arena de río y luego de 30-35 días trasplantarlas. Se puede partir de plantas en pleno
desarrollo, preferiblemente antes que del inicio de la floración. Las plantas ideales para la propagación
vegetativa son aquellas que tienen uno o dos años, las cuales previamente deben ser podadas a una altura de
5cm del suelo, y utilizarlas después de 45 días. Se recomienda utilizar estacas con tres nudos en las partes
basal y media de los tallos jóvenes. Se pueden enraizar sin necesidad de un estimulante del enraizamiento,
pero si se desea un mayor porcentaje de pegue, rápido y vigoroso, se recomienda aplicar alguna fuente
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comercial de ácido indolbutírico (IBA) en una concentración del 2%. Con esto se pueden tener estacas
enraizadas listas para el trasplante de 25-35 días (23).
Los lotes sembrados con estacas enraizadas superan en rendimiento de materia seca a los sembrados con
plántulas provenientes de semillas sembradas en la misma época, ya que las estacas tienden a producir más
área foliar en menor tiempo, lo que se alcanza en plantas provenientes de semilla hasta el segundo año, sin
embargo los costos de siembra son mayores.La siembra por estacas enraizadas es recomendable para áreas
pequeñas y cuando se quiera una producción inicial rápida (23).
3. Manejo del cultivo
A causa de su perennidad se explicará el manejo del cultivo inicialmente en lo referente al primer año y
luego las labores necesarias para los años posteriores. El cultivo de forma más práctica y económica es a
partir de la semilla. Es importante elaborar y manejar el semillero en la forma como se apuntó
anteriormente. La fecha de trasplante recomendada es la segunda quincena de mayo, con el fin de obtener la
primera cosecha en el mes de agosto. La distancia de siembra es de 0.6m entre surco y 0.3m entre planta,
esto permite realizar las labores de limpia adecuadamente y además, una vez que las plantas han
desarrollado, cierran el surco, con lo que la necesidad de limpias disminuye (23).
La siembra se puede realizar también en asocio con otras especies medicinales o bien otros cultivos. Se han
realizado pruebas de asocio con maíz y se comprobó que no afecta el rendimiento de este cultivo. Se
recomienda sembrar el maíz en doble surco separado a 0.5m, lo que permite dejar una calle de 1.2m entre
doble surco donde se pueden sembrar dos hileras de pericón. Cinco días después del trasplante se aplica
abono orgánico en una dosis de 5tm/ha de preferencia de un abono orgánico deshidratado. Para suplir
alguna deficiencia de elementos menores se puede realizar una aplicación de fertilizante foliar en dosis de
0.5L/ha antes de la floración. Las limpias estarán en función de la necesidad, pero en general pueden
realizarse dos, durante la segunda se aprovecha para efectuar un aporque para evitar que a causa de la
arquitectura de la planta, se puedan caer cuando estén en plena floración. Trasplantando en mayo se puede
obtener la primera cosecha a finales de agosto y una segunda a finales de octubre. El momento oportuno
para la cosecha es cuando las plantas están en plena floración, pero por la variabilidad en días a floración
intrapoblacional que existe, la misma debe hacerse escalonada. Esto tiene la desventaja que aumenta los
costos; sin embargo, puede ser ventajoso en cuanto a espacio para secado y calidad del producto (23).
Durante el segundo año y los siguientes que se mantenga el cultivo (se recomienda tres años y luego
renovar), los trabajos se concentran en podas, limpias y abonado si es necesario. De octubre a marzo las
plantas producen follaje, pero de baja calidad, porque se mancha con cenicilla (Oidium sp.), por ello a
inicios de abril se hace una poda a 5 cm del suelo, esto estimula la brotación y con el efecto de las primeras
lluvias se obtiene un buen desarrollo de las plantas; así, la primera cosecha del año se obtiene en junio, una
segunda en septiembre y de acuerdo con las condiciones ambientales incluso se puede obtener una tercera
cosecha a finales de octubre (23,25). Para efectuar el abonado en el segundo año y los siguientes se
recomienda hacerlo con base en el análisis de suelos, procurando suplir la necesidad de nutrientes con
abonos orgánicos. Se han realizado ensayos preliminares para calcular la frecuencia de riego necesaria en la
época seca. Los mismos indican que es necesario regar cada 10 días con lo que se obtiene un adecuado
rendimiento de aceite esencial y un consumo mínimo de humedad. Sin embargo, hace falta hacer una
evaluación económica y observar si con el riego se supera la incidencia de cenicilla (Oidium spp.) sobre el
follaje en época seca (23).
4. Plagas: Durante el cultivo se pueden presentar algunos patógenos del follaje y suelo, entre ellos:
Cecrospora spp. se presenta como manchas concéntricas e irregulares de color café negruzco en tallos y
hojas durante todo el ciclo de cultivo, sin llegar a constituir una epífita. Para evitar su presencia se
recomienda airear entre surcos por medio de podas y sembrar en la época recomendada. Oidium spp.
aparece superficialmente, en forma de cenicilla sobre hojas y tallos. En especial en la época seca, puede
causar daño bastante notorio porque las hojas pierden su calidad para la venta, por lo que se recomienda
sembrar en la época apuntada anteriormente para escapar a su aparecimiento en los dos primeros cortes. En
la época seca se debe dejar crecer a las plantas sin ningún manejo y en abril podar a 5cm del suelo y sacar el
material cortado del campo de cultivo. Rhizoctonia spp. y Fusarium spp. pueden manifestarse en raíces y
base de los tallos, pero a la fecha su presencia es moderada sin llegar a constituir un problema grave. Su
daño está asociado con la presencia de gallina ciega (Phyllophaga spp.) (23).
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5. Cosecha: En la época de plena floración se ha comprobado que se obtiene el mayor contenido de
aceite esencial y otros componentes fitoquímicos, por lo tanto es la recomendada para la cosecha. Ésta se
alcanza entre 140-160 días después de la siembra en el primer año (incluye el período de semillero), o
después de 65-75 días después de podada en el segundo año y siguientes. Después del primer corte se puede
obtener un segundo a los 60-65 días. Las plantas se cortan completas a 5cm del suelo, luego se lavan con
agua potable o en su defecto agregando una gota de cloro comercial por litro de agua. El lavado se realiza
con el propósito de eliminar tierra y materiales extraños. Para esta labor se puede hacer uso de recipientes
de plástico, luego de esto se coloca el material vegetal en canastas plásticas caladas, para eliminar el exceso
de agua del follaje (23,26).
6. Secado: Lo más práctico es utiliza un secador solar cuyo tamaño estará en función de la cantidad de
material que se quiera secar. El principio de estos secadores se basa en utilizar la energía del sol en forma
indirecta para secar el material vegetal, por medio de la circulación de aire dentro de la cámara. En el
interior el material se coloca en estanterías sobre bandejas con marcos de madera cubiertos de cedazo
plástico, tipo mosquitero. La duración del secado depende de las condiciones del tiempo, pero en general a
de tres a cuatro días, durante los cuales se debe estar controlando el material y de preferencia voltearlo
dentro de las bandejas (23).
Hay dos formas de introducir el material al secador:
- Cortado y picado, que consiste en cortar el material vegetal de 5mm de largo, esto facilita el secado del
follaje, pero tiene el inconveniente que cuando está seco hay que hacer una selección para eliminar las
porciones de tallo grueso ya que esta parte tiene un bajo contenido de los componentes de interés y además
produce problemas en la extracción, y también tanto el picado como la selección aumentan los costos (23).
- Se introducen las plantas enteras extendiéndolas lo mejor posible para facilitar el secado. Ya secas se pasa
la mano a lo largo de la planta con lo cual se logra separar hojas y flores del tallo y ramas. Aunque esta
técnica ocupa más espacio en el secador, tiene la ventaja de reducir los costos de mano de obra (23).
