REPBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA. UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL RMULO GALLEGOS. REA DE INGENIERA AGRONMICA DIRECCIN DE PROGRAMA DE PRODCCIN VEGETAL

CARACTERIZACIN MORFOLGICA EN MEDIO DE CULTIVO DE HONGOS ENDFITOS PRESENTES EN PLANTAS DE CACAO (Theobroma cacao L.) REALIZADA EN LA FUNDACIN INSTITUTO DE ESTUDIOS AVANZADOS (IDEA), UBICADO EN EL SECTOR SARTENEJAS, ESTADO MIRANDA.

. Autor: Andrs E. Baralt. C. Tutor Acadmico: Dr. Antonio Manrique Tutor de campo: Dr. Simn Prez.

Junio, 2010.

REPBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA. UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL RMULO GALLEGOS. REA DE INGENIERA AGRONMICA DIRECCIN DE PROGRAMA DE PRODCCIN VEGETAL

CARACTERIZACIN MORFOLGICA EN MEDIO DE CULTIVO DE HONGOS ENDFITOS PRESENTES EN PLANTAS DE CACAO (Theobroma cacao L.) REALIZADA EN LA FUNDACIN INSTITUTO DE ESTUDIOS AVANZADOS (IDEA), UBICADO EN EL SECTOR SARTENEJAS, ESTADO MIRANDA.

Junio, 2010

TABLA DE CONTENIDO Pginas. DEDICATORIA.. AGRADECIMIENTOS.. RESUMEN. OBJETIVOS INTRODUCCIN.. CAPITULO I. Caractersticas generales de la institucin. 1. Contribucin legal de la institucin. 2. Descripcin general... 3. reas de investigacin.. 4. Misin... 5. Visin... 6. Metas 7. rea de Agricultura y Soberana Alimentaria 8. Departamentos adscritos. 9. Laboratorio de trabajo CAPTULO II. Bases tericas. 1. Aspectos generales del cultivo de cacao 1.1. Caracteristicas de la flor del cacao.. 2. Historia del cacao en el mundo 3. Breve resea histrica del cacao en Venezuela... 4. Manejo Agronmico del cultivo 5. Plagas y Enfermedades del cacao. 5.1. Insectos plagas del cacao. 5.1.1. Insectos perforadores del tronco 5.1.2. Plagas que afectan hojas 5.1.3. Plagas que afectan frutos 5.2. Enfermedades que afectan al cacao... 6. Aspectos generales de los hongos.. 6.1. Divisin Ascomycota.. 6.1.1. Aspectos generales.. 6.1.2. Ciclo de vida de los Ascomycota I. II. IV. V. 1.

5. 6. 6. 7. 7. 7. 8. 8. 9.

11. 13. 14. 17. 20. 23. 23. 26. 29. 31. 37. 39. 39. 40.

Caractersticas de algunos gneros de hongos encontrados como endfitos. 6.2.1. Cladosporium 41. 6.2.2. Curvularia... 43. 6.2.3. Lasiodiplodia. 44. 6.2.4. Colletotrichum... 45. 6.2.5. Glomerella.. 48. 6.2.6. Fusarium 49. 6.2.7. Pestalotiopsis 50. 6.2.8. Penicillium. 51. 6.2.9. Phomopsis. 53. 7. Identificacin molecular de hongos 7.1. Extraccin de ADN. 54. 7.2. PCR (Polymerase Chain Reation).. 54. 7.2.1. Ciclo de amplificacin.. 56. CAPTULO III. Actividades realizadas en el periodo de pasantas. 1. Descripcin de las actividades realizadas por semanas 2. Metodologas aplicadas 2.1. poca y lugar de muestreo. 2.2. Coleccin de las muestras 2.3. Procesamiento de las muestras 2.4. Clasificacin de las muestras segn su origen.. 2.5. Purificacin y conservacin de los aislados 2.6. Caracterizacin macromorfolgica 2.7. El diseo experimental 2.8. Tcnicas de conservacin de hongos.. 2.9. Caracterizacin micromorfolgica 2.10. Extraccin de ADN. 2.11. PCR (Polymerase Chain Reaction) CAPTULO IV. Resultados y Discusiones. 1. Caracterizacin Macromorfolgica 2. Caracterizacin Micromorfolgica. 3. Extraccin de ADN... 4. PCR. CONCLUSIONES... RECOMENDACIONES. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS ANEXOS..

6.2.

60. 66. 67. 67. 68. 68. 69. 70. 70. 70. 72. 73.

76. 84. 89. 89. 92. 95. 96. 104.

DEDICATORIA

A mi padre, Efran E. Baralt Gonzlez, quien desde el universo envi su bendicin y fortaleza para superar todos los obstculos que se presentaron durante la realizacin de la carrera; a mi madre, Francisca Josefina Contreras, quien ha sido la fuente de inspiracin, apoyo y compaa incondicional, para caminar por el sendero de la vida y as realizar todas las metas planteadas; a mis hermanos, Alejandro Baralt Contreras y Abraham Baralt Contreras, por estar siempre conmigo y confiar en m en cada momento vivido.

AGRADECIMIENTOS Primeramente quiero dar gracias al Dai Gojonzon, por darme salud, fortaleza e intelecto para cumplir con sta meta planteada, y por ayudarme a seguir da a da con buena conviccin para la superacin de los obstculos que se presentan a diario. Gracias a todas las personas que confiaron en m y me brindaron su apoyo durante la realizacin de la carrera de Ingeniera Agronmica en Produccin Vegetal, en especial a mi To Omar Calzadilla y Ta Fanny Briceo, quienes fueron un pilar fundamental en el curso de la carrera por brindar su apoyo, confianza y cario incondicional. Agradezco a la familia Garca Muoz, quienes dieron su compaa, confianza y apoyo en todo momento. A la Abuela Sol Bentez, Ta Soledad Ramrez y primos Samuel Baralt y Raquel Baralt, por estar presentes y quienes han sido de gran ayuda en el culmino de mi carrera, dndome no slo su apoyo, sino tambin su comprensin y cario. Agradezco a dems familiares que compartieron y confiaron en m. Doy gracias al universo, por haber tenido un excelente padre, que si bien no est presente fsicamente lo est espiritualmente, y que durante mucho tiempo me brindo mucho apoyo, confianza, cario, sabidura y fue quien particip en el desarrollo de mi intelecto. Una excelente madre sper amorosa, inteligente, comprensiva, quien ha sido la fuente de inspiracin en mi superacin personal, siempre brindndome el apoyo necesario, corrigindome y educndome para lograr todas las metas que platee en la vida. A mis hermanos, quienes han sido los mejores compaeros de vida, buscando siempre las soluciones a los problemas que se han suscitado en nuestro hogar, aplicando las herramientas que nos dieron nuestros padres.

Agradezco a la Universidad Nacional Experimental de los Llanos Centrales Rmulo Gallegos, por darme la oportunidad de formarme como profesional, brindarme todo el conocimiento necesario en el mundo del agro, y permitirme la experiencia de vida universitaria. Agradezco a los profesores que me impartieron el conocimiento, en especial a los profesores Antonio Manrique, Fabio Giunta, Manuel Wagner y Pedro Lpez, quienes no slo formaron parte de mi instruccin, sino que tambin formaron parte de mi educacin, dndome lecciones de vida importantes para ser un excelente profesional y una excelente persona. A mis compaeros de la universidad que de una forma u otra estuvieron presentes en el logro de esta meta, compartiendo momentos buenos y malos durante la carrera. A mis amigos cotidianos (compaeros scouts) por ser de gran apoyo y estar presentes en todo momento. Finalmente, agradezco a la Fundacin Instituto de Estudios

Avanzados (IDEA), por darme la oportunidad de realizar las pasantas en sus instalaciones, y por haberme aportado tanto aprendizaje, y conocimiento en el campo de la biotecnologa agrcola, agradeciendo a todo el personal que labora en sta rea, que fueron quienes brindaron el apoyo y conocimiento en el ramo.

Caracterizacin morfolgica en medio de cultivo de hongos endfitos procedentes del cacao (Theobroma cacao L.).Andrs E. Baralt C. Universidad Nacional Experimental Rmulo Gallegos Ingeniera Agronmica en Produccin Vegetal. Laboratorio de Fitopatologa Molecular de la Fundacin Instituto de estudios avanzados (IDEA) E-mail: andrewbaralt@hotmail.com Resumen Los hongos endfitos crecen internamente en el tejido vegetal, sin manifestaciones externas, y que son organismos inherentes a las plantas en donde establecen una asociacin especfica con su hospedero, para mutuo beneficio. Se realiz un estudio morfolgico de estos hongos provenientes de rganos areos como hojas y frutos sanos, aislados de plantas de cacao (Theobroma cacao). Los fragmentos de tejidos esterilizados se colocaron en PDA (por triplicado) a una temperatura de 24 C (promedio ambiente del laboratorio) por 6 das. Se evaluaron las caractersticas tanto macromorfolgicas como micromorfolgicas de las colonias, para as, conocer los gneros de endfitos que se presentan comnmente en el cacao. Las evaluaciones nos permitieron reconocer los gneros Colletotrichum, Glomerella, Pennicilium, Cladosporium, Lasiodiplodia, fusarium, Nigrospora, Phomopsis, Curvularia y Pestalotiopsis, los cuales pueden producir sntomas sobre la planta como hongos patgenos latentes, una vez que el tejido en el que habitan se debilite o empiece a morir. Palabras claves: hongos endfitos; macromorfologa; micromorfologa.

OBJETIVOS Objetivo general Caracterizar morfolgicamente en medio de cultivo, hongos endfitos presentes en plantas de cacao (Theobroma cacao L.). Objetivos especficos: Evaluar el crecimiento de hongos endfitos, aislados de partes areas (Hojas y frutos) de la planta. Analizar las caractersticas macromorfolgicas de cada aislado, que sirva de dato para su identificacin taxonmica. Analizar las caractersticas micromorfolgica de cada aislado, con el fin de determinar el gnero y en algunos casos la especie del hongo endfito. Estudiar las caractersticas moleculares de los diferentes grupos morfolgicos que se presenten. Emplear diversos medios de cultivos, con el fin de evaluar el comportamiento del hongo. Utilizar diversos medios de montaje, con el fin de evaluar el comportamiento de las estructuras frente a los diferentes medios.

INTRODUCCIN

El cacao es un cultivo ntimamente ligado a la cultura venezolana, tanto por su origen como por su gran importancia en el desarrollo econmico y social del pas desde que se estableci su comercializacin hace ya ms de trescientos cincuenta aos. Venezuela lleg a ser el primer productor mundial de cacao, y este producto supuso la fuente principal de ingresos durante un largo perodo de la poca colonial (Marquina, 2005). Asimismo, el autor intuye que, tradicionalmente Venezuela ha sido considerada como un productor de cacaos finos y de aroma de alta calidad. Sin embargo, en 1993 fue rebajado a la condicin de productor parcial de cacaos finos y de aroma debido a la proliferacin de otras variedades de rboles de cacao a lo largo del ltimo siglo y medio (forastero principalmente, que se introdujo en el pas en un afn de los tcnicos por aumentar la productividad del rbol y lograr una mayor resistencia a plagas y enfermedades). A pesar de ello, el pas sigue siendo capaz de producir el cacao fino de alta calidad que le ha otorgado fama mundial. Igualmente, el especialista in comento, expresa, que al tratarse de un rbol tropical, el cultivo del cacao requiere de unas condiciones climticas clidas y hmedas, requisitos que Venezuela rene perfectamente. La cosecha del cacao se realiza cortando los frutos maduros de los rboles, abrindolos (normalmente con un machete) y extrayendo las semillas de los frutos. Se trata por tanto de un cultivo altamente intensivo en mano de obra y cuyo proceso de produccin parece, al menos a corto plazo, muy poco industrializable.

