“Determinación serológica de la

Rinotraqueítis Infecciosa Bovina (IBR) en el Municipio de Moctezuma

Sonora”

Tesis

que para obtener el título de Médico Veterinario Zootecnista

Presenta

Luis Fernando Valenzuela Molina

Ciudad, Obregón Sonora; Enero de 2012

i

DEDICATORIAS

Para mis padres, Yolanda Molina y Fernando Valenzuela, por haberme apoyado a

culminar una etapa más de mi vida que sin ustedes todo hubiera sido más difícil, y

por que la vida me ha premiado con unos padres como ustedes.

Para mi abuela, Irma Jiménez, (mama Irma) por todo el apoyo y cariño incondicional

que me ha brindado siempre, por todos sus consejos y regaños que me fueron de

mucha ayuda para reflexionar y esforzarme cada día más para concluir mis estudios.

Para mis tíos, José Manuel Félix y María Antonia Valenzuela, que me dieron la

oportunidad y la confianza de contar con ustedes, ya que en la vida se nos dan

pocas oportunidades como esta que no desaproveche y de lo cual me siento muy

agradecido, dios los bendiga y los cuide siempre.

Para mis hermanas, Melissa y Perla por haberme apoyado y creído en mí siempre.

Para mi novia, Denia Isabel que siempre estuviste al pendiente de que terminara mis

estudios aconsejándome y ayudándome en lo que pudieras en todos los momentos

fuertes y felices por eso y por muchas cosas más te amo mi niña hermosa.

Para mis dos grandes amigos que se nos adelantaron en esta lucha René Castell y

Adrian Covarrubias sin lugar a dudas ustedes siempre han sido y seguirán siendo

unas grandes personas que llevare en mi corazón, no solo como un recuerdo de

nuestra amistad sino como esa fuerza que te impulsa a salir adelante y ser mejor

cada día, que dios los tenga en la gloria.

ii

AGRADECIMINTOS

A los productores del municipio de Moctezuma Sonora, por su apoyo en la

realización de este trabajo.

Mi asesor de tesis MVZ. José María Aceves Gutiérrez.

A los revisores MC. Pedro Alán López Castro, MC Fernando Rivera Acuña.

MC Jorge Robles Mascareño, MC Pablo Luna Nevarez

MVZ. Inés Enríquez Ramos.

MC. Carlos M. Aguilar Trejo.

iii

INDICE

DEDICATORIA i

AGRADESIMIENTOS ii

INDICE DE FIGURAS v

RESUMEN vi

I. INTRODUCCIÓN 1

1.1 Antecedentes 2

1.2 Planteamiento del problema 2

1.3 Objetivo 3

1.4 Justificación 3

1.5 Limitaciones del estudio 3

II. FUNDAMENTACION TEORICA 4

2.1 Definición 4

2.2 Etiología 4

2.3 Epidemiología 4

2.4 Sinónimos 6

2.5 Patogenia 6

2.6 Forma respiratoria 7

2.7 Signos forma respiratoria 8

2.8 Enfermedad ligera 8

2.9 Enfermedad sub aguda 8

2.10 Enfermedad aguda 8

2.11 Epizootiología 9

iv

2.12 Hallazgos a la necropsia 10

2.13 Tratamiento 10

2.14 Vacunas y plan de vacunación 10

2.15 Diagnostico 11

2.16 Técnica de ELISA 12

III. METODO Y MATERIALES 14

3.1 Localización del área de estudio 14

3.2 Método 14

3.3 Variables a analizar 16

3.4 Método estadístico 16

IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 18

V. CONCLUCIONES 22

VI. BIBLIOGRAFIAS 23

v

INDICE DE FIGURAS

Figura 1. Seroprevalencia a IBR de los animales muestreados 18

Figura 2. Nivel de inmunidad en los animales muestreados basado en la revisión

según la escala del InmunoComb. 21

vi

RESUMEN

Luis Fernando Valenzuela Molina. Presencia serológica de anticuerpos contra la

Rinotraqueítis infecciosa Bovina en bovinos explotados extensivamente en el

municipio de Moctezuma, Sonora, Asesor: MVZ José Ma. Aceves Gutiérrez.

El objetivo de la presente investigación fue evidenciar los anticuerpos presentes para

la enfermedad de Rinotraqueítis Infecciosa Bovina, por medio de la técnica de

ELISA. El estudio se realizó en bovinos explotados extensivamente en el municipio

de Moctezuma, Sonora. Siendo una región en donde se ignoraba el estatus sanitario

de los animales a (IBR).