Una forma de aumentar la calidad del producto seco es colocar un nylon negro en la parte interior del techo
para oscurecer la cámara de secado, con esto se consigue que el color natural de las hojas y flores se
mantenga al máximo, sin embargo, aumenta los días de secado. El punto de secado se tiene cuando las
hojas se quiebran con facilidad al presionarlas con la mano. El porcentaje de humedad alcanzado está entre
8-12%. Después del secado el material es seleccionado y se almacena en bolsas de papel multicapa y/o en
barriles plásticos de 15 o 30gal con tapadera, con el fin de evitar la rehidratación y mantener la calidad de
producto por mayor tiempo; lo que usualmente puede alcanzar hasta un año. La relación de peso fresco a
seco es de 3.5-4:1 (23).
IV. USOS ETNOMÉDICOS O TRADICIONALES
1. Usos medicinales:
Hoja: Las hojas se utilizan para tratar la diarrea, disentería, cólera, flatulencia, parasitismo intestinal, dolor
de estómago, indigestión, inflamación, náuseas, vómitos, malaria, anemia, inflamación de ojos, picadura de
escorpión, hepatitis y paludismo. También se utilizan para aliviar el parto y dolor menstrual. Se le atribuye
propiedad antiespasmódica, antiséptica, antidiarreica, antiinflamatoria, carmativa, diurética y febrífuga
(13,14,20,24,27). En México el emplasto se utiliza para curar tumores (11).
Planta entera: En México, la decocción de la planta entera se utiliza para el dolor de estómago. El extracto
acuoso se utiliza para enfermedades gastrointestinales, dolor de cabeza, cólicos, tónico, fiebre. La infusión
se utiliza para aliviar cólicos intestinales, facilita la digestión, diarrea, tos, aire en el estómago, dolor de
estómago. El pericón fumado tiene efecto alucinógeno y psicotrópico. En Guatemala, el extracto acuoso de
la planta entera se utiliza para dolor de estómago. La cocción de la planta se utiliza para combatir la diarrea
(14,41).
Tallos y flores: La decocción del tallo y flor sirve para curar padecimientos de la piel. Al extracto acuoso de
las hojas y ramas se les atribuye propiedades galactogogas y ecbólicas. El macerado se utiliza para el dolor
de aire y dolor de vientre. El macerado, infusión, hervida y cocimiento de las ramas se utiliza para combatir
el espanto. El cocimiento de las hojas o ramas se utiliza para baño de señoras. En la cultura aztecas son
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frecuentes, también, las referencias a ―baños de yauhtli‖ para los niños que sufren de sarpullido, impétigo y
otras enfermedades de la piel muy comunes en las comunidades rurales (1,9,21,24,28).
Hojas y flores: La infusión de las flores y hojas se utiliza para dolores de estómago, gastritis y gonorrea. La
decocción de flores y hojas se utiliza para dolores menstruales. La infusión de las flores y hojas secas se
utiliza para tratar las infecciones. La administración oral de las flores secadas a la sombra se utiliza para
desórdenes sanguíneos. La decocción de las hojas secas se utiliza para los cólicos, diarrea, indigestión,
inflamación y nausea. También para el tratamiento de la gastralgia y dolor de estómago (21).
2. Formas de preparación: El apagado de hojas y flores se utiliza para aliviar el dolor de estómago. Se
agrega un manojo en dos tazas de agua hirviendo, se tapa, se deja reposar, se cuela y se administra caliente
por vía oral. No se debe prolongar el tratamiento durante un periodo superior a 3 días consecutivos (1,26).
Para aliviar la diarrea, disentería, cólera, cólicos del mes y dolor de estómago se prepara una infusión de
una cucharada de hojas de pericón en 1 taza de agua, se toma tres veces al día por tres días (42).
Para el dolor de vientre, se prepara la decocción de una onza de pericón, ½ onza de romero y una onza de
canela, tomar tres veces al día durante 15 días. Para acelerar el parto y como regulador menstrual, se toma
la decocción de pericón sola o con esencia coronada, como agua de pasto. Para lavados vaginales se emplea
sola. Para dolor de estómago, aire, náusea y la sangre, se toman tres tazas al día de la decocción de la
planta. Contra gripe, tos y fiebre, se toma como agua de pasto; o se prepara la tizana de las hojas y flores y
se toma una taza diaria (19).
3. Uso en combinación con otros ingredientes: Los huichol mezclan las hojas y flores con las hojas de
tabaco (Nicotiana rustica) para fumarlos como puros en ceremonias religiosas (22). En México, la
decocción de las ramas frescas mezcladas con Alka-Seltzer® se utiliza para la tos, dolores abdominales y
dolor de cuerpo (21). En Guatemala, mucha gente combina el pericón con Salvia Santa para aliviar el
malestar en el estómago y diarrea. Si es para el embotamiento, se utiliza un tallo de pericón con hojas de
naranja, para sacar el aire (29). En Honduras, para el dolor de vientre se prepara la decocción del pericón
mezclado con romero y canela (19).
4. Otros usos populares: El humo de las hojas y flores se utiliza para ahuyentar mosquitos (1,2). En los
países de clima templado se utiliza las flores y la planta entera como planta ornamental en jardines (24).
Los nativos huicholes lo utilizan como un baño aditivo para fragancia y reumatismo; como un té para la
relajación, sueño y enfermedades leves; como un jugo para el alivio de la comezón y dolor de picaduras de
insectos; y como un pesticida y repelente de insectos (p. e. mosquitos). Las flores y hojas se usan para
aromatizar los elotes cocidos (6,13,14).
V. DROGA VEGETAL
1. Denominación: Partes aéreas de T. lucida
2. Definición: Partes aéreas secas
3. Obtención: Las plantas se cortan completas a 5 cm del suelo, luego se lavan con agua potable. El
lavado se realiza con el propósito de eliminar tierra y materiales extraños, luego de esto se coloca el
material vegetal en canastas plásticas caladas, para eliminar el exceso de agua (23,26).
4. Descripción macroscópica: Color: hojas verdes y flores amarillas. Olor: dulce, agradable, suave,
aromático fuerte a anís. Sabor: aromático, algo picante. Aspecto: hojas y flores enteras, polvo grueso o
partículas grandes (30,31).
5. Descripción microscópica de la droga: No hay información.
6. Composición química La planta contiene tres resinas acídicas, ácido gálico, taninos, glucosa,
dextrina, pectina, goma, sales minerales, metoxicumarinas, esdragol, derivados de ácido ciánico,
cumarinas, herniarinas y en el aceite esencial se encuentra el anetol (13,20).
La raíz contiene bitienil, 2-2’:5-(but-3-en-1-inil) estragol, fenilpropanoides y aceites esenciales (21).
Las hojas y flores contienen: a) aceites esenciales como limoneno (16.5%), β-ocimeno (14%), β-cariofileno
(28%), mirceno (4-5%), alilanisol esdrago, éter metílico de eugenol, tagedona, dihidrotaagetona, tetrahidro-
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tagetona, inalol, estragol fenilpropanoides; b) alcaloides cuaternarios; c) flavoloides como quercetagetina,
patuletina, patuletin-3-arabinosil-galactósido, quercetagetin-3-O-arabinosil-galactosido, rhamnetina Iso:3-
arabinosilgalactosido y rhamnetin iso:7-O-β-D-glucosido; d)saponinas; e) taninos; f) Otros como leuco-
antocianinas, acido gálico, poliacetilenos, glucósidos cianogénicos, cumarinas, derivados de tiofeno, poli-
acetilenos, goma, dextrina, grasas, pectina, tres resinas acídicas y sales minerales (1,13,21,32).
Las semillas contienen un alcaloide no identificado (13).
7. Monografía de control de calidad:
7.1 Identificación
7.1.1 Descripción macroscópica: Color: hojas verdes y flores amarillas. Aspecto: hojas y flores enteras,
polvo grueso o partículas grandes (30,31).