Venezuela ha tenido ventaja comparativa desde la poca colonial en la produccin del cacao de alta calidad, debido al saber hacer en la tcnica, el mtodo y a los conocimientos adquiridos con la experiencia acumulada a lo largo de los siglos. Desde siempre, la actividad cacaotera venezolana ha estado ligada a los campesinos que laboran en pequeas parcelas situadas en zonas deprimidas econmicamente en las cuales las rentas derivadas de la produccin del cacao han sido hasta ahora muy importantes. Sin embargo, la poltica cacaotera del pas no parece haber sido efectiva en potenciar y explotar esta ventaja, especialmente desde que se empez a desarrollar la industria del petrleo, ya que desde entonces los diferentes gobiernos de la Repblica se han preocupado ms de los ingresos generados por las exportaciones de hidrocarburos que de los dems sectores, especialmente del agrario (Marquina, 2005). Debido a que se desarrolla en ambientes hmedos, sta planta es susceptible a diversos agentes negativos como fidos, chinches,

crisomlidos, escoltidos, entre otros insectos; y a la presencia y ataque de hongos, que han trado consecuencias econmicas a los productores del pas, lo que lo ha convertido en una de las problemticas ms importante que se presenta en este cultivo. Por tales razones, es importante estudiar los diversos agentes que afectan negativamente al cultivo; pero as como se consiguen agentes negativos para el cultivo, tambin se consiguen agentes positivos, como hongos y bacterias endfitos que, aunque sus mecanismos de accin actualmente se desconocen para la mayora de las especies, se sabe que establecen asociaciones simbiticas con las plantas en la que prevalece el mutualismo, hasta que la planta se debilita o comience a morir, que es cuando estos organismos endfitos se convierten en parsitos para stas (Prada et al., 2008).

Los hongos endfitos son organismos inherentes a las plantas donde establecen una asociacin simbitica mutualista con su hospedero. La planta provee al hongo de alimento, hospedaje y proteccin; mientras que por otro lado, aun no hay certeza acerca de cules son los mecanismos de accin por parte del hongo hacia su hospedero, aunque se cree, que confieren un gran potencial adaptativo a las especies vegetales, frente a condiciones adversas que generan estrs, ya sean del tipo abitico (salinidad, acidez) o biticos (ataque de plagas y patgenos). Esta simbiosis otorga mayor habilidad competitiva a las plantas y permite una plena expresin de su potencial gentico traducido en altas tasas de germinacin, mejor densidad, ms biomasa en los tejidos y mayor produccin de semillas (Prada et al., 2008). El trmino endfito se conoce desde el siglo XIX y se us inicialmente para agrupar aquellos organismos fngicos que viven dentro de las plantas (Gamboa, 2006). Este grupo de microorganismos viven mayormente dentro de los tejidos areos vegetales sanos y vivos, incluso en las races, excluyendo, a los hongos productores de micorrizas, y ha mostrado un gran potencial econmico en reas como la agronoma y la medicina. Sin embargo, como endfitos pueden pasar una parte de su ciclo de vida considerndose saprfitos o patgenos (Petrini, 1991; Gamboa, 2006). Estos ltimos pueden producir sntomas sobre su hospedero cuando el tejido en el que habitan se debilita o empieza a morir. Muchas de las especies endfitas descubiertas recientemente son desconocidas para la ciencia (Arnold et al. 2000), por tanto, aunque se ha logrado cultivar en medio de cultivo artificial, no se les conoce su nombre segn los sistemas de clasificacin actuales. Para solventar esta situacin, y considerando la inmensa cantidad de especmenes aislados, se ha recurrido a bosquejar las posibles especies a travs de la formacin de grupos

morfolgicos, tomando como base las caractersticas de las colonias de los hongos. Este enfoque permite, en lo que los taxnomos definen los nombres de las especies, hacer estimados de la riqueza de especies de hongos presentes en los trpicos y de determinar su papel en la ecologa de los cultivos y plantas silvestres (Herre et al. 2007).

CAPITULO I CARACTERISTICAS GENERALES DE LA INSTITUCIN La Fundacin Instituto de Estudios Avanzados IDEA fue creada segn Gaceta Oficial No. 31.863 de fecha 15 de noviembre de 1979. Desde entonces se iniciaron las tramitaciones correspondientes para asignar un espacio para la construccin de IDEA. 1. Contribucin legal 1980 El 12 de junio de este ao fue constituida legalmente con la participacin de organismo del sector pblico y privado. 1999 La Fundacin IDEA es finalmente adscrita al Ministerio del Poder Popular para Ciencia, Tecnologa e Industrias Intermedias, quien lo recupera de su inminente desaparicin, hacindolo pasar de 4 investigadores a 129 investigadores de planta, y realizando grandes inversiones en el rescate de una infraestructura en deplorables condiciones para la poca. Todo ello marc un crecimiento, diversificacin y fortalecimiento de proyectos cientficos y tecnolgicos con un alto impacto social. 2006 Desde este ao y hasta la actualidad el IDEA se caracteriza por un fortalecimiento institucional cuya principal prioridad es la expansin de sus capacidades humanas, cientficas, territoriales y de infraestructura. En terrenos propiedad de la Nacin, Sartenejas, Municipio Baruta del Estado Miranda, en un rea superior a las 22 hectreas, que tiene como lmite Norte y Oeste terrenos de la Nacin; y por el Sur y Este con la

Carretera Nacional Hoyo de La Puerta, se desarroll el proyecto para la sede del Instituto de Estudios Avanzados IDEA, actualmente terrenos afectados a favor de IDEA por Decreto Presidencia N 5.869 y publicado en Gaceta Oficial N 38.873 de fecha 19 de febrero de 2008. 2. Descripcin general Creada en 1979, y con un desempeo ininterrumpido en el mbito de la investigacin cientfica, tecnolgica y social, la Fundacin IDEA ha transformado su gestin desde 1999, perfilando polticas cientficas comprometidas con las necesidades de desarrollo que exige la Nacin en el actual marco sociopoltico. Precisamente desde ese ao la Fundacin viene perfilando una gestin comprometida con las necesidades de desarrollo que exige el Pas. Ha crecido en infraestructura y en proyectos que generan soluciones cientficas y tecnolgicas a la diversidad de problemas que aquejan a la poblacin venezolana. La expansin y diversificacin de las reas de investigacin ha sido muy significativa: en los ltimos 10 aos IDEA pas de tener tres programas de investigacin, a ms de 26. Entretanto, en planta actualmente, se cuenta con ms de 110 profesionales de distintas reas, entre investigadores, profesionales y tcnicos. 3. reas de investigacin Tiene cuatro reas de investigacin y desarrollo que generan continuamente soluciones cientficas y tecnolgicas a los ingentes problemas que aquejan a la sociedad venezolana, gracias a la alta calidad de su personal de investigacin y a la extraordinaria infraestructura de sus laboratorios.

El Instituto focaliza su trabajo diario esencialmente en las reas de Agrobiotecnologa, Energa y Ambiente, Salud y Sociopoltica y Cultura. 4. Misin La Fundacin Instituto de Estudios Avanzados -IDEA- aporta al Sistema Nacional de Ciencia, Tecnologa e Innovacin soluciones concretas a las realidades del agro, la salud integral, el sector energtico, el acontecer sociopoltico y el sistema de Educacin Superior; para lo cual posiciona las capacidades del talento institucional y prioriza los procesos de gestin en pro de concretar los lineamientos establecidos en el Plan Nacional Simn Bolvar (Proyecto Nacional Simn Bolvar. Desarrollo Econmico y Social 2007-2013. Primer Plan Socialista). 5. Visin Ser una institucin pblica reconocida socialmente por sus aportes cientficotecnolgicos de avanzada e innovaciones integradas a los procesos de Desarrollo Endgeno Sustentable, llevados a cabos por un talento profesional con compromisos ticos, sociales y polticos. 6. Metas Como poltica dictada por su ente tutelar, el Ministerio del Poder Popular para Ciencia, Tecnologa e Industrias Intermedias, la Fundacin IDEA tiene entre sus metas ampliar el campo de intervencin ms all del Valle de Sartenejas, creando nuevas unidades de investigacin, desarrollo y gerencia en reas vitales para el pas. En una primera fase se pretende ampliar las instalaciones de Mochima, en el estado Sucre. Otras regiones del pas estn siendo sujetas a estudio para toma de decisiones, en particular la vasta zona que corresponde

con la Faja Petrolfera del Orinoco, Los Andes y Apure, entre otros. Tambin, y de manera revolucionaria, se est estructurando la Escuela Superior Internacional, que pretende incorporarse al enorme esfuerzo nacional de formacin de investigadores, con sentido de solidaridad regional con nuestros hermanos latinoamericanos y africanos. 7. rea de Agricultura y soberana alimentaria En el contexto de los objetivos estratgicos institucionales, se pretende abarcar toda la actividad prevista en investigacin, desarrollo y transferencia tecnolgica en innovacin en materia agrcola por la comunidad del IDEA. En este sentido, se estima dar respuesta, bajo un enfoque integrado, a todas las demandas y necesidades sectoriales planteadas en el rea de la produccin agrcola y el desarrollo sostenible a modo de contribuir con la soberana agroalimentaria de la nacin a travs de la implementacin de productos de la investigacin agrcola, derivados de los programas y proyectos de mejoramiento gentico, salud agrcola integral y bioseguridad; propagacin de germoplasma en rubros de inters nacional y desarrollo sustentable de los sistemas agronmicos nacionales. 8. Departamentos adscritos El rea de Agricultura y Soberana Alimentaria cuenta con dos departamentos; el departamento de tejidos in vitro y embriognesis somtica y el departamento de Fitopatologa y Biologa Molecular. El departamento de Tejidos in vitro y embriognesis somtica se encarga de crear una coleccin de plantas propagadas por cultivo de tejidos, con el fin de evaluar el comportamiento de las plantas en diferentes medios de cultivo, adems de mejorar las plantas ante el ataque de plagas y enfermedades, de ese modo buscar el control ms efectivo para prevenir y

sanar las diversas patologas causadas por los diversos organsmos. El centro cuenta con la coleccin ms amplia en el pas de yuca (Manihot esculenta crantz), tambin tiene una coleccin de solanceas como papa (Solannun tuberosum), algunos helechos, hortalizas de hoja, entre otros. Est a cargo del Ing. Agro. Juan Mateus y la Ing. Agro. Elizabeth Gamez, quienes en conjunto de un personal calificado realizan estas labores de investigacin. El departamento de Fitopatologa y Biologa Molecular, donde se realizan todas las tareas cientficas para la identificacin de especies fitopatgenas, saprfitas y endfitas, as como tambin la determinacin de metaboltos secundarios inmersos en diversos organismos con el fin de analizar su actuacin en los diferentes aspectos de la vida. Este departamento est a cargo del la Dra. Daynet Sosa y el Dr. Simn Prez, que quienes en conjunto de un equipo calificado realizan las labores de investigacin, tanto en la fitopatologa molecular como en la Biologa molecular. Ambos departamentos estn bajo la direccin del Dr. Digenes Infante y el Dr. Ramn Rea. 9. Laboratorio de trabajo Todas las labores realizadas durante las pasantas, se hicieron en el laboratorio de Fitopatologa Molecular, que cuenta con un cuarto de campanas, donde se encuentran tres campanas de flujo laminar, y una de ellas est dotada con todos los parmetros de bioseguridad necesarias. Tambin cuenta con un cepario de hongos fitopatgenos y endfitos, conservados con la tcnica de Castellani. Tiene todos los materiales y

equipos necesarios para la realizacin de las investigaciones que se plantee por el equipo de investigadores. Este laboratorio est a cargo de la Licenciada en Biologa Diamarys Domnguez quien aport todo el apoyo necesario para la realizacin de las tareas asignadas durante el periodo de pasantas.

