“como se hace un animal transgénico”
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“Como se hace un animal transgénico”
Dra. CONSTANZA CONTRERAS JURADOInstituto de Investigaciones Biomédicas CSIC-UAM
“De la Revolución Neolítica a la Revolución Transgénica”
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� INTRODUCCIÓN:
DEFINICIÓN,TIPOS, HISTORIA,
TECNOLOGÍA DEL DNA RECOMBINANTE
� CLONACIÓN VS TRANSGÉNESIS
� APLICACIONES
� TÉCNICAS
� COMO SE HACE UNA ANIMAL TRANSGÉNICO
ÍNDICE
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PHARMFARM BIOPHARMING PHARM
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ANIMAL MODIFICADO GENÉTICAMENTE: Animal en el
que se ha producido una modificación deliberada en
su genoma.
TIPOS DE MODIFICACIONES GENÉTICAS
•Eliminación de un gen endógeno
•Modificación de un gen endógeno
•Introducción de un nuevo gen
INTRODUCCIÓN
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TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
PROTEÍNA
GEN
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G A A T T C C T T A A G
G A A T T C
C T T A A G
A A T T
T T A A GEN
TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
Sitio de clonación
Resistencia antibiótico
Pro
mot
or
GF
P
VECTOR
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
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ANIMAL MODIFICADO GENÉTICAMENTE: Animal en el
que se ha producido una modificación deliberada en
su genoma.
TIPOS DE MODIFICACIONES GENÉTICAS
•Eliminación de un gen endógeno
•Modificación de un gen endógeno
•Introducción de un nuevo gen
“KNOCK-OUT”
“KNOCK-IN”
“TRANSGÉNICO”
INTRODUCCIÓN
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LUGAR DE EXPRESIÓN DEL TRANSGEN
-PROMOTORES UBICUOS
-PROMOTORES ESPECIFÍCOS
Nestina: sistema nerviosoKeratinas: epiteliosPit-1: células hipofisariasLCK: linfocitos TAlbúmina: hígadoLisozima: macrófagos
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CONTROL DE LA EXPRESIÓN DEL TRANSGEN
-PROMOTORES CONSTITUTIVOS
-PROMOTORES INDUCIBLES
Por hormonas Tamoxifen - Cre-LoxP
Tetraciclina tet-on/ tet-off
13bp 8bp 13bp
ATAACTTCGTATA - GCATACAT -TATACGAAGTTAT
LoxP --------- LoxP
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UN POCO DE HISTORIA…
1973 1977
E. Coli hSomastotatina
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19741982
1992
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Tracy Transgénica αααα1-antitripsina
Fibrosis quística
Megan y Moragclonadas Cél Madre
Dolly clonadaCél. diferenciadas
PollyMolly
Transgénicas Factor IX y clonada
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TRANSFERENCIA NUCLEAR
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APLICACIONES
� CIENCIA BÁSICA
� INDUSTRIAFARMACÉUTICAAGRÍCOLA
� BIOMEDICINAMODELOS DE ENFERMEDADESVALIDACIÓN DE MEDICAMENTOSXENOTRASPLANTES
� ZOOTECNIA
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APLICACIONES: CIENCIA BÁSICA
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APLICACIONES
� CIENCIA BÁSICA
� INDUSTRIAFARMACÉUTICAAGRÍCOLA
� BIOMEDICINAMODELOS DE ENFERMEDADESVALIDACIÓN DE MEDICAMENTOSXENOTRASPLANTES
� ZOOTECNIA
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APLICACIONES: INDUSTRIA FARMACÉUTICA
BIORREACTOR
DESVENTAJAS: COSTECANTIDADESSENSIBLE A CAMBIOS
20 mg/L
Producción de Hormona Humana del Crecimiento
5 g/L
250 >
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APLICACIONES: INDUSTRIA FARMACÉUTICA
Conestat alfa humanaAngioedema
Antitrombina humana IIITrombosis
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Medicamento Enfermedad Animal Empresa
A-lactoalbúmina Infección vacas PPL
A1-antitripsina Enfisema ovejas PPL
CFTR Fibrosis quística ovejas, ratones PPL
