area: ciencias sector: biologÍa nivel: iv medio diferenciado clase: estructura y regulaciÓn de la...
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AREA: CIENCIAS
SECTOR: BIOLOGÍA
NIVEL: IV MEDIO DIFERENCIADO
CLASE: ESTRUCTURA Y REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA
PROFESOR: JULIO RUIZ A.
DEFINICIÓN MOLECULAR DE GEN
SECUENCIA COMPLETA DE NUCLEÓTIDOS NECESARIOSPARA LA SÍNTESIS DE UN PRODUCTO GÉNICO FUNCIONAL
POLIPÉPTIDO RNA m
que puede ser
REGIONES DECONTROL
PROBLEMA A INVESTIGAR:
¿EXISTE ALGUNA RELACIÓN ENTRE LOS GENES Y LAS ENZIMAS?
ENZIMA: PROTEÍNA QUE INTERVIENE EN EL METABOLISMO PARA LA SÍNTESIS DE OTRAS MOLÉCULAS ESPECÍFICAS.
¿QUÉ SON LAS ENZIMA
EXPERIMENTO DE GEORGE BEADLE Y EDWARD L. TATUM NEUROSPORAS
OBJETIVO DELEXPERIMENTO: Demostrar la relación que hay entre un gen y una enzima.
MATERIAL D EXPERIMENTACIÓN: EXPERIMENTO DE GERGE BEADLE Y EDWARD TATUM
Utilizaron como material de investigación, neurosporas.
Las Neurosporas normales del punto de vista nutricional son prototrófica: crece en un medio de cultivo mínimo: con algunas sales.
Hongo moho del pan
Neurosporas o esporas del moho del pan
A diferencia del humano, las neurosporas, tienen todas las enzimas para la síntesis
de la vit B6, aminoácidos, etc
¿QUÉ SON LAS NEUROSPORAS?
HIPÓTESIS
Si todas las sustancias orgánicas que necesitan para vivir las neurosporas (aminoácidos, glúcidos, vitaminas, lípidos) son sintetizadas a partir de las iniciales
Entoces, «deben tener algún gen que codifique la información para la síntesis de una enzima que dirija los procesos metabólicos para la síntesis de los nutriente que necesitan estas esporas: vit B6, aminoácidos, etc.»
PRIMERA PARTE DEL EXPERIMENTO:
• Irradiaron con rayos X y luz ultravioletas las neurosporas.
• ¿Con qué propósito?
• Para modificar la estructura de los genes, esto es, producir mutaciones.
ILUSTRACIÓN EXPERIMENTO
SEGUNDA PARTE EXPERIMENTO:
Se les proporcionó a las esporas una por una las sustancias esenciales para su supervivencia, hasta ver cual conseguía normalizar el desarrollo de la neurospora perturbada.
EN UN MEDIOENRIQUECIDO
ESPORAS EN UNMEDIO DE CULTIVO
EXPERIMENTO DE G. BEADLE Y E. TATUM
NO CRECENEN UN MEDIOMÍNIMO
glycina serina alamina Con prolina
CRECENTransferidas a medios mínimos con un aminoácido conocido, previamente irradiadas con rayos X
Otros aminoácidos
NO CRECEN CRECEN
NO CRECEN
EN SÍNTESIS:
¿QUÉ RESULTADOS OBTUVIERON?:
• Algunas de las neurosporas irradiadas no podían vivir en el medio de cultivo mínimo a menos que se le proporcionaran una determinada vitamina, aminoácidos y otro suplemento nutritivo.
• A estos organismos incapaces de sintetizar ciertas sustancias orgánicas, especialmente aminoácidos se les llamó auxótrofos.