CAPITULO II BASES TERICAS

1. Aspectos generales del cultivo del cacao (Theobroma cacao L.). Theobroma cacao L. es el nombre cientfico que recibe el rbol del cacao o cacaotero. Theobroma significa en griego (alimento de los dioses), cacao deriva del nahua cachua. Este nombre cientfico lleva aadida al final una abreviatura botnica convencional, en este caso L., que es la inicial del apellido del naturalista sueco que clasific la planta, Linneo (Anexo, Cuadro 1). La palabra cacao puede hacer referencia a tres conceptos muy relacionados entre s: 1. Cacao puede referirse, en primer lugar, al fruto del cacaotero, entendido este bien como la mazorca que crece directamente de su tronco, bien como las semillas contenidas en ese fruto. 2. En segundo lugar, el cacao es tambin el producto que resulta de la fermentacin y el secado de esas semillas (o habas o maracas) del fruto del rbol del cacao. El cacao, entendido as, es el componente bsico del chocolate. 3. Por ltimo, se denomina adems cacao al polvo seco que se obtiene moliendo los granos y extrayendo, total o parcialmente, la grasa o manteca de cacao. Muchos afirman que este es originario de Amrica del Sur, de la cuenca del ro Orinoco o el ro Amazonas y que de ah empez a extenderse hasta el sureste de Mxico. Mientras que otros, afirman que empez en

Mxico y se extendi hasta la cuenca del rio Amazonas, sin embargo, no se sabe con certeza. Lo que s se sabe es que su primera utilizacin por el hombre fue hecha en Mxico. El cacaotero es un rbol que necesita de humedad y de calor. Es de hoja perenne y siempre se encuentra en floracin, crece entre los 6 y los 10 m de altura. Requiere sombra (crecen a la sombra de otros rboles ms grandes como cocoteros y platanos), proteccin del viento y un suelo rico y poroso, pero no se desarrolla bien en las tierras bajas de vapores clidos. Su altura ideal es, ms o menos, a 400 msnm. El terreno debe ser rico en nitrgeno y en potasio, y el clima hmedo, con una temperatura entre los 20 C y los 30 C y una humedad relativa que va de 90 % a 95 %. rbol caulfloro (flores y frutos nacen directamente del tallo y ramas). Sus pequeas flores de color rosa y sus frutos crecen de forma inusual: directamente del tronco y de las ramas ms antiguas. Las flores son polinizadas por unas pequeas mosquitas. El fruto es una baya denominada mazorca, que tiene forma de calabacn alargado, se vuelve roja o amarillo purprea y pesa aproximadamente 450 g cuando madura (de 15 a 30 cm de largo por 7 a 12 de ancho). Un rbol comienza a rendir cuando tiene 4 5 aos. En un ao, cuando madura, puede tener 6.000 flores pero slo 20 mazorcas. A pesar de que sus frutos maduran durante todo el ao, normalmente se realizan dos cosechas: la principal (que empieza hacia el final de la estacin lluviosa y contina hasta el inicio de la estacin seca) y la intermedia (al principio del siguiente periodo de lluvias), y son necesarios de cinco a seis meses entre su fertilizacin y su recoleccin (McNeil y Cameron, 2007).

La inflorescencia del cacaotero: Cojines o pulvnulos florales: aparecen en el tronco sin hojas (Caulfloro), de yemas latentes dando origen a las inflorescencias. Puede formar de 40 60 flores de las cuales slo el 1,5 al 6 %, desarrollan el fruto (Anexo Figura 1). La inflorescencia es dicasiforme (Anexo Figura 2). Floracin: la flor inicia su apertura en horas de la tarde, a primeras horas de la maana emite el polen y presenta el estilo receptivo, importante para realizar la polinizacin controlada. 1.1. Caractersticas de la flor

La flor es diminuta, de 8 mm de dimetro, aunque su tamao puede variar de 5 10 mm de dimetro, son inodoras, regulares, hermafroditas, pentmeras (5 verticilos), ovario spero de cinco carpelos fundidos (gamocarpelar). Pedicelo: de 1 a 3 mm de longitud el cual sostiene a la flor (Anexo Figura 3). Cliz (S): formada por 5 spalos agudos, carnosos, soldados en la base, de color blanco a rosado, de 1 a 7 mm de longitud, y son pubescentes ( AnexoFigura 3).

Corola (P): cinco ptalos con lneas, de 6 a 8 mm de longitud, alternan con los spalos. Parte basal en forma de copa bordeada internamente por dos nervios de color violeta. Parte terminal estrecha con cuello de cisne y se ensancha como una esptula (Anexo Figura 4). Androceo: presentan cinco estambres frtiles y cinco estriles llamados estaminodios, ambos forman un tubo estaminal pubescente, los estambres

frtiles estn curvos hacia afuera, las anteras de cada filamento se cobijan dentro de la concavidad de los ptalos mientras que los estambres estriles se son ms largos y salen por encima de los ptalos (Anexo Figura 5), el polen es viable cuando se abre la flor slo por 24 h. Gineceo: ovario simple, spero, sincrpico, ovoide, pentagonal, con cinco carpelos fundidos con el estilo, ovario de placentacin central, cada cmara con 6 a 10 vulos, de placentacin axial (Anexo Figura 5).

2. Historia del cacao Los primeros rboles del cacao crecan de forma natural a la sombra de las selvas tropicales de las cuencas del Amazonas y del Orinoco, hace unos 4000 aos. Los primeros cultivadores en Centroamrica fueron los habitantes del sitio de Puerto Escondido, en Honduras, alrededor de 1100 a.C. Entre 600 y 400 a.C. se extendi a Belice tambin. En la poca de la civilizacin Olmeca, cerca de 900 a.C., es probable que en Mesoamrica la siembra de cacao haya sido extensiva (Coe et al, 1996). En 2006, estudios realizados por la Universidad de Cornell en Ithaca, Nueva York, encontraron que los vestigios ms antiguos sobre el uso del cacao como bebida se situaban 1.100 aos antes de Cristo. Sin embargo, estudios recientes realizados por investigadores mexicanos del Instituto Nacional de Antropologa e Historia (INAH), de las universidades de Columbia, Arizona, Yale, Wisconsin y Kennesaw, sealan que existen evidencias del consumo de cacao como bebida en el periodo formativo (1900 -900 a.C), es decir, 800 aos antes de lo que se crea hasta ahora. Los residuos de una bebida preparada a base de cacao fueron localizados en

una vasija de cermica encontrada durante las excavaciones realizadas en el sitio sagrado del Cerro Manat, ubicado dentro del ejido del Macayal, en el municipio de Hidalgotitln, Veracruz, Mxico. La vasija se localiz asociada con una gran cantidad de objetos suntuosos entre los que destacan: hachas labradas en piedra verde, jadeta, pelotas de hule, mazos de madera y varias estacas con la punta quemada, as como semillas de jobo, coyol, nanche, calabaza, huesos de tortuga y venado de cola blanca. Este contexto llev a los investigadores a deducir que posiblemente la vasija datada mediante carbono 14 en 1750 a. C, de paredes cilndricas ligeramente divergentes, con el fondo plano y engobe de color rojo en la parte inferior del cuerpo y manchas negras, fue creada para contener bebidas como la chicha (cerveza de maz), chocolate o atole, preparaciones consumidas exclusivamente por los jerarcas o gente de alto prestigio social. La evidencia de cacao en esta vasija localizada en la costa del Golfo de Mxico, indica que el uso de la bebida precede a las evidencias encontradas en las reas Mayas de Belice y en Puerto Escondido, Honduras (Coe et al, 1996). Los mayas, en torno al siglo X a.C., casi simultneamente con los olmecas, se haban establecido en una extensa regin al sur del Mxico actual, que se extiende desde la pennsula del Yucatn en Amrica Central a lo largo de regin de Chiapas, Tabasco y la costa de Guatemala en el Pacfico. Los mayas llamaban al rbol del cacao ka'kaw: frase relacionada con el fuego (kakh) escondido en sus almendras, y al Chocolate le llamaba Chocolhaa o agua (haa) amarga (Chocol). El cacao simboliza para los mayas vigor fsico y longevidad. La palabra nahuatl cacahuaxochitl se refiere a la flor (xochitl) del rbol de cacao (Coe et al, 1996).

Los mayas crearon un brebaje amargo el Chocolha hecho de semillas de cacao que consuman exclusivamente los reyes y los nobles y tambin usado para dar solemnidad a determinados rituales sagrados. En sus libros, los mayas describen diversas formas de elaborar y perfumar la bebida: ms lquido o ms espeso, con ms o menos espuma, con aditamentos como la miel, llamada por ellos hikoth, el maz o Ixim, el chile picante (Coe et al, 1996). El chocolate se usaba con fines teraputicos. Los mdicos mayas prescriban el consumo de cacao tanto como estimulante como por sus efectos calmantes. Los guerreros lo consuman como una bebida reconstituyente, y la manteca de cacao era usada como ungento para curar heridas. Era tambin usado como moneda (Coe et al, 1996). Ms tarde, los mayas lo llevan hacia el norte, a las tierras que ocupaban los toltecas, el pueblo que precedi a los aztecas en la historia de Mesoamrica. El dominio azteca supuso, pues, la sumisin de los toltecas, los olmecas y todos los pueblos que constituyeron el inmenso imperio de los adoradores del Sol y de la Serpiente Emplumada, o Quetzalcatl, Kukulkn para los mayas, el dios fundador de la estirpe y de la cultura precolombina. Era precisamente a Quetzalcatl a quien los aztecas hacan remontar el primer origen de cacao, regalo divino para aliviar su cansancio y deleitar el reposo. Los aztecas prescribieron tambin una pocin a base de cacao mezclado con el polvo de los huesos machacados de sus antepasados para curar la diarrea (Coe et al, 1996). No obstante, la bebida de cacao que Corts haba tomado en copas de oro durante los banquetes organizados en su honor por Moctezuma II era

muy diferente a lo que hoy estamos acostumbrados. El xocolatl, que as era como se llamaba, era un agua amarga. Los aztecas mezclaban chile con las semillas del cacao tostadas y molidas, y aadan harina de maz como emulsionante bsico para absorber la manteca de cacao. La espuma era una de las partes ms importantes y deliciosas de la bebida. Los mayas hacan que la bebida fuera an ms espumosa vertindola desde un recipiente elevado a otro que estaba en el suelo. Ms tarde, los aztecas inventaron una especie de molinillo para provocar la aparicin de la espuma (Coe et al, 1996).