7.1.2 Descripción microscópica: No refiere
7.1.3 Características organolépticas: Olor: dulce, agradable, suave, aromático fuerte a anís. Sabor:
aromático, algo picante (30,31).
7.2 Ensayos
7.2.1 Características fisicoquímicas:
No debe contener más del 10% de materia extraña y órganos deteriorados.
No debe presentar: Partes de otras plantas, insectos o larvas, partículas de tierra, arena y otras materias.
Humedad: Por método gravimétrico no debe contener más del 10%
Cenizas totales: Por incineración en mufla a 700-750ºC, no debe pasar el 9% (33).
7.2.2 Análisis microbiológico: El producto en cualquiera de sus presentaciones no contendrá micro-
organismos patógenos o sus toxinas. Coliformes totales <104 NMP, coliformes fecales <10
3 NMP, E. coli
<102 NMP, y recuento de mohos y levadura <10
4 UFC/mL (33).
7.2.3 Contaminante: No deberá contener contaminantes químicos o biológicos en cantidades que
sobrepasen los límites máximos aceptados por la unidad sanitaria.
8. Ficha técnica de seguridad y eficacia
8.1 Toxicología: La infusión no es tóxica hasta 50g/kg. La DL50 de los extractos con actividad
espasmolítica por vía oral es mayor a 100mg/kg de peso. El extracto alcohólico provoca en algunas
personas síntomas cardiovasculares. El -tertienilo puede ser fototóxico en presencia de la luz ultravioleta
cercana y producir una fotodermatitis por un mecanismo que no depende de la peroxidación lipídica de
membrana (1,13,14). Popularmente se le considera una planta abortiva. La tintura produce en algunas
personas problemas en los latidos del corazón (14,26).
8.2 Contraindicaciones: contraindicado su uso durante el embarazo
8.3 Dosis: Infusión (3-5g/taza) o tintura 1:8 (2-4mL/taza) (34).
9. Datos farmacológicos
Estudios in vitro, han reportado que relaja la musculatura lisa intestinal y traqueal. En mecánica respiratoria
sólo la menor dosis (10mg/kg. IV) produjo cambios compatibles con la broncodilatación como aumento del
flujo aéreo traqueal, el volumen ventilatorio y el volumen respiratorio por minuto, disminución de la
presión transpulmonar, la resistencia pulmonar y aumento de la adaptabilidad pulmonar, pero únicamente el
aumento de volumen ventilatorio fue estadísticamente significativo (11,35).
Diversos extractos de hojas tienen actividad espasmolitica in vitro en ratas, la DE50 es de 1.88g para el
extracto bencénico. Un modelo experimental en conejos el extracto acuoso produce cambios compatibles
con broncodilatación: disminuye levemente la presión transpulmonar, aumenta la adaptabilidad dinámica,
produce leve taquicardia caída de la presión venosa central, leve taquipnea, incremento de flujo aéreo
traqueal, pero no en forma de dosis dependiente. Estudios preliminares indican que la decocción de hojas
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tiene cierta actividad inmunomoduladora en ratones, medida por un aumento en la población de linfocitos y
en los títulos de anticuerpos séricos. Las hojas han mostrado actividad contra nematodos (36).
El efecto del extracto clorofórmico de las hojas en contracciones espontáneas e inducidas con acetilcolina
del músculo liso de yeyuno de conejo fue estudiado in vitro. La inhibición fue dosis-dependiente y fue
revertida al eliminar el extracto del medio. La cinética de la inhibición fue diferente a aquella de nor-
adrenalina o sulfato de atropina. La forma molecular de los compuestos activos en el extracto clorofórmico
crudo es lipofílico, bastante estable en condiciones concentradas, pero no una vez esta fue disuelta (20).
Un estudio determinó que, la capacidad espasmolítica de seis diferentes extractos de T. lucida (pericón)
frente a acetilcolina como espasmogénica de referencia, es estadísticamente similar, exceptuando el extracto
acuoso, que presentó la menor actividad espasmolítica (6).
En un ensayo farmacológico, las hojas y tallos mostraron depresión del sistema nervioso central y alguna
actividad hipotensora (2). Además se ha demostrado que es depresor del sistema nervioso central y tiene
acgtividad antiinflamatoria, antiespasmódica gastrointestinal y para aliviar dolores de estómago (16).
Estudios in vivo, han revelado que, el extracto presenta actividad antibacteriana in vivo contra la infección
producida por S. dysenteriae 1 en córnea de cobayo; similar a la obtenida con el antibiótico de referencia
(cloranfenicol al 1%) (2,22).
La maceración etanólica de las hojas flores es activa contra enterobacterias (E. coli enteropatógena (ECEP),
S. dysenterie, S. flexneri, S. typhi y S. pyogenes y poco activa contra N. gonorrhoea). El extracto acuoso es
activo contra ECEP, S. enteritidis, S. typhi, S. dysenteriae, S. flexneri, S. pneumoniae y S. pyogenes. El
estudio del espectro de inhibición del extracto etanólico demostró inhibición de 60% de cepas de P.
auruginosa y 15% de cepas de S. typhi. El tamizaje de la actividad vibriocida in vitro demostró que la
maceración etanólica inhibe V. cholerae, la mayor actividad se extrajo con n-hexano y la CIM es de 10mg.
Estudios de la actividad antifúngica demuestran que la maceración etanólica de hojas y flores inhibe el
crecimiento C. albicans, C. krusei, C. parapsilosis y C. stellatoidea (CIM: 1-2mg) (16,17,21,34,35,37,38).
Otro estudio determinó la actividad bacteriana con once cepas de bacterias y C. albicans, por medio de
extractos de acetato de etilo en donde se aislaron 5,5,4’ trimetroxiflavona (C18H16O) el cual presentó
actividad antimicrobiana en las once bacterias estudiadas pero no en C. albicans (9,39).
El extracto acuoso de las diferentes partes fueron altamente deletéreos para los nemátodos parásitos de
plantas como M. incognita, Rotylenchulus reniformis, Tylenchorhynchus brassicae, Hoplolaimus indicus,
Helicotylenchus indicus y Tylenchus filiformis. La mortalidad de estos nemátodos aumentó con el
incremento en la concentración de los extractos y en el período de exposición. La nidada de los juveniles de
M. incognita fueron también fuertemente inhibidos por los extractos. La inhibición en la nidada aumentó
con el incremento en la concentración de los extractos. Los extractos de las flores causaron la mortalidad
más alta en los nematodos y en la inhibición en la nidada de los juveniles, seguido por los extractos de
semillas, hojas y raíces (8,40).
Se demostró que el compuesto 5,7,4’-trimetoxiflavona es el responsable de la actividad contra S. boydii, S.
aureus, S. epidermidis, P. aeruginosa, B. subtilis, S. lutea y cuatro cepas de V. cholerae (36).
Del extracto metanólico de las hojas se aisló un compuesto de la familia de los flavonoles glicosilados y dos
ácidos fenòlicos, utilizando la prueba con DPPH (41).
El aceite esencial (1 μL) presentó actividad contra B. subtilis, C. albicans, E. coli y S. typhi, citotoxicidad
contra A. salina (DL50: 0.16mg/mL), actividad insecticida contra larvas de A. aegypti (CL100: 0.124mg/mL)
en el primer y segundo estadío, y hasta el tercer estadío contra A. albimanus. Los extractos etanólicos no
presentaron actividad a una concentración de 0.1mg/mL contra bacterias y levaduras, no mostraron
citotoxicidad contra A. salina a 0.5mg/mL, y tampoco fueron activos contra larvas de A. aegypti y A.
albimanu (34). El extracto etanólico no mostró actividad contra C. jejuni (16).
El extracto seco presenta los mejores rendimientos de la actividad antioxidante, fenoles totales y TDAC con
los distintos parámetros de medición. Se determinó que es rica en flavonoides, cumarinas y monoterpenos,
lo que les confiere además un alto potencial de ser utilizadas como pigmentos y aromas naturales (30).