NEUROSPORA NORMAL
SIN COMPLEMENTO
CRECE: sintetiza arginina,citrulina y
ornitina
NEUROSPORA IRRADIADA: mutante A
Complementoarginina
Crece solo si se agrega arginina o citrulina. No
sintetiza arginina por defecto ez 1. Necesita gen B para
sintetizar citrulina
Crece solo si se agrega arginina: no sintetiza este
aa, defecto en ez 2. Necesita gen A
NEUROSPORA IRRADIADA: mutante B
Arginina o citrulina
ornitina citrulinaarginina
Ez A
Gen B gen A
Ez B
Fundamentales para síntesis proteínas
LOS GENES Y LAS VIAS METABÓLICAS
CONCLUSIONES
• En varias series de experimentos, demostraron que las mutaciones causaron cambios en las enzimas específicas implicadas en las rutas Metabólicas
• Estos experimentos, publicados en 1941 los llevaron a proponer un vínculo directo entre los genes y las reacciones enzimáticas conocida como la hipótesis “Un gen, una enzima”.
• Esta hipótesis, afirma que los genes codifican información para sintetizar proteínas con actividad enzimática.
• Un gen específico codifica para la síntesis de una sola enzima las que participan en una las cadenas de reaccione químicas.
• E. Tatun Recibió en 1958 el Premio Nobel de Fisiología o Medicina, que compartió con G. Beadle y Joshua Lederberg, por sus trabajos sobre los bloqueos metabólicos controlados por genes
GENES Y EXPRESIÓN GÉNICADNA eucarita y procariota.swf
¿EN QUÉ CONSISTE LA TRANSCRIPCIÓN DE UN GEN?
Expresión génica consta de do procesos:
Transcripción: síntesis de ARN m a partir de un molde de ADN.
• Traducción: Síntesis de proteínas a partir de un molde de ARN m.
• Además del ARN m, participa el ARN t como decodificador del primero.
PROCARIOTA EUCARIOTA
GENES PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS
¿QUÉ DIFERENCIAS PUEDES RECONOCER?
ALGUNAS DIFERENCIAS
Son más simples Son más complejos
Carecen de intrones Poseen intrones y exones
La transcripción produce un mRNApara la síntesis de más de una proteína
No hay procesamiento del transcrito,a partir de éste, se sintetizan dos o más proteínas diferentes
Transcripción compleja, se transcribe unproducto primario que puede ser procesado a dos o más mRNA monocistrónicos, según los sitios de corte y empalme
La trascripción produce un único mRNA Inicial monocistrónico, que es traducido a una proteína específica
Las secuencias codificadoras están densamente organizadas a lo largo
del DNA
Las secuencias intrónicas no codificanpara mRNA, ni tienen función regulatoria o funcional.
ALGUNAS DIFERENCIAS
SISTEMA DE ORGANIZACIÓN, EXPRESIÓN Y REGULACIÓN
PROCARIOTA
SISTEMA DE ORGANIZACIÓN, EXPRESIÓN Y REGULACIÓN
EUCARIOTA
OPERON PROMOTOR
. Grupos de genes que codifican para proteínas relacionadas se agrupan en unidades conocidas como operón
. Consta de: un operador, un promotor, un regulador y un gen estructural
1. . Sistema formado: • El promotor• Los intensificadores• Los silenciadores.• Los factores de transcripción, etc
ESTRUCTURA GENES PROCARIOTAS: MODELO DEL OPERON.
Este modelo fue planteado por los biólogos franceses: Francois y Jacque Monod, en 1960.
ESTRUCTURA GENES PROCARIOTAS:
Genes estructuralesRegulador
SISTEMA OPERÓN
OPERÓN: DISPOSICIÓN DE GENES DEDICADOS A UN ÚNICO FIN METABÓLICO: SINTESIS DE ENZIMAS PARA FORMAR AMINOÁCIDOS
Este modelo del operón de la regulación de los genes procariotas fue propuesto en 1961 por Francois Jacob y Jacques Monod
Genes estructuralesRegulador
ESTRUCTURASISTEMA OPERÓN
Parte del ADN donde se fija la enzima ARN polimerasa la que copia los genes estructurales mRNA
Se le unen proteínas específicas para activarlo o reprimirlo y así, se controla el acceso de la ARN polimerasa al promotor
El gen regulador codifica para una proteína que se pega al operador, obstruyendo al promotor (y por lo tanto a la transcripción), de los genes estructurales. De esta forma, regula a todo el operón
Es decir, donde la ARN polimerasa reconoce el sitio de inicio de la transcripción
codifican para la síntesis de 3 enzimas involucradas en una vía metabólica.