Con un total de 141 animales muestreados, sin importar raza, sexo y edad, se obtuvo

la muestra sanguínea por punción de la vena caudal en animales no vacunados.

Los resultados obtenidos fueron de 81 animales positivos equivalente a un 57% a la

prueba de ELISA.

Esto hace notar la importancia de la realización de estudios serológicos y de

monitoreo en los bovinos de este municipio.

Se concluye que si no se cuénta con animales vacunados en esta región es muy

probable que sean infectados. La presencia de anticuerpos para (IBR) manifiesta

vii

que los animales muestreados de el municipio de Moctezuma, Sonora pueden estar

enfermos manifestando o no signos, lo que puede ser una causa de problemas

productivos y reproductivos en los animales, ó bien pone de manifiesto que los

animales estuvieron enfermos y presentan la infección latente.

1

I. INTRODUCCIÓN

Los bovinos son los principales animales de granja para la producción de carne y

leche para consumo humano, pero a pesar de su importancia para la alimentación

humana, los sistemas de producción bovina son descuidados por la poca

atención al bienestar animal.

En México existe ganado con enfermedades que interfieren en la producción y se

hace énfasis en las enfermedades infecciosas del aparato respiratorio que

afectan a las vías altas es decir las que se encuentran por encima de la glotis y

comprenden a las fosas nasales, senos de la cara, nasofaringe y tráquea. Estas

enfermedades logran desarrollarse y extenderse debido a la influencia de otros

agentes tanto patógenos como factores ambientales que lo favorecen.

Las enfermedades infecciosas del aparato respiratorio son muy variadas. Bajo

distintos términos colectivos como Síndrome Respiratorio Bovino y complejo

respiratorio bovino se reúnen enfermedades del tracto respiratorio que no

dependen de un solo curso patológico típico o cuadro sintomático característico

de un microorganismo, sino de la interacción de varios.

Uno de los agentes etiológicos más importantes de estas infecciones es el

herpesvirus tipo 1 que provoca la enfermedad de Rinotraqueítis Infecciosa Bovina

(IBR), la cual tiene tres manifestaciones: la forma respiratoria de la enfermedad

es de presentación súbita. Las pérdidas por mortalidad son bajas generalmente,

pero presenta una alta morbilidad. No es rara la observación de conjuntivitis en

las epizootias de la (IBR). (Marchant, 1980). Puede presentarse también la forma

genital o/y forma encefálica.

2

1.1 Antecedentes

Los primeros datos referentes a la IBR corresponden a un caso ocurrido en

ganado lechero de California, EUA en 1954. (Correa, 1988). El virus de la IBR fue

descrito por primera vez por Madin, Cork, y Mc Kercher en 1956. La enfermedad

se había observado antes por otros investigadores en Colorado y California.

(Marchant, 1980). Se ha postulado que el virus de IBR fue introducido en el

oriente de Estados Unidos desde Europa, y en esta región permaneció en hatos

de ganado vacuno como infección del aparato genital. Ahora bien, cuando llegó al

occidente de los Estados Unidos, donde existían gran número de reses reunidas

en los pastizales, el virus se adaptó a las vías respiratorias y produjo la

enfermedad. (Mohanty, 1983).

En México, la Rinotraqueítis Infecciosa Bovina fue diagnosticada por primera vez

en 1971 y a la fecha se á aislado el virus a partir de bovinos con signos

sospechosos de hatos de diferentes partes de la República Mexicana (Correa,

1988).

1.2. Planteamiento del problema

En estudios anteriores se encontró la presencia de anticuerpos contra el virus de

Rinotraqueítis Infecciosa Bovina (IBR) en algunas comunidades vecinas al

municipio de Moctezuma, Sonora, y actualmente se han estado presentando

casos con signos clínicos característicos a (IBR) lo cual ha provocado que baje la

producción del ganado en este municipio, despertando un interés por parte de los

productores a realizar este tipo de estudio.

3

1.3. Objetivo

Determinar la presencia de anticuerpos del virus de la Rinotraqueítis Infecciosa

Bovina por medio de la prueba de inmunoensayo; Para conocer el grado de

diseminación de la enfermedad en el municipio de Moctezuma, Sonora, ya que en

muestreos anteriores de algunos municipios como son, la Colorada, Suaqui

Grande, Ures y villa Pesqueira, Sonora se han encontrado altos números de

reactores positivos.

