articulo hipoglucemia

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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS Fundada en 1551 FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA UNIDAD DE POST GRADO Efecto del extracto hidroalcohólico de hojas y flores de Otholobium pubescens en la hiperglicemia experimental en Rattus norvergicus var. Albinus TESIS para optar al Grado Académico de: MAGÍSTER EN RECURSOS VEGETALES Y TERAPÉUTICOS AUTOR ENRIQUE JUAN SOLGORRÉ CONTRERAS ASESOR Mg. AMÉRICO CASTRO LUNA LIMA – PERÚ 2005 Table des matières Dedicace RESUMEN SUMMARY I.- INTRODUCCIÓN II.- MARCO TEÓRICO 2.1. ASPECTOS BOTÁNICOS 2.1.1. CLASIFICACIÓN BOTÁNICA 2.1.2. DESCRIPCIÓN MORFOLÓGICA: CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS. 2.1.3. HÁBITAT 2.2. ASPECTOS QUÍMICOS 2.3. USO EN LA MEDICINA TRADICIONAL 2.4. ESTUDIOS ANTERIORES III.- PARTE EXPERIMENTAL 3.1. MATERIALES 3.1.1. MATERIAL BIOLÓGICO 3.1.2. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS 3.2. MÉTODOS 3.2.1. FASE FITOQUÍMICA 3.2.1.1 RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA 3.2.1.2 PRUEBA DE SOLUBILIDAD 3.2.1.3 MARCHA FITOQUÍMICA 3.2.2. FASE FARMACOLÓGICA 3.2.2.1 BIOENSAYO DE TOXICIDAD 3.2.2.2. DETERMINACIÓN DE LA DL50 3.2.2.3. INDUCCIÓN DE LA HIPERGLICEMIA EXPERIMENTAL 3.2.3. PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO FARMACOLOGICO.

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Page 1: articulo hipoglucemia

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOSFundada en 1551

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

UNIDAD DE POST GRADO

Efecto del extracto hidroalcohólico de hojas y flores deOtholobium pubescens en la hiperglicemia

experimental en Rattus norvergicus var. Albinus

TESISpara optar al Grado Académico de:

MAGÍSTER EN RECURSOS VEGETALES Y TERAPÉUTICOS

AUTORENRIQUE JUAN SOLGORRÉ CONTRERAS

ASESORMg. AMÉRICO CASTRO LUNA

LIMA – PERÚ 2005

Table des matières

DedicaceRESUMENSUMMARYI.- INTRODUCCIÓNII.- MARCO TEÓRICO

2.1. ASPECTOS BOTÁNICOS

2.1.1. CLASIFICACIÓN BOTÁNICA2.1.2. DESCRIPCIÓN MORFOLÓGICA: CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS.2.1.3. HÁBITAT

2.2. ASPECTOS QUÍMICOS2.3. USO EN LA MEDICINA TRADICIONAL2.4. ESTUDIOS ANTERIORES

III.- PARTE EXPERIMENTAL

3.1. MATERIALES

3.1.1. MATERIAL BIOLÓGICO3.1.2. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

3.2. MÉTODOS

3.2.1. FASE FITOQUÍMICA

3.2.1.1 RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA3.2.1.2 PRUEBA DE SOLUBILIDAD3.2.1.3 MARCHA FITOQUÍMICA

3.2.2. FASE FARMACOLÓGICA

3.2.2.1 BIOENSAYO DE TOXICIDAD3.2.2.2. DETERMINACIÓN DE LA DL50

3.2.2.3. INDUCCIÓN DE LA HIPERGLICEMIA EXPERIMENTAL

3.2.3. PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO FARMACOLOGICO.

Page 2: articulo hipoglucemia

3.2.3.1. DETERMINACIÓN DE LA GLUCOSA SANGUINEA.

3.2.4. ANALISIS ESTADÍSTICO DE LA FASE FARMACOLOGICA.

IV.- RESULTADOS

4.1. PRUEBA DE SOLUBILIDAD4.2. MARCHA FITOQUÍMICA4.3. RESULTADO DEL BIOENSAYO DE TOXICIDAD CON Artemia salina4.4. ENSAYO PARA DETERMINAR LA DL50 EN RATAS UTILIZANDO EL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE FLORES YHOJAS DE Otholobium pubescens (Poiret) Grimes.4.5. RESULTADOS DEL TRATAMIENTO FARMACOLÓGICO

V.- DISCUSIÓNCONCLUSIONESBIBLIOGRAFÍAANEXOS

Anexo Nº 1Anexo Nº 2Anexo Nº 3

RESUMEN

SUMMARY

A nuestra querida Universidad Nacional Mayor de San Marcos, le quedo muy agradecido por permitirmecumplir mis aspiraciones y por los conocimientos impartidos a través de sus abnegados profesores, quienessiempre permanecerán en mi pensamiento.Expreso mi inmensa gratitud a mi Asesor Mg. Américo Castro Luna, por su apoyo y paciencia, además por lasacertadas sugerencias para la realización de este trabajo de investigación, contribuciones que serángratamente recordadas y apreciadas.Al glorioso Ejército del Perú, por su excelente política de capacitación a su personal en beneficio de laInstitución.A mi hijo: Jesús Enrique y Lucero Berioska, por traer tanta alegría a mi vida, quienes colaboraron con sucomprensión y paciencia durante estos años de estudio, que son y serán el motivo de constante superaciónen la vida.A mi Esposa, Madre y Hermanos por el apoyo incondicional y por darme la oportunidad de lograr todoaquello que he querido ser.A mis amigos:Mg. Alexis Arroyo, Q. F. Gloria Gordillo y Eusebio Morales, quines siempre estuvieron presentes con susvaliosas orientaciones.Mi agradecimiento a l Jurado Examinador:Dra. Luisa NEGRÓN BallartePresidenteDr. Pablo BONILLA RiveraMiembroMg. Cesar FUERTES RuitónMiembroMg. Américo CASTRO LunaMiembroMg. Raúl SORIA LópezMiembropor sus valiosos aportes para la optimización de este trabajo de investigación y muy en especial por lavaloración y calificación del mismo.

El objetivo de esta investigación fue determinar el efecto hipoglicemiante de la administración oral delextracto hidroalcohólico de las hojas y flores de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, en la hiperglicemiaexperimental inducida por aloxano en ratas albinas. Se demostró que la administración de 500 mg/kg p.c,durante 33 días de tratamiento, redujo significativamente los niveles de glicemia de 390 a 223 mg/dl.

Palabras clave: Otholobium pubescens, Fabaceae, Diabetes Mellitus, actividad hipoglicemiante.

The objective of the present research was to determine the antihyperglicemic activity of oral administrationof leaves and flowers hydroalcoholic extract of Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, in the Alloxan-induced diabetes rat. it determined that the administration of 500 mg/kg p.c, during 33 days of treatment,significantly lowered the levels of glucose from 390 to 223 mg/dl.