1 2 3
Codón de término
No se transcriben
LOS INTERREPTURES GENÉTICOS
Proteínas que puedenactivar e inhibir un gen
Son
Proteína represoralambda (cl) Proteína cro
Bloquean la síntesis de otra enzima, permitiendo dos estados
Estado I o profago
El represor lambda ocupa al operador: bloquea síntesis de represor y activa su propia síntesis
Estado II o lítico
La proteína cro ocupa un lugar diferente en el operador, bloqueado la síntesis del represor y activando su propia síntesis.
Control de la transcripción de los gene procariotas
Controlando la transcripción de un gen, la célula puede regular que proteínas produce y con que rapidez
TIPOS DE CONTROL
REPRESIÓN ACTIVACIÓN
El mRNA y las proteínas codificadas son sintetizadas a alta velocidad
Todo esto determinado en procariotas para ajustar la maquinaria bioquímica a los requerimientos nutricionales
REPRESIÓN
Controlando la transcripción de un gen, la célula puede regular que proteínas produce y con que rapidez
REPRESIÓN
Control de la transcripción de los gene procariotas
Controlando la transcripción de un gen, la célula puede regular que proteínas produce y con que rapidez
REPRESIÓN
Control de la transcripción de los gene procariotas
Controlando la transcripción de un gen, la célula puede regular que proteínas produce y con que rapidez
REPRESIÓN ACTIVACIÓN
Control de la transcripción de los gene procariotas
Controlando la transcripción de un gen, la célula puede regular que proteínas produce y con que rapidez
REPRESIÓN
El mRNA y las proteínas codificadas son sintetizadas a alta velocidad
ACTIVACIÓN
Control de la transcripción de los gene procariotas
Controlando la transcripción de un gen, la célula puede regular que proteínas produce y con que rapidez
REPRESIÓN
Todo esto determinado en procariotas para ajustar la maquinaria bioquímica a los requerimientos nutricionales
El mRNA y las proteínas codificadas son sintetizadas a alta velocidad
ACTIVACIÓN
Control de la transcripción de los gene procariotas
Controlando la transcripción de un gen, la célula puede regular que proteínas produce y con que rapidez
REPRESIÓN
Todo esto determinado en procariotas para ajustar la maquinaria bioquímica a los requerimientos nutricionales
El mRNA y las proteínas codificadas son sintetizadas a alta velocidad
ACTIVACIÓN
Control de la transcripción de los gene procariotas
Controlando la transcripción de un gen, la célula puede regular que proteínas produce y con que rapidez
REPRESIÓN
Todo esto determinado en procariotas para ajustar la maquinaria bioquímica a los requerimientos nutricionales
El mRNA y las proteínas codificadas son sintetizadas a alta velocidad
ACTIVACIÓN
Control de la transcripción de los gene procariotas
Controlando la transcripción de un gen, la célula puede regular que proteínas produce y con que rapidez
REPRESIÓN
Todo esto determinado en procariotas para ajustar la maquinaria bioquímica a los requerimientos nutricionales
El mRNA y las proteínas codificadas son sintetizadas a baja velocidad
El mRNA y las proteínas codificadas son sintetizadas a alta velocidad
ACTIVACIÓN
Control de la transcripción de los gene procariotas
Controlando la transcripción de un gen, la célula puede regular que proteínas produce y con que rapidez
REPRESIÓN
CONTROL DE LA EXPRESIÓN GÉNICA EN LOS PROCARIOTAS.Operón Lac.swf
• Lo que hoy se sabe al respecto, sobre el control de le expresión génica en procariotas, proviene de investigaciones, en la bacteria Escherichia coli.