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El extracto acuoso reduce significativamente la inmovilidad y aumenta el nado sin afectar la conducta
escalatoria en el modelo del nado forzado en rata a dosis de 10 mg/kg/día, demostrándose así la actividad
antidepresiva (18).
El aceite esencial ha demostrado actividad repelente contra Sitophilus zeamais con una dosis de 0.065
µL/cm (3).
VI. REFERENCIAS
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38. Zavala C. Inhibición in vitro de Streptococcus pyogenes por extractos vegetales de Bombax ellipticum (árbol
Señoritas), Solanum mammosum (chichitas de Esquipulas), Bougainvillea glabra (buganvilia), Adiantum capillus-
veneris (culantrillo), Sida rhombifolia (escobillo), Plantago major (llantén), Solanum americanum (macuy),
Tagetes lucida (pericón), Pluchea odorata (siguapato) y Physalis pubescens (miltomate) usadas en el tratamiento
de afecciones respiratorias. Tesis Química Farmacéutica. Facultad de CCQQ y Farmacia, USAC. Guatemala.
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41. Aquino R et al. An extract of Tagetes lucida and its phenolic constituents as antioxidants. Journal of Natural
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42. Zamora-Martínez MC, Pola CNP. Medicinal plantas used in some rural populations of Oaxaca, Puebla and
Veracruz, Mexico. Journal of Ethnopharmacology, 1992, 35(3): 229-257.
Página 119 de 130
Anexo 9. Ternstroemia tepezapote Schlect. & Cham.
(Theaceae)
I. DENOMINACIÓN, SINÓNIMOS Y EQUIVALENCIAS
1. Denominación: Flor seca de Ternstroemia tepezapote Schlect.
& Cham (1-5,6).
2. Sinónimos: Mokofua seemannii (Triana & Planch.) Kuntze
(Flora de Panamá), M.okofua tepezapote (Schltdl. & Cham.) Kuntze,
Taonabo oocarpa Rose, T. seemannii (Triana & Planch.) Standl., T.
sphaerocarpa Rose, T. tepezapote (Schltdl. & Cham.) Szyszyl.,
Ternstroemia hemsleyi Hochr., T. hemsleyi var. dentobracteata
Hochr., T. impresa Lundell, T. oocarpa (Rose) Melch., T. seemannii
Triana & Planch.T. seleriana Loes, T. sphaerocarpa Melchior (6).
3. Nombres vernáculos: Baratillo, trencillo, chucul, hualicuc, uixlilil-caax, pañol, chique, roble, river
craboo, trompillo, hierba del cura, tilo, flor de tila, tila estrella, palo huaco. (1-7).
4. Partes usadas: Flores y frutos. Se emplean frescas o secas (7).
II. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Arbusto o árbol, algunas veces 15m de alto, con un tronco de 15cm o más de diámetro. Hojas oblongo-
ovadas u oblongo-oblanceoladas, 7-13cm de largo, principalmente 3-4cm de ancho, obtusas o redondeadas
en el ápice o algunas veces subagudo, cuneadas o atenuadas en la base, enteras o levemente crenuladas, los
nervios inconspicuos en ambas superficies, algunas veces impresas arriba. Pedicelos 1.5-2.5cm de largo,
bractéolas dos, desiguales, ampliamente ovadas o suborbiculares, 2-3mm de largo. Sépalos desiguales, los
más externos suborbiculares, alrededor de 8mm de largo, glandular-lenticulados, frecuentemente cons-
picuos o algo enteros, pétalos rosado-blancuzcos, lanceolados u ovados, 8mm de largo, agudos, unidos
hasta en la mitad de su longitud. Estambres cerca de 50 y 2-seriadas. Ovario bilocular, 4-5 ovulado, el estilo
6-7mm de largo, el estigma puntiforme. Fruto cónico u ovoide cónico, 1-2cm de largo, 1-1.5cm de ancho en
la base (6).
III. DATOS AGROTECNOLÓGICOS
1. Distribución y hábitat: Común en bosques semicaducifolios alterados y sabanas de pinos, bosques
mixtos, húmedos, lluviosos o bosques de pino, algunas veces en suelos de piedra caliza; encontradas
naturalmente en bordes de zonas ecológicas, pero rara vez introducidas en zonas de bosques perennes
tropicales. Se distribuye en una altitud que va de 3,150m para abajo.
Se reporta para el sur de México, Guatemala (Petén, Alta Verapaz, El Progreso, Izabal, Zacapa,
Chiquimula, Jalapa, Santa Rosa, Guatemala, Suchitepéquez, Huehuetenango, Chimaltenango, Quiché,
Sololá), Belice, El Salvador, Honduras, Nicaragua, Panamá (1,6,8).
Crece sobre un suelo franco arcilloso de baja fertilidad natural. El área que habita corresponde a la zona de
vida de bosque húmedo subtropical (templado), en las que prevalece un clima que se caracteriza por recibir
un importante aporte de las nubes que frecuentan la zona y que contribuyen a formarlo y a que promedie
una temperatura anual de 16.9°C y un valor anual de humedad relativa por arriba del 80% (3).
2. Cultivo: Inicia en el mes de febrero a mostrar actividad de diferenciación de hojas y botones florales
en los ápices de rama de la mayoría de arbustos, y en forma aislada pueden formarse en los meses de julio,
agosto y octubre. La etapa en la que los frutos empiezan a alcanzar su madurez coincide con las últimas
semanas del año (3).
IV. USOS ETNOMÉDICOS O TRADICIONALES
1. Usos medicinales: En Huehuetenango, la corteza se emplea como uno de los numerosos remedios
para mordedura de serpientes. En Honduras se utiliza para los nervios e insomnio (3).
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El cocimiento se utiliza como calmante de los nervios. Un uso más generalizado es para el tratamiento de
enfermedades del corazón y los nervios. T. pringlei se usa para tratar los nervios y el insomnio. En
Michoacán, México, se usa para dolores reumáticos. En Jalisco, se recomienda contra la tos. Otras formas
de preparación incluyen las hojas, que son aplicadas en baños (tópicos) (5,7,9).
2. Formas de preparación
Corteza: La decocción se emplea como uno de los numerosos remedios para mordedura de serpiente.
Flor: El cocimiento de flor de T. sylvatica se utiliza como calmante de los nervios. El cocimiento de T.
pringlei con otras plantas se recomienda contra la tos (7,9).
3. Uso en combinación con otros ingredientes: El fruto mezclado con toronjil morado (Agastache
mexicana), toronjil blanco (Agastache mexicana spp. xolocotziana) y toronjil azul y chino (Dracocephalum
moldavica), hinojo (Foeniculum vulgare), flor de manita (Chiranthodendron pentadactylon), flor de azahar
(Citrus spp.), pasiflora (Pasiflora spp.) y flor de plátano (Musa paradisiaca) se utiliza para el tratamiento
de enfermedades del corazón y de los nervios. Otra combinación utilizada para el tratamiento anterior es
fruto de trompillo (Ternstroemia spp.), raíz de valeriana (Valeriana spp.), azahar (Citrus spp.), hinojo
(Foeniculum vulgare) y los tres toronjiles. Dado que esta planta se considera de naturaleza caliente, se
emplea con otras plantas de diferentes características para obtener compuestos templados para el
tratamiento de enfermedades de los nervios y del corazón (5).
V. DROGA VEGETAL
1. Denominación: Flor T. tepezapote Schlect. & Cham.
2. Definición: Flor seca
3. Obtención: No hay información disponible
4. Descripción macroscópica: No hay información disponible
5. Descripción microscópica de la droga: No hay información disponible
6. Composición química No hay información disponible
7. Monografía de control de calidad:
7.1 Identificación
7.1.1 Descripción macroscópica: No refiere.
7.1.2 Descripción microscópica: No refiere
7.1.3 Características organolépticas: No refiere.
7.2 Ensayos
7.2.1 Características fisicoquímicas:
No debe contener más del 10% de materia extraña y órganos deteriorados.