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I.- INTRODUCCIÓN

II.- MARCO TEÓRICO

2.1. ASPECTOS BOTÁNICOS

2.1.1. CLASIFICACIÓN BOTÁNICA

2.1.2. DESCRIPCIÓN MORFOLÓGICA: CARACTERÍSTICAS BOTÁNICAS.

Key words: Otholobium pubescens, Fabaceae, Diabetes Mellitus, antihyperglycemic activity.

La diabetes mellitus es una enfermedad común en muchas poblaciones del mundo(1). Las plantas medicinalescon actividad antidiabética pueden aportar una fuente útil de nuevos compuestos orales hipoglicemiantes,ya sea, como entidades farmacéuticas o coadyuvantes de las terapias existentes.(2,3)

Otra razón importante para estudiar el uso de las plantas es validar científicamente su efectividad pararecomendar su uso y probablemente concluya a reducir el costo del cuidado de la salud de estospacientes.(4).

Otholobium pubescens (Poiret) Grimes ha sido usada como hierba medicinal por muchos años(5, 6). Esconsumida en la medicina tradicional del Perú como un extracto acuoso para el tratamiento de la diarrea yla diabetes. (7). En un trabajo anterior Acosta & otros reportaron que la administración oral de “culén”disminuyó los niveles de glicemia en ratas diabéticas tan igual como el fármaco Clorpropamina. (8)

Recientemente, experimentos realizados en ratas y ratones, con hiperglicemia inducida porestreptozotocina, se demostró el efecto hipoglicemiante del extracto de Otholobium pubescens y elcompuesto bakuchiol aislado del mismo.(9)

El objetivo principal de la presente investigación ha sido comprobar la actividad hipoglicemiante del extractohidroalcohólico de hojas y flores de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, “Culén”, que es la forma comúnque se utiliza en la medicina tradicional.

La especie vegetal fue clasificada en el Museo de Historia Natural de la Universidad Nacional Mayor de SanMarcos, siendo determinada según el Sistema de Clasificación de Engler y Prantl, modificada por Melchior en1964, como sigue:

DIVISIÓN: ANGIOSPERMAE

CLASE: DICOTYLEDONEAE

SUB CLASE: ARCHYCHLAMYDAE

ORDEN: ROSALES

FAMILIA: FABACEAE (LEGUMINOSAE)

GENERO: Otholobium

ESPECIE: Otholobium pubescens (Poiret) Grimes

NOMBRE COMÚN: Culén, Huallhua, Colin macho, Huayllana, Albahaquilla, Hierba de mataduras, Albaquilla.

La especie Otholobium pubescens (Poiret) Grimes popularmente conocida como “Culén”, es un arbustoerguido, ampliamente ramificado que alcanza entre 1.50 a 3.00 metros de altura.

Page 4: articulo hipoglucemia

CUADRO Nº 1: DESCRIPCIÓN MORFOLÓGICA DE Otholobium pubescens (Poiret) Grimes “Culén”

TALLO: Aéreo, erguido, semileñoso; densamente pubescente de color blanquecino.

HOJAS: Compuestas trifoliadas. Aromáticas. Presenta foliolos oblongo-lanceolados, de borde entero de 5 a 8 cm de longitudpor 1,5 a 2,5 cm de ancho, pubescente con largos tricomas en el nervio de la cara inferior.

FLORES: Inflorescencia racimosa axilar alargada de 10 a 15 cm de longitud. Pedúnculos densamente vellosos. Las florespequeñas de color lila azulada o purpúreo, de 10 a 12 mm de longitud, corola papilonada pentámera cigomorfa(forma de mariposa); el primer estandarte de los pétalos es aovado orbicular. Androceo diadelfo. Gineceo completo.Ovario súpero, unicarpelar, uniovular. Cáliz pentámero lobulado.

FRUTO: Seco pequeño, oval, acuminado e indehiscente, legumbre que contiene una semilla.

Page 5: articulo hipoglucemia

2.1.3. HÁBITAT

2.2. ASPECTOS QUÍMICOS

TALLO: Aéreo, erguido, semileñoso; densamente pubescente de color blanquecino.

La reproducción de esta especie puede hacerse por semillas sembradas durante el verano o por estacas en laépoca otoñal. Es de crecimiento rápido en condiciones de humedad apropiada.(5, 10)

FIGURA Nº1: OTHOLOBIUM PUBESCENS (POIRET) GRIMES “CULEN”

El Otholobium pubescens (Poiret) Grimes es una planta silvestre que crece en la región andina del Perú,Chile, Bolivia y Argentina; crece de preferencia en lugares húmedos de los valles y las quebradas de laprecordillera.

En el Perú esta planta se desarrolla entre los 2 000 a 4 000 m.s.n.m., en los departamentos de Ayacucho,Apurímac, Cusco, Puno, Junín, Cajamarca, Ica y Huancavelica. En Lima se encuentra en las provincias deHuarochirí y Chosica (800 a 900 m.s.n.m.). (5,8)

El Otholobium pubescens (Poiret) Grimes contiene: Aceites esenciales (psoraleno), taninos, gomas, resinas,furocumarinas, terpenoides, tiene como componente mayoritario al bakuchiol, terpenoide fenólico, conactividades antimicrobianas y citotóxicas. Este trabajo se orientó a efectivar la actividad citotóxicamediante la quimiomodulación, realizando para ello, modificaciones sobre los dobles enlaces 7 y 12. Losderivados semisintéticos obtenidos se sometieron a ensayos de citotoxicidad sobre células neoplásicas(A-549, HT-29 y MEL-28), resultando con mayor potencia citotóxica aquellos que se encuentran epoxidadosen 7 y simultáneamente funcionalizados en las posiciones C-12 y C-13.(5)

Asimismo Hirzel et. al., mencionan que (Otholobium glandulosum (L.) Grimes) es una planta medicinal queha adquirido gran importancia debido a su alto contenido de psoraleno de estructura cumarínica

(6)..Recientemente se ha aislado e identificado al componente Bakuchiol del Otholobium pubescens (Poiret)Grimes al cual se le ha demostrado propiedad hipoglicemiente(9). Se le atribuye también, propiedadesmedicinales posiblemente a la presencia de taninos, que tiene efecto astringente.(11)

FIGURA Nº 2: ESTRUCTURA QUÍMICA DEL BAKUCHIOL, TERPENOIDE PRESENTE EN Otholobium pubescens(Poiret) Grimes. “Culén”

Page 6: articulo hipoglucemia

2.3. USO EN LA MEDICINA TRADICIONAL

2.4. ESTUDIOS ANTERIORES

Las informaciones recogidas del uso empírico y popular de esta especie, refieren su empleo comocarminativo, digestivo, antiespasmódico, hipoglucemiante, antidiarreico, laxante y vermífugo; lo cual seutiliza la planta entera en forma de cocimiento o infusión. Además le atribuyen propiedades de serantiinflamatoria, astringente, catártica, hemostática y antiinfecciosa.