1.4. Justificación

En el Estado de Sonora la ganadería ha sido una de las actividades pecuarias

más importantes ya que el ganado bovino tiene gran capacidad para adaptarse a

terrenos áridos y semiáridos comunes en esta región, lo cual implica una

actividad de bajo costo comparada con otros animales. Con la finalidad de

mejorar los hatos se han introducido animales de alta calidad genética al Estado

de Sonora trayendo como consecuencia la introducción de nuevos agentes

patógenos que interfieren en la salud de los animales disminuyendo la

productividad de esta actividad pecuaria. Con esta investigación se pretende

determinar el porcentaje de seroprevalencia de (IBR) para poder actuar

concienzudamente implementando medidas de prevención de enfermedades,

diseñando y evaluando programas de manejo y vacunación.

1.5. Limitaciones del estudio

La principal limitación del presente estudio es la distancia que hay entre cada

rancho lo cual dificulta el traslado., el costo de los kit de ELISA para correr las

pruebas, al igual que la falta de manejo de los animales.

4

II. FUNDAMENTACIÓN TEORICA

2.1 Definición

La Rinotraqueítis Infecciosa Bovina (IBR) es una enfermedad infecciosa

ocasionada por un virus herpes que se puede presentar en una forma aguda o

también latente. (Correa, 1988). Se ha observado que el herpesvirus puede

afectar a varios sistemas orgánicos. (Blowey, 1992).

2.2 Etiología

Virus de DNA en su acido nucléico, clasificado como Herpes Tipo I. (Instituto

Nicaragüense de Tecnología Agropecuaria 2002).

Pertenece como Vericellovirus a la subfamilia Alphaherpesviridae, dentro de la

familia Herpesviridae (Brunner, 2002).

2.3 Epidemiología

Las especies susceptibles que en condiciones de campo y experimentales se

pueden infectar es el ganado bovino, pero los borregos, caballos, cuyos, ratones,

perros y gatos son refractarios (Correa, 1988). Y aunque rara vez se puede

presentar, el padecimiento puede afectar de forma natural a los cerdos, tanto en

la modalidad respiratoria como en la genital. Con base a estudios serológicos, el

virus tiene amplia distribución en la fauna africana, sobre todo en el búfalo. Son

susceptibles los bovinos de todas las razas y edades en la infección

experimental, pero la enfermedad natural se observa, principalmente, en animales

de mas de 6 meses de edad, quizá por hallarse mas expuestos a la infección

(Blood, 1992).

5

El ganado recién nacido falto de anticuerpos maternales se afecta más

severamente que el ganado viejo (Blood, 1992).

El virus de la Rinotraqueítis Infecciosa Bovina ha sido aislado del semen 12

meses después de su almacenamiento (Blood, 1992). Se estima que el

aislamiento del virus en el semen es más bien de origen prepucial que testicular.

Los toros pueden transmitir el virus sin manifestar el signo alguno de la infección

(Mohanthy, 1983). El período de incubación en lotes de engorde es de 10- 20

días (Blood, 1992).

La morbilidad oscila entre el 20 y 100% (Bruner, 2002). Y la tasa de mortalidad en

el ganado de carne se debe invariablemente a la traqueítis bacteriana secundaria

y a la bronconeumonía y puede alcanzar una cifra del 10 % (Blood, 1992). O bien

con una infección vírica concomitante con el virus de la diarrea vírica bovina

(VDVB) o con el virus respiratorio sincitial bovino (Rebhun, 1999).

No se registran variaciones estacionales en la incidencia, salvo una mayor

ocurrencia en bovinos en lotes de engorde en los meses de otoño e invierno,

cuando se encuentran mayor número de animales susceptibles (Blood, 1992)

La infección por HVB1 está distribuida entre el ganado de todos los continentes

causando una variedad de enfermedades y pérdidas económicas significativas

(Kaashoek et al, 1996)

6

2.4 Sinónimos

Vulvovaginitis postulosa infecciosa, Balanopostitis pustulosa infecciosa, exantema

coital y Rinotraqueítis infecciosa bovina. (Fenner, 1992). También llamada Nariz

roja, IBR (Blowey, 1992).