3. Breve resea histrica del cacao en Venezuela, segn CAPEC (2010). 1498 Cristbal Coln llega a las costas de Paria en su tercer viaje. Los primeros datos sobre el cacao en Venezuela se remontan a finales de 1600, en ellos se cataloga al cacao como un producto generado en Mrida y exportado a Espaa. Dicho cultivo se extendi a las costas de Aragua, Barlovento y Sucre. 1620 - 1700 Los volmenes exportados llegaron a 600 Tm/ao, alcanzando unas 2.230 Tm/ao durante el perodo 1701 - 1703. 1728 Primer monopolio de la comercializacin de cacao venezolano. La Corona Espaola otorga a la Compaa Guipuzcoana la comercializacin exclusiva de los bienes producidos en estas provincias y con esto, el primer monopolio de cacao.

1742 Separacin de la Provincia de Venezuela del Virreinato de Nueva Granada. 1749 Descontento y protestas por los bajos precios pagados a los productores de cacao, lo que trae como consecuencia el primer levantamiento contra la compaa y el rgimen por parte de Juan Francisco Len desde Panaquire (Barlovento). 1777 Creacin de la Capitana General de Venezuela y anexo a ste, de las Provincias de Maracaibo, Guayana, Cuman, Islas de Margarita y Trinidad. 1780 Eliminacin de los privilegios otorgados a la Compaa Guipuzcoana y su posterior disolucin en 1785 1799 Desembarco del explorador y naturista Alejandro de Humboldt por Cuman y su investigacin por Venezuela narrando sobre el cacao y sus condiciones. 1810 - 1824 La Guerra de Independencia. Durante la mitad de 1800 se genera un estancamiento en la produccin con un promedio de 5.000 Tm/ao, el caf reemplaza al cacao como mayor generador de ingresos. 1854 Abolicin de la esclavitud. 1858 - 1863 La Guerra Federal. 1900 - 1920 Incremento de la produccin de cacao alcanzando volmenes de 22.000 Tm/ao.

1928 Explotacin del petrleo desplazando una sociedad trabajadora de una economa agrcola por una minera industrial. 1933 Devastacin de las plantaciones de cacao en el Edo. Sucre por el cicln de Oriente. 1936 Creacin del Ministerio de Agricultura y Cra por parte del Gobierno Nacional durante el gobierno de Eleazar Lpez Contreras. 1956 Produccin mxima histrica de cacao 23.000 Tm/ao. 1959 Creacin del Fondo Nacional de Cacao y Caf (FNCC) por parte del Estado Venezolano. 1960 Promulgacin de la Ley de Reforma Agraria. 1967 Divisin del FNCC en el Fondo Nacional de Cacao (FONCACAO) y el Fondo Nacional de Caf. 1974 Promedio anual de produccin de cacao 20.000 Tm/ao. 1975 Segundo monopolio de la comercializacin de cacao por parte de FONCACAO. 1984 Abandono y/o sustitucin del rubro cacao por otras actividades agrarias, esto ocasiona una disminucin en la produccin nacional de cacao llegando a producirse slo 10.500 Tm/ao para la fecha. 1991 Desmonopolizacin de la comercializacin de cacao por parte del estado venezolano y por consiguiente un incremento en la produccin nacional de cacao; alcanzado actualmente un promedio de 17.000 Tm/ao.

4. Manejo agronmico del cultivo de cacao Temperatura Puede crecer en zonas con temperaturas hasta de un mnimo de 15 C. Sin embargo, la formacin de flores depende en gran parte de la temperatura. Cuando sta es menor de 21C, casi no hay formacin de flores, en cambio cuando alcanza 25C, las flores se forman normal y abundantemente. En todo caso, no hay lmites de calor, si se tiene en cuenta que es un cultivo que debe estar a la sombra (Giusti, 2003). El Agua Segn el autor previamente mencionado, la cantidad de lluvia que satisface al cultivo oscila entre 1.500 y 2.500 mm en las zonas bajas ms clidas, y entre 1.200 y 1.500 mm en las zonas ms frescas o los valles altos. La distribucin mensual de la lluvia es muy importante, tanto por su falta como por su exceso. Un mnimo de 100 mm en los meses ms secos sera ideal para el cultivo del cacao. Este hecho es importante para el cacao bajo riego. Sombreamiento El cacao es una planta que se desarrolla bajo sombra, se le considera tpicamente humbrfila, aunque bajo condiciones especiales de luminosidad y distribucin de agua, puede cultivarse a plena exposicin del sol. La seleccin de las especies para sombra definitiva debe ser hecha cuidadosamente pues debe producir algn beneficio econmico. Es necesario un nmero de rboles permanentes de sombra capaces de

producir de un 25 a un 30% de sombreamiento. Varias son las especies de rboles usados como sombra; los ms comunes han sido las leguminosas bucare (Erythrina), guamas (Ingas). Sin embargo; debera investigarse el uso de otro tipo de rboles econmicamente importantes, como maderables, laurel, cedro, cenzaro y terminalia y/o frutales como los ctricos, aguacate, zapote, rbol de pan, algunas palmas, entre otros (Giusti 2003). El Viento Ante la presencia de brisas permanentes, el autor in comento, expresa que las hojas de cacao pierden agua, dejan de trabajar, se secan y mueren. Si el viento es de cierta intensidad, las hojas caen prematuramente. El propsito de la sombra al iniciar la plantacin no slo es reducir la luz para reducir la actividad de la planta sino tambin reducir el movimiento de aire que la perjudica. Suelos El cacao es bastante exigente en cuanto a la calidad del suelo. Requiere suelos ricos, profundos, franco arcillosos, con buen drenaje y topografa regular. Para el transplante, los hoyos deben tener un mnimo de un metro de profundidad, a fin de proporcionar suficiente espacio para el crecimiento y desarrollo de las races. No es recomendable sembrar cacao en: suelos pantanosos, de pendientes muy fuertes, muy pedregosos, poco profundos, pobres y suelos arenosos cercanos al mar (Giusti 2003). Cultivo La siembra debe realizarse en la primera mitad de la temporada de lluvia para tener suficiente tiempo para que el rbol se establezca antes de la

siguiente temporada seca. A pesar que madura 24 meses despus de la siembra inicial, los rboles llegan a ser productivos nicamente despus de cinco aos. Los rendimientos son mximos entre el octavo y dcimo ao, pero se pueden obtener buenos rendimientos durante varias dcadas. En condiciones normales, la produccin vara entre 300 y 500 kg/ha por ao. Los hbridos presentan rendimientos mayores, por encima de los 1.000 kg/ha (Giusti, 2003). Los frutos maduran a lo largo de todo el ao, sin embargo, se llevan a cabo dos cosechas anualmente: la cosecha principal y la cosecha intermedia. La cosecha intermedia es en general menor que la cosecha principal, sin embargo, el tamao vara segn cada regin. Dichos cultivos requieren de 5 a 6 meses entre la fertilizacin y la cosecha de los frutos, la cual dura alrededor de 5 meses y en cortar los frutos maduros de los rboles, abrirlos (normalmente con un machete) y extraer las semillas de los frutos. Estas semillas se ponen a fermentar entre 2 y 8 das antes de secarlas al sol. Los granos se transportan en sacos para su comercializacin. Las altitudes apropiadas para sembrar cacao estn entre 300 y 800 m.s.n.m., sin embargo en zonas cercanas a la lnea ecuatorial puede sembrarse hasta en altitudes de 1.300 m.s.n.m. por existir una compensacin trmica entre la latitud y altitud. Intuye el mismo, que para sembrar una hectrea de cacao se requieren mil cien semillas, sembradas en filas con una distancia de 3 x 3 m, lo cual da una densidad de entre 950 y 1330 rboles/hectrea. Se deben comprar alrededor de cien semillas ms, para cubrir las resiembras, que se estiman en 10%. Las condiciones climticas y las enfermedades son los principales factores que afectan la produccin. Se estima que hasta un 30% de la produccin mundial se pierde debido a las enfermedades. Entre las enfermedades ms comunes que afectan al cacao estn la podredumbre

negra de las nueces del cacao, la escoba de bruja y VSD (Muerte regresiva vascular). Es importante la poda para: eliminar las partes poco productivas, estimular el desarrollo de nuevos brotes, equilibrar los puntos productivos, regular la altura del rbol y regular la entrada de luz a los estratos inferiores.

5. Plagas y Enfermedades 5.1. Insectos plagas del cacao Las plagas y enfermedades han constituido en un factor importante en la disminucin de la produccin de cacao, La incidencia de plagas depende de las condiciones climticas de la zona, adems del microclima existente dentro del cacaotal, de los hbitos y ciclo de vida de los insectos y del manejo que se le est dando al cultivo. Este manejo requiere ser equilibrado, porque a pesar de ser una planta atacada por diversas enfermedades y plagas, necesita tambin de aquellos insectos benficos que participan en su polinizacin y que actan como controladores biolgicos (Moya et al., 2004), .

5.1.1. Insectos Perforadores del Tronco Coquitos Perforadores: Xyleborus ferrugineus (Fabricius) (ataca plantas adultas) Xylosandrus morigerus (Blandford) (ataca plantas jvenes)

Sntomas y Daos: Insectos que atacan el tronco y las races. Realizan gran nmero de galeras preferiblemente en la base del tallo. Su actividad se detecta porque la planta presenta sntomas de marchitamiento y en el suelo y tronco se observa un

aserrn muy pulverizado producto de su actividad. Tienen gran importancia por ser vectores de hongos patgenos (Ceratocystis, Fusarium y Lasiodiplodia), formando un complejo o asociacin insecto-hongo que limitan severamente al cultivo. El Xylosandrus ataca plantas en viveros, el dao se manifiesta por un marchitamiento generalizado que culmina con la muerte de las plantas. El ataque es muy frecuente en las plantas ms lignificadas, es decir, madera vieja (Moya et al., 2004).

Medidas de control:

Segn, Moya et al., 2004, El control debe dirigirse a disminuir la poblacin del insecto, as como tambin las plantas que presentan sntomas de la enfermedad, asociacin insecto - hongo, realizando las siguientes actividades: 1. Cortar y quemar las plantas enfermas y secas, ya que en estas persiste el inculo del hongo, y se pueden producir varias generaciones de insectos. 2. Desinfectar las herramientas utilizadas. 3. Evitar heridas en las plantas sanas. 4. Cultivo bajo adecuadas condiciones de fertilizacin, humedad y sombra. 5. Proteger las plantas vecinas con aplicaciones en la base de los tallos, con una mezcla de insecticida + fungicida. 6. Realizar curetajes en la zona afectada de la planta y aplicar una pasta cicatrizante. 7. Aplicar medidas fitosanitarias en viveros; no dejar sobrepasar las plantas en la bolsa, darles adecuado mantenimiento y eliminar plantas afectadas. 8. Insectos masticadores y raspadores de la corteza en ramas y tallo.

La Gota

Steirastoma depressum (Beter) Steirastoma breve (Sulzer)

Sntomas y Daos

Esta plaga afecta las plantas nivel de troncos y ramas, el dao lo realiza en estado larval ya que devora la corteza y a su vez construye tneles por debajo de sta, ocasionando un anillado que interrumpe el paso de la savia, causando la muerte de la planta o ramas. La larva se detecta fcilmente porque el rea afectada se ennegrece y aparece un exudado gelatinoso, los adultos slo raspan la corteza de las ramas tiernas. Su importancia radica en que por estas heridas pueden penetrar hongos patgenos que pueden ocasionar la muerte de plantas (Moya et al., 2004).

Medidas de control: 1. Si las poblaciones son muy altas y la plantacin est en brotacin, conviene establecer programa de manejo de malezas que mantenga hospederos naturales, de los que se alimentar esta especie. 2. Al detectar el dao conviene practicar ciruga vegetal y proteger la herida. 3. Realizar jornadas de recoleccin del insecto adulto, contribuye a reducir la poblacin insectil y a bajar los niveles de dao.