Una de las formas de preparar el cocimiento de este recurso fitoterapéutico por su uso comohipoglucemiante es la siguiente:

En un litro y medio de agua, se agrega 100 gramos de hojas y flores, se hace hervir hasta quequede alrededor de un litro de agua; se filtra y se toma 4 a 5 copas al día.El uso popular de esta planta es haciendo hervir 30 gramos de ramas de Culén descortezadas,dejar en reposo y tomarlo cada 6 horas durante veinticuatro horas.Para el empacho se hace hervir una cucharada de corteza en un litro de agua. Este cocimiento seusa también para expulsar parásitos.(5,12)

El zumo de las hojas es aplicado a las heridas y las hojas machacadas de la misma las cubrían, siendocambiadas diariamente. (12,13)

Es un arbusto muy noble, y es utilizado como antidiarreico pediátrico y como vermífugo, utilizándose laplanta entera tierna. (12)

Para combatir los ardores del sol, las hojas frescas se coloca debajo del sombrero debido a la frescura quebrinda. Para combatir las almorranas, se aplica como lavado o aplicando los vapores de su cocimiento(Hoffmann et al. 1992). Estudios realizados en la granja Homa de Limache-Chile, acerca del uso y beneficiode esta especie, le atribuyen usos alimenticios, aromáticos (incienso) y curativos.(11) En el tratamiento de laDiabetes mellitus Tipo II, étnicamente lo prepara tratando, 100 gramos de hojas y flores en un litro y mediode agua, se hierve hasta que reduzca a 1 litro; se filtra y se toma 4 a 5 veces al día. (8,15) Otros beneficioscurativos de esta planta son: almorranas, anorexia, diarrea (infusión de tallos), empachos, heridas (jugo dehojas) jaquecas, carminativo, emético (raíz), emoliente febrífugo, purgante (cenizas de los tallos). (5,14,15)

En 1994, Grossi,(2) presentó en el Congreso Médico Latinoamericano celebrado en Buenos Aires, llevandoimportante comunicación de sus profundas investigaciones acerca de la planta “Culén” y su efectohipoglucemiante, trabajo que se publicó el 28 de mayo de ese año en la “Argentina Médica” y que figura enel libro “Medicina Casera”, donde se detallan un sinnúmero de propiedades y se dan recetas para lapreparación de las pócimas.

En un estudio realizado sobre el efecto hipoglucemiante del fruto de Momordica charantia L., refieren quecerca de cuatrocientas especies vegetales son conocidas popularmente como hipoglucemiantes en nuestropaís, sin embargo, sólo el 12,5% han sido estudiadas.(18)

Según estudios realizados por Valdivia & Hidalgo (1996), en el Hospital “Guillermo Almenara”, a pacientesdiagnosticados con Diabetes Mellitus No Insulino Dependiante (DMNID) (Tipo II), cerca del 70% de lospacientes ingirieron algún producto tradicional en su tratamiento teniendo entre ellos los descritos en elcuadro Nº 2, de los cuales los resultados obtenidos merecen mayor investigación.(8, 11)

La Sociedad Farmacéutica de Japón, en su Boletín Biológico Farmacéutico, Nº 22, del año 1999, presenta untrabajo de Krenisky, J. & otros, quienes realizaron el aislamiento y la determinación de la actividadantihiperglicémica de Bakuchiol del Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, concluyendo que el “Culén”posee actividad antihiperglicémica, por acción de uno de sus componentes denominado Bakuchiol. (9)

Page 7: articulo hipoglucemia

CUADRO Nº 2: PLANTAS ANTIHIPERGLICEMIANTES

Nombre común Nombre científico

Berros Naturtium aquatioum

Botoncillo Spilanthes americana

Casco de vaca Bauhinia variegata

Balsamina Momordica charantia

Cholan Tecoma stans

Marañon Anacardium occidentales

Orégano Origanum vulgare

Hercampuri Gentianella alborocea

Caigua Cyclantera pedata

Pasuchaca Geranium ayabacense

Chancapiedra Phyllantus niruri

Canchalagua Asteraceae sckuhria

Tuna Opuntia ficus.

Diente de león Taraxacum officinalis

Sangre de grado Crotón sp

Uña de gato Uncaria tomentosa Wild

Yacón Smallanthus sonchifolia (Benth) Rob.

Culen Otholobium pubescens (Poiret) Grimes

Page 8: articulo hipoglucemia

III.- PARTE EXPERIMENTAL

3.1. MATERIALES

3.1.1. MATERIAL BIOLÓGICO

3.1.2. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Nombre común Nombre científico

Fuente:Libro de Resumen del II Congreso Interamericano de Medicina Tradicional. Lima - Perú. (1988). (11)

FIGURA Nº 3: HIPÓTESIS ETIOLÓGICA DE LA DIABETES TIPO II

Hojas y flores desecadas de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes.Huevos de Artemia salina.Ratas albinos hembras de 250 – 300 g. de peso, de 3 meses de edad.

EQUIPOS

Balanza analítica digitalBomba de vacíoEquipo de extracción SoxhletEquipo para ensayo de toxicidad con Artemia salina

Equipo generador de oxígenoFuente de calorCámara oscura con compartimiento iluminado

Lámpara UV

Page 9: articulo hipoglucemia

3.2. MÉTODOS

3.2.1. FASE FITOQUÍMICA

3.2.1.1 RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Molino de cuchilla Willey.EspectrofotómetroMicrocentrífugaCronómetro

MATERIALES

Matraz erlenmeyer de 100, 250 y 500 mlPapel platinoVasos de Precipitación de 100, 250 y 500 mlLunas de relojPipeta de 10 mlMorteroProbeta graduada de 10 y 100 mlPipetas graduadas de 0.5, 5 y 10 mlTubos de ensayoAlgodónCapilares de hematocrito heparinizadosJeringas hipodérmicas de 1, 2, 5 y 20 mlPapel universal indicador de pH

REACTIVOS

Reactivos para la fase fitoquímicaSolventes químicosAloxano monohidratadoEtanol 95%Set de Glicemia enzimática WienerD (+) GlucosaAgua de mar

La muestra en estudio, constituida por la planta entera (hojas, flores y tallos) de Otholobium pubescens(Poiret) Grimes se recolectó la cantidad de 2 kg aproximadamente, en el Departamento de Ica, Distrito deYauca del Rosario; durante los meses de diciembre del 2 000 y Mayo – Julio del 2 001, siendo clasificada enel Museo de Historia Natural de la UNMSM (Herbario de San Marcos). El secado se realizó en el mismo lugarde recolección considerando las condiciones para tal operación (en sombra, con corriente de aire,temperatura ambiente).Una vez secas fueron sometidas a molienda en un molino eléctrico, luego se pesó200 gramos y se llevó a maceración hidroalcohólica al 80%, posteriormente se filtró y se concentró hasta elsecado del extracto a unos 40-45ºC. Una vez seco el extracto se procedió al desengrasado en un equipoSoxhlet con éter de petróleo manteniendo la temperatura entre 40 y 60 grados centígrados. Obtenido elextracto en polvo, se procedió a realizar la Marcha Fitoquímica para determinar la presencia de metabolitossecundarios, mediante reactivos de coloración y precipitación. (19)

