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Protocolos y mtodos Preparacin de TAE y TBE Laboratorio de Genmica Viral y Humana Creado: 14 de Febrero del 2008 Facultad de Medicina UASLP Ultima modificacin: 11 de Noviembre del 2008

Laboratorio de Genmica Viral y Humana Facultad de Medicina Universidad Autnoma de San Luis Potos

Preparacin de Buffer Tris, Acido actico, EDTA (TAE) y Tris, Acido brico, EDTA (TBE). El TAE es el buffer ms comnmente empleado para la separacin de fragmentos de DNA por electroforsis. Sus aplicaciones electroforticas incluyen al anlisis de productos de PCR, protocolos de purificacin de DNA y experimentos de clonacin de DNA. Este buffer posee una fuerza inica baja al igual que una pobre capacidad de amortiguacin de pH. El TAE constituye la mejor alternativa (en comparacin al TBE) para el anlisis electrofortico de fragmentos grandes (> 20 kb) de DNA. Una de las desventajas del TAE como buffer de electroforesis es que no permite reciclarlo por ms de tres corridas electroforticas seguidas, a diferencia del TBE cuya efectividad permanece inalterada durante 3 o 4 das, sin importar el nmero de corridas electroforticas realizadas. El empleo del TBE como buffer de electroforesis es particularmente til para discriminar a pequeos fragmentos de DNA (20 kbp) de DNA tienden a migrar ms rpido en el TAE que en el TBE, mientras que los fragmentos pequeos (

Protocolos y mtodos Preparacin de TAE y TBE Laboratorio de Genmica Viral y Humana Creado: 14 de Febrero del 2008 Facultad de Medicina UASLP Ultima modificacin: 11 de Noviembre del 2008

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Tabla de preparacin (TAE):

TAE 10X Cf (1X) 1 L 10 L 20 L

Tris 40 mM 48.4 g 484 g 968 g

Acido Actico 11.42 ml 114.2 ml 228.4 ml

Na2EDTA-2H2O 2 mM 7.44 g 74.4 g 148.8 g

dH2O cbp 1 L cbp 10 L cbp 20 L Tabla de preparacin (TBE):

TBE 10X Cf (1X) 1 L 10 L 20 L

Tris 89 mM 108 g 1.08 kg 2.16 kg

Acido Brico 89 mM 55 g 550 g 1.1 kg

0.5 M EDTA, pH 8 2 mM 40 ml 400 ml 800 ml

dH2O cbp 1 L cbp 10 L cbp 20 L Notas:

1. Limpie perfectamente bien la balanza con la brocha para evitar el acarreo de contaminantes y la corrosin de la

balanza o de las superficies de acero inoxidable.

2. El Tris(hidroximetil)aminometano tambin es conocido por los nombres de tris, TRIS, tris base, trizma, trisamina, THAM, trometamina, trometamol y trometano. Tris-HCl hace referencia a la solucin de tris cuyo pH ha sido manipulado o modificado con HCl. El pH de las soluciones amortiguadoras a base de Tris cambia significativamente con la temperatura, disminuyendo aproximadamente 0.028 unidades de por cada C por encima de 25C. Por ello es necesario ajustar el pH ante fluctuaciones extremas de temperatura operacional. Como el pKa del Tris es de 8.08, este no debe usarse para soluciones amortiguadoras con rangos operacionales por debajo de pH 7.0 o por encima de pH 9.0.

3. Las soluciones 10X de TAE poseen un pH ~8.5 que se corrige automticamente a pH 7.5 una vez llevadas a 1X. Por ello en el caso de las soluciones 10X, no es necesario ajustar el pH.

4. La vida media de anaquel para soluciones 1X o 10X de TAE y TBE oscila entre 6 y 24 meses a temperatura ambiente. Referencias:

1. Current Protocols in Molecular Biology, Appendix 2, A.2.5, Supplement 40, Frederick M. Ausubel et al. 2003. 2. TBE, or not TBE; that is the question: Beneficial usage of tris-borate for obtaining a higher resolution of small DNA

fragments by agarose gel electrophoresis. Yutaka Miura et al, Nagoya Medical Journal 43(1) 1-6, 1999.