sistema de identificacion bbl crystal

SISTEMA DE SISTEMA DE IDENTIFICACION BBL IDENTIFICACION BBL

CrystalCrystal

EQUIPO PARA LA EQUIPO PARA LA IDENTIFICACION IDENTIFICACION

DE DE Neisseria/HaemophNeisseria/Haemoph

ilusilus

SISTEMA DE SISTEMA DE IDENTIFICACION IDENTIFICACION

BBL CrystalBBL Crystal

METODO DE IDENTIFICACION METODO DE IDENTIFICACION EN MINIATURA QUE UTILIZA EN MINIATURA QUE UTILIZA

SUBSTRATOS SUBSTRATOS CONVENCIONALES Y CONVENCIONALES Y

CROMOGENICOS CROMOGENICOS MODIFICADOSMODIFICADOS

V E N T A J A SV E N T A J A S

Menor espacio, necesario para Menor espacio, necesario para almacenamiento.almacenamiento.

Extensión de la fecha de caducidad.Extensión de la fecha de caducidad.

Control de calidad uniformeControl de calidad uniforme

Facilidad de uso.Facilidad de uso.

Varios procedimientos de análisis Varios procedimientos de análisis usados en los sistemas BBL usados en los sistemas BBL

Crystal son modificaciones de Crystal son modificaciones de métodos clásicos.métodos clásicos.

FermentaciónFermentación OxidaciónOxidación DegradaciónDegradación HidrólisisHidrólisis

Además hay substratos ligados a cromógenos

y fluorogenos para la detección de enzimas

EQUIPO BBL CrystalEQUIPO BBL Crystal

Tapas del panelTapas del panel

BasesBases

Tubos de fluido del inoculoTubos de fluido del inoculo

ALMACENAMIENTO DEL ALMACENAMIENTO DEL EQUIPOEQUIPO

TAPASTAPAS Están envueltas individualmente, conservar Están envueltas individualmente, conservar

cerradas en un refrigerador entre 2 – 8 ºC.cerradas en un refrigerador entre 2 – 8 ºC. No deben congelarse.No deben congelarse. No deben usarse si la envoltura parece estar No deben usarse si la envoltura parece estar

dañada.dañada. BASESBASES

Envasadas en dos grupos de 10 en las Envasadas en dos grupos de 10 en las bandejas de incubación.bandejas de incubación.

Apiladas boca abajo para reducir Apiladas boca abajo para reducir contaminación.contaminación.

Almacenar en lugar libre de polvo de 2 – 30ºC.Almacenar en lugar libre de polvo de 2 – 30ºC.

TUBO DE FLUIDO DEL INOCULOTUBO DE FLUIDO DEL INOCULO Envasados en dos grupos de 10 tubos Envasados en dos grupos de 10 tubos

cada uno.cada uno. No deben usarse:No deben usarse:

Fugas en lo tubos o sus tapas.Fugas en lo tubos o sus tapas. Indicios evidentes de contaminación.Indicios evidentes de contaminación.

Almacenar entre 2 – 25 ºC.Almacenar entre 2 – 25 ºC.

ALMACENAMIENTO DEL ALMACENAMIENTO DEL EQUIPOEQUIPO

PRINCIPIO DE LA PRINCIPIO DE LA PRUEBAPRUEBA

Los paneles del sistema BBL Cristal Los paneles del sistema BBL Cristal contienen:contienen: 29 substratos bioquímicos y enzimáticos 29 substratos bioquímicos y enzimáticos

deshidratados.deshidratados. 1 control fluorescente.1 control fluorescente.

Para rehidratar los substratos:Para rehidratar los substratos: Utilizar una suspensión bacteriana preparada con el Utilizar una suspensión bacteriana preparada con el

fluido de inoculo.fluido de inoculo. Las pruebas usadas en el sistema se basan Las pruebas usadas en el sistema se basan

en la utilización y degradación microbiana en la utilización y degradación microbiana de substratos específicos detectados por de substratos específicos detectados por varios sistemas indicadores.varios sistemas indicadores.

La hidrólisis enzimática de los substratos La hidrólisis enzimática de los substratos fluorogénicos que contienen derivados fluorogénicos que contienen derivados cumarinicos resulta en un aumento de la cumarinicos resulta en un aumento de la fluorescencia, detectable a simple vista fluorescencia, detectable a simple vista con una lámpara de luz UV.con una lámpara de luz UV.

Los substratos cromogénicos después de Los substratos cromogénicos después de sufrir hidrólisis producen cambios de sufrir hidrólisis producen cambios de color que pueden detectarse a simple color que pueden detectarse a simple vista.vista.

PRINCIPIO DE LA PRINCIPIO DE LA PRUEBAPRUEBA

S U B S T R A T O SS U B S T R A T O S

BACTERIAS IDENTIFICABLESBACTERIAS IDENTIFICABLES

MATERIALMATERIAL

MECHEROMECHERO HISOPOS DE ALGODÓNHISOPOS DE ALGODÓN VORTEX VORTEX INCUBADORAINCUBADORA LAMPARA CON LUZ UVLAMPARA CON LUZ UV GUANTES, CUBREBOCAS, GOGLES.GUANTES, CUBREBOCAS, GOGLES. SOLUCION SALINA 0.85% ESTERIL.SOLUCION SALINA 0.85% ESTERIL.

OBTENCION DE LAS OBTENCION DE LAS MUESTRASMUESTRAS

No debe utilizarse el sistema No debe utilizarse el sistema directamente con muestras directamente con muestras clínicas.clínicas.