Page 10: articulo hipoglucemia

3.2.1.2 PRUEBA DE SOLUBILIDAD

3.2.1.3 MARCHA FITOQUÍMICA

3.2.2. FASE FARMACOLÓGICA

3.2.2.1 BIOENSAYO DE TOXICIDAD

FIGURA Nº 3: DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA OBTENCIÓN DEL EXTRACTO DE Otholobium pubescens (Poiret)Grimes

Se realizó utilizando solventes en función a su polaridad creciente (éter etílico, benceno, n-hexano,n-butanol, n-propanol, cloroformo, acetato de etilo, acetona, etanol, metanol, agua destilada); para lo cualse pesó 1 gramo del extracto hidroalcohólico seco y se colocó en tubos de ensayo, a los cuales se les agregó2 ml de cada solvente para verificar su solubilidad.(8, 20)

Se realizaron pruebas cualitativas para determinar la presencia de metabolitos secundarios presentes en elextracto hidroalcohólico de flores y hojas secas del Otholobium pubescens. (Poiret) Grimes. (19, 21, 22)

Los animales de experimentación fueron ratas de la raza Sprague Dowley, obtenidas del Centro Nacional deProducción de Biológicos del Instituto Nacional de Salud, correspondientes a la especie Rattus norvergicusvar. Albinus, hembras de 3 meses de nacidas con un peso promedio de 262 gramos Las ratas fueroncolocadas en jaulas independientes con agua y alimento. La alimentación de estos animales fue conproductos elaborados por la planta de alimentos del Departamento de Nutrición de la Facultad de Zootecniade la Universidad Nacional Agraria – La Molina; formada por una mezcla de torta de soya, harina de trigo,aminoácidos sintéticos y antifúngicos.

La Artemia salina es la especie de artrópodos más usado en bioensayos en la investigación fitoquímica, parala detección de sustancias bioactivas, debido a que su ciclo biológico es bien conocido, es de fácil manejo enel laboratorio y su cultivo es relativamente sencillo y barato.

La toxicidad en Artemia salina con el extracto de hidroalcohólico de flores y hojas secas del Otholobiumpubescens. (Poiret) Grimes, se expresa como CL50 (Concentración letal 50) que es la concentración de unextracto que mata al 50% de una población determinada de este crustáceo. (21)

METODOLOGÍA:

a) Se preparó agua de mar artificial (3.8 gramos de sal comercial en 100 ml de agua destilada) y se filtró,luego de airear por espacio de una hora.

Page 11: articulo hipoglucemia

3.2.2.2. DETERMINACIÓN DE LA DL50

3.2.2.3. INDUCCIÓN DE LA HIPERGLICEMIA EXPERIMENTAL

3.2.3. PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO FARMACOLOGICO.

b) Se colocó aproximadamente 50 mg de huevos de Artemia salina en una cámara oscura con uncompartimiento iluminado del cual salieron las larvas, y se les incubó a temperaturas entre 25–28º C poraproximadamente 24 ó 30 horas, al cabo de las cuales vio las larvas.

c) Se procedió a hacer una solución de trabajo que contuvo 10 mg de extracto hidroalcohólico por ml desolución.

d) A partir de esta solución se prepararon diluciones de 1000, 100 y 10 ppm, se hicieron réplicas y un controlnegativo de cada concentración.

e) Se transfirió a cada recipiente 10 nauplios, por medio de una pipeta pasteur o tubos capilares.

f) Se incubó los recipientes por 24 horas, en las mismas condiciones que los huevos, al cabo de los cuales, secontó el número de individuos muertos.

g) Se calculó la CL50 con la ayuda del programa de computación EPA PROBIT ANÁLISIS PROGRAM.

Por definición la DL50 es la cantidad de droga o dosis administrada a una población que causa alteraciones omuerte al 50% de ellos.

El ensayo se determinó con una población de 15 ratas divididas en 3 grupos (5 ratas por grupo). Seadministró el extracto hidroalcohólico en dosis de 250, 500 y 750 mg/kg p.c., por vía oral y con losresultados se determinó la DL50. Antes de dar inicio al experimento, se les suprimió el alimento 12 horasantes del ensayo.

CUADRO Nº 3: ENSAYO FINAL PARA DETERMINACIÓN DEL DL50

Dosis (mg//kg p.c.) N° de Muestras

250 5

500 5

750 5

Aloxano

Pese a conocerse desde hace mucho tiempo esta sustancia, se desconoce el mecanismo de acción. Algunosestudios indican que hay una alta afinidad del fármaco por las membranas de las células del islote deLangerhans que se hallan en el páncreas. Existen también evidencias que los cambios de la membranapodrían explicar la necrosis selectiva.

Inducción de la hiperglicemia experimental

Se procedió a seleccionar a las ratas, para la administración de aloxano en dosis de 160 mg/kg por pesocorporal (p.c.), por vía intradérmica,(3) previamente fueron sometidos a un ayuno de 12 horas. Lahipoglucemia tipo II se indujo con la administración del aloxano por tres días consecutivos.

Las 40 ratas raza Sprague Dowley, especie Rattus norvergicus var. Albinus, hembras de 3 meses de nacidascon un peso promedio de 262 gramos fueron agrupadas en 4 grupos: el primero para recibir un tratamientocon el extracto hidroalcohólico de hojas y flores de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, el segundo grupopara ser tratadas con Glibenclamida, el tercer grupo no recibiría ningún tratamiento y el cuarto grupo seríael grupo control.

Las ratas fueron preparadas con un ayuno de 12 horas y se procedió a determinar la glicemia basal a todaslas ratas. Luego se les administró aloxano 160 mg/kg p.c, vía intradérmica, al primer, segundo y tercergrupo de ratas. Al cuarto grupo que actuó como grupo control, no se le administró aloxano.

Page 12: articulo hipoglucemia

3.2.3.1. DETERMINACIÓN DE LA GLUCOSA SANGUINEA.

3.2.4. ANALISIS ESTADÍSTICO DE LA FASE FARMACOLOGICA.

IV.- RESULTADOS

4.1. PRUEBA DE SOLUBILIDAD

Posteriormente, al primer grupo de ratas aloxanadas se les administró por vía oral un tratamiento diario conel extracto hidroalcohólico de hojas y flores de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes a una dosis de 500mg/kg p.c.