No debe presentar: Partes de otras plantas, insectos o larvas, partículas de tierra, arena y otras materias.
Humedad: Por método gravimétrico no debe contener más del 10%
Cenizas totales: Por incineración en mufla a 700-750ºC, no debe pasar el 9% (10).
7.2.2 Análisis microbiológico: El producto en cualquiera de sus presentaciones no contendrá micro-
organismos patógenos o sus toxinas. Coliformes totales <104 NMP, coliformes fecales <10
3 NMP, E. coli
<102 NMP, y recuento de mohos y levadura <10
4 UFC/mL (10).
7.2.3 Contaminante: No deberá contener contaminantes químicos o biológicos en cantidades que
sobrepasen los límites máximos aceptados por la unidad sanitaria.
8. Ficha técnica de seguridad y eficacia
8.1 Toxicología: No hay información disponible
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8.2 Dosis: No hay información disponible
9. Datos farmacológicos:
La infusión de T. pringlei, hecha con la flor, ejerce acción constrictora sobre el músculo liso vascular de
rata, así como en la aorta; en la vejiga conduce a un aumento en las contracciones. En el intestino produce
un aumento en la motricidad intestinal con evidente aumento del tono; en aurícula aislada solo a dosis
elevadas se observó moderado aumento en la amplitud de la contracción. El corazón prefundido de rana se
observó un ligero aumento en la contracción (9).
En el norte de México se conoce una planta de la misma familia llamada Ternstroemia pringlei, a la cual se
le realizaron estudios para evaluar sus efectos sedantes. Con la utilización del extracto acuoso de la fruta se
ha comprobado por medio de una metodología utilizada en ratas, que esta planta si cumple con la actividad
sedante, pero también demostró interactuar de forma compleja con drogas depresoras del sistema nervioso,
por lo que puede representar una advertencia del uso de esta planta de manera concomitante con otras
drogas neuroactivas (2).
VI. REFERENCIAS
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9. Argueta A. Atlas de las plantas de la medicina tradicional mexicana. Instituto Nacional Indigenista, México,
1994, pp. 1336
10. Departamento de Control de Calidad; Laboratorio de Productos Naturales Farmaya, S.A. Certificados de Control
de Calidad de Materia Prima Vegetal. Guatemala, 2007.
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Anexo 10. Valeriana prionophylla Standl
(Valerianaceae)
I. DENOMINACIÓN, SINÓNIMOS Y EQUIVALENCIAS
1. Denominación: Rizoma seco de Valeriana prionophylla Standl
(1-4).
2. Sinónimos: Valeriana pumilo Standl. & L.O. Williams, V.
skutchii Standl (3-5).
3. Nombres vernáculos: Valeriana, Raíz de gato (1,2).
4. Partes usadas: Rizoma (1,2,6-10).
II. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Hierba perenne erecta, a menudo bifurcada, raíces olorosas, los tallos de 10-80cm de de alto,
esparcidamente pilosos o casi glabros, los nudos pilosulosos. Hojas predominantemente basales, simples,
usualmente numerosas y aprisionadas, algunas cespitosas, oblongo-lineares a espatuladas, la mayoría de 3-
30cm de largo y 0.5-3cm de ancho, obtusas, atenuadas hacia la base, subpeciolar, los márgenes serrados,
serrado-dentado, crenada o raramente entera, usualmente ciliada, glabra o pilosulosa, hojas caulinares 2-3
pares, principalmente de 2-20cm de largo, usualmente sésiles y envueltas en la base, algunas veces corto-
pecioladas. Inflorescencia largamente pedunculada, las flores numerosas dispuestas en un dicasio agregado,
densa o difusa. Brácteas lineares. Limbo del cáliz con 9-11 segmentos exsertos, las anteras aprisionadas 4-
lobadas, la teca sulcada. Estilo exserto. Aquenios de 2-3mm de longitud, lisos o transversalmente ruguloso,
glabro o pilosulosos, la parte adaxial con costillas usualmente conspicuas (4).
III. DATOS AGROTECNOLÓGICOS
1. Distribución y hábitat: Nativa de Guatemala. Se ha reportado para México, Guatemala (se encuentra
en altitudes de 2,100-4,200msnm en Chimaltenango, Guatemala, Huehuetenango, Quetzaltenango,
Sacatepéquez, San Marcos, Sololá y Totonicapán), Costa Rica, Panamá, Bolivia (3-5).
2. Cultivo
2.1 Suelo: La valeriana no es selectiva en cuanto al tipo de suelo; media vez tenga suficiente provisión de
agua y nitrógeno. Aunque en forma natural se encuentra en lugares rocosos, en suelos calizos. Bajo cultivo
crece mejor en suelo franco arcilloso (11).
2.2 Clima: Crece en diversidad de climas cálido o frío, húmedo o seco y en una variedad de altitudes (aún
arriba de los 2,400m). Aunque su mayor optimización de componentes activos se obtienen en climas fríos
con temperatura promedio entre 16-18ºC (11,12).
2.3 Propagación: La propagación es realizada por medio de métodos vegetativos, generativos o
reproductivos. Puesto que la propagación vegetativa y reproductiva estimula la producción de botones
florales extra, reduciendo así el peso de la raíz, la siembra directa en el campo es el mejor método. La
germinación ocurre generalmente a las cinco semanas, en un porcentaje de 80-83%. Las semillas pierden su
viabilidad después de dos años. Las semillas necesitan agua constantemente. El contenido óptimo de
humedad en el suelo por cosecha total está entre 45-60%, sin embargo, el contenido de aceites esenciales es
más alto entre 30-45% de humedad (12).
2.3.1 Distancia de siembra: 70-80cm entre surco y 30-40cm entre plantas (11).
2.3.2 Plagas o enfermedades: No hay información; aunque se puede tomar la referencia de V. officinalis
L., en la que las principales enfermedades son producidas por Septoriosis y Oidium (1,2).
2.3.3 Fertilización: Agregar nitrógeno es importante para el éxito del cultivo de valeriana. Los
fertilizantes que contienen nitrógeno, fósforo y potasio pueden incrementar significativamente el peso de la
raíz y cosecha total. Un estudio mostró que un fertilizante nitrógeno-potasio incrementa el contenido de
valtrato en un 10% en comparación con las no fertilizadas con este abono. Otro grupo determinó que la
relación óptima de estos nutrientes es N:P2O5:K2O, 1:0.75:1 (12).
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Prefiere un tipo de suelo con un pH neutro. Ni los niveles en el contenido de aceites esenciales y
valepotriatos se ven influenciados al variar las condiciones de suelo, aunque los niveles de valepotriato
varían dependiendo del suplemento nutritivo (12). Se ha comprobado que la fertilización orgánica con base
en excrementos animales es efectiva (11).
3. Cosecha: La planta se cosecha a los dos años, se extraen los rizomas en otoño, se lavan y secan
inmediatamente (en una secadora u horno) pero lentamente a temperaturas que oscilan entre los 40-50ºC.
Las raíces más largas son cortadas para reducir el tiempo de secado. Se esperan rendimientos de 12-
18ton/ha de raíces frescas, la pérdida de peso al secarlas es de 65% (1,11,12).
IV. USOS ETNOMÉDICOS O TRADICIONALES
1. Usos medicinales: En la medicina tradicional mexicana, guatemalteca y costarricense es ampliamente
usada en la forma de infusión acuosa, como sedante y antiespasmódico (13). La especie más estudiada es V.
officinalis, pero se ha demostrado que tiernen usos etnomédicos similares (1,2).
Los indígenas usan la raíz de Valeriana ceratophylla HBK en cocimiento ligero, tomado en ayunas para las
afecciones del sistema nervioso como irritabilidad de los nervios, insomnios, pesadillas, etc (14).
