EL CARIOTIPO

1. Introducción2. Metodología3. Clasificación de los cromosomas4. Técnicas de bandeado cromosómico5. Citogenética molecular

MetodologíaEL CARIOTIPOTejido sólido

MetodologíaEL CARIOTIPOSangre periférica

G-bandingFitohemaglutinina

EL CARIOTIPO Metodología

Metafase humana teñida con Giemsa

Clasificación de los cromosomas

Los cromosomas se clasifican por pares de homólogos y se ordenan atendiendo a:

• Tamaño• Posición del centrómero (constricción primaria)• Presencia de constricciones secundarias

En el cariotipo humano los cromosomas se clasifican en siete grupos: A, B, C, D, E, F y G

EL CARIOTIPO

Cariotipo estándar

EL CARIOTIPO Clasificación de los cromosomas

Técnicas de bandeado cromosómico

1. Bandas que marcan todo el cromosomaBandas QBandas GBandas RBandas G de alta resolución

2. Bandas que marcan regiones específicasBandas CBandas TBandas NOR

EL CARIOTIPO

Bandas que marcan todo el cromosomaBandas Q ADN rico en AT

EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico

Bandas Q Quinacrina patrón similar a las bandas G se observan con el microscopio de fluorescencia

Bandas G

Bandas que marcan todo el cromosoma

Resultan de interacciones del ADN y proteínas con los colorantes que componen la tinción Giemsa. Se desnaturalizan proteínas con tripsina.

EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico

ADN rico en AT

Bandas-G

• Las bandas G oscuras son regiones de replicación tardía en la fase S, contienen cromatina más condensada

• Las bandas G claras se replican generalmente más tarde en la fase S. Cromatina menos condensada.

Los cromosomas se tiñen en zonas oscuras y claras

EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico

Bandas que marcan todo el cromosoma

Bandas R

La técnica de bandas R supone la desnaturalización de regiones del cromosoma por calor seguida por tinción de Giemsa

ADN rico en GC

EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico

Bandas que marcan todo el cromosomaEL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico

Bandas de alta resolución

EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico

Bandas de alta resolución

Nº Bandas 400 550 850

• Bandas de alta resolución Sincronización en prometafase (methotrexate) bandas G

Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma

EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico

Bandas C

Bandas centroméricas tiñe la heterocromatina

Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma

EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico

Bandas t

Se tiñen los telómeros

Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma

EL CARIOTIPO Técnicas de bandeado cromosómico

Bandas NOR

Se tiñen los organizadores nucleolares de los cromosomas acrocéntricos

Citogenética molecular

Aplicación de las técnicas de biología molecular a preparaciones citogenéticas.Identificación de reestructuraciones producidas “de novo” y de cromosomas marcadores.Detección de anomalías cromosómicas en células en interfase.Estudio de la estructura y función de regiones cromosómicas específicas.

EL CARIOTIPO

Citogenética molecularEL CARIOTIPO

Hibridación “In Situ” con fluorescencia (FISH)

Una o varias sondas de ADN, unidas a moléculas de marcaje fluorescentes, se hibridan con cromosomas en una preparación, que se visualizan n un microscopio de fluorescencia.

Cromosoma en el portaobjetos

Marcaje de la sonda con una molécula fluorescente

desnaturalización

ADN doble hélice

Hibridación de la prueba con el cromosoma desnaturalizadodesnaturalización

Hibridación “In Situ” Fluorescente (FISH)

Tipos de sondas de ADNCentroméricas (α-satélite)

•Metafase: Identificación de cromosomas

•Interfase: Recuento de cromosomas

Sonda α-satélite específica de centrómero

Tipos de sondas de ADN

Sonda específica de locus con sonda control para el cromosoma

Sonda para identificar la región delecionada

Sonda para identificar el cromosoma

específica de locus

Sitio de sondas FISH

(TTAGGG)n

Altas concentraciones de genesdeleciones microscópicas o submicroscópicas pueden tener un impacto significativo.

Juegan un papel crítico en el apareamiento de los cromosomas en meiosis

Teloméricas y subteloméricasTipos de sondas de ADN

Tipos de sondas de ADN

Marcaje del cromosoma entero: pintado

Identifica el material de un determinado cromosoma

En translocaciones

cromosoma 8

Pintado

Multiplex FISH: Multi-FISH

El ADN de cada cromosoma humano se marca directamente con uno o más fluorocromos, de una manera combinatoria, resultando un color único para cada uno de los 24 cromosomas

Cromosoma 1Cromosoma 2Cromosoma 3

Los 24 tonos de color no pueden ser distinguidos por el ojo humano

Se captura un conjunto de imágenes en la escala de grises, uno por cada uno de los cinco filtros distintos

Las imágenes son procesadas por el ordenador para dar una imagen pseudocoloreada de la metafase y del cariotipo

METAFASE

Azofeifa et al.

CARIOTIPO

Azofeifa et al.