2.5 Patogénia

El virus ataca primero las mucosas de la cabeza, luego la tráquea y pulmones, no

siendo raro que después de una fase de viremia, ocasione inflamación del

Sistema Nervioso Central, y abortos en las vacas gestantes. La inflamación

edematosa de las mucosas, que mas tarde pueden transformarse en necrosis,

especialmente después del asiento bacteriano secundario, motiva una secreción

al principio seroso o mucosa y luego mucopurulenta (flujo nasal, lagrimal,

salivación abundante). Los exudados fibrinosos provocan la aparición de

revestimientos pseudomembranosos en las mucosas nasal, laringe y tráquea. En

los pulmones se instaura una bronconeumonía catarral que pueden ser

supurativa si participan, además, bacterias. Que posiblemente obedecen a la

actuación de un virus de acompañamiento. (Schulz, 1993).

Después de la infección por vía respiratoria, el virus se replica en los linfonodulos

linfáticos regionales; de ahí por vía sanguínea, se localiza en el tracto respiratorio

alto, produciendo la enfermedad respiratoria (Instituto Nicaragüense de

Investigación Agropecuaria 2002), (INTA).

La conjuntivitis en el proceso respiratorio se produce mediante aerosoles (Fenerr,

1992). Siendo la propagación desde las cavidades nasales hacia los tejidos

oculares, probablemente, a través de los conductos lagrimales (Blood, 1992).

7

La encefalitis parece ser el resultado de la difusión neural directa a partir de la

cavidad nasal, faringe y tonsilas a través de las ramas maxilar y mandibular del

nervio trigémino y ganglio trigémino (Fenerr, 1992; Blood, 1992).

La invasión sistémica por el virus va seguida de la localización de este en varios

tejidos diferentes. El virus puede ser transportados por leucocitos periféricos

hacia la placenta, y se transfiere al feto causando aborto (Blood, 1992).

El proceso genital puede ser el resultado del coito o de la inseminación artificial

aunque e algunos brotes especialmente en vacas lecheras puede no estar

relacionado con el coito (Fenerr, 1992).

2.6 Forma respiratoria

La enfermedad respiratoria, es usualmente vista en ganado mayor de 6 meses

pero puede ocurrir en animales jóvenes (Blowey, 2004).

En el ganado lechero, pueden detenerse los signos clínicos y el animal se cura

por completo en 10 a 14 días. En animales de engorde, la enfermedad suele ser

más larga, el periodo febril más largo, las secreción nasal mas profusa y

purulenta, puede haber una enfermedad prolongada hasta 4 meses (Blood,

1992).

8

2.7 Signos forma respiratoria

Se manifiesta por fiebre, flujo óculo-nasal, inapetencia, aumento de la frecuencia

respiratoria y tos. Fiebre de 40.56 °C a 42.22°C, respiración rápida de 40 a 80

resp/min. (Brunner, 2002; Rebhun, 1999).

Los pulmones son normales a la auscultación, la incapacidad respiratoria se

manifiesta durante el ejercicio (Blood, 1992).

2.8 Enfermedad ligera

En esta solo se presenta conjuntivitis, enrojecimiento delgado en la línea de los

ojos párpados con descarga usualmente limpia y acuosa. A menudo ocurre

cuando la tención de la enfermedad es suave o el grado de infección es bajo o el

animal es resistente (Blowey, 2004).

2.9 Enfermedad subaguda.

Es común en ganado adulto y a menudo es de corta duración. Existe un aumento

marcado de la temperatura (40 °C) que dura un día o dos. A menudo existe una

marcada caída en la producción de leche, lagrimeo y descarga nasal. En los

animales habrá ptialismo y una corta expresiva tos, se presenta taquipnea, los

animales se recuperan de 10 a 14 días (Blowey, 2004).

2.10 Enfermedad aguda

Los signos son similares a la forma subaguda pero la temperatura tiende a ser

mayor (40- 41 °C). Los signos se presentan particularmente en ganado de 6

meses a 2 años. Los signos respiratorios son comúnmente tos y desórdenes

9

respiratorios. La descarga de los ojos y nariz tiende a volverse profusa, las cuales

consisten en tejido muerto (costras) (Blowey, 2004).

Durante la infección aguda o en las 4 u 8 semanas siguientes puede haber

aborto. Aunque puede existir mortalidad de los fetos en cualquier fase de la

gestación, la mayoría de los abortos aparecen en el tercer trimestre de la preñez

(Rebhun, 1999).