Comejenes Nasutitermes ephratae Holmgreen N. corniger Montschlsky

Los comejenes se encuentran formando nidos muy voluminosos, en el tronco o en las ramas del rbol, localizndose preferiblemente en la horqueta o

vrtice de las plantas. Los daos se deben al efecto mecnico por el peso, afectando directamente la corteza y a la produccin al cubrir los cojines florales (Moya et al., 2004).

Medidas de control

1. Tumbar y quemar los nidos. 2. Limpiar el tronco y las ramas de las numerosas galeras superficiales. 3. No dejar partes secas de madera o restos de poda.

5.1.2. Plagas que Afectan Hojas

Vaquita Brachyomus octotuberculatus (F.)

Insectos de color gris y que presentan en la regin Terminal del abdomen un abultamiento, se alimenta de hojas tiernas, sobre las cuales hace un dao parecido al del bachaco rojo, pero los cortes son ms irregulares. Este insecto slo ataca cuando la plantacin permanece mucho tiempo libre de malezas, por lo que debe contemplarse un control racional de malas hierbas (Moya et al., 2004).

Medidas de control:

1. Dado que la plaga no puede volar, su ataque se restringe a reas localizadas, por lo que un manejo adecuado de malezas y plantas hospederas como el cordoncillo, facilita su control. 2. Si el ataque y dao es muy severo y en la plantacin est en perodo de brotacin, se recomienda la utilizacin de insecticida de contacto e

ingestin dirigido al follaje, slo cuando sea necesario por sus efectos sobre los polinizadores.

Bachacos Atta sp. Acromyrmex sp.

Son insectos de color pardo rojizo, cabeza grande y mandbulas fuertes viven bien organizados en colonias denominadas bachaqueros. Los daos se caracterizan por cortes semicirculares desde los bordes hacia la nervadura central de las hojas. En cacao pueden causar defoliacin severa en las hojas y tambin cortan las flores (Moya et al., 2004).

Medidas de control

1. Se puede usar plaguicida atrayente en forma de cebo, cerca de la entrada del bachaquero o de los caminos por donde transitan los bachacos, el cual es llevado a los nidos, donde ejerce accin fungicida, impidiendo el crecimiento del hongo que sirve de alimento. 2. Aplicar un insecticida en polvo, con bomba de presin forzada de aire, a travs de las bocas de entrada, para alcanzar las cmaras de cra que constituyen el bachaquero (utilizar equipo de proteccin para la aplicacin de plaguicidas: ropa, zapatos, guantes y mascarilla).

Piojitos o Thrips Selenothrips rubrocinctus Giard

Insectos que atacan hojas y frutos. En el follaje, el dao es ms importante ya que debido a su actividad alimenticia raspan las hojas las cuales

amarillean y caen. Si el ataque es severo se puede producir una defoliacin progresiva de la planta. En frutos el dao avanza y toma una coloracin ferrosa, debido a la deposicin de excrementos y a las heridas causadas por el insecto, ocasionando dificultad al momento de la cosecha, ya que hace difcil determinar si la mazorca est madura (Moya et al., 2004).

Medidas de control

1. Como los ataques son ms intensos en plantas expuestas al sol, se recomienda hacer una adecuada regularizacin de la sombra.

Coquitos Esqueletizadores Disonycha sp. Omophoita sp. Los insectos adultos se alimentan de follaje, preferiblemente de brotes y hojas tiernas. Los ataques se localizan en la regin intervenal de la hoja. Con frecuencia ocasionan ataques en vivero (Moya et al., 2004).

Medidas de control

1. S las poblaciones son muy elevadas, se pueden colocar trampas de captura, para lo cual se debe consultar con el asesor tcnico ms cercano. 2. Si el ataque y dao es muy severo, se recomienda la utilizacin de un insecticida de contacto e ingestin, en forma dirigida donde se localicen los focos, slo cuando sea necesario. Ya que sus efectos son nocivos a los polinizadores. 3. Para plantas en vivero, se recomienda un programa de manejo fitosanitario que incluya el control de todas las plagas.

5.1.3. Plagas que afectan el Fruto:

Perforadores del Fruto Carmenta theobromae (Busck) La hembra del insecto deposita los huevos en la superficie de los frutos tiernos, de donde salen las larvas que perforan la corteza para alimentarse. Daan la corteza al ocasionar galeras, las cuales se rellenan con los excrementos que son de color oscuro y apariencia a borra de caf. Sin afectar la parte interna ni los granos, por lo que estas se pueden aprovechar parcialmente (Navarro et al., 2004).

Carmenta foraseminis (Eichlin)

La hembra coloca los huevos en forma individual en las hendiduras y rugosidades tanto de frutos tiernos como en los prximos a alcanzar la madurez fisiolgica. La larva al momento de la eclosin se introduce en el fruto causando una perforacin al lado del huevo muy pequea, la cual es difcil de observar a simple vista. Las larvas de los primeros instares, se alimentan del tejido placentario y los ltimos del mesocarpio, dejando las excretas esparcidas dentro del fruto. Las larvas al llegar a la ltima fase de desarrollo, se dirigen al epicarpio del fruto y comienzan a construir el capullo con las excretas y una sustancia cerosa que ella misma expulsa (Herrera y Snchez., 2005). Sntomas Los frutos atacados presentan externamente la apariencia de sanos, observndose una mancha o peca que sella la abertura de la perforacin, que corresponde a una capa muy delgada del epicarpio del fruto, que la larva deja para usarla de proteccin y evitar la entrada de otros insectos que

puedan perjudicarle; esta capa es destruida cuando emerge el adulto del capullo, dejando una perforacin en el fruto que facilita el ingreso de otros agentes patgenos, ocasionando prdidas importantes en la produccin (Navarro et al., 2004). Medidas de control 1. Realizar cosechas peridicas, para evitar la sobre maduracin de los frutos. 2. Eliminar las mazorcas con daos por insectos, hongos y vertebrados como ardillas, monos y pjaros. 3. Depositar las cscaras de los frutos de los picaderos a los composteros o productores de abono orgnico y aplicar tratamiento fitosanitario para el control de hongos e insectos. 4. Acatar las disposiciones de Sanidad Vegetal de no trasladar frutos de cacao, de una entidad federal a otra, ni dentro de la misma entidad federal

La Chinche amarilla Monalonion dissimulatum

Conocida como chinche amarilla, o mosquilla del cacao. El insecto adulto es una chinche de 10 a 12 mm de largo, color naranja con dos manchas oscuras transversales y cabeza de color negro con antenas y patas largas. Las ninfas son de color amarillo naranja brillante, sin alas, con patas largas color negro. Esta plaga se presenta preferiblemente en zonas hmedas y sombreadas, en pocas de lluvia, con temperaturas altas y exceso de malezas. Los brotes y las mazorcas, son atacados por las ninfas y adultos que chupan la savia e inyectan toxinas. El ataque origina manchas necrticas circulares de color negro que se van uniendo entre s. Sobre stas se pueden desarrollar hongos patgenos del cacao. El ataque a las

mazorcas se inicia en la punta extendindose hacia el pednculo (Moya et al., 2004).

Medidas de control

1. Poda de mantenimiento del cacaotal y el raleo del sombro permanente, a fin de regularizar la entrada de luz y aire dentro de la plantacin. 2. Mantener controladas las malezas. 3. Realizar inspecciones frecuentes para localizar los focos del insecto en sus fases iniciales y proceder a su control y proceder a su control, mediante presin mecnica con las manos o flameo con una antorcha.

Mamferos

Entre estos animales se encuentran las ratas, ardillas, rabipelados y monos que causan daos en los frutos y ramas; otras veces destruye cojines florales. Los ataques ocurren en perodos de escasez de frutos silvestres, por lo que se recomienda preservar algunas de stas especies (Ramos et al., 2000).

Aves Causan perforaciones en las mazorcas prximas a la cosecha y destruyen frutos de cualquier edad. Entre stos se encuentran los loros, pjaros carpinteros (Ramos et al., 2000). .5.2. Enfermedades del cacao

Las condiciones del ambiente influyen marcadamente sobre la incidencia de las enfermedades en el cacao. La mayora de las que afectan hojas y frutos aparecen durante y a la salida de las lluvias.

Moniliasis Mancha Ceniza Moniliophthora roreri (Cify Par.) Evans et al., s.f.

Es una enfermedad que slo ataca los frutos en cualquier estado de su desarrollo. En frutos menores de tres meses aparecen deformaciones o gibas ligeramente plidas, estos frutos se momifican y permanecen adheridos al rbol. En frutos mayores a los tres meses, se observa una mancha caf claro, que en condiciones de alta humedad, se cubre de un polvo color crema, constituida por millones de conidias que son como semillitas, que reproducen la enfermedad y que son diseminadas por el viento, la lluvia y los insectos. Las almendras se pudren y se adhieren a la cscara. Los frutos enfermos presentan hinchazones y son de mayor peso que los sanos (Rumbos, 2004).

Medidas de control

1. Limpieza general de la plantacin eliminando las malezas y realizando las podas necesarias en los rboles de cacao y rboles de sombra, a fin de mejorar las condiciones de aireacin y remocin del exceso de humedad. 2. Recoger y quemar o enterrar todas las mazorcas enfermas incluyendo los chireles negros y momificados pegados al rbol y las que se encuentren en el suelo. 3. Cosechar peridicamente los frutos maduros sanos, para evitar prdidas por infecciones tardas. 4. La apertura o limpieza de drenajes. 5. Realizar la fertilizacin de manera fraccionada para fortalecer las plantas, obedeciendo al respectivo anlisis de suelo. 6. Slo en caso necesario aplicar fungicidas a base de cobre.

Pudricion Parda de la mazorca (Cncer del Tronco) Phytophthora palmivora (Butler)

La enfermedad se manifiesta con una mancha de color marrn chocolate que con el tiempo se oscurece. Esta mancha se puede encontrar en la parte basal, en la unin del pednculo con el fruto, avanzando rpidamente hacia el pice de la mazorca. En ocasiones avanza desde la punta hacia la base y tambin puede iniciarse desde la zona central hacia los dos extremos del fruto. La necrosis avanza hacia el interior alcanzando las almendras, a las cuales les produce necrosis hmeda. El hongo a travs del pednculo puede alcanzar el cojn floral, afectando las flores y los chireles. En el tronco el hongo causa necrosis de color marrn oscuro y exudado gomoso rojizo. Si la necrosis avanza y rodea el tallo, causar la muerte de la planta (Capriles, s.f.).

Medidas de Control

1. Evitar sobre maduracin de los frutos. 2. La deteccin temprana del sntoma de la enfermedad en el tallo, permite realizar ciruga vegetal local y aplicar la pasta cicatrizante. 3. Desinfectar las herramientas. 4. Limpieza general de la plantacin eliminando las malezas y realizando las podas necesarias en los rboles de cacao y rboles de sombra, a fin de mejorar las condiciones de aireacin y remocin del exceso de humedad. 5. Recolectar, enterrar o quemar todos los frutos y otros rganos enfermos de la planta y los que caen al suelo. Escoba de brujas Crinipellis perniciosa (Sthael) Singer

El nombre de la enfermedad se corresponde con el aspecto que toman los brotes en las plantas. Afecta los cojines florales, las flores, las hojas y sobre todo los frutos, especialmente cuando son pequeos. Aunque no llega a matar los rboles, la colonizacin permanente del patgeno los vuelve improductivos (Capriles, s.f.).

