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TEMA 3ORGANIZACIÓN DEL MATERIAL HEREDITARIO EN PROCARIOTAS

GENÓFORO DE LOS VIRUS-Características generales-Virus ADN-fago λ

GENÓFORO BACTERIANO-Cromosoma bacteriano-ADN extracromosómico: PLÁSMIDOS

-clasificación-utilización tecnología ADN recombinante

GENÓFOROS VIRALESVIRIÓN(diámetro 10-400 nm)

DNA/RNA

nucleocápside

organización simple y acelular

ausencia DNA y RNA en el mismo virión

incapacidad reproducirse de forma independiente y llevar a cabo división celular

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GENÓFOROS VIRALES

Retrovirus (Ribodesoxivirus) - Sarcoma de Rous (Pollo)

- Leucemia de Rauscher (ratón) - HIV (virus de inmunodeficiencia humana

causante del SIDA)

AnimalSencillaLineal

Familia de virusTipo de virus según huésped.

Tipo de Hélice

Tipo de Molécula

VIRUS ARN-ADN

Hepatitis BAnimalDoble (gap)Circular

Familia de virusTipo de virus según huésped.

Tipo de Hélice

Tipo de Molécula

VIRUS ARN-ADN

VIRUS HEP. B

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GENÓFOROS VIRALES

FAGO λ

infecta E. coli

cápside icosaédrica, DNA doble hélice lineal con ~ 48.000 pb

extremos cohesivos: extremos 5’ monocatenarios (12 nucleótidos de secuencia complemenaria)

lisis bacteria ciclo lisogénico

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GENÓFORO BACTERIANO

ADN → doble hélice circular→ tamaño variable (0,1 a 8 x109 dalton)→ E. coli (1.100 m longitud, 3,2 x105 pares nucleótidos)

Material genético → NUCLEOIDE

ADN (60%)

LÍPIDOS (1%)

PROTEÍNA (5-10%)

ARN (30%)

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ADN altamente organizadoPlegamiento formando DOMINIOS →SUPERENRROLLAMIENTO

GENÓFORO BACTERIANO

Nº dominios en E. coli variable (12 a 80 dominios)Composición: ADN dúplex condensado + proteínas básicas

GENÓFORO BACTERIANO

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ProtaminasDesconocidoSububnidad de 3.000 d.P

Desconocida20.000 copias

Monómero de 15.000 d.HLP1

Desconocida10.000 copias

Subunidad de 15.000 d.H1

DesconocidaDesconocido

Subunidad α de 10.500 d.

Subunidad β de 9.500 d.

IHF

Histona H2B30.000 dímero

Dímero subunidades idénticas de 28.000 d.

H

Histona H2A40.000 dímeros

Dímero subunidades α y β de 9.000 d.HU

Semejanza con eucariontesContenido por célulasComposiciónProteína

PROTEÍNAS BÁSICAS DETECTADAS EN BACTERIAS

GENÓFORO BACTERIANO

-Fis-Dan (DNA-binding protein underanaerobic conditions) = YgiP(Nucleic Acids Research, 2010, Vol. 38, No. 11 3605–3618)

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ADN EXTRACROMOSÓMICOPLÁSMIDOS

ADN doble y circular

Replicación autónoma; información no vital

Posibilidad de integración en cromosoma principal bacteriano → EPISOMA

- secuencias inserción y transposones

Tamaño variable: 2.000 a 100.000 pb ADN bacterianoplásmidos

FUNCIÓN PLÁSMIDOS

TRANSFERENCIA FACTOR FERTILIDAD (F)ENTRE BACTERIAS → CONJUGACIÓN

F+

F-

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FUNCIÓN PLÁSMIDOS

Hfrfactor F integrado en genóforo bacteriano

transferencia de marcadores cromosómicos a F- con elevada frecuencia

transferencia desde punto fijo y en un orden determinado (integración específica factor F)

FUNCIÓN PLÁSMIDOS

plásmido E. coli resistente a ampicilina (ampr) y tetraciclina (tetr)

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ESTIRPE A ESTIRPE B

cys+, leu+, thr+ cys-, leu-, thr--

medio mínimo con leucina y treonina

medio mínimo con:

-treonina

-leucina

-sin suplementos

A.- Medio mínimo con leucina y treonina:

-cys+, leu+, thr+

-cys+, leu-, thr-

B.- Medio mínimo con:

- TREONINA: cys+, leu+, thr+ Y cys+, leu+, thr-

- LEUCINA: cys+, leu+, thr+ Y cys+, leu-, thr+

- MEDIO MÍNIMO: cys+, leu+, thr+

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TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”

-rasgos característicos gen (nº intrones, posición)

-estructura producto proteico gen → FUNCIÓN

comparación secuencias ADN de ≠ genes → evolución

modificación parte de secuencia ADN de un gen y reinserción

CONSTRUCCIÓN ADN RECOMBINANTE

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”

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TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”

DIGESTIÓN ADN

(enzimas de restricción)

corte ADN en fragmentos para su clonación

cortes escalonados → ADN recombinante

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”

clonación gen específico

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TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”

diseño plásmidos

como vectores de clonación de ADN

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”