2.11 Epizootiología

La IBR pese a tratarse de un mismo virus, no se presenta simultáneamente en la

enfermedad respiratoria y la erupción vesicular (presumiblemente se han

adaptado determinadas cepas de virus a los respectivos sistemas orgánicos). Si

bien el virus puede sobrevivir durante un tiempo relativamente largo fuera del

cuerpo animal, el contagio se verifica, por lo general, mediante el contacto entre

los animales. Los brotes nuevos de la enfermedad se atribuyen al ingreso de

nuevos animales infectados.

Superada la enfermedad, deja una prolongada inmunidad (para toda la vida), que

se trasmite al ternero mediante el calostro. La rara presentación de enzootias

obedece probablemente a que los terneros tienen tiempo para constituir una

inmunidad activa mientras se hallan bajo los efectos de los anticuerpos

calostrales. (Schulz, 1993).

2.12 Hallazgos a la necropsia

La necropsia de los casos mortales de IBR mostrara inflamación difusa,

ulceración, y membranas diftéricas a lo largo de todos los conductos nasales, en

10

la laringe y en la tráquea. La mucosa nasal inflamada, y a veces en otras zonas

de la nasofaringe o de la tráquea, serán visibles las características placas de

color blanco. Alguna que otra vez de encuentra ulceración de la mucosa oral. La

bronconeumonía bacteriana secundaria o las infecciones víricas superpuestas

pueden enmascarar algunas lesiones de IBR (Rebhun, 1995).

2.13 Tratamiento

Hay una divergencia considerable en cuanto a utilizar o no antibióticos (Blowey,

2004, Blood, 2004).Como todas las enfermedades de origen viral, no existe

tratamiento efectivo, se trata de contrarrestar el efecto secundario de las bacterias

contaminantes con terapia antibiótica(Instituto Nicaragüense de Investigación

Agropecuaria 2002), (INTA).

2.14 Vacunas y plan de vacunación

Las vacunas vivas pueden aplicarse a partir de las 2 semanas de edad y las

vacunas inactivadas a partir del tercer mes de vida. Si se vacuna con productos

inactivados a bovinos menores de tres meses de vida, ya que la inmunidad puede

verse afectada por existencia de anticuerpos maternos. La revacunación se

realiza por lo común con intervalos de medio a un año. (Brunner, 2002).

Existen dos tipos de vacunas elaboradas con virus vivo modificado disponible.

Una es de uso intramuscular, elaborada por lo general, con cultivos tisulares de

riñón bovino y la otra es una vacuna intranasal elaborada con tejido tisular de

conejo. También se dispone de vacunas intranasales de cultivos celulares de

bovino que contiene un mutante sensible a la temperatura (Blood, 1992).

Con base a trabajos experimentales las ventajas de una vacuna intranasal son:

que puede usarse en hembras gestantes y proporciona protección más rápida y

11

eficaz contra la forma respiratoria. La reacción casi no produce reacción

sistémica, y todos los animales en contacto en un brote pueden vacunarse con

seguridad (Blood, 1992).

Además de las vacunas convencionales como son las monovalentes o la

compuesta por varios antígenos asociados polivalentes, se utilizan vacunas

marcadoras (Marcadores deletéreos) (Brunner, 2002).

Las vacunas marcadoras son las que permiten la diferenciación serológica de

ganado infectado en una población vacunada (Obando, 1999).

2.15 Diagnóstico

Generalmente cuando existen los signos característicos y las placas

patognomónicas en la mucosa nasal, el diagnóstico de IBR se basa en el examen

físico. La confirmación de laboratorio es posible mediante la técnica de

anticuerpos fluorescentes durante la fase aguda de la enfermedad (las lesiones

más apropiadas son las de menos de 7 días). Los raspados de las lesiones de la

mucosa y de las placas de color blanco deben ser positivos en la mayoría de los

casos agudos. Además, durante este tiempo es posible el aislamiento del virus.

(Rebhun, 1995).

En ocasiones el diagnóstico morfológico no es suficiente para realizar el

diagnóstico definitivo, por lo tanto es necesario recurrir a pruebas adicionales

como el aislamiento del virus en células de riñón fetal bovino o en células de riñón

de hámster joven (B.H.K). los tejidos de preferencia para aislamiento son: cornete

nasal, hígado fetal, riñón fetal, mucosa vaginal lesionada, placenta, encéfalo

(forma juvenil) bazo y ganglios linfáticos (INTA, 2002).