Valeriana officinalis se utiliza como sedante, ansiolítico, espasmolítico para el tratamiento de espasmos
gastrointestinales, tratamiento de la hipertensión, angina, palpitación, asma bronquial, cólicos hepáticos y
calambres menstruales, trastornos de ansiedad, anticonvulsivo, antibiotico, anodino, anticaspa, calmante,
carminativo, depurativo, expectorante, hepatoprotectora, hipnótica, sudorífica, tónica, etc. Varias revisiones
de aplicaciones antiguas de la valeriana indican que la raíz se utiliza para perturbaciones digestivas
crónicas, calambres estomacales, cólicos, diarrea, hinchamiento (especialmente cuando son causados por
estrés emocional, café, alcohol y abuso de nicotina), desórdenes de Grave, condiciones de excitabilidad
durante la menstruación, etc (1,2,11,15,16).
Valeriana edulis o valeriana mexicana es ampliamente usada para el tratamiento de insomnio y ansiedad.
Dioscorides mencionó varios miembros de la familia de la valeriana el cuál el recomendó para problemas
digestivos, flatulencia, nausea, hígado estancado y desordenes del tracto urinario. Los griegos también
usaron estas plantas como emenagoga, antitranspirante, antídoto para venenos, infecciones vaginales por
levadura (17).
2. Formas de preparación: Se utiliza en forma de infusión como sedante y antiespasmódico (13). La
raíz de V. officinalis se emplea generalmente en forma de tintura, debido al desagradable sabor de la
infusión. En caso de contracturas musculares se utiliza la tintura o decocción en forma de fricción sobre la
zona afectada. Las preparaciones en forma de tisana presentan ligera acción diurética. En el noreste de
México emplean infusiones de valeriana para combatir el alcoholismo y la drogadicción. La infusión y
tintura de raíz se usan oralmente para tratar afecciones nerviosas, catarro, fiebre, resfrío, reumatismo,
infección renal, problemas cardíacos y afecciones digestivas. La decocción de raíz se aplica tópicamente en
cataplasmas o compresas para curar contusiones, heridas, llagas y raspones, así como resolver tumores y
enfermedades de los ojos, administrada como enema se utiliza para tratar afecciones intestinales (1,2,15).
3. Uso en combinación con otros ingredientes: La infusión tiene un sabor desagradable, por lo que
suele agregarse algunas gotas de anís, menta y si se desea endulzarlo con miel. Suele agregársele otras
plantas sedantes como el toronjil o el tilo. Su uso más extendido es como sedante, inductor del sueño,
antiespasmódico y anticonvulsivante. En presencia de palpitaciones nerviosas suele prescribirse la
combinación de tres tinturas (pasiflora, valeriana y crataegus). Mezclando la raíz con aceite de oliva y
dejándola un tiempo en reposo, se aplica en casos de paperas en el oído del lado enfermo y por vía externa,
friccionando sobre el área afectada. En el noreste de México junto con hojas de lechuga se preparan
infusiones para combatir migrañas y neuralgias (15).
V. DROGA VEGETAL
1. Denominación: Rizoma V prionophylla Standl.
2. Definición: La droga incluye fragmentos de raíz, rizoma y estolones, desecados y reducidos a trozos
irregulares. Según los resultados obtenidos hasta el momento, la hoja desecada tamizada en mesh No. 5 de
color verde-blancuzco a verde-pardo, también puede utilizarse como materia vegetal (18).
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3. Obtención: La planta se cosecha a los dos años de cultivo, se extraen los rizomas en otoño, se lavan y
secan inmediatamente. Las raíces más largas son cortadas para reducir el tiempo de secado.
4. Descripción macroscópica: La raíz principal pivotante cuando está entera y fresca, puede medir hasta
54.0 cm de largo y 2.6 cm de diámetro en su parte media, con olor moderado y en corte transversal presenta
una cavidad central con trabéculas. Las hojas frescas están divididas a lo largo por una gruesa nervadura
central, con forma de espátula y bordes crenados. Sus dimensiones de 0.8-30.0 cm de largo y de 0.7-4.9 cm
de ancho (19).
5. Descripción microscópica de la droga: Con la técnica de diafanizado en las hojas se observó la
venación de tipo reticular, la nervadura central dividida en venas secundarias que se unen y de las que salen
venas terciarias y cuaternarias. En el haz se observa la epidermis con paredes celulares gruesas de tipo
biestratificada, presencia de dos tipos de tricomas, de tipo glandular pluricelular, de cuatro células en la
parte globular y una célula en la parte basal y de tipo tector unicelular, con estomas de tipo anomocítico y
anisocítico. En el envés de la hoja numerosos estomas anisocíticos, presenta poca cantidad de tricomas
glandulares en comparación con el haz. Las células endodérmicas con paredes tangenciales sinuosas, y las
células del parénquima con numerosas granulaciones en el interior. Con la técnica de disociado se observan
estructuras de la raíz primaria, el rizoma y las raicillas secundarias. Se observan células de la epidermis
amorfas, casi rectangulares; células del parénquima casi cuadrangular, gránulos de almidón de forma
redondeada con un hilio o hendidura central; elementos de los vasos del xilema reticulados y extremos
perforados, elementos cribosos del floema, fibras xílicas y traqueidas en grupos. En cortes transversales se
observo: cilindro vascular de tipo poliarca (2, 3 o 4 ramales) en la raíz principal y el rizoma con médula
central. Se realizó una plantilla con caracteres particulares (19).
6. Composición química: Las hojas presentan ácido hidroxivalerénico y Las flavonoides en cantidades
aproximadas de 1.12±0.43%. Los rizomas presentan ácido hidroxivalerénico (mayor concentración que en
la hoja), ácido valerénico, isovaltrato, acevaltrato, didrovaltrato, homo:didrovaltrato, iso-valeroxi-
hidroxi:didrovaltrato, valtrato, dihomo:valtrato, homo:valtrato, iso:valtrato, iso:homo:valtrato, prinsepiol-
4-O-β-D-glucopiranósido, fraxiresinol-4' O-β-D-glucopiranósido, 8-hidroxipironesinol-4'-O-β-D-gluco-
piranósido, 8-hidroxipinoresinol y prinsepiol (6,8,10,13).
Se ha determinado la presencia de aceite esencial con un promedio de (0.1±0.15%) para las hojas y de
(0.41±0.28%) para los rizomas. Posee una composición compleja que incluye ácido isovalérico, ácido-3-
metilvalérico, ácido valérico, isovalerato de alilo, ácido 3-metil-2-oxovalérico, hexili de sesquiterpenos
(como α, β y transcariofileno, β-pineno, camfeno acetato de bornilo, farnesol, limoneno y β-bisaboleno);
ácidos carboxílicos, hidrocarburos, alcoholes y cetonas, entre otros (18).
7. Monografía de control de calidad
7.1 Identificación
7.1.1 Descripción macroscópica: La droga vegetal seca presenta trozos de color pardo-amarillento en el
exterior y amarillo claro a blanquecino en el medio, de olor característico provenientes de raíz y rizoma. Si
el color es muy oscuro indica la degradación de algunos metabolitos de interés por una técnica inadecuada
de secado. Las raíces auxiliares cilíndricas y de unos 0.3 cm de diámetro pueden estar presentes (19).
En la droga seca proveniente de las hojas, se observan fragmentos de hojas de diversos tamaños, de color
verde-amarillento o blancuzco a verde pardo, polvo amarillento, fragmentos de pedúnculos florales y de
nervaduras centrales de las hojas enrolladas sobre sí mismas. El olor es más penetrante y picante en las
raíces que en las hojas y se intensifica con la humedad y el transcurso del tiempo (19).
7.1.2 Descripción microscópica: No refiere
7.1.3 Características organolépticas: No refiere.
7.2 Ensayos
5.2.1 Características fisicoquímicas:
No debe contener más del 10% de materia extraña y órganos deteriorados.
No debe presentar: Partes de otras plantas, insectos o larvas, partículas de tierra, arena y otras materias.
