enzimas ii
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Principios de Catálisis Enzimática y Cinética Enzimática.
Dra. Valeska Ormazabal Depto. de Ciencias Básicas
Facultad de Medicina
Medicina 2012
¿ De dónde viene la Energía necesaria para producir un descenso de la energía libre de
activación de reacciones específicas?
1. Reordeamiento de los enlaces covalentes de las reacciones catalizadas por enzimas.
• Activación del sustrato por formación de un enlace covalente transitorio.
• Transferencia de un grupo del sustrato a la enzima en forma transitoria.
2. Formación de interacciones no covalentes enzima-sustrato.
¿Cómo las enzimas usan la energía de la unión no covalente?
• 1. La energía de fijación proporciona especificidad y catálisis. • 2. Las interacciones débiles están optimizadas en el estado de
transición.
1. Reducción de la Entropía
2. Romper la capa de Solvatación del sustrato.
1. Orientación adecuada del sustrato, respecto a sus grupos funcionales y a posibles
distorciones.
En el estado de transición las interacciones entre la enzima y el sustrato son óptimas
Especificidad Enzimática: Especificidad de sustrato.
*La energía de Fijación regula tanto la catálisis como la especificidad
• Cinética Enzimática
Curva de progreso de una reacción enzimática en el tiempo
Curva de progreso de una reacción enzimática en el tiempo
Varias Causas pueden contribuir a que se produzca esta disminución: 1. El producto puede inhibir. 2. Agotamiento del sustrato. 3. La reacción inversa se hace más importante. 4. Disminuye la cantidad de P formado por unidad de Tiempo. 5. Velocidad de formación de producto y de la reacción inversa es igual.
Determinación de Km y Vmáx por el gráfico de Eadie Hofstee
Métodos de linealización para determinación parámetros cinéticos
Método Eje Y Eje X Intercepto Eje Y
Intercepto Eje x
Pendiente
Lineweaver-Burke
1/v 1/s 1/V -1/Km K/V
Eadie-Hofstee
v v/s V V/Km -Km
Kcat: Describe la velocidad limitante de cualquier reacción enzimática. Kcat= Vmax/[Et]
Cálculo de Actividad Enzimática
• La velocidad de reacción catalizada por 0,1ml de una dilución 1:100 de Fosfatasa Alcalina es 0,3umoles / min. de producto. ¿Cuál es su actividad enzimática?
• 0,1ml-------- 0,3umoles producto / min. 1,0ml------------3,0umoles producto / min. dil 1:100-------------300umoles producto / min. Respuesta: 300UI/ml
Para comparar actividades enzimáticas se utilizan parámetros cinéticos
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