12

El diagnostico incluye: serología solicitada por seroneutralización en cultivos

celulares o a la prueba de ELISA (INTA, 2002). Estas pruebas se procesan con

las muestras de sueros pares (sueros obtenidos de la fase aguda de la

enfermedad y sueros del animal convaleciente obtenidos de 14 a 21 días

después). Un incremento al cuádruple del título se considera positivo (Mohanty,

1983; Rebhun, 1999)

2.16 Técnica de ELISA

El acrónimo ELISA representa:

E= Encima

L= Linked (enlace)

I= Inmuno

S= Sorbente

A= Assay

Valora anticuerpos específicos según el antígeno que se emplee, produciéndose

una reacción antígeno- anticuerpo. Al final de la reacción se obtiene una solución

de color que se mide con un espectrofotómetro, cuya intensidad está en la

relación directa con la cantidad de anticuerpos (Ángel y Ángel, 2000).

En ELISA el anticuerpo (o antígeno) se fija a una superficie, ya sea en contenedor

de una placa de microtitulación o una partícula de plástico. El espécimen a

prueba se aplica y el material adherido se detecta y caracteriza a través de un

anticuerpo secundario marcado enzimáticamente. Estos ensayos son rápidos

13

sencillos y fáciles de adaptar a analizadores automáticos, pero requieren de

reactivos muy purificados (Parslow, Stites, Terr, imboden, 2002).

Existen distintas variedades de ELISA pero las más utilizadas y sensibles es el

análisis tipo Sándwich o indirecto.

Un anticuerpo marcado con encimas (mAb) dirigido contra un antígeno específico

se fija a placas de microtitulación. Los contenedores se incuban con diluciones

seriadas del espécimen del paciente para permitir la adherencia del antígeno al

anticuerpo de superficie, posteriormente se lavan los contenedores. El antígeno

adherido se detecta mediante un anticuerpo secundario marcado

enzimáticamente. Después de otro lavado, los contenedores se incuban con un

sustrato de encimas y se cuantifica la reacción enzimática (aparición del producto

de la reacción) (Parslow y cols 2002).

14

III. MÉTODO Y MATERIALES

3.1 Localización del área de estudio

El municipio de Moctezuma, Sonora está ubicado en el centro del Estado de

Sonora, su cabecera es la población de Moctezuma y se localiza en el paralelo

29° 47' de latitud norte y a los 109° 40' de longitud al oeste del meridiano de

Greenwich; a una altitud de 677 metros sobre el nivel del mar.

Cuenta con un clima seco, semicalido con una temperatura media máxima

anuales de 29.8 grados centigrados en los meses de junio y julio y una

temperatura minima anual de 12 grados en los meses de diciembre y enero, la

temperatura media anual es de 12.2 grados centigrados

Al este, norte y sur predomina el matorral subtropical, cuya especie es:

casahuate. Casi al centro y combinada con la misma vegetación anteriormente

descrita se localizan pequeñas porciones de suelo utilizadas para agricultura de

riego. Al oeste del municipio la vegetación se caracteriza por bosque de encino y

de pino.

www.e-local.gob.mx/work/templates/enciclo/sonora/.../26038a.htm

3.2 Método

El método se llevó a cavo muestreando a 141 bovinos de diferentes razas, sexo y

edad, extrayendo sangre de de la vena caudal utilizando jeringas de 5ml.

15

Después fue depositada en tubos de ensayo de 13 x 100 sin anticoagulante,

retirando la aguja de la jeringa al momento de vaciarla, esto para evitar

turbulencia y por consiguiente la hemólisis de la muestra, posteriormente se

refrigeraron para su traslado y fueron enviadas al laboratorio de Bacteriología

del departamento de Ciencias Agronómicas y Veterinaria del Instituto Tecnológico

de Sonora, Se centrifugaron las muestras para la extracción del suero y se

congelaron a una temperatura de 0°C para la realización de la prueba después

de la extracción del suero.

Una vez extraído el suero se tomó con la micropipeta 0.05 μl y se depositó en los

contenedores del Kit de ELISA, después de esto se procedió a realizar cada uno

de los pasos de la prueba, inmediatamente se realizó la lectura de los resultados.