Al segundo grupo de ratas aloxanadas se les administró un tratamiento diario con el fármaco glibenclamidaque es utilizado como hipoglucemiante, a una dosis de 5 mg/kg p.c. por vía oral.

El tercer grupo de ratas aloxanadas no recibió ningún tipo de tratamiento, para poder comparar el efectohipoglucemiante del extracto en estudio y del fármaco glibenclamida.

El cuarto grupo de ratas no aloxanadas no recibió tratamiento.

A los cuatro grupos se les hizo tomas de sangre en los días 1, 2, 3, 7, 8, 11, 15, 21, 24, 27, 30 y 33 día, paradeterminar los niveles de glicemia.

Este análisis se realizó utilizando un Set de Glicemia enzimática WIENER, que contuvo los siguientesreactivos:

Estándar: Solución de glucosa 1g/lEnzimas: (GOD/POD): solución de oxidasa 3000 U/l y peroxidasa 400 U/l.Reactivo 4-AF: Solución de 4-aminofenazona, 1,25 μM.Reactivo fenol: solución de fenol 2,75 μM.

Las muestras sanguíneas de las ratas se obtuvieron por el método de corte de cola, evaluándosecuantitativamente con un espectrofotómetro a la longitud de onda de 505 nm.

Al conjunto de valores de los niveles de glicemia los agrupamos en 3 períodos (del día 1 al 10, el primerperiodo, del día 11 al 21 el segundo período; y del día 22 al 30, el tercer período) para mejorar el estudioestadístico. A los periodos de tratamiento se les determinó la media y la desviación estándar para asídeterminar si existe diferencia significativa entre los grupos por cada periodo mediante un t calculado, a unnivel de significancia de = 0,05, utilizando la respectiva fórmula estadística.

El extracto hidroalcohólico de hojas y flores de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, mostró mayorsolubilidad en el agua, poco soluble en acetato de etilo y no soluble en éter etílico.

CUADRO Nº 4. PRUEBA DE SOLUBILIDAD

Solventes Muestra H2O/EtOH

Eter etílico -

Benceno -

n-Hexano -

n-Butanol +

n-Propanol +

Cloroformo -

Acetato de etilo +

Acetona + +

Etanol + + +

Metanol + + +

Agua + + + +

(-) Insoluble,

Page 13: articulo hipoglucemia

4.2. MARCHA FITOQUÍMICA

4.3. RESULTADO DEL BIOENSAYO DE TOXICIDAD CON Artemia salina

(+ -) Escasamente soluble

(+) Poco soluble

(++) Medianamente soluble

(+++) Soluble

(++++) Muy soluble

La Marcha fitoquímica realizada con el extracto hidroalcohólico de de hojas y flores Otholobium pubescens(Poiret) Grimes detecta la presencia de taninos, antraquinonas, saponinas, triterpenoides y/o esteroides,flavonoides, azucares reductores; no se observó la presencia de alcaloides.

CUADRO Nº 5: MARCHA FITOQUÍMICA

GRUPO FUNCIONAL REACTIVOS RESULTADO

TANINOS Extracto + Rvo. de Gelatina pp. blanco +

Extracto + Tricloruro de fierro Coloración azul +

ANTRAQUINONAS Extracto + Rvo. de Bortranger Ms/bz (NaOH 5%) aq. pp. rojo +

SAPONINAS 1g de extracto en polvo + 10 ml de agua estéril +agitación 30’

Persistencia de espuma por 30’ +

TRITERPENOIDES Y/OESTERIODES

Extracto en cloroformo + Rvo de Lieberman-Burchard)

pp. verde, azul verdoso (vira de rojoa azul)

+

FLAVONOIDES Rvo. de Shinoda Ms + Limadura de Mg + HCl conc. Coloración roja +

ALCALOIDES Extracto + Rvo. de Dragendorf No hubo cambio de coloración -

AZUCARES REDUCTORES Extracto + Rvo. de Fehling pp roja +

Extracto + Rvo. de Molish Coloración violeta +

pp Precipitado

Rvo. Reactivo

CUADRO Nº 6: BIOENSAYO DE TOXICIDAD. Cantidad de nauplios vivos a las 24 horas (n = 10

DILUCIÓN TUBO 24 HORAS

10 ppm 1 7

2 7

3 8

100 ppm 1 5

2 6

3 5

1000 ppm 1 3

2 1

3 2

BLANCO 1 9

2 8

3 9

Se utilizó el programa de computación EPA PROBIT ANÁLISIS PROGRAM para el procesamiento de datos delCuadro Nº 6, para calcular los valores de CL50, determinándose el valor 175.2037. Este valor nos indicó lapresencia de actividad biológica de la planta en observación. (Ver Anexo Nº 1).

Page 14: articulo hipoglucemia

4.4. ENSAYO PARA DETERMINAR LA DL50 EN RATAS UTILIZANDO ELEXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE FLORES Y HOJAS DE Otholobiumpubescens (Poiret) Grimes.

4.5. RESULTADOS DEL TRATAMIENTO FARMACOLÓGICO

CUADRO Nº 7: ENSAYO FINAL PARA DETERMINAR EL DL50. PORCENTAJE DE MORTALIDAD UTILIZANDO EL EXTRACTO

DOSIS (mg/kgp.c.)

N° DEMUESTRAS

%MORTALIDAD

OBSERVACIÓN

250 05 00 Los animales se comportan de manera normal.

250 05 00

250 05 00

500 05 00 El comportamiento de los animales casi normal, ligeramenteestresadas.

500 05 00

500 05 00

750 05 00 Los animales se tornan nerviosos y ofuscados.

750 05 00

750 05 00

CUADRO Nº 8: NIVELES DE GLICEMIA PROMEDIO DE LOS DIFERENTES GRUPOS DE ESTUDIO Y LA GLICEMIABASAL

GRÁFICO Nº 1: VARIACIÓN DE LOS NIVELES DE GLICEMIA DE LAS RATAS SOMETIDAS A EXPERIMENTACIÓN

Page 15: articulo hipoglucemia

Tto. = Tratamiento

CUADRO Nº 9: EFECTO HIPOGLUCEMIANTE DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE FLORES Y HOJAS DGrimes. (500 mg/kg p.c) Y LOS PORCENTAJES DE VARIACIÓN DE LOS NIVELES DE GLICEMIA

Niveles de Glicemia (mg/dl)

Rata 1er día 33avo día % Variación

1 396 221 44.19

2 387 224 42.12

3 402 231 42.54

4 378 233 38.36

5 401 244 39.15

6 390 222 43.08

7 411 218 46.96

8 394 217 44.92

9 395 216 37.21

10 399 208 47.87

PROMEDIO % EFECTIVIDAD 42.64

Page 16: articulo hipoglucemia

V.- DISCUSIÓN

CUADRO Nº 10: EFECTO HIPOGLUCEMIANTE DE Glibenclamida (5 mg/kg p.c.) Y LOS PORCENTAJES DEGLICEMIA.

