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PresentaElizabeth Sosa Castillo
Unión no homóloga de extremos (NHEJ)
“Los extremos rotos se yuxtaponen y se ligan” Generalmente supone la pérdida de uno o varios
nucleótidos en el sitio de unión
Unión homóloga de extremos (HR)
Se utiliza un mecanismo relacionado con los procesos de recombinación de DNA.
Se utiliza el otro cromosoma para reparar sin pérdida de nucleótidos
MECANISMOS QUE EVITAN LA RUPTURA DE LOS CROMOSOMAS
Resección: ruptura de la cadena de ADN con degradación nucleolitica en el extremo 5´.
Etapa ciclo celular Cinasa dependiente
de ciclina (CDK)
Elección entre
NHEJ y HR
Actividad CDK--- NHEJ (Fase G1)
Actividad CDK--- HR
OBJETIVO
Describir un análisis cuantitativo del procesamiento de DSB en Saccharomyces cerevisiae.
DESCRIPCIÓN DEL ENSAYO PARA LA CUANTIFICACIÓN DEL SSDNA
*Discriminar eficientemente entre ssDNA y dsDNA (cuantificación precisa)
*Resistencia de ssDNA a la digestión por BstUI
ANÁLISIS DEL PROCESAMIENTO DE DSB Y ACTIVACIÓN DEL PUNTO DE CONTROL (CHECKPOINT)
Investigar correlación entre la resección DBS y la activación checkpoint
Ddc2 – Proteína requerida para la respuesta de la activación del checkpoint, se ha localizado en sitios específicos de daño al DNA.
Reparación DNA
Ensayo de Inmunoblot
Activación Rad53 en células arrestadas en fase G2/M, pero no en fase G1.
ANÁLISIS DEL PROCESAMIENTO DE DSB Y ACTIVACIÓN DEL PUNTO DE CONTROL (CHECKPOINT)
1
LA ACTIVACION DEL CHECKPOINT Y LA RESECCIÓN DE DBS SON PROCESOS DEPENDIENTES DE LA DOSIS DE RUPTURA
Investigar el efecto de dosis DBS (número rupturas) sobre la respuesta DSB
2
LA RESECCIÓN DE DSB ES REGULADA POR MECANISMOS DEPENDIENTES E INDEPENDIENTES DE NHEJ EN FASE G1
Investigar la posibilidad de que la resección en fase G1 es prevenida por NHEJ.
EL PROCESAMIENTO DE DSB REQUIERE DEL LA REPLICACIÓN DEL ADN
3
LA ACTIVACION DEL CHECKPOINT REQUIERE DE LA REPLICACION DEL ADN
EL INCREMENTO DE LA ACTIVACIÓN DEL CHECKPOINT POR DSBS DURANTE LA REPLICACIÓN ES DEPENDIENTE DE RAD9 PERO NO DE MRC1
CONCLUSIONES
Identificaron cuatro factores que influyen en las DSBs:
NHEJ, etapa del ciclo celular, dosis de DSB y presencia de horquillas de replicación de ADN.
Dos características del procesamiento de DBS son reguladas durante el ciclo celular:
a)Un elevado NHEJ durante la fase G1 previene el inicio de la resección del DNA.
b)mecanismo independiente de NHEJ previene una resección extensa durante la fase G1.
La activación del checkpoint es dependiente de la replicación (Rad9).
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