Utilizar aislados de un medio como:Utilizar aislados de un medio como: Agar chocolateAgar chocolate Agar Thayer-MartínAgar Thayer-Martín

El aislado para la prueba debe ser El aislado para la prueba debe ser un cultivo puro (18–24 horas) un cultivo puro (18–24 horas) hasta 48 horashasta 48 horas****

PROCEDIMIENTOPROCEDIMIENTO Realizar una tinción de gram a las colonias Realizar una tinción de gram a las colonias

presuntivas.presuntivas. Permitir que los reactivos alcancen la Permitir que los reactivos alcancen la

temperatura ambiente (25ºC).temperatura ambiente (25ºC). Bajo condiciones estériles y con ayuda de un Bajo condiciones estériles y con ayuda de un

hisopo de algodón, tome varias colonias de un hisopo de algodón, tome varias colonias de un cultivo puro.cultivo puro.

Suspenda las colonias en un tubo de fluido del Suspenda las colonias en un tubo de fluido del inoculo.inoculo.

Agite en vortex de 10 a 15 segundos.Agite en vortex de 10 a 15 segundos. Ajuste la turbidez al patrón No.3 del nefelómetro de Ajuste la turbidez al patrón No.3 del nefelómetro de

McFarland.McFarland. Si no hay colonias disponibles:Si no hay colonias disponibles:

Diluir con solución salina al 0.85% sin exceder 1 ml.Diluir con solución salina al 0.85% sin exceder 1 ml. Al final quite el volumen agregado.Al final quite el volumen agregado.

PROCEDIMIENTO…..PROCEDIMIENTO…..

Realice la prueba de cultivo puro:Realice la prueba de cultivo puro:

Extraiga una pequeña gota del tubo de Extraiga una pequeña gota del tubo de fluido del inoculo con asa estérilfluido del inoculo con asa estéril

Inocule una placa con medio apropiado Inocule una placa con medio apropiado (agar chocolate o agar Thayer-Martín)(agar chocolate o agar Thayer-Martín)

Incube 24 a 48 horas, de 35 a 37ºC con Incube 24 a 48 horas, de 35 a 37ºC con 5% CO5% CO22

PROCEDIMIENTO…..PROCEDIMIENTO….. Tome una base y vierta en Tome una base y vierta en

ella todo el contenido del ella todo el contenido del tubo de fluido del inoculo tubo de fluido del inoculo en el área demarcada de la en el área demarcada de la base.base.

Balancee la base Balancee la base suavemente con ambas suavemente con ambas manos hasta que se llenen manos hasta que se llenen con el inoculo todos los con el inoculo todos los pocillos, al final deje el pocillos, al final deje el exceso en la zona exceso en la zona demarcada.demarcada.

Asegúrese del relleno Asegúrese del relleno completo de los pocillos.completo de los pocillos.

PROCEDIMIENTO….PROCEDIMIENTO….

Alinie la tapa y Alinie la tapa y presione hacia presione hacia abajo abajo simultáneamente simultáneamente hasta sentir una hasta sentir una leve resistencia.leve resistencia.

Coloque los paneles Coloque los paneles inoculados en las inoculados en las bandejas de bandejas de incubación.incubación.

Deben incubarse Deben incubarse boca abajo (sin COboca abajo (sin CO22), ), con 40-60% con 40-60% humedad, 35-37ºC, humedad, 35-37ºC, por 4 horas.por 4 horas.

PROCEDIMIENTO….PROCEDIMIENTO….

PROCEDIMIENTO….PROCEDIMIENTO….

La incubadora no debe abrirse La incubadora no debe abrirse continuamente (< 3 veces)continuamente (< 3 veces)

Los paneles deben leerse 30 minutos Los paneles deben leerse 30 minutos después de sacarlos de la después de sacarlos de la incubadora.incubadora.

L E C T U R AL E C T U R A

Lea las columnas F a J Lea las columnas F a J usando luz blanca.usando luz blanca.

Lea las columnas A Lea las columnas A hasta E usando luz UVhasta E usando luz UV

Un pocillo con substrato Un pocillo con substrato fluorescente se considera fluorescente se considera positivopositivo únicamente si la únicamente si la

intensidad de la intensidad de la fluorescencia observada fluorescencia observada en el pocillo es mayor en el pocillo es mayor que la del pocillo de que la del pocillo de

control negativocontrol negativo

REGISTRO DE RESULTADOSREGISTRO DE RESULTADOS

Calculando el número de Calculando el número de perfilperfil

EjempEjemplolo AA BB CC DD EE FF GG HH II JJ

44 ** ++ -- -- ++ ++ ++ -- ++ --

22 -- ++ ++ ++ -- ++ -- ++ ++ --

11 ++ -- ++ -- ++ -- -- ++ ++ --

PerfilPerfil 11 66 33 22 55 66 44 33 77 00

CONTROL DE CALIDADCONTROL DE CALIDAD

Antes de la incubación, deje el panel Antes de la incubación, deje el panel a temperatura ambiente durante 1 a temperatura ambiente durante 1 minuto (no mas de 2 minutos).minuto (no mas de 2 minutos).

Observe la bandeja y note si hay Observe la bandeja y note si hay reacciones de color.reacciones de color.

Si nota algún pocillo positivo no use Si nota algún pocillo positivo no use los paneles.los paneles.

LIMITACIONESLIMITACIONES

El sistema ha sido diseñado únicamente El sistema ha sido diseñado únicamente para los grupos taxonómicos que para los grupos taxonómicos que aparecen en la tabla anterior.aparecen en la tabla anterior.

Se necesita una prueba de confirmación Se necesita una prueba de confirmación adicional.adicional.

La base de datos se creo con medios de la La base de datos se creo con medios de la marca BBL, la reactividad de algunos marca BBL, la reactividad de algunos substratos depende de los medios substratos depende de los medios suministrados.suministrados.

No utilice medios que contengan esculina.No utilice medios que contengan esculina.

GRACIAS