• En 1960 Fracois y Jaques Monod, observaron que cuando se cultivaban E. coli en un medio carente de lactosa, se reprime la síntesis de mRNA lac, para que la energía no se desperdicie sintetizando enzimas que la célula no puede utilizar.
• En un medio que la bacteria tiene tanto lactosa como glucosa, la bacteria metaboliza preferentemente glucosa.
• La lactosa se metaboliza a gran velocidad, sólo cuando la lactosa está presente y la glucosa se encuentra en mínima concentración.
• Este ajuste metabólico se logra reprimiendo la trancripción del operón lac hasta que la lactosa esté presente, y la síntesis de solo niveles bajos de mRNA lac hasta que la concentración de glucosa caiga a niveles bajos.
• La transcripción de los genes estucturales, es controlada por el operón lac y por la proteína CAP.
CONTROL DE LA EXPRESIÓN GÉNICA POR INDUCCIÓN DEL OPERÓN LAC.
se realiza
Por inactivación del represor: se separa inductor del operador
Activación del represor: inductor se une al operador
Ausencia de lactosa y presencia de glucosa
En presencia de lactosa y ausencia de glucosa
ocurre en ocurre en
REPRESOR INACTIVO O REPRIMIDO
Inductor: Alolactosa, se une al represor para inactivarloRepresor
inactivo
EN PRESENCIA DE LACTOSA LA E. COLI, FORMA UN PRODUCTO INTEMEDIO: ALOLACTOSA (INDUCTOR), SE UNE AL REPRESOR Y LO DESACTIVA, PERMITIENDO LA FIJACIÓN DE LA ENZIMA AL OPERADOR PARA QUE TRANSCRIBA LOS GENES ESTRUCTURALES.
Inductor alolactosase separó del represor
por lo tanto,represor se activa:se une al operador
ARN polimersaEs bloqueada por el represor activado
Todo esto opera en ausencia de lactosa: el represor, se activa y se une al operador lac bloqueando la transcripción de los genes estructurales por parte de la enzima ARN polimerasa para no sintetizar las enzimas que actúan en el metabolismo de la lactosaOperón Lac.swf
REPRESOR ACTIVADO
No hay transcripción genes
estructurales
EN SÍNTESIS:1 EN PRESENCIA DE LACTOSA LA E. COLI,
FORMA UN PRODUCTO INTEMEDIO: ALOLACTOSA (INDUCTOR)
2 INDUCTOR, SE UNE AL REPRESOR, ÉSTE SE SEPARA DEL OPERADOR.
3 LA EZ ARN POLI SE FIJA AL PROMOTOR PARA TRASCRIBIR GENES ESTRUCTURALES.
4 SE SINTETIZAN LAS ENZIMAS PARA METABOLIZAR LA LACTOSA.
5 EN AUSENCIA DE LACTOSA (PRESENCIA DE GLUCOSA), OCURRE EL PROCESO CONTRARIO
CONTROL DE INTERRUPTOR GÉNICO POR REPRESIÓN DEL OPERÓN TRIPTOFANO: OPERÓN ACTIVADO
Proteína correpresora triptofano, separada del represor
Represor se inactiva: no se une al operador
Enzima ARN poli queda libre para transcribir los genes estructurales
ASÍ, EL OPERÓN TRIP, QUEDA ACTIVADO PARA QUE LA ARN POLI, TRANSCRIBA LOS GENES ESTRUCTURALES NECESARIOS PARA SINTETIZAR LAS ENZIMAS QUE ACTÚAN A SU VEZ EN LA SÍNTESIS DEL TRIPTOFANO
Correpresor, se une al represor
Se une al aperador
ARN poli, bloqueada para transcribir los genes estructurales
CONTROL DE INTERRUPTOR GÉNICO POR REPRESIÓN DEL OPERÓN TRIPTOFANO: OPERÓN ACTIVADO
ASÍ, EL OPERÓN TRIP, QUEDA DESACTIVADO PARA QUE LA ARN POLI, NOTRANSCRIBA LOS GENES ESTRUCTURALES NECESARIOS PARA SINTETIZAR LAS ENZIMAS QUE ACTÚAN A SU VEZ EN LA SÍNTESIS DEL TRIPTOFANO
EN SÍNTESIS Operón TRIPTOFANO.swf
1 EL CORREPRESOR TRIPTOFANO, SE UNE AL REPRESOR, ESTE SE ACTIVA, SE UNE AL OPERADOR, LA EZ ARN POLI, NO PUEDE COPIAR LOS GENES ESTRUCTURALES.