Niveles de Glicemia (mg/dl)

Rata 1er Día 30avo día % Variación

1 397 103 74.06

2 400 94 76.50

3 385 98 74.55

4 393 0 70.00

5 395 90 77.22

6 379 87 77.04

7 382 89 76.70

8 380 104 72.63

9 392 110 71.94

10 401 105 73.82

PROMEDIO % EFECTIVIDAD 74.44

CUADRO Nº 11: NIVELES DE GLICEMIA POR PERIODO, SEGÚN TRATAMIENTO CON EL EXTRACTO EL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DEFLORES Y HOJAS DE Otholobium pubescens (Poiret) Grimes (500mg/kg p.c.) Y GRUPO SIN TRATAMIENTO

Niveles de Glicemia (mg/dl)

n=10 Ratas A. tratadas con Extracto Ratas Aloxanadas sin tratamiento t teórico t c

Media ± D. E. Media ± D. E.

1º Periodo del 1 al día 10 387.20 ± 19.93 391.45 ± 71.76 2.101 2.28 Existe dif.sig.

2º Periodo del 11 al día 21 348.48 ± 31.98 383.05 ± 70.62 2.101 2.99 Existe dif.sig.

3º Periodo del 22 al día 30 253.05 ± 28.59 335.190 ± 42.71 2.101 5.92 Existe dif.sig.

CUADRO Nº 12: NIVELES DE GLICEMIA POR PERIODO, SEGÚN TRATAMIENTO CON GLIBENCLAMIDA (5 mg/kg p.c.) Y GRUPO SINTRATAMIENTO

Niveles de Glicemia (mg/dl)

n=10 Ratas aloxanadas tratadas conglibenclamida

Ratas Aloxanadas sintratamiento

tteórico

t c

Media ± D. E. Media ± D. E.

1º Periodo del 1 al día10

294.59 ± 75.56 391.45 ± 71.76 2.101 3.77 Existedif.sig.

2º Periodo del 11 al día21

167.18 ± 59.60 383.05 ± 70.62 2.101 10.61 Existedif.sig.

3º Periodo del 22 al día30

107.29 ± 25.73 335.190 ± 42.71 2.101 20.13 Existedif.sig.

En la actualidad hay pocos antecedentes de estudio a la planta Otholobium pubescens (Poiret) Grimes. En1904, Grossi, en un estudio realizado en Chile documenta sus investigaciones acerca de la planta “Culén” ysu efecto hipoglucemiante.

Otro antecedente fue presentado por Krenisky; J. & otros, quienes realizaron una investigación sobre el“Aislamiento y determinación de la actividad antihiperglicémica de Bakuchiol del Otholobium pubescens(Poiret) Grimes”, en el cual trabajaron con “culén” recolectado en el Perú, y realizaron la experimentaciónen ratas y ratones, concluyendo que el “culén” posee actividad antihiperglicémica. La estructura delBakuchiol no lleva ninguna semejanza a la secretada por la insulina, a los inhibidores de la salida de laglucosa hepática, a los sensibilizadores de la insulina, o a los inhibidores de la glucosa actualmente

Page 17: articulo hipoglucemia

CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFÍA

King, H., Rewers, M., Who. Ad Hoc Diabetes Reporting Group. Global estimates forprevalence of diabetes mellitus and impaired glucose tolerance in adults.DiabetesCare.1993; 16, 157-177.

1.

Day, C.& Bailey, J. Hypoglicaemic agents from traditional plant treatments for diabetes.Int. Ind. Biotech. 1988; 8(3):5-8.

2.

disponibles para el tratamiento de la diabetes del tipo 2,sino a la capacidad de bajar perceptiblemente lasconcentraciones de la glucosa de la sangre, en modelos de animales con diabetes tipo 2.

En la investigación realizada luego de los procesos detallados para la determinación del DL50, (cuadro Nº 7)se determinó que la Dosis Letal Media efectiva es a concentraciones mayores de 750 mg/kg p.c., lo cualpermitió que se fije una dosis de trabajo de 500 mg/kg p.c, porque como podemos ver en el cuadro Nº 7 elgrupo de ratas sometidas a ensayo con la administración del extracto a dosis de 750 mg/kg p.c sufrieronofuscación y se pusieron nerviosas, mientras que a la dosis de 500 mg/kg p.c su comportamiento era casinormal, solo un ligero estresamiento.

Del cuadro Nº 8 se puede apreciar la variación entre los niveles de glicemia del día 1 y 33, para el primergrupo de ratas tratadas con el extracto hidroalcohólico de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes lográndoseuna reducción de 390.2 ± 18.52 mg/dl hasta 223.40 ± 10.24 mg/dl lo cual representa un promedio deefectividad de 42.64% (cuadro Nº 9); mientras que con el tratamiento de Glibenclamida se logró reducir de309.4 ± 8.28 mg/dl hasta 97.78 ± 8.18 mg/dl que determina un promedio de efectividad de 74.44% (cuadroNº 10), con respecto al primer día de tratamiento.

Podemos apreciar del párrafo anterior que el porcentaje de efectividad del la glibenclamida (74.44%) esmayor a la de nuestra planta en estudio (42.64%) pues es un fármaco industrializado y aditado de otroscomponentes hipoglucemiantes.

Otro índice del efecto hipoglucemiante es la tendencia descendente de los niveles de concentración deglucosa para todos los casos de las ratas tratadas con el extracto. Esto se puede notar claramente en elGráfico Nº 01, pues conforme avanzaba día a día el tratamiento, los valores descendían notablemente. Conla ampliación de días de tratamiento y dieta es posible que se llegue a igualar los valores de la glucosa basal.Esto igualmente es notado en el caso de ratas tratadas con glibenclamida que muestra una tendenciadescendente de los valores de concentraciones de glucosa, acercándose a la glucosa basal, y era de esperar,ya que es un fármaco de efecto hipoglucemiante largamente demostrado.

De la fase fitoquímica realizada se alcanza a entender que el efecto hipoglicemiante de la planta en estudiose debería a los componentes químicos que se hallan en mayor cantidad en el extracto hidroalcohólico talescomo: taninos, antraquinonas, saponinas, triterpenoides y/o esteroides, flavonoides, azúcares reductores yde manera muy particular compuestos químicos en los que se hallan presentes los grupos funcionaleshidroxilos de naturaleza fenólica, tal como se ha demostrado en el aislamiento del Bakuchiol, según Hirzel el.at. (6)

Por los resultados obtenidos en el presente trabajo de investigación, sobre el extracto hidroalcohólico de lashojas y flores de Otholobium pubescens (Poiret) Grimes, se puede concluir que:

1. La administración de una dosis de 500 mg/kg p.c. del extracto hidroalcohólico de las flores y hojas deOtholobium pubescens (Poiret) Grimes, “Culén” en ratas Rattus norvergicus var. Albinus., con hiperglicemiaexperimental, disminuyó los niveles de glicemia de 390.2 ± 18.58 mg/dl a 223.4 ± 10.24 mg/dl en 33 días detratamiento. Asimismo, el fármaco glibenclamida, administrado en una dosis de 5 mg/ kg p.c. en ratasRattus norvergicus var. Albinus., con hiperglicemia experimental, produjo una disminución de lahiperglicemia al disminuir los niveles de glicemia de 390.4 ± 8.29 a 97.78 ± 8.18 mg/dl en 30 días detratamiento.