El kit utilizado para este diagnóstico es llamado InmunoComb el cual está

diseñado para determinar en sueros de bovinos títulos de anticuerpos para (IBR)

Está basado en el principio de examen inmunológico, es una tarjeta plástica en

forma de peine en donde antígenos de (IBR) están adjuntos.

Este kit trabaja bajo la versión más común de ELISA es el ensayo de Sandwich o

llamado también indirecto.

Este análisis utiliza 2 tipos distintos de anticuerpos que reaccionan con el

antígeno cuya concentración se requiere medir. Se fija una cantidad constante de

un anticuerpo en una serie de soportes sólidos repetidos tales como pocillos de

microtitulación de plástico. Se añade a estos pocillos la solución problema que

contiene el antígeno en una concentración desconocida o una serie de soluciones

patrón con concentraciones conocidas del antígeno y se deja que se unan. Se

elimina mediante lavado el antígeno no unido y se permite la unión del segundo

16

anticuerpo ligado a una enzima (Abul, 2002).La intensidad del color de la muestra

se compara con el control positivo incluido en la prueba para determinar el título.

El control positivo (c+) es calibrado para 200 unidades de ELISA. Las muestras

con idéntico o más alta intensidad de color que el control positivo son

consideradas positivas.

El valor de la Comboescale en rangos de color va del 0 al 10 siendo a partir del

numero 3 la intensidad de color adecuado para el control positivo.

Proporcionando los siguientes valores según unidades ELISA comparadas: arriba

de 200 unidades de ELISA a partir del número 3 al 4 se considera baja

inmunidad, de 4 al 4 es nivel de inmunidad medio y del número 5 en adelante con

800 unidades ELISA presenta una inmunidad alta, es decir que el animal posee

un alto titulo de anticuerpos para (IBR). Valores menores de 3 son considerados

negativos.

3.3 Variables a analizar

Número de reactores positivos y negativos a la Rinotraqueítis Infecciosa Bovina.

3.4 Método estadístico

Se realizó un muestreo simple aleatorio utilizando la siguiente fórmula

(N) (p) (q

n= -------------------

(N-1) B2 ₊ p q

4

17

Donde:

N= Tamaño de la población

n= Tamaño de la muestra

p= Probabilidad de éxito

q= probabilidad de fracaso

B= Limite en el error

La información se analizó por medio de estadística, gráficas descriptivas,

generando números y frecuencias de los resultados obtenidos.

18

IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Se evaluaron las muestras de 141 bovinos para Rinotraqueítis Infecciosa Bovina del

municipio de Moctezuma Sonora. En donde 81 animales fueron positivos siendo

estos el 57% y 60 negativos con el 43%.

57%

43%

Porcentaje de animales positivos y negativos a IBR

81 positivos

60 negativos

Figura 1. Seroprevalencia a IBR en los animales muestreados.

Los resultados obtenidos en el presente trabajo coinciden con otros estudios

realizados en México en cuanto que hay animales positivos a IBR, el numero de

muestras es muy variable en los distintos estudios lo que se observa es gran parte

de estos presentes niveles de seropositividad arriba del 30%.

Blood en 1992, informó que la IBR se había identificado en Estados Unidos,

Australia, Inglaterra, Canadá, Nueva Zelanda, Sudáfrica, Zimbabue y Europa

19

Continental. Y la enfermedad ocurre por lo común en vacas productoras de leche. En

ganado productor de carne al norte de Australia, hasta un 96% de los toros y un 52%

de las vacas muestran evidencia serológica de infección, presumiblemente venérea,

pues la IBR respiratoria es poco común en bovinos en condiciones de ganadería

extensiva. Sin embargo esto es muy subjetivo, ya que el mismo Blood 1992 señala

que existe evidencia epidemiológica de que la virulencia o especificidad de

hospedador cambian debido a factores desconocidos esto apoya en cierto modo el

resultado arrojado en el presente estudio que fue de 81 animales positivos (57%) a

IBR.

Blood 1992, estipuló que la aparición repentina de los brotes de la IBR en los países

en que antes ocurría la enfermedad leve, quizá se deba a la importación de bovinos

infectados con una cepa más virulenta después de la mutación de una cepa

doméstica.

En 1994, se analizaron las muestras de 54 hatos mexicanos encontrando el 54.91%

de animales positivos a IBR (n=621). En el 2000 se evaluó 1179 para IBR,

provenientes de 120 ranchos del estado de Tamaulipas, Veracruz, Tabasco, Chiapas

y Yucatán, se obtuvo el 53.35% de animales positivos a IBR (n=1179). (Reyes JM;

Vásquez R y García JA, 2004).

