proteinas chaperonas asociadas a mica en placenta humana
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Proteinas chaperonas asociadas a MICA en placenta humana
T.M. Antonio Serrano G.Doctorado en Bioquímica
Fac. Cs Qcas. y FarmacéuticasU. de Chile
MICA y Stress
Groh PNAS 1996
• Proteína de membrana que se presenta en células sometidas
• Stréss térmico• Infecciones por virus•Transformación maligna.
•Gen activado por HSPs
Entonces
• Ante stress se acumula MICA en RE• Sobre expresion de Vasostatina en melanoma
produce acumulacion de MICA en reticulo• No se han detectado variantes de splicing y no
posee secuencia de retención en RE• Folding• Proteínas Chaperonas
• Mecanismo de Evasión Inmune– Tumoral– Placenta
En Placenta
• Se conoce que en este órgano existe una gran cantidad de IL-10 en el trofoblasto como mecanismo de escape inmune permitiendo la sobrevida del feto
• Regulación de expresión de moléculas relacionadas al complejo mayor de histocompatibilidad por citoquinas.
Entonces…
• IL-10 induce baja de MHC-1 en membrana • IL-10 induce baja de MHC-2 en membrana • IL-6 induce baja de MHC-2 en membrana (Stat3)• INF-g aumenta MHC I en membrana (TAP y LPM2/7)• MHC-II aumento transactivador CIITA
Hipótesis
• MICA es retenido en retículo endoplasmico de trofoblasto temprano por interacción con un multicomplejo de chaperonas
• Citoquinas modulan retención de MICA en retículo endoplasmico por acción de proteínas chaperonas o del sistema de exportación a membrana en células de citotrofoblasto
Objetivo
• Determinar proteínas asociadas a MICA en su acumulacíon en retículo endoplasmico de células trofoblásticas tempranas.
• Determinar influencia de citoquinas en la acumulación de MICA en retículo endoplasmico de células del de citotrofoblasto
1) Detectar MICA asociado a retículo endoplásmico y a moléculas chaperonas en placenta y citotrofoblasto.
Tejido Citologia
MICA GolgiCALR
Confocal
IHQMICA
Placenta 1er Trimestre
HSJ
CITOTROFOBLASTO CULTIVO
Sin tto
IL-10
INF-g
FACS MEMBRANA INTRACELULAR
2) Detectar Variaciones de MICA Intracelular y de membrana según condición de citoquinas
MICA
3) Detectar Proteínas asociadas a MICA en fracción microsomal de placenta.
Inmunoprecipitacion
Ultracentrifugación
MICA
Placenta 1er Trimestre
HSJ
Fracción Microsomal
SDS PAGE 2D
4) Identificar proteínas asociadas a MICA en fracción microsomal de placenta.
Inmunoprecipitacion
MICA
CALX
HSP
CRT
MALDI/TOF
MICA
SDS PAGE 2DCITOTROFOBLASTO CULTIVO
Sin tto
IL-10
INF-g
RT-PCR Semi-Q
5) Identificar proteínas asociadas a MICA en fracción microsomal de placenta, que varían según citoquina
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