clase cromatina y cromosomas 2006
DESCRIPTION
cromosomasTRANSCRIPT
E S T R U C T U R A
DE LA
C R O M A T I N A
H1
H2B
H2A
H3
H4
hélice
variable
conservada
La acetilación de histonases una modificación reversiblede los extremos N-terminaldel octámero de histonas.Resultado:• reducción de la unión al ADN• desestabilización de la cromatina
N
Histona Peso molecular Numero de aminoácidos Contenido de aminoácidos básicos
LAS HISTONASson
proteínas básicasaltamente conservadas
El octámero de histonas organiza145 pb de ADN
• Cada núcleo formado por dímeros de histonastiene 6 uniones al ADN que involucran 3vueltas de la doble hélice;
• El octámero de histonas organiza 145 pb de ADN en 1 3/4 vueltas de ADN;
• 48 nm de ADN son empaquetados en un disco de 6 x 11nm
< 6 nm >
<
11
nm
>
ENSAMBLAJE DEL OCTAMERO DE HISTONAS
Tetrámero H3-H4
Octámero Dímero H2A-H2B
Histona H1
Dominio de la proteína globular H1/H5
La histona H1 estabiliza la interacción entre nucleosomas en la cromatina más compacta
Fibras de cromatina
+ extremos N-terminalescargados(unión al ADN sobrenucleosomas vecinos)
Histonas altamenteacetiladas
(especialmente H3 y H4)
Fibra de cromatinade 30 nm
Fibranucleosómicade 11 nm
• ALTO nivel de histonas H1 • Nivel reducido de histona H1
• NO transcripción génica •Posible transcripción génica
solenoide
nucleosoma
ADN
NIVELES DE
ORGANIZACIÓN
DE LA
CROMATINA
E S T R U C T U R A
C R O M O S O M I C A
Compactación nuclear y cromosómica
Compactación mediante el andamiaje cromosómico o la matriz nuclear
Modelo del bucle radialdel cromosoma
1µm
10 µ
m
cromátida cromátida
Cro
mos
oma
mitó
tico
+ 2M NaCl
histonas
+ 2M NaCl
histonas
MitosisBucles de ADN
B A N D A S
C R O M O S O M I C A S
C L A S I F I C A C I O N
TECNICAS DE BANDEO DIFERENCIAL
Bandeo G
Bandeo R
TECNICAS DE BANDEO SELECTIVO
Bandeo C
Bandeo Nor
Bandeo T
QFQ
BANDAS R
BANDAS G
NOMENCLATURA
BANDAS
Bandas G Bandas R
Banda T
IDIOGRAMA DE
CROMOSOMAS
HUMANOS
BANDAS T (REFLEXION)
BANDAS NOR
BANDAS C (CROMOSOMAS CHO – REFLEXION)
BANDAS C
POLIMORFISMO DE LAS BANDAS C
ASIMETRIA LATERAL
BANDEO DE
ALTA
RESOLUCION O
BANDAS
PROFASICAS
BANDEO DINAMICO R
“CHROMOSOME PAINTING”
HIBRIDACION IN SITUFLUORESCENTE
HIBRIDACION
IN SITU
FLUORESCENTE
EN NUCLEOS
INTERFASICOS
HIBRIDACION DE
GENOMAS
COMPARATIVOS
S I G N I F I C A D O
D E L A S
B A N D A S
C R O M O S O M I C A S
B A N D A S C R O M O S O M I C A S• Densidad de genes
• Tiempo de replicación
• Composición de bases
• Secuencias repetidas dispersas
• Organización genómica
• Conformación de la cromatina
GENOMAS DE MAMIFEROS
Secuencias repetidas
SINEs
LINEs
Tiempo de replicación
Composición de bases
Tipo de Subgenoma
Banda cromosómica
Temprana Constitutivo (G-) clarasGC
Tardía Tejido-específico (G-) oscurasAT
Cuerpo del bucle
Fluorescencia
Daunomicina
Topo II
YOYO/MG
YOYO
Tinción selectiva de los buclesTinción
Saitoh y Laemmli, Cell (1994)
Saitoh y Laemmli, Cell (1994)
1
2
Z1
Z3
Z2
Z6Z7
Z5Z9
Z8
Z4
Z10
Z13
Z125
8
8
9
10
7
X
EL C O D I G O
D E
H I S T O N A S
Procesos de modificación covalente
Acetilación
Fosforilación
Metilación
Complejos de proteínas (utilizan la hidrólisis del ATP para alterar la estructura de la cromatina)
Complejos SWI/SNF o ISWI
Las diferentes modificacionescovalentes de las histonas
Modificaciones de residuos en las colas de histonas:* Acetilación*Metilación*Fosforilación
• Acetilación de lisinas y fosforilación de serinas neutraliza la carga neta de las colas (procesos reversibles)
• Metilación de argininas favorece acción de coactivadores(No se describen demetilasas)
• Metilación de lisinas es requisito para meiosis y regula otras modificaciones.
ACETILACION DE HISTONAS
Anticuerpo R5 anti-H4 (FITC) + Hoechst 33258 Imagen digitalizada de la coloración con Hoechst 33258
CHO 9
Cariograma compuesto: a izquierda cromosomas teñidos con Hoechst33258; a derecha los mismos cromosomas marcados con el anticuerpo R5 anti-H4
MECANISMOS PROPUESTOS PARA LOS COMPLEJOS SWI/SNF E ISWI
D O M I N I O S
C R O M O S O M I C O S