FFI0772

ADRIANO D ANDRICOPULOADRIANO D ANDRICOPULOADRIANO D. ANDRICOPULOADRIANO D. ANDRICOPULORAFAEL V. C. GUIDORAFAEL V. C. GUIDO

OBJETIVOSOBJETIVOS

� Inibição Enzimática� Inibição Enzimática

� Triagens Bioquímicas

� Determinação da Potência: IC50

INIBIÇÃOINIBIÇÃOINIBIÇÃOINIBIÇÃOÁÁENZIMÁTICAENZIMÁTICAENZIMÁTICAENZIMÁTICA

ATORVASTATINAATORVASTATINAAtorvastatina

(Lípitor®)(Lípitor®)US$ 10,733 bilhões - 2010HMG-CoA Redutase

HMG-CoA redutaseTiolase

HMG-CoA

ACETIL-CoA 3-HIDRÓXI-3-METILGLUTARIL-CoA(HMG-CoA)

AESTATINASSintase

Mevalonato kinase

ÁCIDO MEVALÔNICOACETO-ACETIL-CoA

ATP

MIC

AFosfomevalonato kinase

MEVALONATO-5-FOSFATOU

ÍM Isopentenil-PPIsomerase

Mevalonato-5-pirofosfatodecarboxidase

MEVALONATO-5-PIROFOSFATO

DIMETILALIL-PPCO2

ISOPENTENIL-5-PIROFOSFATO (PP)

OQ

U

Farnesil-PP sintaseBisfosfonatos

GERANIL-PP

ISOPENTENIL 5 PIROFOSFATO (PP)

BIO

FARNESIL-PP

Farnesil-PP sintaseBisfosfonatos

GERANILGERANYL-PP

GERANIL PP

VIA

Esqualeno sintaseFARNESIL PP

ESQUALENO

Esqualeno monoxigenase

GERANILGERANYL PP

Geranilgeranil-PP sintase

V

LANOSTEROL

Esqualeno monoxigenase

Esqualeno epoxidasePROTEÍNAS

HEME ADOLICOL

2,3-OXIDOSQUALENONADPH

COLESTEROL19 reações

LANOSTEROLPROTEÍNASPRENILADAS

DOLICOLUBIQUINONA

MECANISMO DE AÇÃO

� Inibidores da HMGR (EC 1 1 1 34)� Inibidores da HMGR (EC 1.1.1.34)

2 H+

2 NADPHCoA

2 NADP+

HMGR

HMG-CoACoASH

M I ÃMODO DE INTERAÇÃO ATORVASTATINAATORVASTATINA

ATORVASTATINAATORVASTATINA

(3R,5R)-7-[2-(4-fluorofenil)-3-fenil-4-( , ) [ ( )(fenilcarbamoil)-5-(propan-2-il)-1H-

pirrol-1-il]-3,5-ácido-di-hidroxipentanóicop

IC50 = 8 nMK 6 MKi = 6 nM

Holdgate et al., Biochem. Soc. Trans., 2003, 528-531.Istvan & Deisenhofer, Science, 2001, 1160-1164.

RECONHECIMENTORECONHECIMENTOMOLECULARMOLECULAR

ESTATINASESTATINAS

LovastatinaMevacor

PravastatinaPravachol

SinvastatinaZocor

MevastatinaCompactina

l i i i i At t tiFluvastatinaLescol

CerivastatinaBaycol

RosuvastatinaCrestor

AtorvastatinaLípitor

CINÉTICACINÉTICA

INIBIDORESINIBIDORESENZIMÁTICOSENZIMÁTICOS

PESQUISA BÁSICAPESQUISA BÁSICA

Substâncias BioativasMoléculas Bioativas

Ligantes

Composto-Líder

Novas Entidades QuímicasNovas Entidades Moleculares

FÁRMACO Medicamento

TRIAGENS Parâmetros CinéticosParâmetros Cinéticos

TriagemPL% Inibição Triagem

BiológicaLAN

IC50 Potência

EJAMEN

Ki Afinidade NTO

ÃMECANISMO DE AÇÃO

TRIAGENS BIOLÓGICAS

CINÉTICACINÉTICACatálise Enzimática

Esquema de reação química catalisada por uma enzima

INIBIÇÃO ENZIMÁTICAINIBIÇÃO ENZIMÁTICAEfeitos na Velocidade de Reação

ENSAIO BIOLÓGICOENSAIO BIOLÓGICO

EnsaioBiológico

SubstânciasCandidatas

ENSAIO BIOLÓGICO

EnsaioBiológico

SubstânciasCandidatas

Medidaé % InibiçãoCinética % Inibição

% Inhibition = 100 (1 - vi / v0)

PARAMÊTROS CINÉTICOSPARAMÊTROS CINÉTICOS

POTÊNCIAPOTÊNCIAPOTÊNCIAPOTÊNCIA

Concentração x Resposta

PARAMÊTROS CINÉTICOSPARAMÊTROS CINÉTICOS

Concentração (μM) % InibiçãoConcentração (μM) % Inibição0 0

0,04 160,175 400 35 510,35 511,25 75

5 9610 99

100 100

nibi

ção 60

80

nibi

ção 60

80

% In

20

40 % In

20

40

[I] μM0 2 4 6 8 10 12

0

log [I] μM

0,01 0,1 1 10 1000