Medidas de control

1. Realizar las podas necesarias en los rboles de cacao y rboles de sombra, a fin de mejorar las condiciones de aireacin y remocin del exceso de humedad. 2. Recolectar y quemar las escobas vegetativas antes de que sequen y antes de iniciarse las lluvias a fin de impedir que el hongo forme sus estructuras reproductivas. 3. Cosecha peridica y eliminacin de plantas enfermas o rboles foco.4. Evitar el traslado de material de cacao de zonas afectadas a zonas libres

de la enfermedad.

Mal del machete mal de Choroni Ceratocystis fimbriata (Ellis Y Halsted)

Esta enfermedad se conoce tambin como "pudricin azul de la madera". Afecta las races, tallos y ramas. Est ntimamente asociada a coquitos perforadores del tallo, de la familia Scolytidae (Xyleborus). Si las plantas son atacadas en el tronco debajo de las ramas, presentarn marchites generalizada, amarillamiento repentino y total de las hojas, que en pocos das se enrollan sobre la nervadura principal y quedan adheridas a las ramas durante varios das hasta que caen (Capriles, s.f.).

Cuando el hongo ataca a nivel de ramas, ocurre el secamiento de stas con idnticos sntomas. En ambos casos se puede ver la necrosis de la madera, de color castao oscuro y zonas de gris azulado en franjas longitudinales (Capriles, s.f.).

Medidas de control 1. Cortar y quemar las plantas o ramas enfermas en el sitio. 2. Evitar heridas en las plantas y de ocurrir, protegerlas con pasta cicatrizante. 3. No podar plantas sanas sin desinfectar las herramientas. 4. Proteger las plantas vecinas con aplicaciones a la base de sus tallos, con una mezcla de insecticida +fungicida +adherente.

Antracnosis Colletotrichum gloeosporioides (Penzig) Sacc.

La enfermedad causa daos importantes en hojas y frutos. Ataca principalmente las hojas tiernas de los brotes jvenes, ocasionando manchas que pueden avanzar por las nervaduras hacia el tallo. En frutos jvenes se manifiesta por numerosos puntos necrticos, que pueden profundizar en la corteza, llegar a las almendras y detener el crecimiento. En frutos ms desarrollados se producen manchas ms grandes de diferentes formas, hundidas y de poca profundidad en la corteza. En condiciones de alta humedad y temperatura, sobre las lesiones se producen las estructuras de fructificacin del hongo (Caprles, s.f.). Medidas de control

1. Realizar podas a fin de mejorar las condiciones de aireacin y remocin del exceso de humedad.

2. Regular la sombra permanente evitando la excesiva exposicin de las plantas al sol. 3. Realizar poda de ramas afectadas por la enfermedad, recolecta y quema de frutos afectados.

Agallas Fusarium decencellulare (Brick) Anamorfo. Calonectria rigidiuscula (BerkyBr.)Sacc. Teleomorfo.

En cacao se forman diferentes tipos de hipertrofias (malformaciones) denominadas agallas o verrugas, en el tronco y en las ramas se conocen con los nombres de agallas de punto verde, abanico, perilla y floral. La agalla de punto verde son grupos de yemas en forma compacta que no logran desarrollarse. Las agallas florales se manifiestan como ramilletes de flores en los cojines florales, no producen frutos. La de perilla se manifiesta como hipertrofia en ramas y el tallo en forma de tumor (Capriles, 1981).

Medidas de control

1. Mantener el equilibrio de la sombra dentro de la plantacin. 2. Eliminar las plantas muy afectadas. 3. Eliminar las agallas de perilla mediante ciruga vegetal y aplicar pasta cicatrizante. 4. Hacer desinfeccin de las herramientas.

Muerte sbita y/ o Regresiva (Pudricin carbonosa de la mazorca) Lasiodiplodia theobromae (Pat) Griffy Maubl

La muerte sbita, repentina o regresiva consiste en una quemazn de los brotes tiernos y necrosis de las ramas o toda la planta. Inicialmente se observa una clorosis en las hojas ms jvenes, luego una necrosis en los bordes que se hace total y toma una coloracin marrn intensa. Las hojas necrosadas se hacen muy frgiles y caen dando la apariencia de muerte descendente. En frutos pequeos o medianos no es frecuente la enfermedad, pero en mazorcas a punto de cosecha causa una pudricin carbonosa oscura con abundante polvillo negro (conidios).En el tallo se manifiesta por una a varias manchas necrticas de color castao rojizo tornando a gris oscuro. La corteza se vuelve fibrosa y se separa con facilidad de la madera. Los daos severos se producen bajo condiciones de altas temperaturas, alta humedad relativa, perodo seco prolongado, ataque de insectos y presencia de heridas (Capriles, 1981). Medidas de control

1. Poda de mantenimiento y raleo del sombro, para permitir entrada de luz y aireacin de la plantacin, evitando los excesos de humedad. 2. Recoleccin y destruccin de mazorcas enfermas. 3. Proteccin de las heridas con pasta cicatrizante. 4. Desinfectar las herramientas cada vez que se pase de un rbol a otro.

6. Aspectos generales de los hongos Los hongos son organismos eucariotas hetertrofos que tienen un rol importante en el medio ambiente. Son responsables de la descomposicin de kl a materia orgnica, la produccin de antibiticos, micotoxinas y diversos compuestos bioactivos. Muchos son patgenos de plantas y animales y algunas especies sirven de alimento para los seres humanos. Los hongos

son capaces de establecer relaciones simbiticas con otros organismos, asocindose al tejido como parsitos o endfitos (Alexopoulus et al., 1996). Un hongo patgeno es aquel que causa lesiones y sintomatologa en los tejidos vegetales (Ulloa y Hanlin, 2000), causando daos considerables a los cultivos agrcolas e influyendo negativamente a la economa (Gold et al., 2001). En contraste, un hongo endfito es aquel que habita en los tejidos vegetales sin causar dao (Petrini, 1991; Malav 2005). Se ha documentado la presencia de uno o ms endfitos habitando diversas especies de plantas, formando una relacin mutualista donde la planta le ofrece albergue y nutrientes al hongo, mientras ste provee resistencia contra herbvoros, insectos hongos patgenos enfermedades y sequa (Lodge y Cantrell, 1995; Alexopoulus, 1996; Carlile, 2001; Clay y Schardi, 2002). Esta resistencia de la planta puede relacionarse a la produccin de toxinas y metabolitos secundarios por algunas especies endofticas (Lodge y Cantrell, 1995; Carlile, 2001; Clay y Schardi, 2002). Se ha demostrado que algunos de estos metabolitos secundarios (aminas, amidas, derivados de indol, esteroides y terpenoides, entre otros) tienen efecto antimicrobiales (Tan y Zou, 2001; Strobel y Daisy, 2003). Por ejemplo, Phomopsis produce fomosicalasina, un metabolito con accin inhibitoria contra Bacillus subtilis, Salmonella entrica, Staphylococcus aureus y Candida tropicales (Horn et al., 1995). La diversidad de hongos endfitos asociados a especies vegetales est relacionada con la edad de las hojas, localidad (ambientes terrestres o acuticos) y clima de la planta, ya sea en zonas templadas o tropicales (Frhlich et al, 2000; Macarthur y McGee, 2000; Arnold y Herre, 2003). Varias especies de endfitos pueden ser aisladas de una misma planta,

demostrando que no necesariamente hay especificidad entre los hongos endfitos y un gnero hospedero en particular (Petrini, 1986). Asimismo, han aislado endfitos de diversas familias de plantas, entre las que destacan Sapotaceae, Orchidaceae, Poaceae, Malvaceae, Arecaceae, entre otras (Lodge et al., 1996; Bayman et al., 1997; Schulthess y Faeth, 1998; Marshallm et al., 1999). 6.1. Divisin Ascomycota. 6.1.1. Aspectos generales Los ascomicetes son un grupo monofiltico (todos derivan del mismo antecesor comn), que engloba aproximadamente al 75% de los hongos conocidos. Aqu se encuentran la mayora de los hongos que, junto con un alga, forman los lquenes, y adems, de ellos derivan la mayora de los Deuteromicetes, que han perdido, o se desconoce, su reproduccin sexual. Tienen una fase dicaritica celular. En los hongos vistos hasta ahora, y la mayora de los seres vivos, tras la fusin del citoplasma de los dos gametos (plasmogamia), tiene lugar la fusin de sus ncleos haploides (cariogamia), para originar una clula con un ncleo diploide. Sin embargo, en estas dos divisiones, la cariogamia no es inmediata, por lo que tiene lugar una fase dicaritica (dos ncleos), que es breve en los ascomicetos y ms larga en los basidiomicetos (Rubio, 2004). El autor in comento, expone que la principal caracterstica que define a los ascomicetes es la presencia de ascas. Durante la fase dicariota, las hifas continan creciendo, formando un micelio dicaritico; cuando las condiciones son adecuadas, en la clula terminal de una hifa, se produce la cariogamia (la fusin de los dos ncleos haploides que contena), formndose entonces el cigoto, que ser la clula madre del asco.

Asexualmente se reproducen por gemacin, fisin, fragmentacin y desarrollo de conidios, que producen esporas. Sexualmente, por

conjugacin, gametangia y gametangiogamia. 6.1.2. Ciclo de vida El ciclo caracterstico de este grupo es el ciclo de vida haplo- caritico. En el que el estado dicaritico es muy conspicuo. Uno de los caracteres ms interesantes de los Ascomicetes y Basidiomicetes es la separacin temporal de la plasmogamia y la cariogamia, de tal manera que se forma un sistema de hifas dicariticas que puede durar mucho tiempo. Cuando por fin ocurre la cariogamia el cigoto sufre meiosis inmediatamente. As la nica clula diploide del ciclo de vida es el cigoto (Anexo Figura 6). Los ascomicetes se caracterizan por la formacin de un ascocarpo en forma de bastn llamado asco y por la formacin dentro del mismo de las ascosporas. Los ascos, slo con algunas excepciones, se forman dentro de cuerpos fructferos llamados ascocarpos, los cuales se presentan con cuatro morfologas fundamentales: Cleistotecio: Ascos completamente cerrados por el ascocarpo. Peritecios: Ascocarpos en forma de pera o botella que cuando inmaduro est cerrado pero al madurar forma un poro por donde escaparn las esporas. La pared que los envuelve se denomina peridio (en realidad el excpulo) que se abre apicalmente por un ostiolo. En el interior se ordenan los ascos sobre un himenio, Los ascos pueden estar acompaados de estructuras estriles en forma de filamentos llamados parfisis. Apotecio: Ascocarpo completamente abierto con forma de copa o disco. Los ascos se disponen en un himenio en forma de empalizada. Rodeado por un excpulo carnoso en forma de plato.

Ascostroma o pseudotecio: Los ascos se forman directamente dentro de cavidades hechas en un estroma (tejido somtico compacto de estructura compacta y acojinada). De acuerdo al tipo de ascoarpo que presenten los ascomicetes de la subclase Euascomycetidae se agrupa en tres tipos generales: Plectomycetes si el ascocarpo es un cleistotecio, Pyrenomycetes si el ascocarpo es un peritecio y Discomycetes si el ascocarpo es un apotecio. Estos hongos se reproducen muy frecuentemente de manera asexual por medio de: Conidiosporas: esporas asexuales que se desarrollan en el extremo de una hifa especial llamada conidiforo.