Proteína C
humana
Trombosis cerdos, ovejas PPL
Factor VIII Hemofilia cerdos, ovejas Pharming, PPL
A-glucosidasa Pompe conejos Pharming
Colágeno I Reparación tisular vacas Pharming
Fibrinógeno Cicatrización Vacas, ovejas Pharming, PPL
Ac glutámico
descarboxilasa
Diabetes I Ratón, cabra GTC
Pro542 HIV Ratone, cabra GTC
Investigación y Desarrollo de Medicinas
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APLICACIONES: INDUSTRIA AGRÍCOLA
AquAdvantage AUMENTO DE LA TASA DE CRECIMIENTOACELERACIÓN DE LA MADURACIÓN SEXUAL
1er Animal Transgénico APROBADO
para CONSUMO HUMANO
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APLICACIONES
� CIENCIA BÁSICA
� INDUSTRIAFARMACÉUTICAAGRÍCOLA
� BIOMEDICINAMODELOS DE ENFERMEDADESVALIDACIÓN DE MEDICAMENTOSXENOTRASPLANTES
� ZOOTECNIA
![Page 22: “Como se hace un animal transgénico”](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022072017/62d7a5782f847c084c501cab/html5/thumbnails/22.jpg)
APLICACIONES: BIOMEDICINA
XENOTRASPLANTES
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APLICACIONES
� CIENCIA BÁSICA
� INDUSTRIAFARMACÉUTICAAGRÍCOLA
� BIOMEDICINAMODELOS DE ENFERMEDADESVALIDACIÓN DE MEDICAMENTOSXENOTRASPLANTES
� ZOOTECNIA
![Page 24: “Como se hace un animal transgénico”](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022072017/62d7a5782f847c084c501cab/html5/thumbnails/24.jpg)
APLICACIONES: ZOOTECNIA
![Page 25: “Como se hace un animal transgénico”](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022072017/62d7a5782f847c084c501cab/html5/thumbnails/25.jpg)
� MICROINYECCIÓN PRONUCLEAR
� VECTORES VIRALES
� TRANSFERENCIA DE GENES MEDIADA POR ESPERMA
� TRANSFERENCIA NUCLEAR
� GENE TARGETING
TECNICAS DE OBTENCIÓN DE TRANSGÉNICOS
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MICROINYECCIÓN DE ADN EN PRONUCLEOS
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VECTORES VIRALES
![Page 28: “Como se hace un animal transgénico”](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022072017/62d7a5782f847c084c501cab/html5/thumbnails/28.jpg)
TRANSFERENCIA MEDIADA POR ESPERMA
EXTRACCIÓN DEL EYACULADO
INSEMINACIÓN ARTIFICIAL
INYECCIÓN INTRACITOPLASMÁTICA
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TRANSFERENCIA NUCLEAR
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“ GENE TARGETING “
+ antibióticos selección
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Quimeras
“ GENE TARGETING “
Blastocisto
Cél Madre modificadas
Cél Madre No modificadas
CRUCES
Heterocigotos
+ / - + / -+ / +25%
- / -25%
+ / -50%
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“ GENE TARGETING “
+ antibióticos selección
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X X GEN A
LoxP
tkNeo
LoxP
FRT
FRT
LoxP
tkNeo
LoxP
FRT
FRT
Sistema de recombinación Cre-LoxPGeneración de ratones Knock-out Condicionales
Resistencia a geneticinaSelección positiva
Sensibilidad a genciclovirSelección negativa
13bp 8bp 13bp
ATAACTTCGTATA - GCATACAT -TATACGAAGTTAT
LoxP --------- LoxP
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Sistema de recombinación Cre-LoxPGeneración de ratones Knock-out Condicionales
LoxP
tkNeo
LoxP
FRT
FRT
X X
RESISTENTES A GENETICINA NO SENSIBLES A GENCICLOVIR
![Page 35: “Como se hace un animal transgénico”](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022072017/62d7a5782f847c084c501cab/html5/thumbnails/35.jpg)
![Page 36: “Como se hace un animal transgénico”](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022072017/62d7a5782f847c084c501cab/html5/thumbnails/36.jpg)
GRACIAS POR VUESTRA ATENCIÓN
Dra. CONSTANZA CONTRERAS JURADOInstituto de Investigaciones Biomédicas CSIC-UAM
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