2 EL CORREPRESOR, SE SEPARA DEL REPRESOR, ÉSTE, SE
INACTIVA (SE SEPARA DELOPERADOR) 3 LA EZ. ARN POLI, SE UNE AL OPERADOR
PARA COPIAR LOS GENES ESTRUCTURALES.
4. Los operones inducibles y represibles son ambos desconectados por proteínas represoras codificadas por genes reguladores.
5. El represor se une al DNA en el operador y evita, de esta forma, que la RNA polimerasa inicie la transcripción.
6. El experimento de Jacques- Monod fue muy importante por que constituyó el primer modelo propuesto para explicar la regulación de la transcripción en procariontes: MODELO DEL OPERÓN.
¿CÓMO SW COTROLA LA EXPRESIÓN DE LOS GENES?
Se puede lograr de muchas formas
Regulando el momento y la frecuencia de la transcripción de genes específicos: control transcripcional
Controlando el modo de procesamiento de los transcritos del ARNm:control de procesamiento del ARN
Seleccionando los ARMm maduros que serán mandado a los ribosomas para ser exportados al citoplasma: control del transporte de ARN
Controlando los ARNm que van a ser traducidos: control traduccional
Desestabilizando selectivamente algunas moléculas de ARNm:Control de la degradación de los ARNm
Activando o desactivando de modo selectivo las proteínas sintetizadas:Control de la actividad proteica.
¿Qué caracteriza el control transcripción tanscripcional en eucariotas?f
Es más compleja la transcripción que en procariotas:
Intervienen varias RNA polimerasas: Poli I, Poli II, Poli III
Actúan numerosas proteínas reguladoras, llamadas factores de trascripción.
El DNA está asociado a proteínas llamadas histonas (ejerncen control)
Los genes presenta secuencias codificantes llamadas exones y secuencias no codificantes denominadas intrones.
¿ Qué caracteriza el control transcripcional en eucariotas? continuación
B. El control génico está más relacionado con la regulación de programa genético, para desarrollo embriológico y la diferenciación celular (en procariotes, para ajustes nutricionales).
C. El genoma contiene información para fabricar miles de proteínas y mRNA diferentes, producto de la expresión de una fracción de genes, dependiendo de las señales recibidas del medio externo.
D. Al igual que en procariotas, la regulación de la expresión génica se hace principalmente al inicio de la transcripción.
¿en que difiere la transcripción de los genes eucariotas de los procariotas?
1. Las enzimas ARN poli no pueden iniciar la transcripción por si misma.
2. Requieren de la presencia de una serie de enzima llamadas factores de transcripción (FT)
3. Los FT deben unirse al promotor antes que la transcripción pueda iniciarse.
4. El ensamblaje consta de varias etapas con lo que la velocidad de transcripción puede aumentar o disminuir como respuesta a señales de regulación
5. Muchas de esta proteínas reguladoras, actúan influyendo en estas etapas.
¿en que difiere la transcripción de los genes eucariotas de los procariotas?