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Humedad: Por método gravimétrico no debe contener más del 10%
Cenizas totales: Por incineración en mufla a 700-750ºC, no debe pasar el 9% (20).
5.2.2 Análisis microbiológico: El producto en cualquiera de sus presentaciones no contendrá micro-
organismos patógenos o sus toxinas. Coliformes totales <104 NMP, coliformes fecales <10
3 NMP, E. coli
<102 NMP, y recuento de mohos y levadura <10
4 UFC/mL (20).
5.2.3 Contaminante: No deberá contener contaminantes químicos o biológicos en cantidades que
sobrepasen los límites máximos aceptados por la unidad sanitaria.
8. Ficha técnica de seguridad y eficacia
10.1 Toxicología:
La administración oral a ratones del elixir de una mezcla vegetal que incluye V. prionophylla no mostró
signos de toxicidad a 1,200mg/kg durante 8 días (DL50 >1,200mg/kg). En 28 pacientes con insomnio que
tomaron tintura 1:5 no se observaron efectos secundarios, ni en 20 pacientes con cáncer de mama que
presentaban ansiedad que lo consumieron por 40 días (21-23).
Puede causar somnolencia, por lo no se recomienda la operación de maquinaria ni conducir un vehículo
cuando se encuentre en este estado. Aunque no se han demostrado clínicamente la interacción entre la
valeriana y el alcohol, como una medida preventiva no se deben consumir con bebidas alcohólicas o de
forma conjunta con otros sedantes. Se han reportado efectos adversos menores, asociados con el uso
crónico de rizoma e incluye dolor de cabeza, excitabilidad, ansiedad e insomnio (24).
10.2 Dosis
Por lo datos preliminares puede usarse en forma similar a V. officinalis. Raíz o rizoma seco, 2-3g de materia
vegetal por taza de infusión oral, 1-5 veces al día, sin rebasar 10g al día. Tintura (1:5, etanol al 70%), 0.5-1
cucharadita (1-3mL), una o varias veces al día (24).
Dosis muy elevadas pueden causar bradicardia y arritmias; así como disminución de la motilidad intestinal.
La medida de primeros auxilios por sobredosificación que se recomienda es lavado gástrica con carbón
activado y sulfato de sodio. Dosis veinte veces por encima de las recomendadas han reportado síntomas
ligeros que se resuelven en 24 horas (24).
9. Datos farmacológicos
9.1 Propiedades atribuidas:
La actividad sedante, hipnótica y ansiolítica podría deberse a la interacción del ácido valérenico con los
canales GABA A (25).
Los valepotriatos presentan presentan actividad espasmolítica, sedante y anticonvulsiva; así mismo se
sugiere, que interaccionan con sustancias con esqueleto químico similar presentes en el aceite esencial y de
ésta forma actúan sobre el sistema nervioso (12).
Un estudio comprobó que los preparados de raíces secas almacenadas por largo tiempo tienen un efecto
citotóxico menor que los preparados de raíces frescas. Esto se debe a que en los preparados frescos hay una
gran cantidad de valepotriatos; mientras que en las raíces almacenadas hay más compuestos que son
productos de la degradación de los valepotriatos: baldrinales, homobaldrinales, etc.) (26).
Debido al efecto citotóxico de los valepotriatos, se realizó un estudio para determinar los efectos de una
administración prolongada de éstos en ratas preñadas y sus crías. Se determinó que los valepotriatos
empleados indujeron algunas alteraciones después de la administración por ruta intraperitoneal, pero dosis
dadas oralmente fueron inocuas en las ratas preñadas y sus crías (27).
Al emprender la búsqueda de las sustancias activas de la valeriana, se encuentra que los epoxiridoides
(valepotriatos) y sus productos de degradación, los baldrinales, y los terpenos no-volátiles, como el 17 ácido
valerénico y sus derivados, no son necesariamente los responsables de la acción farmacológica observada,
debido a que la acción depresiva central de los valepotriatos, valeranona y del aceite esencial, no demuestra
una reducción en el recambio de glucosa cerebral en ratas. La potencia sedante de éstos compuestos es baja
(>30mg/kg, en ratones). Los valepotriatos en medio acuoso rápidamente se degradan, produciendo
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baldrinales, que son químicamente reactivos y pueden formar polímeros, desapareciendo de los extractos.
Las raíces y rizomas poseen grandes diferencias en cuanto a su constitución química. El estudio de los
flavonoides ha cobrado importancia, ya que se ha demostrado su actividad sedante e inductora del sueño. La
linarina inicialmente aislada de V. wallichii e identificada en V. officinalis, indicando que ésta y su aglicona,
acacetina, poseen actividad sedante e inductora del sueño. Su mecanismo de acción aún no está establecido,
ya que no son ligandos para el sitio de unión a las benzodiazepinas en el cerebro de ratones (28).
9.2 Farmacología experimental
Los compuestos, aisaldos prinsepiol-4-O-β-D-glucopiranósido, 8-hidroxipironesinol-4'-O-β-D-glucopira-
nósido, 8-hidroxipinoresinol y el prinsepiol (5), fueron evaluados para determinar sus propiedades
antioxidantes y actividad vasorelajante. Las agliconas 4 y 5 desplegaron una potente actividad antioxidante.
Además, la aglicona 4 mostró una alta actividad vasorelajante comparado con los compuestos 1, 3 y 5 en
conjunto (13).
Barrios en 2007 realizó un estudio en el que se determinó la acción sedante e hipnótica del rizoma en
combinación con hojas de Passiflora edulis, flor con bráctea de Tilia platyphyllos o pericarpio de Citrus
aurantium en infusión. A través de tres pruebas se determinó la actividad sedante, siendo estas la placa
agujereada, rota rod y chimenea; mientras que para evaluar la actividad hipnótica se utilizó la prueba de
potenciación de sueño. Para cada una de éstas se utilizaron 25 ratones albinos machos con un peso de 20-
23g, asignando 5 ratones por lote experimental. Los resultados indican que la combinación V. prionophylla/
P. edulis (1000mg/kg) no ejerce un efecto sedante mayor al observado en el uso aislado de valeriana y para
el efecto hipnótico, ejerce una acción contraria al combinarlas y utilizarlas como tal en ratones,
disminuyendo el tiempo de sueño. La combinación V. prionophylla/T. platyphyllos (1000mg/kg) presenta
un efecto antagónico notorio en todas las pruebas, sin embargo, a dosis de 750mg/kg, esta incompatibilidad
no es tan evidente; es decir, ejerce un efecto sedante e hipnótico menor al observado en el uso aislado de
valeriana en ratones. Por último, la combinación V. prionophylla/C. aurantium en cualquiera de las dosis,
no ejerce un efecto sedante e hipnótico mayor al observado en el uso de valeriana aislada en ratones (7).
9.3 Farmacología clínica: Se utiliza como un sedante medio que promueve el sueño y como una
alternativa de otros sedantes, como las benzodiacepinas, en el tratamiento de estados de excitación nerviosa,
ansiedad y transtornos de inducción del sueño. Entre los usos descritos en farmacopeas y sistemas tra-
dicionales de medicina, es de utilidad como espasmolítico del músculo liso gastrointestinal en trastornos de
origen nervioso (24,28).
VI. REFERENCIAS
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(valeriana) en combinación con hojas de Passiflora edulis (flor de la pasión), flor con bráctea de Tilia
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10. Riquett, D. Análisis por espectrofotometría de isovaltrato en extracto de hoja y raíz de Valeriana (Valeriana
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uso de plantas medicinales. Facultad de CCQQ y Farmacia. USAC, 2007.
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11. Ficha técnica agrotecnológica de Valeriana (en preparación).
12. Hobbs, C. Valerian. HerbalGram, 1989, 2:1:19-34.
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16. Circosta, C. et al. Biological and analytical characterization of two extracts from Valeriana officinalis. Journal of
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of Ethnopharmacology, 1994, 41:39-44.