2. En relación a la estructura de los componentes químicos hallados en la fase fotoquímica, se ha encontradola presencia de taninos, antraquinonas, saponinas esteroidales y/o saponinas terpenoidales, flavonoides,otros fenoles y azúcares reductores; y que la interrelación de estos metabolitos sean responsables del efectohipoglucemiante de la planta en estudio.

3. De la prueba para determinar la DL50, luego de un ensayo preliminar y otro final se determinó por elmétodo de observación a las ratas que la Dosis Letal Media efectiva es a concentraciones mayores de 750mg/kg p.c.

Page 18: articulo hipoglucemia

Kim, K. & Lee, B. The screening of plants for hypoglycemic. Action in normal and alloxan-induced hiperglycemic rats. Korean J. Pharmacog. 1992; 23(2):117-119.

3.

Farnsworth, R. Ethnopharmacology and future drug development: the North Americanexperience. J. Ethnopharmacol. 1993; 51(38): 145-152.

4.

Sung, I., Fitomedicina (1100 Plantas Medicinales). Editorial Isabel. Tomo I. 2003.5.Hirzel, J., Rodríguez, N. & Del Valle, P. Efecto de la nutrición mineral sobre la producciónde Culén (Otholobium glandulosum (L.) Grimes). Agric. Téc., 2004;.64(3), 280-287. ISSN0365-2807.

6.

Ramírez, R., Mostacero, J., García, E., Mejía, F., Pelas, F., Medina, D. & Miranda, H.Vegetales empleados en medicina tradicional norperuana. Banco Agrario del Perú -Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo-Perú.1988.

7.

Acosta, E., y Arroyo, M., Estudio Fitoquímico y Determinación de la ActividadHipoglicemiante de Psoralea pubescens (Culén). Facultad de Farmacia y Bioquímica,Universidad Nacional “San Luis Gonzaga de Ica”. 1997.

8.

Krenisky, J., Lou, J., Reed, M. & Carney, J. Isolation and Ant hyperglycemic Activity ofBakuchiol from Otholobium pubescens (Fabaceae), a Peruvian Medicinal Plant used for thetreatment of Diabetes. Biol. Pharm. Buil. 1999; 22 (10) 1137-1140.

9.

Aldave, A., & Mostacero, J. Botánica Farmacéutica. Editorial Libertad. 226-234. 1987..10.Trabajos del II Congreso Interamericano de Medicina Tradicional. Libro de Resumen.CYTED. Lima - Perú. 1988.

11.

Hoffmann, A., Farga, C., Lastra, J.& Veghazi, E. Plantas medicinales de uso común enChile. Fundación Ediciones Claudio Gay. Chile.1992.

12.

Kroeger, A., y Luna, R., Atención Primaria de Salud. Principios y Métodos. OrganizaciónPanamericana de la Salud. 2da edición. Editorial Pax. México. 1992; 55.

13.

Baudillo, J., Guía de la Flora Medicinal. Editorial AEDOS S.A. España. 9-10. (1995)14.Angulo, P., La Medicina Tradicional en el desarrollo de los Medicamentos. 1ra Edición.Editorial De Mar EIRL. Lima-Perú. 1997.

15.

Arellano, P., El Libro Verde. Revista del Ministerio de Salud, Lima–Perú. 1992;16.Grossy, J. Medicina Casera. Editorial Santiago.Chile. 86-92. 1904.17.Capcha C., Rosana; Villena L., Ruben. Determinación del efecto Hipoglucemiante del frutode Momordica charantía L.. Facultad de Farmacia y Bioquímica, UNMSM. Lima. Perú. 1997.

18.

Lock De Ugaz, O., Investigación Fitoquímica, 2da.Edición. Editorial Pontificia UniversidadCatólica del Perú. Lima – Perú. 1994.

19.

Hueda, C., y Estrada, J., Estudio Fitoquímico del extracto acuoso de los frutos deCheilantus miriophylla y su ensayo de la Actividad Hipoglicemiante en conejos conHiperglicemia Experimental. U.N.T. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Trujillo-Perú.1998.

20.

Villacrés O., Víctor. Bioactividad de plantas amazónicas. Editorial Abya–Yala. Cayamine.Ecuador. 1995.

21.

Olivera, A., Manrique, B. Manual de Laboratorio Químico. Primera Edición. Departamentode Bioquímica., Trujillo-Perú. 1961.

22.

Cáceres, A., Plantas de Uso Medicinal en Guatemala, Vol. I Universidad de San Carlos deGuatemala. Editorial Universitaria. Guatemala. 1996.

23.

ANEXOS

Anexo Nº 1

Cálculo del CL50 por EPA PROBIT

Page 19: articulo hipoglucemia
Page 20: articulo hipoglucemia

Anexo Nº 2

GRÁFICO Nº 2: Otholobium pubescens (Fabaceae) Grimes - CULEN

Datos experimentales y gráficos de niveles de glicemia en animales de experimentación

Page 21: articulo hipoglucemia

CUADRO Nº 13: NIVELES DE GLICEMIA DE RATAS ALOXANADAS TRATADAS CON EL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE Otolobium pubesce(Poiret) Grimes (Dosis = 500 mg/kg p.c.)

Nº Rata Glucosa Basal (mg/dl) DÍAS DE TRATAMIENTO

1° 2° 3° 7° 8° 11° 15° 21° 24° 27° 30° 33°

1 121 396 400 390 380 375 360 330 280 275 251 226 221

2 75 387 395 394 378 370 365 326 292 290 252 242 224

3 85 402 402 403 396 391 380 359 319 315 265 252 231

4 86 378 389 385 380 378 375 364 306 304 270 261 233

5 90 401 405 401 388 379 373 370 312 316 255 249 244

6 81 390 388 392 379 372 369 358 314 308 252 243 222

7 72 411 409 407 390 389 379 349 295 276 236 228 218

8 95 394 394 392 379 370 368 348 300 270 248 227 217

9 120 344 339 330 325 322 322 310 310 286 255 247 216

10 98 399 397 396 383 383 381 374 322 288 268 233 208

Media 92.3 390.2 391.8 389.0 377.8 372.9 367.2 348.8 305.0 292.8 255.2 240.8 223.4

D.E. 16.89 18.58 19.70 21.74 19.47 19.34 17.29 20.77 13.17 16.94 10.21 11.92 10.24

Page 22: articulo hipoglucemia

Nº Rata Glucosa Basal (mg/dl) DÍAS DE TRATAMIENTO

GRÁFICO Nº 3: NIVELES DE GLICEMIA EN RATAS ALOXANADAS Y TRATADAS CON EL EXTRACTOHIDROALCOHÓLICO DE Otholobium pubescens (Poiret) Grimes (Dosis 500 mg/kg p.c.)