6. Las proteínas reguladoras pueden actuar aun cuando estén unidas a mucha distancia del promotor.
7. Un mismo promotor puede ser regulado por un número grande de proteínas dispersas en el ADN
ORGANIZACIÓN GENERAL DE UN GEN EUCARIOTA COMPLEJO DE TRANSCRIPCION Y ENHANCERS.swf
PROMOTOR
secuenciaTATA: reconoce proteína
del mismo nombre
Secuencias de reconocimiento de proteínas reguladoras a distancia del promotor
Secuencia reguladora
Secuencia codificadoraproteína: exones- intrones
PROMOTOR
PARTE DEL GEN DONDE SE ENSAMBLAN LOS FACTORES GENERALES DE TRANSCRIPCIÓN Y LA ENZIMA ARN POLIMERASA II
TAMBIEN SE ENSAMBLAN PROTEÍNAS REGULADORAS PARA CONTROLAR LA VELOCIDAD DE LA TRANSCRIPCIÓN
es
REGULAR LA EXPRESIÓN DEL GEN
todo esto para
Factores generales de transcripción o basales
ARN poli IIProteína TATA
coactivadores
activadores
RELACIÓN ENTRE EL PROMOTOR Y LAS PROTEÍNAS REGULADORAS (FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN
¿¿Qué son los factores de trascripción? (FT)
Son proteínas reguladoras, controlan específicamente la expresión de cada gen según la situación fisiológica de la célula, debido a que son capaces de:
a) Fijarse al DNA cerca de sus genes diana.
b) Activar o bloquear la transcripción de los genes diana modificando el funcionamiento de la RNA pol, que por si misma no puede iniciar la transcripción.
c) Responder a señales procedentes del exterior o del interior de la célula.
TIPOS DE FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN
BASALESCOACTIVADORES
ACTIVADORES REPRESORES
¿POR QUÉ LOS FT SON OBJETOS DE TANTAS INVESTIGACIONES HOY EN DÍA?
• son objeto de muchas investigaciones por que pueden tener aplicaciones médicas, por ejemplo en estudios con el virus del SIDA (VIH).
• Si se encontrara un agente inhibidor que reconociese a ese factor de transcripción del VIH y no factores de transcripción humanos, se podría detener la replicación de virus.
• También podría tener aplicaciones oncológicas.
TFIID
La transcripción se inicia con el reconocimiento de la proteína de la TBP (tatabBinding Protein) del factor HFIID de la secuencia TATA del promotor
Inicio de la transcripción
Una vez unido el TFIID a la secuencia TATA facilita el ensamblaje
de de los FGT y la Poli II
ETAPA SIGUIENTE
COACTIVADORES
El ensamblaje de los FGT y la Poli II, facilita la inserción de otras proteínas reguladoras: las co activadoras
dominio de reconocimiento de DNA
Dominio de reconocimiento de la maquinaria transcriptota
Proteínas activadoras génicas, tienen dos dominios de recocimiento: para reconocer secuencia reguladora de DNA y de la maquinaria de transcripción
PROTEÍNAS ACTIVADORAS
Proteína activadora se une con su sitio de reconocimiento al DNA y la maquinaria transcriptora respectivamente
De esta forma, estas proteínas activan la transcripción del gen, aumentando la velocidad de dicho proceso, actuando de diferentes formas.
dominio de reconocimiento
zona reguladora
PROTEÍNAS REPRESORAS
Estas proteínas al unirse con su dominio de reconocimiento al DNA, impiden la transcripción.
TRANSCRIPCIÓN REPRIMIDA DEL GEN. COMPLEJO DE TRANSCRIPCION Y ENHANCERS.swf
A diferencia de los represores procariotas, no actúan compitiendo con la polimerasa por unirse con el DNA, no está claro como reprimen la transcripción. ¿cómo actuarían?
Compiten con las activadoras por unirse con la secuencia reguladora del DNA
Ambas se unen al DNA, pero el represor impide que el activador se una con la maquinaria transcriptora
El represor, interactúa con los FGT, para impedir que el ensamblaje de éstos continúen
EN SÍNTESIS: LA TRANSCRIPCIÓN DE LOS GENES EUCARIOTAS PUDE REGULARSE: Control de la expresión génica en eucariotas.flv
a) Cambiando la estructura de la cromatina dirigida por activadores o represores.
b) Regulando los niveles de factores de transcripción y/o su actividad de inductores o represores de la transcripción.
c) Por influencia de activadores o represores sobre el ensamblaje de la RNA poli II junto con el resto de los factores de transcripción.