proteinograma: una herramienta de diagnóstico
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Sección Inmunología. Instituto de Investigaciones Médicas
“Alfredo Lanari”
Proteínas:
Conformadas por: C – H – O – N – S, que forman aminoácidos
Estructura: los aminoácidos forman péptidos formando largas cadenas que se pliegan entre sí dando forma a las estructuras proteicas complejas.
Proteinograma:
Cuatificación de Proteínas Totales y sus fracciones con métodos instrumentales adecuados (densitometría, colorimetría, nefelometría, turbidimetría)
Separación de las proteínas presentes en sangre y orina y su análisis cualitativo, para la detección de anormalidades proteicas.
Método de elección para el estudio de las proteínas: electroforesis sobre sostén.
Instrumental:
Sostén o soporte: acetato de celulosa; agar/agarosa; gel; poliacrilamida, etc.
Buffer: soluciones iónicas de pH alcalino. Buffer Veronal sódico/Michaelis.
Voltaje: otorgado mediante fuente de energía. Voltaje 220 V; ≈ 7mA por tira.
Material a separar: suero fresco o congelado a -20ºC; orina de 24 hs; LCR.
¿Suero o plasma?
Plasma: encontramos proteínas como el fibrinógeno, la protrombina, el factor V y el factor VIII. Corren electroforéticamente en la fracción Gama del proteinograma. Se puede confundir con componente monoclonal.
Suero: las proteínas anteriormente mencionadas son consumidas en la formación del coágulo. No existen interferencias.
Orina de 24 hs: concentrada de acuerdo a la proteinuria del paciente.
Fracciones de un proteinograma:Albúmina:
o Valor normal: 3.0 - 5.0 g/l.o Indicadora del estado nutricional del paciente.
Fracción Alfa 1 (α1)o α1 antitripsinao α1 antiquimiotripsinao α1 glucoproteína ácidao α1 fetoproteína
Fracción Alfa 2 (α2)o Haptoglobinao Ceruloplasminao α2 macroglobulinao Lipoproteinas
Fracción Beta (β)o Transferrinao β2 microglobulinao Componentes C3; C4 y C5 del complemento
Fracción Gamma (γ)o Inmunoglobulinas IgG; IgA; IgM, IgD, IgE
ALBÚMINA
ALFA 1 (α1)ALFA 2 (α2)BETA (β)
GAMMA
+
-
PROTEÍNA AUMENTO DISMINUCIÓN
Albúmina
o Hemoconcentracióno Bisalbuminemia
o Lesión hepáticao Malnutricióno Pérdida de proteínas por orina
Alfa 1 (α1)
o Enfermedades inflamatorias agudas o crónicaso Anormalidades hematológicas
o Lesión hepáticao Déficit de α1 antitripsinao Malnutrición
Alfa 2 (α2)
o Reactante de fase aguda
o Síndrome nefrótico
o Suero hemolizadoo Tumores malignos
o Anemia hemólíticao Hepatitis agudao Lesiones hepáticas severas
Corrida electroforética NORMAL:
Beta (β)
o Embarazo
o Tumores
o Anemia ferropénica crónicao Hepatitis aguda
o Enfermedades inflamatoriaso Síndrome nefróticoo Pérdida de proteínas
Gama (γ)
o Aumento policlonal de las Inmunoglobulinaso Aumento monoclonalo Aumento biclonal o biclonalidad
o Pérdida de proteínaso Síndromes deficitarioso Linfomaso Leucemiaso Mieloma micromolecular
Corrida electroforética NORMAL:
o Hepatopatías agudas (Cirrosis biliar primaria; Hepatitis Autoinmune)
o Infecciones crónicas (Tuberculosis; HIV; parasitosis; malaria)
o Enfermedades autoinmunes (Lupus Eritematoso sistémico; Artritis Reumatoidea; Síndrome de Sjögren, Polimiositis)
Aumento policlonal de las Inmunoglobulinas: varios clones de Linfocitos B se activan frente a un estímulo, generando un aumento difuso de las inmunoglobulinas.
Aumento monoclonal de las Inmunoglobulinas: un único clon de Linfocitos B y con una especificidad única, genera un único tipo de Inmunoglobulina en forma de banda homogénea.
¿ Cómo estudiar una banda monoclonal?
o Dosaje de Proteínas Totales y Albúminao Dosaje de Inmunoglobulinaso Determinar “identidad estructural” de la banda
• Tipo de cadena pesada: IgG; IgA; IgM; IgD• Tipo de cadena liviana: Kappa o Lambda
o Métodos de identificación:• Inmunoelectroforesis en suero y orina de 24 hs.• Inmunofijación en suero. Eventualemente Inmunofijación en orina• Difusión simple en orina de 24 hs.
Inmunoelectroforesis:1.Electroforesis en agar o gel2.Aplicación de antisuero mono o poli específico3.Difusión por 24 hs.4.Lavado 24 hs5.Revelado
Inmunofijación:1.Electroforesis en gel2.Aplicación de antisuero monoespecífico3.Difusión 15 min.4.Lavado y revelado
Aumento biclonal de las Inmunoglobulinas: dos clones de linfocitos B con especificidad única o diferente, generan dos bandas homogéneas.
Suero: doble banda en zona de Beta y Gamma lenta.
Orina de 24 hs concentrada: Albúmina
Inmunofijación en suero: doble especificidad: IgG e IgA, cadena liviana Kappa.
Disminución de las Inmunoglobulinas
Hipogamma común variable del adulto:
Mieloma micromolecular
Suero: disminución de las Inmunoglobulinas y banda en zona de Gamma rápida.
Orina de 24 hs: banda en zona de Gama rápida.
Inmunofijación en suero: banda de cadena liviana Lambda
IgGIgA
IgM
Kappa Lambda
Difusión simple de orina: cadena liviana Lambda.
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