GRÁFICO Nº 4: COMPARACIÓN DE LOS NIVELES DE GLICEMIA AL INICIO Y FINAL DEL EXPERIMENTO EN RATASALOXANADAS TRATADAS CON EL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE Otholobium pubescens (Poiret) Grimes(Dosis 500 mg/kg p.c.)

Page 23: articulo hipoglucemia

CUADRO Nº 14: NIVELES DE GLICEMIA DE RATAS ALOXANADAS TRATADAS CON GLIBENCLAMIDA (Dosis = 5 mg/Kg p.c.)

Rata Glucosa Basal (mg/dl) DÍAS DE TRATAMIENTO

1° 2° 3° 7° 8° 11° 15° 21° 24° 27° 30°

1 90 397 325 275 228 202 195 190 165 161 121 103

2 85 400 296 199 185 180 130 130 110 96 100 94

3 107 385 286 185 184 160 151 147 106 153 96 98

4 96 393 291 190 190 162 116 103 95 87 68 *

5 89 395 248 250 196 147 132 117 101 99 98 90

6 95 379 302 270 172 135 107 96 97 95 93 87

7 84 382 302 240 205 199 170 121 93 82 74 89

8 90 380 350 347 341 320 307 273 215 170 129 104

9 101 392 300 278 270 257 235 214 170 107 138 110

10 93 401 376 321 277 232 233 209 165 151 123 105

Media 93 390.4 307.6 255.5 224.8 199.4 177.6 160 131.7 120.1 104 97.78

D. E. 7.09 8.28 35.48 54.24 54.52 56.91 64.38 58.47 43.14 34.28 23.25 31.87

Page 24: articulo hipoglucemia

Rata Glucosa Basal (mg/dl) DÍAS DE TRATAMIENTO

GRÁFICO Nº 5: NIVELES DE GLICEMIA EN RATAS ALOXANADAS Y TRATADAS CON GLIBENCLAMIDA (Dosis 5mg/kg p.c.)

GRÁFICO Nº 6: COMPARACIÓN DE LOS NIVELES DE GLICEMIA AL INICIO Y FINAL DEL EXPERIMENTO EN RATASALOXANADAS TRATADAS CON GLIBENCLAMIDA (Dosis 5 mg/kg p.c.)

Page 25: articulo hipoglucemia

CUADRO Nº 15. NIVELES DE GLICEMIA DE RATAS ALOXANADAS QUE NO RECIBIERON TRATAMIENTO

Rata Glucosa Basal (mg/dl) DÍAS DE observación

1° 2° 3° 7° 8° 11° 15° 21° 24° 27° 30° 33°

1 93 401 556 500 580 506 480 410 480 * * * *

2 97 396 580 501 516 501 509 508 520 490 430 290 *

3 93 379 280 300 280 296 296 288 296 300 280 290 296

4 91 395 310 400 380 386 382 384 390 384 386 340 350

5 84 403 370 365 360 370 377 373 364 360 310 * *

6 90 377 314 320 310 310 311 316 370 371 308 309 309

7 94 390 386 380 379 365 365 359 353 350 341 340 340

8 100 379 378 373 370 361 345 335 337 340 325 * *

9 90 372 380 381 375 369 357 355 342 343 344 327 316

10 96 399 387 380 376 377 569 355 355 351 321 316 315

Media 92.8 389.1 394.1 390 392.6 384.1 399.1 368.3 380.7 365.4 338.3 316 321

D. E. 4.44 11.35 99.13 65.59 89.66 69.25 89.77 59.87 68.11 52.20 45.16 21.11 20.16

* = Rata muerta

GRAFICO Nº 7: NIVELES DE GLICEMIA DE RATAS ALOXANADAS QUE NO RECIBIERON TRATAMIENTO

GRÁFICO Nº 8: COMPARACIÓN DE LOS NIVELES DE GLICEMIA AL INICIO Y FINAL DEL EXPERIMENTO EN RATASALOXANADAS QUE NO RECIBIERON TRATAMIENTO

Page 26: articulo hipoglucemia

CUADRO Nº 16: NIVELES DE GLICEMIA EN RATAS DEL GRUPO CONTROL (AGUA + COMIDA)

Rata Glucosa Basal(mg/dl) DÍAS DE CONTROL

1° 2° 3° 7° 8° 11° 15° 21° 24° 27° 30° 33°

1 92 93 93 97 90 94 91 98 90 92 97 96 94

2 97 95 93 97 101 93 95 95 90 92 91 97 93

3 114 98 96 97 99 105 101 96 92 96 93 92 94

4 80 85 83 85 81 89 83 82 87 85 80 81 83

5 91 92 90 94 100 95 90 97 91 95 93 90 93

6 87 87 87 89 93 90 89 90 86 85 80 84 85

7 93 90 93 95 99 97 100 97 95 102 97 91 90

8 90 95 91 95 92 93 97 94 91 98 93 100 93

9 101 97 94 95 101 102 96 91 93 93 94 96 95

10 101 101 102 97 94 95 94 98 93 96 97 100 98

Media 94.6 93.3 92.2 94.1 95 95.3 93.6 93.8 90.8 93.4 91.5 92.7 91.8

D. E. 9.30 4.97 5.09 4.01 6.36 4.97 5.46 4.98 2.74 5.34 6.40 6.41 4.59

GRÁFICO Nº 9: NIVELES DE GLICEMIA DE RATAS DEL GRUPO CONTROL (AGUA + COMIDA)

Page 27: articulo hipoglucemia

GRÁFICO Nº 10:COMPARACIÓN DE LOS NIVELES DE GLICEMIA AL INICIO Y FINAL DEL EXPERIMENTO EN RATASDEL GRUPO CONTROL (AGUA Y COMIDA)

Page 28: articulo hipoglucemia

Anexo Nº 3

CUADRO Nº 17: BIOENSAYO DE TOXICIDAD, MORTALIDAD DE NAUPLIOS (Artemia salina)

DILUCIÓN TUBO 24 HORAS % MORT. PROMEDIO %

10 ppm 01 03 30 26.66

02 03 30

03 02 20

100 ppm 01 05 50 46.66

02 04 40

03 05 50

1000 ppm 01 07 70 80.00

02 09 90

03 08 80

BLANCO 01 01 10 13.33

02 02 20

03 01 10

Fotos del trabajo de investigación

Consultar en formato impreso