6.2. Caractersticas de algunos de los hongos encontrados como endfitos 6.2.1. Cladosporium Clasificacin Cientfica Reino Divisin Clase Subclase Orden Familia Gnero Fungi Ascomycota Dothideomycetes Dothideomycetidae Capnodiales Davidiellaceae Cladosporium

Aspectos generales Gnero que engloba a unas 40 especies, algunas de ellas fitopatgenas y la mayora saprofitas sobre vegetacin o sobre el suelo;

algunas de sus especies son capaces de atacar celulosa, pectina y lignina. Es un gnero de distribucin cosmopolita, siendo uno de los taxones ms aislado y abundante en los recuentos aerobiolgicos de todo el mundo. Es ampliamente citado como productor de asma y esporosis, e incluso algunas de sus especies actan como oportunistas y son capaces de intervenir en ciertos procesos micticos pulmonares, atacar la piel, producir

cromoblastomicosis y lesiones neurotrpicas (Rivas y Thomas, 2005). El autor contina, que aunque el mayor inters por estos hongos, desde el punto de vista sanitario, viene dado por la capacidad alerggena de sus conidios, que pueden alcanzar en la atmsfera, tanto en interiores como en exteriores de edificaciones, concentraciones muy altas. Segn los datos facilitados por la Unidad de Alergia del Hospital Reina Sofa de Crdoba, Cladosporium es el tercer alrgeno fngico en importancia tras Alternaria y Aspergillus Este gnero forma en medio de cultivo, una coloracin verde oliva, marrn o negro en algunos casos. Con una textura aterciopelada, un margen entero y con alta capacidad de esporulacin, los conidios de Cladosporium pueden aparecer encadenados o solitarios. Poseen un tamao aproximado de 3-7 x 2-4 , son reconocibles por las caractersticas de color y forma comentadas en la descripcin anterior y por la presencia de una cicatriz en la base (Rivas y Thomas, 2005). El premencionado autor expresa, su teleomorfo: Mycosphaerella, forma en medio de cultivo colonias de color olivceo y a veces grises o marrones; aterciopeladas, flocosas o pelosas; a veces presenta estromas. Sus conidiforos son macronematosos o semimacronematosos simples o poco ramificados, con una coloracin marrn o verdosa, y de superficie lisa o

ligeramente granulosa en algunas especies. Muchas de sus especies poseen ramoconidios con o sin septos. La clula conidigena es poliblstica, generalmente integrada y simpodial; da lugar a conidios que generalmente quedan en cadenas acrpetas, o a veces se presentan solitarios. Sobre este particular, Rivas y Thomas (2005) exponen que pueden ser de forma variada (elipsoidales, limoniformes, oblongos, esfricos,

subesfricos, fusiformes), con una cicatriz en la base y pueden ser unicelulares o poseer 1-3 septos transversales; poseen pared lisa, verrugosa o equinada, hialina a pigmentada, de color olivceo a marrn obscuro. 6.2.2. Curvularia Clasificacin cientfica Fungi Ascomycota Euascomycetes Pleosporomycetidae Pleosporales Pleosporaceae Curvularia

Reino Divisin Clase Subclase Orden Familia Gnero

Aspectos Generales Las especies de gneros Curvularia, se desarrollan sobre variados substratos y por lo general presentan patrones de distribucin geogrfica amplios como cosmopolita o pantropical, aunque algunos de sus

representantes pueden presentar una distribucin ms limitada (Ellis, 1966, 1971; Sivanesan, 1984a, 1987). En las plantas actan como patgenos, invasores secundarios o saprobios. Son muy conocidos como parsitos importantes de gramneas

silvestres

y

cultivadas

en

su

hbitat

fundamental.

Sin

embargo

ocasionalmente tambin pueden afectar otros grupos. Las enfermedades ms comunes que producen son manchas foliares, marchitamiento de hojas y plntulas, pudriciones de races y afectaciones de semillas y granos (Benoit y Mathur, 1970; Ellis, 1971; Chidanbaram et al., 1973; Sivanesan, 1984a, 1987; Sivanesan y Waller, 1986; Alcorn, 1988a; Farr et al., 1995; Kwasna, 1995). Es un patgeno facultativo, que puede causar manchas en hojas en diferentes plantas como en, habas, el algodn, el algodn, el arroz, la cebada, el trigo, el cacao, el maz, entre otros rubros. Sus sntomas principalmente se presentan en hojas desarrolladas donde se observa manchas de color marrn oscuro de formas irregulares en los bordes y el pice de 2 a 4 cm esta enfermedad no ocasiona prdidas en la produccin (MycoBank, 2000).

6.2.3. Lasiodiplodia

.Clasificacin cientfica Reino Divisin Subdivisin Clase Orden Familia Gnero Especies Fungi Eumycota Deuteromycotina Coelimycetes Sphaeropsidales Sphaeropsidaceae Lasiodiplodia theobromae pseudotheobromae

Aspectos generales El patgeno causante de este sntoma afecta prcticamente a una gran cantidad de especies de rboles frutales, a los que llega a invadir por un mal manejo agronmico del cultivo (estrs hdrico, deficiencias nutricionales), y por el descuido de las labores de poda que se realiza durante la conduccin del cultivo, produciendo daos como la muerte descendente de las ramas, que pueden incluso llagar a matar a la planta. El rango de hospedantes es bastante amplio como aguacate, mango, cacao, manzano, vid, rosal, entre otros, y as como en diferentes reas ecolgicas. Entre los sntomas se tiene que las plantas afectadas presentan secamiento y necrosis de ramas terminales en donde es posible observar muerte descendente as como defoliacin parcial y muerte del rbol. Para el control de la muerte descendente se considera la eliminacin de la rama mediante la labor "ciruga" y el uso de protector de heridas. Las aspersiones de fungicidas cpricos pueden tambin reducir la severidad (Alves et al., 2008). Las muestras de ramas secas que se trajeron de las plantaciones se sometieron a cultivos in vitro donde el hongo desarrollo colonias densas de color oscuro-grisceo y gris claro en el borde por su cara superior y los micelios que se levantaban como columnas. No se observ formacin de esclerocios. La observacin microscpica revel la presencia de conidios rectos, cilndricos, de extremos obtusos, hialinos (Alves et al., 2008). 6.2.4. Colletotrichum Clasificacin cientfica Reino Divisin Clase Subclase Fungi Ascomycota Sordariomycetes Sordariomycetidae

Orden Familia Gnero

Incertae sedis Glomerellaceae Colletotrichum

Aspectos generales

Este gnero se caracteriza por presentar organismos cosmopolitas y pocas veces tienen especificidad patognica en sus hospedantes. Presentan una gran variabilidad en caracteres morfolgicos de conidios y apresorios. Las enfermedades que causan han sido descriptas en un sinnmero de especies cultivadas y espontneas (Agrios 1995). sta enfermedad presenta sntomas en los frutos en estado de llenado y maduracin. Los sntomas que se observan son lesiones circulares de color marrn claro de 1 2 cm de dimetro, hundidas, Internamente los frutos presentaron una pudricin y frecuentemente es blanda. Luego esta va avanzando en la medida que el patgeno continu la colonizacin de nuevos tejidos, hasta las setas del hongo irrumpen a travs de la epidermis al formase los acrvulos en estos se observa setas rgidas, numerosas, negras, y conidiforos simples, rectos, hialinos, que cubre la superficie del estroma en un solo estrato. La antracnosis causada por Colletotrichum spp., afecta diferentes cultivos, como el gandul, la fresa, el mang, el cacao, la papaya, el aguacate, la manzana, la almendra, la lenteja, el algodn, el caf y el guineo, entre otras plantas. El gnero Colletotrichum fue descrito por Tode en 1790 bajo el nombre de Vermicularia, nombre que fue validado por Fries en el 1825 (Baxter et al., 1985). Ms tarde, Saccardo en 1884, transfiri a Vermicularia al gnero

Colletotrichum y aplic este nombre a los hongos habitantes de las hojas que eran similares a Colletotrichum (Baxter et al., 1985). Colletotrichum fue establecido como gnero por Corda en 1831, quien lo describi como un hongo caracterizado por producir cuerpos de fructificacin asexual llamados acrvulos setosos y conidias hialinas y fusiformes (Baxter et al., 1985). Colletotrichum ha sido redescrito bajo diferentes gneros, siendo los dos ms comunes Vermicularia y Gloeosporium Desm & Mont (Wharton, 2001). Han existido problemas para diferenciar a Colletotrichum de Gloeosporium. Inicialmente, en Gloeosporium su acrvulo glabroso era distintivo, pero ms tarde se descubri que este hongo poda desarrollar setas en algunos sustratos (Jeffries et al., 1990). Duke en el 1928, demostr que la presencia o ausencia de setas y su arreglo en el acrvulo son extremadamente variables y no son relevantes a nivel de gnero (Wharton, 2001). Von Arx (1957, 1970) redujo la confusin entre gneros al escribir monografas sobre Colletotrichum, en las que reduce cientos de taxones a 13 especies aceptadas. Von Arx (1970) describe el estado anamorfo de Glomerella, el gnero Colletotrichum, con acrvulos intra o subepidermales, con variaciones en tamao y forma, glabrosos o setosos. Las setas son oscuras u ocasionalmente casi hialinas que surgen de la base del acrvulo. Las conidias son elipsoidales, cilndricas y forman apresorios al germinar. Adems, describe para C. gloeosporioides acrvulos oscuros o claros, setosos o glabrosos. Las conidias son cilndricas o elipsoidales, redondeadas en los extremos, atenuadas o truncadas, hialinas y forman masas de esporas anaranjadas a rosadas. Una herramienta adecuada para la identificacin de Colletotrichum spp. es la medida de sus apresorios. Para muchos hongos fitopatgenos, el apresorio es la estructura ms importante en la invasin del hospedero. ste aumenta el rea de superficie y permite la adhesin del hongo a la planta

hospedera. Adems, provee la fuerza mecnica, las enzimas necesarias para la penetracin y promueve la sobrevivencia en condiciones adversas (Hutchison et al., 2000). Segn Buddie et al., (1999) en su estudio y en otros estudios citados por Buddie (Bruns et al., 1991; Grondona et al., 1997) se ha demostrado que Colletotrichum spp. tiene subdivisiones sistemticas y estos grupos pueden ser divididos en otros subniveles. Esta afirmacin est basada en el anlisis de distintas partes del genoma, que podran reflejar diferentes niveles de jerarqua taxonmica. El problema con la taxonoma de Colletotrichum spp. reside en que produce conidias secundarias provenientes de las conidias de germinacin inicial. Estas esporas secundarias generalmente son variables en tamao y dificultan la identificacin (Buddie et al., 1999). Debido a estos problemas se han utilizado una variedad de mtodos moleculares para discriminar entre especies de Colletotrichum ya que los criterios morfotaxonmicos no son precisos (Freeman et al., 1996). 6.2.5. Glomerella Clasificacin Cientfica Reino Divisin Clase Subclase Orden Familia Gnero Fungi Ascomycota Sordariomycetes Sordariomycetidae Incertae sedis Glomerellaceae Glomerella