En el 2001, Leal GAJ y col; evaluaron sueros de 87 animales productores de leche

pertenecientes de 7 establos del Distrito Federa, México; y obtuvieron 32.18%

positivas a IBR; esta cantidad de animales muestreados se asemeja al presente

20

Estudio solo que es en vacas lecheras y se tiene un porcentaje de positivas más bajo

comparado con el de este estudio, quizás sea por la característica de manejo en los

Animales ya que los sistemas de producción láctea presentan más avances y

mejoras en medidas profilácticas.

En 2002 Córdova IA y col; analizaron 180 sueros de bovinos con antecedentes de

aborto en el clima trópico húmedo, resultando el 13% positivas a IBR. En el 2003

Córdoba IA y col; valoraron 2664 muestras de bovinos lecheros con antecedentes de

aborto procedentes de 7 unidades de producción del centro de México, resultando

positivas un 27.49% para IBR. Los porcentajes de positividad de los trabajos antes

mencionados son aun más bajos y se observa que hace énfasis en que los

problemas presentados en estos animales eran de tipo reproductivo, es sumamente

importante realizar estudios en animales con problemas de aborto que el agente

etiológico de la IBR puede provocar aborto.

En 2004, Reyes JM et al, encuentran en muestreos provenientes de 14 establos de

la República Mexicana: Veracruz, Tabasco, Campeche, Chiapas, Aguascalientes,

Yucatán, Tamaulipas, Querétaro, Sinaloa, Chihuahua, Durango, Jalisco, Baja

California Norte y Michoacán, un 57.29% de positividad a IBR; en el estado de

Sonora a pesar de ser muy importante su actividad ganadera se conoce muy poco

acerca de valores de estudios serológicos a la IBR. Esto puede atribuirse a la escasa

investigación en el ganado de carne respecto a este padecimiento.

21

En 2006 Palomares C. encuentra en 85 muestras de bovinos no vacunados

explotados en sistemas extensivos, de los municipios de la Colorada, Suaqui

Grande, Ures, y Villa Pesqueira, Sonora el 84.7% de positividad a IBR.

43%

20%

18%

19%

NIVEL DE INMUNIDAD A IBR DE LOS ANIMALES MUESTREADOS

NEGATIVO BAJO MEDIO ALTO

Figura 2. Nivel de inmunidad en los animales muestreados basado en la

revisión según la escala del InmunoComb.

En la prueba diagnóstica el nivel inmunologico en los animales muestreados

arrojaron los siguientes datos:

Un 43% negativo equivalente a 60 animales y un 57% positivo equivalente a 81

animales, de los cuales 28 animales 20% tienen un nivel de positividad inmunológico

bajo, 26 animales 18% tienen un nivel de inmunidad medio y 27 animales 19% tiene

un nivel de inmunidad alta. (Véase figura 2)

22

V. CONCLUSIONES

De los 141 animales muestreados se encontraron 81 animales positivos (57%) a la

prueba de ELISA, con distinta reactividad. Con una baja inmunidad o baja

intensidad de color en la prueba son animales que pudieron estar en contacto con

el virus, por lo que pueden ser animales portadores y los de alta intensidad de color

pudieran ser animales recientemente infectados.

La Rinotraqueitis infecciosa no se caracteriza por una alta mortalidad, pero si se

presenta una morbilidad alta, que asociada con agentes secundarios puede causar

grandes estragos en la producción de ganado, desde problemas respiratorios como

neumonías hasta poder ocasionar una alta mortalidad.

Existe información sobre la presencia de la Rinotraqueitis Infecciosa bovina en

sistemas de producción intensiva, como son los establos lecheros, pero hace falta

crear conciencia acerca de la presencia de esta enfermedad en sistemas

extensivos, engordas de ganado y doble propósito etc.

Este trabajo puede ser un estudio inicial para aplicarse a otros municipios en el

estado de Sonora con el propósito de determinar la presencia de IBR en animales

no vacunados.

Además este estudio sirve para crear conciencia en los productores y diseñar un

programa de vacunación del ganado de esta zona, lo cual favorecerá la salud del

ganado y con ello notables beneficios en la producción.

23

VI. BIBLIOGRAFIAS

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