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Anexo 11. RESUMEN DEL SEMINARIO DE INVESTIGACION DE TESIS:
“Actividad inhibitoria de la acetilcolinesterasa por extractos de ocho especies
vegetales nativas de Guatemala usadas en el tratamiento de afecciones nerviosas
Presentado por: Leonel López, Dayrin Ortiz, Armando Cáceres y María E. Paredes
Introducción: La presente investigación tuvo como objetivo evaluar por medio de
técnicas microcolorimétricas la actividad IACE que pueden presentar los extractos
diclorometá-nicos, metanólicos y aceites esenciales de 8 plantas nativas. Así como la
caracterización química de los extractos, mediante ensayos macro y semimicro aplicando
técnicas de separación como la TLC, determinándose la presencia de aceites volátiles,
alcaloides, cumarinas, flavonoides, antocianinas y taninos.
Materiales y Métodos: El material se colectó en cuatro regiones del país: zona norte-
altiplano (Alta Verapaz), norte-occidente (Chimaltenango), sur-occidente (Suchitepéquez)
y sur-oriente (Jalapa); realizando la colecta de materia vegetal en condiciones silvestres o
cultivadas y depositando un ejemplar de herbario en el Herbario del Laboratorio de
Productos Naturales Farmaya. Las especies colectadas fueron: Brugmansia candida Pers.
(florifundia), Cassia reticulata Wild. (barajo), Chaptalia nutans L. (valeriana), Erythrina
berteroana Urban (palo de pito), Pimenta dioica L. (pimienta gorda), Solanum nigrescens
Mart & Gal. (macuy), Vernonia deppeana Less. (suquinay), Wiganda urens var.
caracasana Ruiz & Pavón (chocón).
Los aceites esenciales se obtuvieron por hidrodestilación utilizando el equipo
Neoclevenger, según la Farmacopea Europea (2001). Del material vegetal se obtuvieron
dos extractos por percolación con disolventes de diferente polaridad (diclorometano y
metanol). El menstruo obtenido, se concentró a presión reducida a una temperatura
inferior a 45°C, en un evaporador rotatorio y luego se colocó en una desecadora.
La metodología de IACE se estandarizó en un intervalo de tiempo de 17 seg. Se hicieron
10 concentraciones del control positivo (eserina) con diluciones 1:2 a partir de 2000µM
(2000µM, 1000µM, 500µM…2.6µM). El límite de detección de la eserina fue en la
concentración 15.6µM, y la CI50 se detectó en 250µM. Se evaluaron 8 intervalos de
tiempo, y fue en el último intervalo (segundo 136) en donde se detectó la mayor
estabilidad en la cinética de la reacción enzimática. Por lo tanto, fue allí donde se
analizaron los resultados obtenidos del blanco, control y muestras.
En placas de microtitulación se colocaron 25µL de ioduro de AC 15mM, 125µL de
DTNB 3mM, 50µL de Tris-HCl pH8 con 0.1% albúmina de suero bovino y 25µL de
diluciones de cada extracto. Se midió 8 veces la absorción a 405nm cada 17 seg. Se
agregó 25 µL de ACE a cada pozo y se midió 8 veces la absorción. El valor de
absorbancia obtenido en cada muestra fue comparado con el blanco y control, que
evidenciaban el 0 y 100% de actividad inhibitoria respectivamente y de esta manera se
calculó el porcentaje de inhibición.
La caracterización fitoquímica se realizó por pruebas convencionales de tamizaje para
aceites volátiles, alcaloides, cumarinas, flavonoides, antocianinas y taninos, mediante
escala semimicro y TLC.
Resultados: La Tabla 1 muestra las 8 especies vegetales seleccionadas, el órgano,
número de herbario, lugar de colecta y georeferencia (Tabla 1, Fotografía 1).
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Tabla 1. Datos de colecta de las especies vegetales del estudio.
Fuente: datos experimentales
Fotografía 1. Fotografía de las especies estudiadas.
(A) Brugmansia candida, (B) Cassia reticulata, (C) Chaptalia nutans, (D) Erythrina berteroana, (E)
Pimenta dioica, (F) Solanum nigrescens, (G) Vernonia deppeana, (H) Wigandia urens var. caracasana
Material
Vegetal Órgano
No. de
herbario
Lugar de
colecta
Altura
(msnm)
Georeferencia
Brugmansia candida Flor 1089
Carretera entre
Chimaltenango y
Tecpán
2,029
14º38’55.5‖N
90º51’43.8‖O
Cassia reticulata Hoja 1101
Ecoparcela el
Kakawatal, Samayac,
Suchitepéquez
471
14º33’07.0‖N
91º28’04.0‖O
Chaptalia nutans Hoja y
Raíz 1084
Ecoparcela el
Kakawatal, Samayac,
Suchitepéquez
429
14º3305.8‖N
91°27’57.5‖O
Erythrina berteroana Corteza 1134 Carretera entre Santa
Rosa y Jalapa 466
14º13’30.9‖N
90º05’22.3‖O
Pimenta dioica Fruto Santa Cruz Verapaz,
Alta Verapaz 1,409
15º22’28‖N
90º25’50‖O
.
Solanum nigrescens Hierba 1111
Carretera entre
Chimaltenango y
Tecpán
2,040
14°38’00‖N
90º40’42‖O
Vernonia deppeana Hoja 1122
Ecoparcela el
Kakawatal, Samayac,
Suchitepéquez
471
14º33’06.7‖N
91º28’04.0‖O
Wiganda urens var.
caracasana Flor 1068
Carretera al volcán de
Acatenango 1,882
14º32’23.0‖N
90º50’43.1‖O
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Los mayores rendimientos con diclorometano fueron W. urens (7.7%), S. nigrescens
(5.8%) y C. reticulata (5.8%), y con metanol la raíz de C. nutans (20.3%), C. reticulata
(18.9%) y W. urens (13.7%). Únicamente la hoja de P. dioica posee aceite esencial
(2.6%).
En la Tabla 2 se observan los porcentajes de IACE de los extractos de las ocho especies
vegetales. Los valores fueron calculados al compararse la actividad obtenida respecto al
blanco. El que presentó mayor inhibición fue el extracto diclorometánico de W. urens var.
caracasana con un valor de 43%.
Tabla 2. Porcentaje de IACE de las especies vegetales a 1 mg/mL.
Fuente: datos experimentales
Caracterización química: La Tabla 3 presenta los resultados del tamizaje químico
realizado a los extractos. En ningún caso se identifica un patrón específico que defina a
un grupo químico característico de una especie y que justifique su comportamiento en
este estudio.
Tabla 3. Tamizaje fitoquímico de extractos diclorometánicos y metanólicos
Extracto Disolvente Aceites
volátiles
Alcaloides Cumarinas Flavonoides y
antocianinas
Taninos
B. candida CH2Cl2 + - - + ND
MetOH - + + + -
C. reticulata CH2Cl2 + + - + ND
MetOH - + - + -
C. nutans hoja CH2Cl2 + - + + ND
MetOH - + + + -
C. nutans raíz CH2Cl2 + + + + ND
MetOH - + + + -
E. berteroana CH2Cl2 + - - + ND
MetOH + + - + -
P. dioica CH2Cl2 + - - + ND
MetOH + + - + -
S. nigrescens CH2Cl2 + - - + ND
MetOH - + + + -
V. deppeana CH2Cl2 + - - + ND
MetOH - + + + -
W. urens CH2Cl2 + - - + ND
MetOH - + + + -
(-)= presencia, (-)= ausencia ND= No se determinó Fuente de datos: experimental
Extracto % de Inhibición
extracto diclorometánico
% de Inhibición
extracto metanólico
B. candida 15 3
C. reticulata 16 13
C. nutans hoja 14 -9
C. nutans raíz 29 22
E. berteroana 19 7
P. dioica 24 -3
S. nigrescens 7 1
V. deppeana 3 6
W. urens var. caracasana 43 11
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PARTE V.
V.1 Informe financiero