Aspectos generales

Glomerella (Stonem.) Spaulding y Schrenk se reconoce como el estado teleomorfo de Colletotrichum, pero no se ha relacionado con otros aislamientos de este taxn (Jeffries et al., 1990). Para algunas formas de Colletotrichum no se ha encontrado el estado teleomorfo, pero pueden ser diferenciados morfolgicamente. Estas formas estn estrictamente limitadas a una planta hospedera especfica y tienen formas de crecimiento distintas en cultivo puro (Von Arx, 1970). Glomerella spp. es un ascomiceto que desarrolla un peritecio bien variable en estructura y se pueden encontrar muchas formas genticas diferentes, de fisiologa variable y especficos para algunos hospederos o sustratos (Von Arx, 1970). Presenta un ascocarpo de 85-300 m, marrn oscuro, con pocas ascas, clavadas y de pared fina, contenidas por hasta ocho ascosporas. Las ascosporas son truncadas, biseriadas y elipsoidales a fusiformes, hialinas, de pared lisa, mayormente con una medida de 10-21 x 4-6 m (Domsch et al., 1980). 6.2.6. Fusarium Clasificacin cientfica Reino Divisin Clase Subclase Orden Familia Gnero Fungi Ascomycota Sordariomycetes Hypocreomycetidae Hypocreales Nectriaceae Fusarium

Aspectos generales Fusarium, es una enfermedad que puede catalogarse como universal. Este es un hongo tpico de suelo, que en zonas clidas y hmedas causa

marchitamiento de follaje. Esta enfermedad es causada por un hongo presente en el suelo, en condiciones ambientales favorables para el desarrollo de la enfermedad son: suelos moderadamente cidos, sueltos y arenosos; temperatura elevada (ms de 25C) y lluvias suficientes para la evolucin normal de la planta. Se han observado en plantas, amarillamiento general de las hojas que luego estos se marchitan, y hay una defoliacin, los frutos cuajados son escasos, poco desarrollados y de maduracin defectuosa. Estos sntomas se observan por que el hongo penetra por las races y se localiza en los vasos leosos de stas y del tallo, impidiendo o dificultando la ascensin y circulacin de la savia, produciendo el oscurecimiento del tejido leoso. Y al momento de extraer la raz de la planta se observa una decoloracin algo rojizo opaco (MycoBank, 2000). 6.2.7. Pestalotiopsis Clasificacin cientfica Sper Reino Reino Divisin Subdivisin Clase Subclase Orden Familia Gnero Aspectos generales Eucariota Fungi Ascomycota Pezizomycotina Sordariomycetes Xylariomycetidae Xylariales Amphisphaeriaceae Pestalotiopsis

Produce una enfermedad fungosa considerada generalmente una enfermedad menor. Ataca el follaje que ha sido daado o debilitado por un clima desfavorable o condiciones de crecimiento. Generalmente, el follaje muerto est cerca de la base de la planta y donde el follaje es relativamente denso. Usualmente, la enfermedad comienza en la punta de la hoja y progresa hacia su base. El color del follaje va de verde a amarillento, luego se pone marrn oscuro que puede verse casi negro. La enfermedad puede matar las ramitas pequeas donde las hojas (en forma de agujas) infectadas murieron (Schuster, s.f.). Control El control es podar el follaje muerto y en caso necesario las ramitas pequeas cuanto antes en primavera. Reduzca la lesin de invierno reduciendo la deshidratacin. No permita que la nieve se acumule, permanezca o quede alrededor o encima de la base de la planta por ningn tiempo - especialmente cuando se derrite. Evite sobre plantar (amontonar) para permitir suficiente circulacin de luz solar y aire (Schuster, s.f.). 6.2.8. Penicillium Clasificacin Cientfica Reino Divisin Clase Subclase Orden Familia Gnero Fungi Ascomycota Leotiomycetes Leotiomycetidae Helotiales Sclerotiniaceae Penicillium

Aspectos generales

Los penicilios son mohos comunes que desarrollan sobre los ms diversos substratos: granos, paja, cueros, frutas, etc. Su identificacin se basa en las caractersticas morfolgicas que fue catica hasta que Pitt (1980) normaliz las condiciones de cultivo y Frisvad (1981) consider la formacin de los metabolitos secundarios en la descripcin de las especies. La importancia de estos mohos en la alimentacin humana y animal se debe a que, adems causar deterioro, producen toxinas (Pitt y Leistner, 1991). Este gnero se caracteriza por formar conidios en una estructura ramificada semejante a un pincel que termina en clulas conidigenas llamadas filides. El gnero Penicillim se caracteriza por formar verticilios. Si hay slo un verticilo de filides el pincel es monoverticilado. Las ramificaciones de un pincel poliverticilado son ramas, rmulas, mtulas y filides. Los conidios generados en filides suelen llamarse fialoconidios para indicar su origen. En la filide, al dividirse el ncleo, se extiende simultneamente el extremo apical que luego se estrangula separando a la espora recin formada. Se llama conectivo a la porcin de pared que une entre s a los conidios permitiendo la formacin de cadenas, y en algunas especies se aprecia claramente con el microscopio ptico (Webster, 1986). Los filamentos o hifas alcanzan un dimetro entre dos o tres micrmetros y tienen septos con un poro central que no es visible al microscopio ptico. Las paredes del estpite, las ramas o las mtulas pueden ser lisas, rugosas o equinuladas. La pared de las filides es siempre lisa. Las filides pueden tener forma de nfora o bien ser casi cilndricas con la porcin apical en forma de cono. El tamao mximo de las filides es de 15 mm y la parte terminal no supera los 3 mm de largo. Los conidios son esfricos o elipsoidales, unicelulares, hialinos que en masa se ven de color verde, verde azulado, verde aceituna o gris. La pared de los conidios es lisa o rugosa segn las especies (Webster, 1986).

Las cepas de Penicillium con reproduccin sexuada corresponden a los gneros teleomrficos Eupenicillium que forma cleistotecios con pseudoparnquima constitudo por clulas de pared engrosada, y

Talaromyces que presenta los ascos rodeados de hifas entrelazadas formando la delgada pared del gimnotecio (Pitt y Hocking, 1997). Eupenicillium y Talaromyces tienen adems otros anamorfos en los gneros Torulomyces el primero y Geosmithia, Merimbla y Paecilomyces el segundo (Pitt et al. 2000). 6.2.9. Phomopsis

Clasificacin Cientfica Reino Divisin Clase Subclase Orden Familia Gnero Aspectos generales Este gnero posee micelio inmerso, ramificado, septado, hialinos o de color marrn plido. Presenta picnidio conidiomata sumergido o semisumergido. Algunas veces presenta erupciones uniloculares de color marrn, globoso, disperso o agregado. Ocasionalmente confluente con paredes delgadas. Textura angular, plida a marrn medio. Apertura simple o compleja del picnidio, centrada, sin papilas. Los Conidiforos estn slo presentes en dos especies de este gnero, los cuales pueden ser filiformes, septados, ramificados irregularmente, ramificada o con ramificaciones cortas. Las clulas conidigenas son enteroblsticas, con filides integradas o Fungi Ascomycota Sordariomycetes Sordariomycetidae Diaporthales Diaporthaceae Phomopsis

disgregadas

con

cuellos

cilndricos

(doliiformes)

o

semicilndricos

(ampuliformes), stos son lisos de rpida apertura. La pared celular es marcadamente engrosada. Los conidios son hialinos, aseptados o pueden presentar un septo, las paredes delgadas a menudo presentan gtulas, elipsoidales, cilndricas, fusiformes, periformes o globosas (Sutton, 1980). Estos hongos tienen la caracterstica de formar -conidios, ovoidales, piriformes, o limoniformes, capaces de producir las primeras hifas de la colonia, hifas frtiles. Y producen tambin -conidios, filiformes, o en forma de bastones, capaces de producir hifas, usualmente son las hifas presentes en la reproduccin asexual.

7. Identificacin molecular de hongos 7.1. Extraccin de ADN La extraccin de ADN se realiza siguiendo ciertos protocolos de extraccin, normalmente se usa el que de mejores resultados a menor costo. Se toma una pequea porcin de micelio, evitando en lo posible de arrastrar medio de cultivo, y se coloca en un tubo de ensayo de 1,5 ml, con 1000 l de Buffer de lisis, se macera y se lleva a la nevera a -80 C. Al da siguiente se sacan las muestras de -80 C y se someten a un choque trmico, llevando las muestras al Thermomixer a 55C por un periodo de 5 min. Una vez que se sometan al choque trmico se centrifugan y se comienza a aplicar el Protocolo de Extraccin deseado. Una vez realizado el protocolo de extraccin, se procede a evaluar la calidad del ADN, haciendo la lectura del mismo en un gel de agarosa al 1%, y llevndola al escner para ser visualizado. Es importante que el protocolo

de extraccin se realice adecuadamente, porque de lo contrario, cuando se realice la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) no amplificar el ADN. 7.2. Polymerase Chain Reaction (PCR) La reaccin en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en ingls (Polymerase Chain Reaction), es una tcnica de biologa molecular desarrollada en 1986 por Kary Mullis, cuyo objetivo es obtener un gran nmero de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mnimo; en teora basta partir de una nica copia de ese fragmento original, o molde (Watson et al., 2004). Esta tcnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificacin, resulta mucho ms fcil identificar con una muy alta probabilidad virus, hongos o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (Cadveres) o hacer investigacin cientfica sobre el ADN amplificado. Estos usos derivados de la amplificacin han hecho que se convierta en una tcnica muy extendida, con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo (Watson et al., 2004). Esta tcnica se fundamenta en la propiedad natural de las ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual emplea ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recin formadas entre s tras cada fase de replicacin y, a continuacin, dejar que vuelvan a unirse a polimerasas para que vuelvan a duplicarlas (Watson et al., 2004). Por lo general, la PCR es una tcnica comn y normalmente indispensable en laboratorios de investigacin mdica y biolgica para una gran variedad de aplicaciones. Entre ellas se incluyen la clonacin de ADN para la secuenciacin, la filogenia basada en ADN, el anlisis funcional de genes, el diagnstico de trastornos hereditarios, la identificacin de huellas

genticas (usada en tcnicas forenses y pruebas de paternidad) y la deteccin y diagnstico de enfermedades infecciosas (Watson et al., 2004). Hoy, todo el proceso de la PCR est automatizado mediante un aparato llamado termociclador, que permite calentar y enfriar los tubos de reaccin para controlar la temperatura necesaria para cada etapa de la reaccin. Muchos termocicladores modernos hacen uso del efecto Peltier, que permite tanto calentar como enfriar los tubos simplemente invirtiendo la corriente elctrica. Los tubos usados para PCR tienen una pared muy fina, lo que favorece una buena conductividad trmica, permitiendo que se alcance rpidamente el equilibrio trmico. Casi todos los termocicladores tienen un sistema que calienta la tapa de cierre con el fin de evitar la condensacin sobre los tubos de reaccin. Los termocicladores ms antiguos que carecan de este sistema, solucionaban el problema de la condensacin con una capa de aceite en la parte superior de la mezcla de reaccin o con un poco de cera dentro de los tubos (Mullis, 1990). 7.2.1. Ciclo de amplificacin El proceso de PCR por lo general consiste en una serie de 20 a 35 cambios repetidos de temperatura llamados ciclos; cada ciclo suele consistir en 2-3 pasos a diferentes temperaturas. La PCR comn se realiza con ciclos que tienen tres pasos de temperatura. Los pasos de ciclos a menudo estn precedidos por un choque trmico (llamado "hold") a alta temperatura (> 90 C), y seguido por otro hold al final del proceso para la extensin de producto final o el breve almacenaje. Las temperaturas usadas y el tiempo aplicado en cada ciclo dependen de gran variedad de parmetros. stos incluyen la enzima usada para la sntesis de ADN, la concentracin de iones divalentes y dNTPs en la reaccin, y la temperatura de unin de los cebadores, as como la longitud del ADN que se desea amplificar (Mullis, 1990).

Iniciacin Este paso consiste en llevar la reaccin hasta una